This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or “intestinal sacs” as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.
उपकला बाधा जठरांत्र पथ के पहले जन्मजात बचाव है और चुनिंदा, अंतर्निहित ऊतक डिब्बों को लुमेन से परिवहन को नियंत्रित करता है उपकला भर में छोटे अणुओं और लगभग पूरी तरह से उपकला macromolecular परिवहन पर रोक लगाने के परिवहन सीमित। इस चयनात्मकता श्लेष्मा जेल परत है, जो lipophilic अणुओं और दोनों शिखर रिसेप्टर्स और उपकला की तंग जंक्शनल प्रोटीन परिसरों के परिवहन की सीमा से निर्धारित होता है। इन विट्रो उपकला के सेल संस्कृति मॉडल सुविधाजनक हैं, लेकिन एक मॉडल के रूप में, वे कमी माइक्रोबायोटा, श्लेष्मा-जेल, उपकला और प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच बातचीत की जटिलता। दूसरी ओर, अवशोषण आंतों या पारगम्यता के vivo मूल्यांकन "आंतों की थैलियों" का उपयोग किया जा सकता है, लेकिन इन assays समग्र जठरांत्र अवशोषण को मापने, साइट विशिष्टता के कोई संकेत नहीं है। पूर्व vivo पारगम्यता assays; , या तो समग्र आंतों अखंडता या एक विशेष अणु का तुलनात्मक परिवहन मापने आंतों साइट विशिष्टता का जोड़ा लाभ के साथ की एक तेजी से और संवेदनशील तरीका है। यहाँ हम पारगम्यता अध्ययन के लिए आंतों की थैलियों की तैयारी और स्पष्ट पारगम्यता (पी एपीपी) की गणना का वर्णन आंत्र बाधा पार एक अणु की। इस तकनीक को जठरांत्र रोग के पशु मॉडल में क्षेत्रीय उपकला बाधा रोग की जांच करने के आकलन दवा अवशोषण की एक विधि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, या।
जठरांत्र संबंधी मार्ग की आंतों उपकला बाधा एक mucosal सतह मानव वयस्क में 400 एम 2 का अनुमान लगाया क्षेत्र है। नतीजतन, यह लगातार रोगाणुओं, जाता दवाओं, पोषक तत्वों और विषाक्त पदार्थों को जीवाणु से चुनौती से अवगत कराया है। मेजबान केवल सहनीय खानेवाला बैक्टीरिया और संभावित रोगजनकों के बीच भेद नहीं करना चाहिए, लेकिन एक ही समय में पोषक तत्वों का अवशोषण की इजाजत दी, उपकला बाधा पार करने से इन प्रजातियों और उनके स्रावित अणुओं को रोकने चाहिए। इस प्रकार, आंतों उपकला की भूमिका ल्यूमिनल सामग्री 1 करने के लिए एक बाधा के रूप में कार्य करने के लिए चयनात्मक है। इस भाग में हासिल की है, म्यूकोसा में जन्मजात उपकला रक्षा प्रणाली है, जो विधान और inducible तंत्र 2 से मिलकर एक संवेदनशील जैविक प्रणाली के माध्यम से कार्य करता है।
उपकला बाधा समारोह के नुकसान एक विकृति है कि जठरांत्र रोगों के एक नंबर की विशेषता है। विवो मेंउपकला बाधा समारोह की परीक्षा एक अनुरेखक अणु की मौखिक gavage और बाद में सीरम विश्लेषण 3 के माध्यम से मूल्यांकन किया जा सकता है। हालांकि, इस तकनीक बाधा रोग के स्थल के रूप में कोई संकेत प्रदान करता है। इन विट्रो और पूर्व vivo Transwell सिस्टम 3 का उपयोग और क्रमश: 4,5 कक्षों ussing transepithelial प्रतिरोध के मूल्यांकन में, आमतौर पर उपकला बाधा समारोह के किराए की मार्कर के रूप में कार्यरत हैं, लेकिन पशु मॉडल 6 का योगदान रोग शरीर क्रिया विज्ञान कमी कर रहे हैं। इस प्रोटोकॉल में हम एक पूर्व vivo ऊतक तैयारी मॉडल है कि आंतों की अखंडता और जो स्तरों के एक नंबर पर श्लैष्मिक बाधा समारोह का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है की प्रत्यक्ष और स्थानीय मूल्यांकन की अनुमति देता का वर्णन है। महत्वपूर्ण बात है, इस तकनीक को रोग के पशु मॉडल को लागू किया जा सकता है, या औषधीय श्लैष्मिक बाधा रोग की गहराई में पूछताछ की अनुमति के लिए चालाकी से किया जा सकता है।
यहाँ, हम श्लैष्मिक बाधा समारोह पूर्व vivo का आकलन करने के अलगाव और आंतों की थैलियों की तैयारी विस्तृत है। आंतों थैली तैयारियों मुख्य रूप से दवा अनुसंधान के क्षेत्र में उपयोग किया गया है, आंत भर में उम्?…
The authors have nothing to disclose.
This work was funded by National Health and Medical Research Project Grant APP1021582 and a Hunter Medical Research Institute grant sponsored by Sparke Helmore/NBN Triathlon and the Estate of the late Leslie Kenneth McFarlane.
Dekantel Non-absorbable Silk suture | Braintree Scientific | SUT-S 116 | |
Media 199 (TC199) | Life Technologies | 11043-023 | No phenol red as this interferes with fluorescence |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Life Technologies | 21063-045 | No phenol red as this interferes with fluorescence |
N-acetylcysteine | Sigma Aldrich | Use at 10mM in media | |
Small animal vascular cathether: Physiocath | Data Sciences International | 277-1-002 | |
FITC-Dextran 4400 MW | Sigma Aldrich | FD-4 | |
FITC-Dextran 20,000 MW | Sigma Aldrich | FD-20 | |
FITC-Dextran 70,000 MW | Sigma Aldrich | FD-70 |