This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or “intestinal sacs” as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.
الحاجز الظهاري هو أول دفاع الفطرية في الجهاز الهضمي، وينظم بشكل انتقائي النقل من التجويف إلى المقصورات الأنسجة الكامنة، وتقييد نقل جزيئات أصغر عبر الظهارة وتقريبا تحظر تماما نقل الجزيئات الظهارية. يتم تحديد هذه الانتقائية من قبل طبقة جل المخاطية، مما يحد من نقل جزيئات محبة للدهون وكل من مستقبلات قمي والمجمعات البروتين صلي ضيقة من الظهارة. في المختبر نماذج ثقافة خلية من خلايا ظهارة هي مريحة، ولكن كنموذج، فإنها تفتقر إلى تعقيد التفاعلات بين الجراثيم، المخاطية هلام، ظهارة والجهاز المناعي. من ناحية أخرى، يمكن أداؤها في الجسم الحي تقييم امتصاص الأمعاء أو النفاذية، ولكن هذه المقايسات قياس امتصاص الجهاز الهضمي بشكل عام، مع عدم وجود دليل على خصوصية الموقع. فيفو السابقين فحوصات النفاذية باستخدام "الحويصلات المعوية". هي طريقة أسرع وأكثر دقة لقياس إما سلامة المعوية العامة أو وسائل النقل المقارن من جزيء محدد، مع ميزة إضافية تتمثل في الأمعاء الموقع خصوصية. نحن هنا وصف إعداد الحويصلات المعوية للدراسات النفاذية وحساب نفاذية واضحة (P التطبيق) من جزيء عبر الحاجز المعوي. ويمكن استخدام هذه التقنية كوسيلة لتقييم امتصاص الدواء، أو لفحص الخلل حاجز الظهارية الإقليمي في النماذج الحيوانية من الأمراض المعوية.
حاجز الظهارية في الأمعاء الجهاز الهضمي هو منطقة سطح الغشاء المخاطي تقدر ب 400 م 2 في الإنسان البالغ. ونتيجة لذلك، يتعرض باستمرار للطعن من الميكروبات، والمخدرات بلعها، المواد الغذائية والسموم البكتيرية. المضيف يجب أن لا يميز فقط بين البكتيريا المتعايشة مقبولة ومسببات الأمراض المحتملة، ولكن يجب منع هذه الأنواع والجزيئات التي يفرزها من عبور حاجز الظهارية، بينما في نفس الوقت مما يتيح امتصاص المواد الغذائية. وهكذا، فإن دور ظهارة الأمعاء هو بمثابة حاجز انتقائي لمحتويات اللمعية 1. ويتحقق ذلك، في جزء منه، من قبل نظام الدفاع الظهارية الفطري في الغشاء المخاطي، الذي يعمل من خلال نظام بيولوجي استجابة تتألف من آليات التأسيسية ومحرض 2.
فقدان وظيفة طلائي الحاجز هو علم الأمراض الذي هو سمة من عدد من أمراض الجهاز الهضمي. وفي الجسم الحييمكن تقدير فحص وظيفة حاجز الظهارية من خلال أنبوب تغذية عن طريق الفم من جزيء التتبع وتحليل مصل الدم لاحق 3. ومع ذلك، فإن هذا الأسلوب لا يقدم أي إشارة إلى موقع الخلل الحاجز. في المختبر، وبحكم فيفو تقييم المقاومة بطريق الظهارة باستخدام أنظمة Transwell 3 و غرفة أوسينج 4،5 على التوالي، يعملون عادة كعلامات بديلة من وظيفة حاجز الظهارية، ولكنها تفتقر إلى علم وظائف الأعضاء الأمراض المساهمة في النماذج الحيوانية 6. في هذا البروتوكول وصفنا نموذج إعداد الأنسجة خارج الحي الذي يسمح بتقييم مباشر ومترجم من سلامة الأمعاء والتي يمكن استخدامها لتقييم وظيفة حاجز المخاطية في عدد من المستويات. الأهم من ذلك، يمكن تطبيق هذه التقنية على نماذج حيوانية من المرض، أو قد يتم التلاعب بها دواء للسماح في عمق الاستجواب من ضعف الغشاء المخاطي الحاجز.
هنا، نحن في تفصيل العزلة وإعداد الحويصلات في الأمعاء لتقييم وظيفة حاجز المخاطية خارج الحي. وقد استخدمت الاستعدادات كيس معوي في المقام الأول في مجال البحوث الدوائية، دراسة امتصاص الأدوية مرشح عبر الأمعاء. ومع ذلك، هذا الاختبار هو على قدم المساواة مناسبة تماما ل?…
The authors have nothing to disclose.
This work was funded by National Health and Medical Research Project Grant APP1021582 and a Hunter Medical Research Institute grant sponsored by Sparke Helmore/NBN Triathlon and the Estate of the late Leslie Kenneth McFarlane.
Dekantel Non-absorbable Silk suture | Braintree Scientific | SUT-S 116 | |
Media 199 (TC199) | Life Technologies | 11043-023 | No phenol red as this interferes with fluorescence |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Life Technologies | 21063-045 | No phenol red as this interferes with fluorescence |
N-acetylcysteine | Sigma Aldrich | Use at 10mM in media | |
Small animal vascular cathether: Physiocath | Data Sciences International | 277-1-002 | |
FITC-Dextran 4400 MW | Sigma Aldrich | FD-4 | |
FITC-Dextran 20,000 MW | Sigma Aldrich | FD-20 | |
FITC-Dextran 70,000 MW | Sigma Aldrich | FD-70 |