This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or “intestinal sacs” as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.
Эпителиальный барьер является первым врожденным защита желудочно-кишечного тракта и избирательно регулирует транспорт из просвета к нижележащим тканях, ограничивая перенос мелких молекул через эпителий и практически полностью запрещающий эпителиальную макромолекулярную транспорт. Эта селективность определяется слизистой слоя геля, который ограничивает транспорт липофильных молекул и обоих апикальных рецепторов и узких соединительных белковых комплексов эпителия. В пробирке модели культуры клеток эпителия удобны, но в качестве модели, им не хватает сложность взаимодействий между микробиоты, слизистой-гель, эпителий и иммунной системы. С другой стороны, в естественных условиях оценка поглощения или проницаемости кишечника может быть выполнена, но эти анализы измерить общую желудочно-кишечную абсорбцию, без указания площадке специфичности. Экс естественных проницаемости анализов с использованием "кишечные мешочки"; являются быстрый и чувствительный метод измерения либо общую целостности кишечного или сравнительный перевозки конкретных молекулы, с дополнительным преимуществом кишечной специфики сайта. Здесь мы опишем приготовление кишечных мешков для исследований проницаемости и вычисление очевидно проницаемости (P приложение) молекулы через кишечный барьер. Эта техника может быть использована в качестве метода оценки абсорбции лекарственного, или изучить региональную эпителиальный барьер дисфункции у животных моделях желудочно-кишечных заболеваний.
Кишечного эпителиальный барьер желудочно-кишечного тракта является площадь поверхности слизистой оценивается в 400 м 2 в взрослого человека. Следовательно, она постоянно подвергается вызов от микробов, попадает препаратов, питательных веществ и бактериальных токсинов. Хост должен не только различать приемлемые синантропных бактерий и потенциально патогенных микроорганизмов, но должна предотвратить эти виды и их секретируемые молекулы от пересечения эпителиальный барьер, в то же время позволяя поглощение питательных веществ. Таким образом, роль кишечном эпителии будет действовать в качестве селективного барьера к просветными Содержание 1. Это достигается, в частности, путем врожденной эпителиальной защитной системы на слизистой, который действует через реагировать биологической системе, состоящей из конститутивных и индуцируемых механизмов 2.
Потеря функции эпителиальный барьер является патологией, что является характерной чертой ряда заболеваний желудочно-кишечного тракта. В естественных условияхэкспертиза эпителиальной барьерной функции могут быть оценены через желудочный зонд молекулы индикаторного и последующего анализа сыворотки 3. Однако эта методика не дает никаких указаний на сайт барьерного дисфункции. В пробирке и экс естественных оценки сопротивления трансэпителиального использованием Transwell системы 3 и Ussing камеры 4,5 соответственно, которые обычно используют в качестве суррогатных маркеров эпителиальных барьерной функции, но не хватает способствуя физиологию болезни животных моделей 6. В этом протоколе мы опишем модель подготовки экс виво ткани, обеспечивающую прямое и локализованное оценку кишечной целостности и который может быть использован для оценки слизистой барьерной функции при нескольких уровнях. Важно отметить, что эта методика может быть применена к животных моделях болезни, или может быть фармакологически манипулировать, чтобы позволить в глубине допроса слизистой барьерной дисфункции.
Здесь мы подробно выделение и подготовку кишечника мешочков для оценки слизистой барьерную функцию Экс Vivo. Кишечные препараты SAC уже в основном были использованы в фармацевтических исследованиях, изучая поглощение кандидатов наркотиков через кишечник. Тем не менее, этот анализ в…
The authors have nothing to disclose.
This work was funded by National Health and Medical Research Project Grant APP1021582 and a Hunter Medical Research Institute grant sponsored by Sparke Helmore/NBN Triathlon and the Estate of the late Leslie Kenneth McFarlane.
Dekantel Non-absorbable Silk suture | Braintree Scientific | SUT-S 116 | |
Media 199 (TC199) | Life Technologies | 11043-023 | No phenol red as this interferes with fluorescence |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Life Technologies | 21063-045 | No phenol red as this interferes with fluorescence |
N-acetylcysteine | Sigma Aldrich | Use at 10mM in media | |
Small animal vascular cathether: Physiocath | Data Sciences International | 277-1-002 | |
FITC-Dextran 4400 MW | Sigma Aldrich | FD-4 | |
FITC-Dextran 20,000 MW | Sigma Aldrich | FD-20 | |
FITC-Dextran 70,000 MW | Sigma Aldrich | FD-70 |