We describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action.
The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is limited to cell proliferation and gene expression endpoints. However, in the organism, mammary morphogenesis occurs in a 3D environment. 3D culture systems help bridge the gap between monolayer cell culture (2D) and the complexity of the organism. Herein, we describe a 3D culture model of the human breast epithelium that is suitable to study hormone action. It uses the commercially available hormone-responsive human breast epithelial cell line, T47D, and rat tail collagen type 1 as a matrix. This 3D culture model responds to the main mammotropic hormones: estradiol, progestins and prolactin. The influence of these hormones on epithelial morphogenesis can be observed after 1- or 2-week treatment according to the endpoint. The 3D cultures can be harvested for analysis of epithelial morphogenesis, cell proliferation and gene expression.
בניגוד לתרבויות 2D רגיל, מודלים פונדקאית תרבית תאים 3D לאפשר לחקר התנהגות תא אפיתל בהקשר רלוונטי מבחינה פיזיולוגית, אחד הדומה רקמות. תרבויות 3D של בלוטת החלב סייעו להבהיר היבטים רבים של התפתחות בלוטת חלב וגידולים. עם זאת, רוב דגמי תרבות 3D הזמינים כרגע אינם מתאימים ללמוד פעולת הורמון משום שורות התאים אנושי אפיתל המשמשים את המשימה חסרות ביטוי קולטן הורמון 6,7,9.
בזאת, אנו מתארות מודל התרבות 3D של האפיתל השד האנושי כי הוא מתאים ללמוד פעולת הורמון 12. מודל זה עושה שימוש שורת תאי אפיתל שד אדם הורמון מגיבים הזמין המסחרית, T47D 3,11,13, אשר הופקו במקור מתוך תפליט פלאורלי המתקבל מטופלת בת 54 עם קרצינומה ductal הסתננות של שד. אנו משתמשים קולגן זנב חולדה סוג 1 כמטריצה. פולחן 3D זהמודל יור מתאים לחקר הפעולה של שלושה הורמונים mammotropic הראשי (אסטרדיול, promegestone (אנלוגי של פרוגסטרון), ופרולקטין) על תאי אפיתל שד אנושיים. הורמון נגרם מורפולוגיה אפיתל ניתן להעריך כמותית לאורך זמן על ידי ניתוח morphometric 12.
צפיפות זריעה מתאימה מאפשרת תרבויות 3D אלה כדי להישמר במשך 2 שבועות. בשלב זה, את הפיתוח של מבנים מספיק הערכה כמותית חזקה פעולת הורמון על מורפולוגיה אפיתל. ג'לים ניתן לקצור גם בנקודות זמן קודמות עבור התפשטות תאים ביטוי גנים מנתח. בנוסף, מודל זה מתאים כדי לבחון את ההשפעה של טיפול הורמונלי רציף; למשל, לאחר הטיפול עם אסטרדיול בשבוע והחלפת הראשון עם / שילוב הורמונים אחרים של הורמונים במהלך השבוע הבא. השפעת תרכובות antiestrogens אסטרוגניים, כגון ICI 182,780, יכול גם להיות סטומת באמצעות מודל התרבות 3D זה 12.
Here, we describe a hormone-sensitive 3D culture model to test the action of hormones on breast epithelium. The response to hormones can be assessed at the tissue morphology, cell proliferation and gene expression levels 12. One limitation of this technique is that visualization during the culture period is restricted to light microscopy since the cultures are grown in a plastic bottom plate. The 3D culture system could be adapted to glass bottom plates to allow for live imaging of the cultures 1.</…
The authors have nothing to disclose.
אנו מעריכים מאוד את תרומתם העריכה על ידי שריל Schaeberle. מחקר זה מומן על ידי Avon מענקים # 02-2009-093 ו 02-2011-095, ו NIEHS / NIH ES 08,314 ל AMS. התוכן הוא באחריות הבלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצגים את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי למדעי בריאות הסביבה או מכוני הבריאות הלאומיים.
12-well Tissue Culture Plates (Falcon) | Fisher Scientific | 08-772-29 | |
15 ml polystyrene conical Tubes | Fisher Scientific | 14-959-49D | |
Activated Charcoal | Sigma | C-5510 | |
Carmine Alum | Sigma | C1022-100G | |
Collagenase, Type 3 | Worthington | S0C11784 | |
Confocal Microscope | Zeiss | LSM510 | Equiped with HeNe 633nm laser |
Dextran T-70 | Abersham/Pharmacia | 17-0280-01 | |
DMEM/F-12, HEPES, no phenol red | Life Technologies | 11339-021 | Phenol red-free media for hormone use |
DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red | Life Technologies | 11054-020 | Phenol red-free media for hormone use |
17-β-Estradiol | EMD Millipore | 3301 | Dissolved in Ethanol |
Ethanol | Koptec | V1001 | |
Fetal Bovine Serum | Hyclone | SH30070.03 | For use with hormones, must be Charcoal Dextran stripped |
Filters (115ml) | Nalgene | 380-0080, 245-0045, 120-0020 | 0.88, 0.45, 0.20 micron, respectively |
Formalin, 10% | Fisher Scientific | SF93-20 | |
L-Glutamine (200 mM) | Life Technologies | 25030-081 | |
ICI 182,780 (fulvestrant) | Sigma Aldrich | I4409-25MG | Dissolved in DMSO |
Microtome | Leica | RM2155 | |
Tissue embedding media | McCormick Scientific | 39502004 | |
Penicillin | Sigma | 7794-10MU | Dissolved in 10 ml of distilled deionized water |
Permount | Fisher Scientific | SP15-500 | |
Phosphate Buffered Saline pH 7.4 | Sigma Aldrich | P3813-10PAK | |
Prolactin | Sigma Aldrich | L4021-50UG | Dissolved in distilled deionized water |
Promegestone | Perkin Elmer | NLP004005MG | Dissolved in Ethanol |
Rat-Tail Collagen | Corning | 354236 | Lots may contain varying concentrations, note accordingly |
Scalpel | Miltex | 4311 | |
Semi-enclosed Benchtop Tissue Processor | Leica | TP1020 | |
Sodium Hydroxide | Sigma Aldrich | S5881 | Prepare 1N NaOH stock |
StaticMaster Anti-static brush | Amstat | C3500 | |
Stripette Serological Pipettes | Corning | 4101 | |
T-25 flasks | Corning | 430168 | |
Tissue Cassettes | Fisher Scientific | 15-200-403E | |
Wheaton Vials, Glass, 20mL | Fisher Scientific | 03-341-25D | |
Xylene | VWR | 95057-822 |