El modelo de oveja fetal no anestesiado instrumentado crónicamente se utiliza para estudiar el desarrollo del feto humano en la salud y la enfermedad, ya que permite la colocación quirúrgica y el mantenimiento de los catéteres y electrodos, muestreo de sangre repetitivo, la inyección de sustancias, registro de la actividad bioeléctrica, y de imágenes in vivo. Se describen los procedimientos necesarios para establecer este modelo.
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Artículo de método
Instrumentación de Ovejas fetal Cerca plazo para multivariados Grabaciones no anestesiados crónicas
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Resumen
Resumen
La oveja preñada instrumentada crónicamente se ha utilizado como modelo del desarrollo fetal humano y de las respuestas a estímulos fisiopatológicos como endotoxinas, bacterias, oclusiones del cordón umbilical, hipoxia y diversos tratamientos farmacológicos. En este modelo se han desarrollado las prácticas clínicas que salvan vidas del tratamiento con glucocorticoides en fetos con riesgo de parto prematuro y la hipotermia terapéutica. Esto se debe a la singular facilidad de las ovejas fetales no anestesiadas para la colocación quirúrgica y el mantenimiento de catéteres y electrodos, lo que permite la toma de muestras de sangre repetitivas, la inyección de sustancias, el registro de la actividad bioeléctrica, la aplicación de estimulación eléctrica y la obtención de imágenes de órganos in vivo. En este trabajo describimos el procedimiento de instrumentación quirúrgica necesario para lograr un modelo de oveja fetal no anestesiado estable y crónicamente instrumentado, incluyendo la caracterización de la recuperación postoperatoria desde el punto de vista gasometral, metabólico e inflamatorio.
Introducción
Una variedad de modelos animales existe para el estudio de ambos embarazos normales y comprometidos, incluyendo roedores de laboratorio, primates no humanos y los rumiantes domésticos. 1,2,3,4,5 El ovejas gestantes instrumentado crónicamente ha sido ampliamente utilizado durante 50 años como un modelo de desarrollo fetal humano y las respuestas a los estímulos fisiopatológicos tales como lipopolisacárido (LPS). 10.06 Las lesiones después de la exposición LPS imitan exactamente lo que se ve en los recién nacidos prematuros con leucomalacia periventricular, que se debe a un perfil de maduración similar de ambas especies. 11, 12
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Protocolo
Cuidado de los animales a las directrices del Consejo Canadiense de los Animales y la aprobación por el Consejo de Montréal Universidad de los Animales (protocolo nº 10-Rech-1560). La información detallada sobre los materiales y métodos utilizados se proporciona en la Tabla 1.
1. Anestesia
- Insertar un catéter de un solo lumen en una vena yugular.
- Sedate la oveja usando acepromacina (Atravet 10 mg / mL) 2 mg por vía intravenosa aproximadamente 30 min antes de la inducción de la anestesia con el fin de reducir el estrés asociado con el procedimiento que a su vez reduce los niveles de cortisol.
- Administrar diaz....
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Resultados
38 ovejas con plazos de fecha embarazadas fueron instrumentados a 128 ± 2 días de gestación (DGA, ~ 0,88 gestación, plazo 145 DGA) con arterial, venosa y catéteres amniótico y el electrocardiograma (ECG) electrodos con una técnica estéril bajo anestesia general (tanto oveja y el feto ). En caso de embarazo gemelar feto grande fue elegido en base a la palpación y estimar el diámetro intertemporal; alternativamente, el feto a ser instrumentada puede ser seleccionado al azar para evitar cualquier sesgo potencial o ambos fe.......
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Discusión
El anestésico y los procedimientos quirúrgicos se presentan que son necesarios para el establecimiento de un modelo animal para el estudio de la fisiología y la fisiopatología fetal: la oveja fetal no anestesiado instrumentado crónicamente.
Cuatro pasos críticos en el protocolo debe hacerse hincapié. En primer lugar, pasar los catéteres y electrodos a través del flanco materna: es importante que esto se hace a la vez para evitar cualquier lesión de órganos internos. En segundo lugar, fijar e.......
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Divulgaciones
No se han hecho divulgaciones.
Agradecimientos
los autores agradecen el apoyo financiero de la Fundación de Investigación Perinatal Molly Towell, los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR) y el Fonds de Recherche du Québec – Santé (a MGF) y la Red de Capacitación en Investigación Perinatal del CIHR-Quebec (QTNPR) (a LDD).
Los autores desean agradecer a Esther Simard, Marco Bosa, Carl Bernard y Carmen Movila por su asistencia técnica.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| ACE Fuente de luz | Schott-Fostec | A20500 | |
| Tijeras de disección | Fine Science Tools | 14060 - 11 | |
| Tijeras de disección en ángulo | Fine Science Tools | 15006 - 09 | |
| Mango de bisturí | Fine Science Tools | 10003 - 12 | herramienta de disección alterna |
| Hojas de bisturí curvadas #12 | Fine Science Tools | 10012 - 00 | herramienta de disección alterna |
| Tijeras para huesos | Fine Science Tools | 16044 - 10 | |
| S & Pinza de atado de sutura en T | Fine Science Tools | 00272 - 13 | |
| Pinza Dumont SS - angulada | Fine Science Tools | 11203 - 25 | |
| Sutura de seda trenzada tamaño 6-0 | Teleflex Medical | 07 - 30 - 10 | |
| Cinta Médica | transpore | 3M | |
| Clorhidrato de ketamina 100 mg/ml | Hospira | NDC 0409 - 2051 - 05 | Final Does es de 80 mg/kg |
| Tranqui Ved Injection (xilacina 100 mg/ml) | Vecdo | NDC 50989 - 234 - 11 | Final Does es de 10 mg/kg |
| Naranja reactivo 14 | Sigma - Aldrich | R - 8254 | |
| Ringers Componentes de | La solución está equilibrada con gas 95% O2 y 5% Co2, pH final 7.4 | ||
| Cloruro de sodio | Sigma - Aldrich | S7653 | Concentración final: 118 mM |
| Cloruro de potasio | Fisher Scientific | P217 - 3 | Concentración final: 4.7 mM |
| Cloruro de calcio dihidratado | Fisher Scientific | C79 - 500 | Concentración final: 2,5 mM |
| Fosfato de potasio monobásico | Fisher Scientific | P -285 | Concentración final: 1,2 mM |
| Sulfato de magnesio | J.T. Baker | Ene-00 | Concentración final: 0,57 mM |
| 4-(2-hidroxietil)piperazina-1-etanosulfónico ácido (HEPES) | Fisher Scientific | BP 310 - 500 | Concentración final: 5,95 g/L |
| glucosa | Sigma - Aldrich | G8270 | Concentración final: 5,5 |
| mM LifeWindow | Digicare Biomedical Technology | ||
| Unidades de bioamplificador y ADC | Cambridge Electronic Design Limited, Unit 4, Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 0FE INGLATERRA. | Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Software de adquisición de datos: Spike 2, V7.13 | |
| Bioamplificador de señal analógica Neurolog | Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, Inglaterra | NL108A | |
| ABL800Flex | Radiometer Canadá; 200 Aberdeen Dr, Londres, ON N5V 4N2 | ||
| Eppendorf 5804R Eppendorf | Canadá; 2810 Argentia Road, #2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2 | ||
| Set de cateterismo yugular Arrow | Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 EE. UU | ||
| Atravet | 10 mg/ml | ||
| Diazepam | 5 mg/ml | ||
| Ketamina | Ketalar | 100 mg/ml | |
| Propofol | 10 mg/ml | ||
| SurgiVeT | Tubos Endotraqueales; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, EE. UU. | ||
| Catéter de intercambio de vías respiratorias de Cook con adaptadores RAPI-FIT | Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 EE. UU | ||
| Ventilador Dispomed | Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6 | ||
| BD Insyte-W | Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 EE. UU. | de 22 a 20 g; 0,9 x 25 mm [1,1 pulg.] a 1,16 pulg. [1,1 x 30 mm] | |
| Edwards Lifesciences Ref: PX272 Kit de control de presión con presión | |||
| LifeWindow LW6000 | Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 EE. UU | ||
| Catéteres | |||
| Babcock | |||
| SCI (Scientific Commodities Inc.) | 2 metros | ||
| 2-0 Vicryl | |||
| Castroviejo tijeras | |||
| electrocardiograma (ECG) | LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlín, Alemania | cuatro electrodos de cobre en una sola vaina, 2 metros | |
| 2-O Vicryl | |||
| 3-0 Vicryl | |||
| PDS II USP | |||
| Trimetoprim sulfadoxina | |||
| Ampicilina | |||
| Stopcock | Argon Medical, Cat 041220001A | Llave de paso doble de 4 vías con bloqueo Luer macho | |
| Agujas Tyco | Healthcare 8881202389 | Monoject Agujas romas de buje de aluminio, 22Gx, 0,7 mm x 38,1 mm: para catéteres fetales arteriales y venosos | |
| Agujas | Tyco Healthcare 8881202322 | Monoject Agujas romas de buje de aluminio, 16Gx, 1,6 mm x 38,1 mm: para catéteres amnióticos |
Referencias
- Barry, J. S., Anthony, R. V. The pregnant sheep as a model for human pregnancy. Theriogenology. 69, 55-67 (2008).
- Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35<....
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