Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Ex Vivo Intestinal Sacs at vurdere slimhinder permeabilitet i modeller af gastrointestinal sygdom

doi: 10.3791/53250 Published: February 9, 2016

Abstract

Epitelbarrieren er den første medfødte forsvar af mave-tarmkanalen og selektivt regulerer transport fra lumenet til det underliggende væv rum, der begrænser transport af mindre molekyler over slimhinder og næsten fuldstændigt forbud epitelial makromolekylær transport. Denne selektivitet er bestemt af den mukøse gellaget, som begrænser transporten af lipofile molekyler og begge de apikale receptorer og stramme forbindelsesepitoper proteinkomplekser af epitelet. In vitro-cellekultur modeller af epitelet er bekvemme, men som en model, mangler de kompleksitet samspillet mellem mikrobiota, slim-gel, epitel og immunsystemet. På den anden side, kan udføres in vivo vurdering af intestinal absorption eller permeabilitet, men disse assays måler den overordnede gastrointestinal absorption, uden angivelse af site-specificitet. Ex vivo permeabilitet assays ved hjælp af "intestinale sække"; er en hurtig og følsom metode til måling enten samlet intestinal integritet eller sammenlignende transport af et specifikt molekyle, med den ekstra fordel af intestinal websted specificitet. Her beskriver vi udarbejdelsen af intestinale sække for permeabilitet undersøgelser og beregning af den tilsyneladende permeabilitet (P app) af et molekyle gennem tarmbarrieren. Denne teknik kan anvendes som en metode til vurdering lægemiddelabsorption, eller undersøge regional epitelbarriere dysfunktion i dyremodeller af gastrointestinal sygdom.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tarmens epitelbarriere af mave-tarmkanalen er en slimhindeoverflade område anslås til 400 m 2 i den humane voksne. Følgelig er det konstant udsat for slås fra mikrober, indtaget lægemidler, næringsstoffer og bakterielle toksiner. Værten skal ikke kun skelne mellem tolerable kommensale bakterier og potentielle patogener, men skal forhindre disse arter og deres udskilte molekyler fra kryds epitelbarrieren, mens den på samme tid tillader absorption af næringsstoffer. Således rolle tarmepitelet er at fungere som en selektiv barriere til de luminale indhold 1. Dette opnås til dels ved den medfødte epitel- forsvarssystem ved slimhinden, som virker gennem en responsiv biologisk system bestående af konstitutive og inducerbare mekanismer 2.

Tab af Epitelbarrierefunktionen er en patologi, der er karakteristisk for en række gastrointestinale sygdomme. In vivoundersøgelse af epitelial barrierefunktion kan vurderes ved oral sonde af et sporstof molekyle og efterfølgende serum analyse 3. Denne teknik giver ingen indikation med hensyn til stedet for barriere dysfunktion. In vitro og ex vivo evaluering af transepitel modstand ved hjælp Transwell systemer 3 og Ussing kamrene 4,5 henholdsvis er almindeligt ansat som surrogatmarkører for epitelial barrierefunktion, men mangler de bidragydende sygdom fysiologi dyremodeller 6. I denne protokol beskriver vi en ex vivo vævspræparat model, der tillader direkte og lokaliseret vurdering af intestinal integritet, og som kan anvendes til at vurdere mucosal barrierefunktion ved en række niveauer. Vigtigt er det, kan denne teknik anvendes på dyremodeller for sygdom, eller kan være farmakologisk manipuleres for at muliggøre en grundig søgning i slimhindebarrieren dysfunktion.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alt dyr arbejde i denne protokol udføres med streng overholdelse University of Newcastle Animal etiske komité godkendte procedurer.

1. Fremstilling af instrumenter, Kultur Medier og fade

  1. Pre-varm Media 199 (TC199) eller Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) medium til 37 ° C. Præoksygenering mediet ved gennembobling med 95% O2 / 5% CO2. Kontroller at mediet har en endelig pH på 7,3.
  2. Forbered suturen ved at skære to 5 cm sektioner for hver sac. Loop suturerne ind i en ulukket knude.

2. Dissektion og Udarbejdelse af mavetarmkanalen

  1. Træk fast føde 12 timer før aflivning. Om ønsket placere dyr på næringsstoffer gel tilskud i denne periode.
  2. Aflive mus ved natriumpentobarbiton overdosis ([200 mg / kg], intraperitoneal injektion) efterfulgt ved cervikal dislokation efter institutionelle etiske protocols og spray 70% ethanol på abdomen og thorax.
  3. Ved hjælp af en saks, lav et vandret snit i midten af ​​underlivet og udsætte peritoneum.
  4. Fortsæt til adskille og fjerne mavetarmkanalen ved at skære den øvre tyndtarm fra maven ved pylorus sphincter og skære tyktarmen ved den anale randen. Brug en pincet til forsigtigt at fjerne mesenterium. Placer tarmkanalen i forvarmet, iltet medium.
  5. Identificere den del af tarmen, som skal vurderes for permeabilitet (figur 1) og sender denne sektion fri fra resten af tarmkanalen.
    1. For at bevare sammenhængen mellem dyr, måle dele af duodenum og jejunum i forhold til maven, og måle dele af colon og ileum forhold til coecum.
    2. Når du vælger væv segmenter, bemærke tilstedeværelsen af ​​mucosa-associeret lymfevæv såsom Peyerske plaques. Disse kan identificeres som lille nodWORKS på serosale side af hulrummet.
    3. Anvendelse af en 1 ml sprøjte, forsigtigt skylle luminale indhold intestinale segment i en petriskål med forvarmet PBS (37 ° C). Disse fækale indhold kan kasseres eller opbevares ved -80 ° C til fremtidig analyse som ønsket.

3. Udarbejdelse af Intestinal Sacs

  1. Der fremstilles en 1 ml sprøjte med en 300 ul volumen af ​​testforbindelsen eller molekyle. Til mucosal integritet, en 1 mg / ml opløsning af FITC-dextran M.Wt. 4.400 kan anvendes. Prober der spænder fra 4,400-70,000 Da i størrelse kan anvendes til forøget sensitivitet. Sikker passe et lille dyr vaskulær kateter på sprøjten.
  2. Mål 5 cm fra åbningen af ​​tarmens segment og binde segmentet forsvarligt lukket med en sutur-løkke på dette punkt. Anbring forsigtigt en pre-bundet sutur-løkke rundt om åbningen af ​​tarmen og indsæt stump kateter. Træk i løkken lukket således at fastgøre tarm segmentog frigive 300 pi volumen fra sprøjten ind i tarmen, der sikrer, at al opløsningen injiceres.
  3. Fjern forsigtigt kateteret samtidig trækker sutur løkke til at sikre lukning af tarm vej. Skær intestinal sac løs fra tarmen og anbringes i et 50 ml konisk rør fyldt med 20 ml oxygeneret medium, forvarmet til til 37 ° C.

4. Måling af permeabilitet

  1. Place koniske rør indeholdende de intestinale sække i et opvarmet vandbad indstillet til 37 ° C. Ved 0, 30, 60, 90 og 120 min tidspunkter, tage en 100 pi prøve fra konisk rør og overføres til en plade med 96, erstatte volumen med 100 pi frisk medium i hvert tilfælde.
  2. Efter den sidste prøve er taget, skæres åbne sække ved punktet for sutur og ned på længden af ​​segmentet, udsætter slimhindeoverfladen.
  3. Mål længden og bredden af ​​hver tarm segment. Hvis desirød, snap fryse segmenter og opbevares ved -80 ° C i protein eller biokemisk analyse, eller alternativt opbevares i RNA stabilisering løsning til molekylære assays.
  4. Konstruere en standardkurve af log fortyndinger for FITC-mærkede molekyler fra 1 til 1 x 10 -6.
  5. Mål prøver og standarder for FITC på en fluorescerende plade-læser, FITC excitation / emission: 495 nm / 519 nm.

5. Beregning af tilsyneladende permeabilitet for hver enkelt Intestinal Sac

  1. Konvertere tidsenheder til sek.
  2. For hvert tidspunkt, beregne den kumulative koncentration, Q

    Q t = (C t * Vr) + (Q t sum * V s),
    hvor:

    Q t = Kumulativ koncentration til tiden t
    C t = Koncentration på tidspunktet t
    Vr = volumen ved modtagersiden
    Q t sum = Sum af alle tidligere Q t
    V s =Volumen samplet
  3. Plot Q versus tid (T) og beregne hældningen: AQ / AT
  4. Beregn den tilsyneladende permeabilitet (Papp)

    P app = (AQ / AT) / (A * Co), hvor:

    A = Areal af væv
    C 0 = Begyndelseskoncentration

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne protokol kan anvendes til at undersøge regionale ændringer i tarmens barrierefunktion i dyremodeller af gastrointestinal sygdom. Ved at måle fluxen af en paracellulær probe hen over slimhindeoverfladen ved varierende områder i mavetarmkanalen 7, kan integriteten af de epiteliale tight junctions vurderes. Endvidere ved at variere beskaffenheden af den paracellulære probe ved størrelse (figur 2) eller hydrofobicitet (figur 3), graden af epitelial perturbation eller integriteten af slimhinderne gellaget, kan også måles. Anvender større molekylvægtmarkører giver mulighed for en mere følsom forespørgsel af paracellulær permeabilitet af slimhinden, afsløre diskrete ændringer, der måske ikke er synlige ved elektrofysiologiske målinger såsom transepithelial elektrisk modstand (TEER), men som ville være tilstrækkelig til at tillade paracellulære transport (figur 2). mucokutantsal inflammation kan føre til et tab af slimceller og reduktion af beskyttelsen mukøse gel, der normalt ligger over og beskytter epitel interface. Brug af hydrofobe prober, kan integriteten af den intestinale mukøse gellaget også undersøges (figur 3). Desuden kan regional barriere integritet undersøges inden for specifikke forberedelse af intestinale sække fra forskellige tarm områder. Regionale ændringer i barrierefunktion variere inden forskellige dyremodeller for sygdom og dermed anvendelsen af intestinale sække tillader en lokaliseret vurdering af intestinal barrierefunktion (figur 4), sammenlignet med oral sonde af prober og efterfølgende serum-assay.

Figur 1
Figur 1. Diagram af den murine mavetarmkanalen. En skematisk af mavetarmkanalen hos et C57BI / 6 mus, fra maven til than anus. Tyndtarmens kryds ikke let differentieres makroskopisk og konsekvent prøveudtagning hjælper med at minimere mus til mus variation. Med henblik på at skabe intestinale sække, vil en 5 cm segment distalt for pylorus sphincter omfatte duodenum. En 10 cm sektion strækker sig proksimalt fra coecum vil omfatte ileum. Den resterende tyndtarm væv betegner jejunum. Det endetarmen er placeret 2 cm proksimalt til anus, mens de resterende tyktarmen, der strækker sig til coecum repræsenterer tyktarmen 8. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2.   Størrelsesafhængig paracellulær transport af FITC-dextran molekyler selvom epithelial mucosa i kontrol og DSS colitis animaLs. Intestinale sacs blev fremstillet ud fra koloner af DSS-mus 10 dage i løbet af sygdommen. Sacs blev fyldt med 1 mg / ml opløsning af FD-4 (MW 4.400 Da), FD-20 (MW 20.000 Da) eller FD-70 (70.000 Da) og flux af FITC-dextran permeabilitet markør blev målt over 120 min. Aldersmatchede sunde dyr blev anvendt som kontroller. N = 5, 2 tekniske replikater pr N. ** p <0,01, t-test. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Figur 3 :. Indflydelsen af slim-gel-lag på barriereintegriteten til hydrofobe forbindelser. Intestinale sacs blev fremstillet ud fra koloner af DSS-mus 10 dage i løbet af sygdommen. Aldersmatchede sunde dyr blev anvendt som kontroller. For negative slim-gel kontrol, tarmeneblev fyldt med 10 mM N-acetylcystein (NAC) (300 pi volumen pr 5 cm af tarmen) og inkuberet ved 37 ° C i 15 minutter og skyllet med frisk medium før sacs fremstillet. Sacs blev fyldt med 1 mg / ml opløsning af FD-4 (MW 4.400 Da) og flux målt over 120 min. N = 3, 2 tekniske replikater pr N. * p <0,05, ** p <0,01, t-test. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4
Figur 4. Den regionale permeabilitet af tarmen til FD-4 i murine modeller af tarmbetændelse. Intestinal sacs blev fremstillet fra jejunum, ileum eller colon af sunde dyr, DSS dyr eller antibiotika-induceret dysbiosis (AID) dyr. Sacs blev fyldt med 1 mg / ml opløsning af FD-4 (MW 4.400 Da) og flux målt over 120 min. N = 3, 2 tekniske replikater pr N. * p <0,05, ** p <0,01, t-test. Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Her har vi beskrevet isolering og fremstilling af intestinale sække til vurdering mucosal barrierefunktion ex vivo. Intestinal sac præparater er primært anvendt i farmaceutisk forskning, undersøge absorptionen af ​​lægemiddelkandidater i hele tarmen. Imidlertid er dette assay lige velegnet til undersøgelse af intestinal sygdom. Intestinal permeabilitet kan variere meget fra område til område og stedet konkret vurdering af permeabilitet giver en bedre forståelse af den regionale betydning af slimhinde integritet i fordøjelsessygdomme. Analysen er robust og under de korrekte fysiologiske forhold, isolerede væv forbliver levedygtige i op til 6 timer post mortem. Efter eutanasi, hastigheden af ​​vævspræparatet er vigtig, og tarmen skal skylles af dens indhold og overført til oxygeneret medium så hurtigt som muligt. For at sikre overensstemmelse mellem dyr, er det vigtigt, at de korrekte intestinale regioner er identified (figur 1). Det anbefales, at colon og ileum segmenter måles fra coecum, mens segmenter af duodenum og jejunum måles fra maven. Fordi forskellige stammer, modeller eller transgene dyr kan være større, og har længere Gits, er det værd at karakterisere den gennemsnitlige længde eller hver tarm segment i din model, før de indleder permeabilitet analyser.

Ud over regional sammenhæng, er det vigtigt at sikre, at hver intestinal sac skæres til samme længde og sac er fyldt med den korrekte mængde af væske. Inkonsistens i disse faktorer vil resultere i ulige udspiling af slimhinden mellem assays. Under-udspiling af intestinale segment ikke kun reducerer påvirkning af de luminale indhold til slimhindeoverfladen, men øger også tykkelsen af ​​vævet gennem hvilken markøren skal bevæge. Over-udspiling af segmentet kan beskadige væv eller aktivere stress-responser i vævet, potentielt confounding resultater. Det skal bemærkes, at der ved beregningen af Papp tager ikke højde for overfladeareal villus struktur. Mens dette fører til fejl i beregningen af ​​den faktiske tilsyneladende permeabilitet af vævet, berører den ikke sammenlignende resultater mellem modeller, som overfladearealet beregnes som en konstant. Eventuelle ændringer i overfladeareal på grund af sygdom modsvares af tab af epitelial integritet og protokollen er tilstrækkelig robust til at identificere ændringer i permeabilitet med sygdomsprogression 6.

Det anbefales at anvende vævskulturmedium. I undersøgelser udført af Barthe et al. Blev fundet brugen af TC199 til at øge levetiden af epitel levedygtighed og væv histologisk arkitektur, når der sammenlignes med simple salt buffere 9. I vores undersøgelser opretholdes, både DMEM og TC199 medium ved 37 ° C forudsat optimale betingelser for væv overlevelse 5,6,10. Den korrekte medierforsyner epithelet med næringsstoffer, der er nødvendige for at opretholde vævsintegritet, under opretholdelse temperatur under assayet sikrer optimal vævsmetabolisme som er afgørende stram forbindelsesepitop integritet og assays involverer aktiv transport via transcellulær pathways. Temperaturer under 37 ° C forårsager tab af levedygtighed væv, øge paracellulær transport og faldende transcellulær transport 11. Således er afgørende forlænger levedygtighed væv med optimale betingelser og derved kan analysen bruges ikke kun til at undersøge den regionale barriere integritet og men også at undersøge interventionsstudier og fysiologiske og transkriptionelle reaktioner.

Mens primært til lægemiddelabsorption studier, at teknikker undersøge tilsyneladende permeabilitet (Papp) af en markør molekyle på tværs af en epitelial barriere er et meget følsomt måling af tarm integritet 12-15. I modsætning til surrogat ex vivo overvåNTS af barrierefunktion, såsom TEER, Papp er en direkte og meget følsom måling af den intestinale barriere 4. Det er værd at bemærke, at TEER målinger og permeabilitet målt ved Papp af markørmolekyler ikke altid sammen. TEER målinger omfatter modstanden af begge tight junctions og transcellulær parallelle modstande 16. Derfor TEER er en måling af den kombinerede modstand tilbydes af tight junctions og cellerne selv. Hvis celle-celle foreninger er svag (dvs. tight junctions er utætte) dette bidrag til den samlede modstand af et monolag vil være lav. Således små ændringer i stramme forbindelsesepitoper modstande til utætte epitel bliver ubetydelige ændringer af modstande epithelet som helhed. I modsætning hertil Papp assays måler evnen hos et molekyle til at krydse den mucosale barriere 17 og faktisk følsomhed Papp målinger kan alstreres gennem valg af forskellig størrelse markørmolekyler (figur 1). Behandlingen af ​​markør størrelse er vigtig i forhold til modellen for intestinal sygdom, der undersøges. Vis alle modeller af allergi eller funktionel sygdom 18,19, hvor tab af integritet er mild til moderat, kan være mere egnet til lavere molekylvægt markører, som vil tillade identifikation af subtile ændringer tarm barrierefunktion. I modsætning hertil med modeller som DSS colitis, som indebærer ribbe af tarmepitelet, kan større markører være mere hensigtsmæssigt at vurdere slimhindeheling, som relativt små stigninger i barriere integritet vil blive fremhævet.

Mens intestinale sække tilbyder en fysiologisk relevant model af GI barrierefunktion, er der nogle begrænsninger med hensyn til variabiliteten af ​​dyremodeller, der skal overvejes. For eksempel kan den sekretoriske staten eller epitel påvirke både paracellulære transport på tværs af INTEStand 20 og integriteten af slimhinderne gellag 5. Mens ex vivo assays inkorporerer elektrofysiologiske målinger, såsom Ussing kammer præparater, kan tage højde for dette, tarm sække ikke. For det andet ved udarbejdelsen af tarm sacs forskere skal tegne sig for lymfoide strukturer, såsom Peyerske plaques, inden sac præparater, da disse kan påvirke permeabiliteten af vævet 21. På trods af disse overvejelser, i modsætning til mange cellekulturmodeller, anvendes til at vurdere epithelial integritet, de intestinale sække tilbyde bidrag fra såvel en mukøse gellag og en underliggende lamina propria. Bidraget fra slimhinderne gellaget, navnlig kan vurderes ved anvendelse af mucolytiske midler, såsom N-acetylcystein eller hydrofobe tracer molekyler, såsom dexamethason 5,17. Dette kan være særligt vigtigt ved vurderingen intestinal permeabilitet i modeller for cancerterapi eller inflammatorisk tarmsygdom, wher tab af slimhinderne barriere kan være en tidlig patologi i slimhindeinflammation 22,23. Ligeledes, i modeller for diarré sygdom, funktionel GI sygdom eller dysbiosis, intestinal slim produktion og samlet slim gel integritet kan ændres på regionalt steder 5,19,24. Oral sonde af permeabilitet markører og efterfølgende serum sampling er en anden mulighed for at vurdere intestinal permeabilitet in vivo. Selv om denne fremgangsmåde har minimal manipulation af væv, er det et sammensat mål for intestinal barrierefunktion og det ikke vurdere de regionale bidrag til den overordnede barriere. Forskellige modeller af GI sygdom sandsynligvis har forskellige steder i relative betydning, som ikke vil blive forklares med oral sonde tilgange. Anvendelsen af ​​intestinale sække, er derfor en hurtig, følsom og fysiologisk relevant assay, som kan anvendes til at undersøge regional tarmslimhinde integritet i små dyremodeller for sygdom.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dekantel  Non-absorbable Silk suture Braintree Scientific SUT-S 116
Media 199 (TC199)  Life Technologies 11043-023 No phenol red as this interferes with fluorescence
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Life Technologies 21063-045 No phenol red as this interferes with fluorescence
N-acetylcysteine Sigma Aldrich Use at 10 mM in media
Small animal vascular cathether: Physiocath Data Sciences International 277-1-002
FITC-Dextran 4,400 MW Sigma Aldrich FD-4
FITC-Dextran 20,000 MW Sigma Aldrich FD-20
FITC-Dextran 70,000 MW Sigma Aldrich FD-70

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272 (2013).
  2. Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobial peptides in innate immunity of the human intestine. Journal of gastroenterology. 38, 717-726 (2003).
  3. Robinson, A., et al. Mucosal protection by hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibition. Gastroenterology. 134, 145-155 (2008).
  4. Feighery, L., et al. Increased intestinal permeability in rats subjected to traumatic frontal lobe percussion brain injury. The Journal of trauma. 64, 131-137 (2008).
  5. Keely, S., et al. Chloride-led disruption of the intestinal mucous layer impedes Salmonella invasion: evidence for an 'enteric tear' mechanism. Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 28, 743-752 (2011).
  6. Keely, S., et al. Contribution of epithelial innate immunity to systemic protection afforded by prolyl hydroxylase inhibition in murine colitis. Mucosal immunology. 7, 114-123 (2014).
  7. Sourisseau, T., et al. Regulation of PCNA and cyclin D1 expression and epithelial morphogenesis by the ZO-1-regulated transcription factor ZONAB/DbpA. Mol Cell Biol. 26, 2387-2398 (2006).
  8. Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
  9. Barthe, L., Woodley, J. F., Kenworthy, S., Houin, G. An improved everted gut sac as a simple and accurate technique to measure paracellular transport across the small intestine. European journal of drug metabolism and pharmacokinetics. 23, 313-323 (1998).
  10. Marks, E., et al. Oral Delivery of Prolyl Hydroxylase Inhibitor: AKB-4924 Promotes Localized Mucosal Healing in a Mouse Model of Colitis. Inflammatory bowel diseases. 21, 267-275 (2015).
  11. Keely, S., et al. Hypoxia-inducible factor-dependent regulation of platelet-activating factor receptor as a route for gram-positive bacterial translocation across epithelia. Mol Biol Cell. 21, 538-546 (2010).
  12. Brayden, D. J., Bzik, V. A., Lewis, A. L., Illum, L. CriticalSorb promotes permeation of flux markers across isolated rat intestinal mucosae and Caco-2 monolayers. Pharmaceutical research. 29, 2543-2554 (2012).
  13. Hubbard, D., Ghandehari, H., Brayden, D. J. Transepithelial transport of PAMAM dendrimers across isolated rat jejunal mucosae in ussing chambers. Biomacromolecules. 15, 2889-2895 (2014).
  14. Keely, S., et al. In vitro and ex vivo intestinal tissue models to measure mucoadhesion of poly (methacrylate) and N-trimethylated chitosan polymers. Pharmaceutical research. 22, 38-49 (2005).
  15. Maher, S., et al. Evaluation of intestinal absorption enhancement and local mucosal toxicity of two promoters. I. Studies in isolated rat and human colonic mucosae. European journal of pharmaceutical sciences : official journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences. 38, 291-300 (2009).
  16. Balda, M. S., et al. Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein. The Journal of cell biology. 134, 1031-1049 (1996).
  17. Behrens, I., Stenberg, P., Artursson, P., Kissel, T. Transport of lipophilic drug molecules in a new mucus-secreting cell culture model based on HT29-MTX cells. Pharmaceutical research. 18, 1138-1145 (2001).
  18. Stefka, A. T., et al. Commensal bacteria protect against food allergen sensitization. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 13145-13150 (2014).
  19. Keely, S., et al. Activated fluid transport regulates bacterial-epithelial interactions and significantly shifts the murine colonic microbiome. Gut microbes. 3, 250-260 (2012).
  20. Barrett, K. E., Keely, S. J. Chloride secretion by the intestinal epithelium: molecular basis and regulatory aspects. Annual review of physiology. 62, 535-572 (2000).
  21. Soni, J., et al. Rat, ovine and bovine Peyer's patches mounted in horizontal diffusion chambers display sampling function. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 115, 68-77 (2006).
  22. Justino, P. F., et al. Regulatory role of Lactobacillus acidophilus on inflammation and gastric dysmotility in intestinal mucositis induced by 5-fluorouracil in mice. Cancer chemotherapy and pharmacology. (2015).
  23. Tran, C. D., Sundar, S., Howarth, G. S. Dietary zinc supplementation and methotrexate-induced small intestinal mucositis in metallothionein-knockout and wild-type mice. Cancer biology & therapy. 8, 1662-1667 (2009).
  24. Musch, M. W., Wang, Y., Claud, E. C., Chang, E. B. Lubiprostone decreases mouse colonic inner mucus layer thickness and alters intestinal microbiota. Digestive diseases and sciences. 58, 668-677 (2013).
<em>Ex Vivo</em> Intestinal Sacs at vurdere slimhinder permeabilitet i modeller af gastrointestinal sygdom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).More

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter