Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Ex Vivo Tarm Sacs å vurdere slimhinner Permeabilitet i modeller av gastrointestinal sykdom

doi: 10.3791/53250 Published: February 9, 2016

Abstract

Epiteliale barrieren er den første medfødt forsvar av mage-tarmkanalen og selektivt regulerer transport fra lumenet til de underliggende vev kamrene, som begrenser transporten av mindre molekyler på tvers av epitelet og nesten fullstendig forbud mot epitel makromolekylær transport. Denne selektivitet er bestemt av den slimete gel-lag, som begrenser transporten av lipofile molekyler og både de apikale reseptorer og stramme synaptiske proteinkomplekser av epitelet. In vitro cellekultur modeller av epitelet er praktisk, men som en modell, de mangler kompleksiteten i samspillet mellom bakterieflora, slimete-gel, epitel og immunsystem. På den annen side, kan in vivo-evaluering av intestinal absorpsjon eller permeabilitet skal utføres, men disse analysene måle samlet gastrointestinal absorpsjon, uten noen indikasjon på området spesifisitet. Ex vivo-permeabilitet-analyser ved hjelp av "tarm" sekker; er en hurtig og følsom metode for å måle enten samlet intestinal integritet eller sammen transport av et spesifikt molekyl, med den ekstra fordelen av intestinale området spesifisitet. Her beskriver vi utarbeidelsen av tarm sekker for permeabilitet studier og beregningen av den tilsynelatende permeabilitet (P app) av et molekyl på tvers av tarmbarrieren. Denne teknikken kan bli anvendt som en metode for å vurdere medikament absorpsjonen, eller for å undersøke regional epitele barrieren dysfunksjon i dyremodeller av gastrointestinal sykdom.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Intestinal epithelial barrieren i fordøyelseskanalen er en slimhinneoverflateareal beregnet på 400 m 2 i et voksent menneske. Følgelig er det stadig utsatt flagget fra mikrober, inntatte legemidler, næringsstoffer og bakterielle toksiner. Verten må ikke bare skille mellom tolererkommensale bakterier og potensielle patogener, men må forhindre at disse arter og deres utskilte molekyler fra krysset epiteliale barriere, mens på samme tid slik at absorpsjon av næringsstoffer. Således er rollen til tarmepitelet for å virke som en selektiv barriere for de luminale innhold 1. Dette oppnås delvis ved det medfødte epithelial forsvarssystemet på mukosa, som virker gjennom en responsiv biologisk system som består av konstitutive og induserbare mekanismer 2.

Tap av epitelial barrierefunksjonen er en patologi som er karakteristisk for en rekke av gastrointestinale sykdommer. In vivo-undersøkelse av epitelial barrierefunksjonen kan bli vurdert gjennom oralt inntak av en tracer molekyl og påfølgende serum analyse 3. Men denne teknikken gir ingen indikasjon med hensyn til området for barrieren dysfunksjon. In vitro og ex vivo vurdering av transepitelial motstand ved hjelp av Transwell systemer 3 og Ussing-kammere 4,5 henholdsvis, blir ofte anvendt som surrogatmarkører for epitelial barrierefunksjon, men mangler den medvirkende sykdom fysiologi av dyremodeller 6. I denne protokollen beskriver vi en ex vivo vev fremstilling modell som gjør det mulig direkte og lokalisert evaluering av intestinal integritet, og som kan brukes til å vurdere mucosal barrierefunksjon på en rekke nivåer. Viktigere, kan denne teknikken bli anvendt for å dyremodeller av sykdom, eller kan være farmakologisk manipulert til å tillate grundig utspørring av slimhinnebarriere dysfunksjon.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alle dyr arbeid i denne protokollen er utført med streng overholdelse av University of Newcastle dyreetikk Komiteen godkjente prosedyrer.

1. Utarbeidelse av instrumenter, Culture Media and Dishes

  1. Forvarm Media 199 (TC199) eller Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) media til 37 ° C. Pre-oksygenatom mediet ved å boble med 95% O2 / 5% CO2. Sjekk at mediet har en endelig pH på 7,3.
  2. Forbered sutur ved å kutte to 5 cm seksjoner for hver sac. Loop sting i en unclosed knute.

2. Disseksjon og klargjøring av mage-tarmkanalen

  1. Trekk fast føde 12 timer før avlivning. Hvis ønskelig, legg dyrene på nærings gel kosttilskudd i løpet av denne tiden.
  2. Avlive mus ved natriumpentobarbiton overdose ([200 mg / kg], intraperitoneal injeksjon) etterfulgt av halshugging i henhold til institusjonelle etikk protokolonner og spray 70% etanol på magen og thorax.
  3. Ved hjelp av en saks, lage et horisontalt innsnitt i midten av magen og eksponere peritoneum.
  4. Fortsett å separere og fjerne mage-tarmkanalen ved å skjære den øvre tynntarm fra magen ved den pyloriske ringmuskelen, og kutting av tykktarmen ved analåpningen. Bruk en pinsett til å forsiktig fjerne mesentery. Plasser tarmkanalen i forvarmet, oksygenrikt medium.
  5. Identifisere den delen av tarmen som skal vurderes for permeabilitet (figur 1), og kutte denne delen fri fra resten av tarmkanalen.
    1. For å opprettholde konsistens mellom dyr, måle deler av duodenum og jejunum i forhold til magen, og måle deler av tykktarmen og ileum i forhold til cecum.
    2. Når du velger vev segmenter, oppmerksom tilstedeværelse av slimhinne-assosiert lymfevev som Peyers patcher. Disse kan bli identifisert som lite nikkules på den serosale side av hulrommet.
    3. Anvendelse av en 1 ml sprøyte, skylles forsiktig den luminale innhold i tarmsegmentet inn i en petriskål med forvarmet PBS (37 ° C). Disse avførings innhold kan kastes eller lagres ved -80 ° C for fremtidig analyse som ønsket.

3. Utarbeidelse av Intestinal Sacs

  1. Tilbered en 1 ml sprøyte med et 300 ul volum av testforbindelsen eller molekyl. For mukosal integritet, en 1 mg / ml oppløsning av FITC-dekstran M.Wt. 4400, kan anvendes. Prober som strekker seg fra 4,400-70,000 Da i størrelse kan anvendes for økt følsomhet. Trygt å passe et lite dyr vaskulær kateter på sprøyten.
  2. Mål 5 cm fra åpningen av tarmsegmentet og binde segmentet sikkert lukket med en sutur-sløyfe på dette punktet. Stikk forsiktig en pre-bundet sutur-sløyfe rundt åpningen av tarmen og sett avstumpet kateteret. Trekk løkken lukket for derved å sikre tarmsegmentetog slipp den 300 fil volum fra sprøyten inn i tarmen, noe som sikrer at all oppløsningen er injisert.
  3. fjerne kateteret forsiktig mens du samtidig trekker sutur løkka for å feste nedleggelsen av tarm sac. Skjær tarmsekken løs fra tarmen og plasseres i en 50 ml konisk rør fylt med 20 ml av oksygenrikt medium, forvarmet til å 37 ° C.

4. Måling av Permeabilitet

  1. Plasser koniske rør som inneholdt tarm sekker i et oppvarmet vannbad innstilt på 37 ° C. Ved 0, 30, 60, 90 og 120 minutter tidspunkter, ta en 100 pl prøve fra den koniske rør og overføres til en 96 brønners plate, ved å erstatte volumet med 100 ul friskt medium i hvert tilfelle.
  2. Etter den siste prøven er tatt, kuttet åpne sekker ved punktet for sutur og ned lengden av segmentet, utsette slimhinneoverflaten.
  3. Måle lengden og bredden av hver tarmsegment. Hvis desirød, snap fryse segmentene og oppbevar ved -80 ° C for protein eller biokjemisk analyse, eller alternativt butikk i RNA stabilisering løsning for molekylære analyser.
  4. Konstruer en standardkurve logg fortynninger for FITC-merket molekyler fra 1 til 1 x 10 -6.
  5. Mål prøver og standarder for FITC på en fluorescerende plateleser, FITC eksitasjon / emisjon: 495 nm / 519 nm.

5. Beregning av relativ permeabilitet for hver enkelt Tarm Sac

  1. Konverter tidsenheter til sek.
  2. For hvert tidspunkt, beregne den kumulative konsentrasjon, Q

    Q t = (C t * V r) + (Q t summen * V s),
    Hvor:

    Q t = kumulativ konsentrasjon ved tid t
    C t = konsentrasjon ved tiden t
    V r = Volum på mottakersiden
    Q t sum = summen av alle tidligere Q t
    V s =Volume samplet
  3. Plot Q som funksjon av tid (T) og beregne helningen: δQ / At
  4. Beregn den tilsynelatende permeabilitet (P app)

    P app = (δQ / At) / (A * Co), Hvor:

    A = Areal av vev
    C 0 = Initial konsentrasjon

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne protokollen kan bli brukt til å undersøke regionale forandringer i tarmbarriere i dyremodeller av gastrointestinal sykdom. Ved å måle fluksen av en paracellulære sonde over mukosal overflate ved forskjellige områder av mage-tarmkanalen 7, kan integriteten av epiteliale tett veikryss bli vurdert. I tillegg, ved å variere arten av den paracellulære sonde med størrelse (figur 2) eller hydrofobi (figur 3), graden av epiteliale forstyrrelse, eller integriteten av slimete gelsjiktet, kan også bli målt. Anvendelse av større molekylvektmarkører muliggjør en mer følsom utspørring av paracellulære permeabilitet i slimhinnene, detektering av diskrete endringer, som kanskje ikke er synlig ved elektrofysiologiske målinger som transepitelial elektrisk motstand (teer), men som ville være tilstrekkelig til å tillate paracellulær transport (figur 2). mucosal betennelse kan føre til et tap av slimceller og reduksjon i den beskyttende slimete gel som normalt ligger over og beskytter den epiteliale grensesnittet. Ved hjelp av hydrofobe sonder, kan integriteten til den intestinale mukøse gelsjiktet også undersøkes (figur 3). I tillegg kan regional barriereintegritet bli behandlet med den spesifikke fremstilling av intestinal blærer fra forskjellige tarmområder. Regionale endringer i barrierefunksjon variere innenfor forskjellige dyremodeller av sykdom, og således er bruken av intestinal sekker som gjør det mulig for en lokalisert evaluering av intestinal barrierefunksjonen (figur 4), sammenlignet med oral gavage av prober og påfølgende serum assay.

Figur 1
Figur 1. Diagram av den murine gastrointestinalkanalen. Et skjematisk av mage-tarmkanalen til et C57Bl / 6-mus, fra magesekken til than anus. De små intestinal veikryss, kan ikke lett differensieres makroskopisk og konsistent sampling bidrar til å redusere mus med muse-variant. Med henblikk på å skape tarm sekker, vil en 5 cm segment distalt til den pyloriske ringmuskelen omfatte tolvfingertarmen. En 10 cm seksjon som strekker seg proksimalt fra cecum vil omfatte ileum. Den gjenværende lille tarmvevet representerer jejunum. Endetarmen ligger 2 cm proksimalt til anus, med de resterende tykktarmen, som strekker seg til cecum representerer kolon 8. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
Figur 2.   Størrelse avhengig paracellulære transport av FITC-Dextran molekyler om epithelial slimhinnen i kontroll og DSS kolitt animals. Tarm sekker ble fremstilt fra kolon av DSS mus 10 dager i løpet av sykdommen. Sekker ble lastet med 1 mg / ml oppløsning av FD-4 (MG 4400 Da), FD-20 (MW 20.000 Da) eller FD-70 (70 000 Da) og fluksen av FITC-dekstran permeabilitet markør ble målt i løpet av 120 min. Alder tilpassede friske dyr ble benyttet som kontroller. N = 5, 2 tekniske replikater per N. ** p <0,01, t-test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3 :. Påvirkningen av slimete-gel-lag på barriereintegritet for hydrofobe forbindelser. Intestinal sekker ble fremstilt fra kolon av DSS mus 10 dager, og i løpet av sykdommen. Alder tilpassede friske dyr ble benyttet som kontroller. For negative slimete-gel kontroll, tarmeneble lastet med 10 mM N-acetylcystein (NAC) (300 ul volum per 5 cm tarm) og inkubert ved 37 ° C i 15 minutter og skylt med friskt medium før sekker fremstilt. Sekker ble lastet med 1 mg / ml oppløsning av FD-4 (MG 4400 Da) og flux målt over 120 min. N = 3, 2 tekniske replikater per N. * p <0,05, ** p <0,01, t-test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 4
Figur 4. Den regionale permeabiliteten av tarmen til FD-4 i murine modeller av tarmbetennelse. Intestinal sekker ble fremstilt fra jejunum, ileum eller colon fra friske dyr, DSS dyr eller antibiotika-indusert dysbiosis (AID) dyr. Sekker ble lastet med 1 mg / ml oppløsning av FD-4 (MG 4400 Da) og flux målt over 120 min. N = 3, 2 tekniske replikater per N. * p <0,05, ** p <0,01, t-test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Her har vi inngående isolasjon og forberedelse av tarm sekker for å vurdere slimhinnene barrierefunksjon ex vivo. Tarm sac forberedelsene har først og fremst vært brukt i farmasøytisk forskning, undersøke opptaket av kandidat narkotika over tarmen. Imidlertid er denne analysen like godt egnet for undersøkelse av tarmsykdom. Intestinal permeabilitet kan variere sterkt fra region til region og språk konkret vurdering av permeabilitet gir en bedre forståelse av den regionale betydningen av mucosal integritet i fordøyelsessykdommer. Analysen er robust og under de riktige fysiologiske betingelser, isolerte vev forblir levedyktig i opp til 6 timer post mortem. Etter eutanasi, er hastigheten av vev-preparatet viktig og tarmen spyles av innholdet og overført til oksygenrikt medium så hurtig som mulig. For å sikre konsistens mellom dyr, er det viktig at de riktige tarmområdet er identifikasjoned (figur 1). Det anbefales at colonic og ileale segmenter måles fra cecum, mens deler av duodenum og jejunum måles fra magen. Fordi ulike stammer, modeller eller transgene dyr kan være større, og har lengre Gits, er det verdt å karakterisere den gjennomsnittlige lengden eller hver intestinal segment i modellen før han gikk i permeabilitet analyser.

I tillegg til regional konsistens, er det viktig å sikre at hvert tarmsekken er skåret til samme lengde, og posen er fylt med den riktige mengde væske. Inkonsistens i disse faktorene vil resultere i ulik utspiling av slimhinnen mellom analysene. Under-distensjon av tarmsegmentet ikke bare reduserer eksponering av de luminale innhold til slimhinneoverflaten, men øker også tykkelsen av vev gjennom hvilken markør må reise. Over-utspiling av segmentet kan skade vev eller aktivere stressresponser i vevet, potensielt confounding resultater. Det bør bemerkes, at for beregning av P-appen tar ikke hensyn til overflatearealet av villøse struktur. Selv om dette fører til feil i beregningen av den målte relative permeabiliteten av vevet, vil det ikke påvirke sammenlignbare resultater mellom modeller, siden overflatearealet beregnes som en konstant. Eventuelle endringer i areal på grunn av sykdom blir motvirket av tap av epitel integritet og protokollen er tilstrekkelig robust til å identifisere endringer i permeabilitet med sykdomsprogresjon 6.

Bruken av vevsdyrkningsmedium anbefales. I undersøkelser utført ved Barthe et al., Bruken av TC199 ble funnet å signifikant øke levetiden av epithelial levedyktighet og vev histologisk arkitektur, sammenlignet med enkle saltbuffere 9. I våre studier både DMEM og TC199 medium holdt ved 37 ° C gitt optimale forhold for vev overlevelse 5,6,10. Den korrekte mediaforsyner epitel med næringsstoffer som kreves for å opprettholde vev integritet, og samtidig opprettholde temperaturen under analysen sikrer optimal vev metabolisme som er avgjørende stramt junctional integritet og analyser som involverer aktiv transport via transcellular veier. Temperaturer under 37 ° C føre til tap av vev levedyktighet, økende paracellulære transport og redusere transcellular transport 11. Dermed forlenger vev levedyktighet med optimale forhold er avgjørende, og dermed kan analysen brukes ikke bare til å undersøke regionale barriereintegritet og men også å undersøke intervensjonsstudier og fysiologiske og transkripsjonell respons.

Mens primært brukes til narkotika absorpsjon studier, til teknikker undersøke tilsynelatende permeabilitet (P app) av en markør molekyl over en epitelial barriere er en svært følsom måling av tarm integritet 12-15. I motsetning til surrogat ex vivo måling avnts av barrierefunksjon, slik som teer, er P app en direkte og meget følsom måling av tarmbarrieren 4. Det er verdt å merke seg at Teer målinger og permeabilitet målt ved P app av markørmolekyler ikke alltid korrelerer. Teer målinger omfatter motstanden både tett veikryss og transcellular parallelle motstander 16. Derfor Teer er en måling av den kombinerte motstand som tilbys av tett veikryss og cellene selv. Hvis celle-celle foreninger er svak (det vil si de tett veikryss er utett) så dette bidrag til den totale motstand av et monolag vil være lav. Således små endringer i trange synaptiske resistens for utett epitel blir ubetydelige endringer i motstanden i epitelet som en helhet. I motsetning til dette, P app analyser måler evnen til et molekyl til å krysse slimhinnebarrieren 17 og faktisk følsomheten av P app målinger kan være alholds gjennom å velge ulike størrelser markørmolekyler (figur 1). Hensynet til markør størrelse er viktig i forhold til modellen av tarmsykdom som undersøkes. Alle modeller av allergi eller funksjonell sykdom 18,19, der tap av integritet er mild til moderat, kan være mer egnet til lavere molekylvekt markører, som vil tillate identifisering av subtile endringer i tarmbarrierefunksjon. I kontrast, med modeller som DSS kolitt, som innebærer denuding av tarmepitelet, kan større markører være mer hensiktsmessig å vurdere slimhinnetilheling, som relativt små økninger i barriereintegritet vil bli markert.

Mens tarm sekker har en fysiologisk relevant modell av GI barrierefunksjon, er det noen begrensninger med hensyn til variabiliteten i dyremodeller som må tas i betraktning. For eksempel kan den sekretoriske tilstand eller Epitel påvirke både paracellulære transport over INTEStine og 20 integriteten til den slimete gelsjiktet 5. Mens ex vivo-analyser som omfatter elektrofysiologiske målinger, for eksempel Ussing kammer preparater, kan forklare dette, intestinal blærer ikke. For det andre, ved fremstilling av de intestinale blærer forskerne bør utgjøre lymfoide strukturer, slik som Peyers lapper, innenfor SAC preparater, da disse kan påvirke permeabiliteten av vevet 21. Til tross for disse betraktninger, i motsetning til mange cellekulturmodeller som brukes til å vurdere epitelial integritet, tarmblærer gir bidrag av både en slimete gel-lag og et underliggende lamina propria. Bidraget av slimete gelsjiktet, i særdeleshet, kan vurderes ved bruk av mukolytiske midler, slik som N-acetylcystein, eller hydrofobe spor molekyler, slik som deksametason 5,17. Dette kan være særlig viktig ved vurdering av intestinal permeabilitet i modeller for kreftterapi, eller inflammatorisk tarmsykdom, wher tap av slimbarrieren kan være en tidlig patologi i slimhinnebetennelse 22,23. Tilsvarende i modeller av diarésykdommer, funksjonell GI sykdom eller dysbiosis, tarmslimproduksjon og generell slimete gel integritet kan endres ved regionale områder 5,19,24. Oralt inntak av permeabilitet markører og påfølgende serumprøver er et annet alternativ for å vurdere intestinal permeabilitet in vivo. Selv om denne metoden har minimal manipulering av vev, er det et sammensatt mål på tarmbarrierefunksjon og den vurderer ikke de regionale bidrag til den totale barriere. Ulike modeller av GI sykdom er sannsynlig å ha forskjellige områder av relative betydning som ikke vil bli regnskapsført ved oral sonde tilnærminger. Bruken av intestinal sekker, er derfor en hurtig, følsom og fysiologisk relevante analyse som kan anvendes for å undersøke regional tarmslimhinne integritet i små dyremodeller av sykdom.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende økonomiske interesser.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dekantel  Non-absorbable Silk suture Braintree Scientific SUT-S 116
Media 199 (TC199)  Life Technologies 11043-023 No phenol red as this interferes with fluorescence
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Life Technologies 21063-045 No phenol red as this interferes with fluorescence
N-acetylcysteine Sigma Aldrich Use at 10 mM in media
Small animal vascular cathether: Physiocath Data Sciences International 277-1-002
FITC-Dextran 4,400 MW Sigma Aldrich FD-4
FITC-Dextran 20,000 MW Sigma Aldrich FD-20
FITC-Dextran 70,000 MW Sigma Aldrich FD-70

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272 (2013).
  2. Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobial peptides in innate immunity of the human intestine. Journal of gastroenterology. 38, 717-726 (2003).
  3. Robinson, A., et al. Mucosal protection by hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibition. Gastroenterology. 134, 145-155 (2008).
  4. Feighery, L., et al. Increased intestinal permeability in rats subjected to traumatic frontal lobe percussion brain injury. The Journal of trauma. 64, 131-137 (2008).
  5. Keely, S., et al. Chloride-led disruption of the intestinal mucous layer impedes Salmonella invasion: evidence for an 'enteric tear' mechanism. Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 28, 743-752 (2011).
  6. Keely, S., et al. Contribution of epithelial innate immunity to systemic protection afforded by prolyl hydroxylase inhibition in murine colitis. Mucosal immunology. 7, 114-123 (2014).
  7. Sourisseau, T., et al. Regulation of PCNA and cyclin D1 expression and epithelial morphogenesis by the ZO-1-regulated transcription factor ZONAB/DbpA. Mol Cell Biol. 26, 2387-2398 (2006).
  8. Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
  9. Barthe, L., Woodley, J. F., Kenworthy, S., Houin, G. An improved everted gut sac as a simple and accurate technique to measure paracellular transport across the small intestine. European journal of drug metabolism and pharmacokinetics. 23, 313-323 (1998).
  10. Marks, E., et al. Oral Delivery of Prolyl Hydroxylase Inhibitor: AKB-4924 Promotes Localized Mucosal Healing in a Mouse Model of Colitis. Inflammatory bowel diseases. 21, 267-275 (2015).
  11. Keely, S., et al. Hypoxia-inducible factor-dependent regulation of platelet-activating factor receptor as a route for gram-positive bacterial translocation across epithelia. Mol Biol Cell. 21, 538-546 (2010).
  12. Brayden, D. J., Bzik, V. A., Lewis, A. L., Illum, L. CriticalSorb promotes permeation of flux markers across isolated rat intestinal mucosae and Caco-2 monolayers. Pharmaceutical research. 29, 2543-2554 (2012).
  13. Hubbard, D., Ghandehari, H., Brayden, D. J. Transepithelial transport of PAMAM dendrimers across isolated rat jejunal mucosae in ussing chambers. Biomacromolecules. 15, 2889-2895 (2014).
  14. Keely, S., et al. In vitro and ex vivo intestinal tissue models to measure mucoadhesion of poly (methacrylate) and N-trimethylated chitosan polymers. Pharmaceutical research. 22, 38-49 (2005).
  15. Maher, S., et al. Evaluation of intestinal absorption enhancement and local mucosal toxicity of two promoters. I. Studies in isolated rat and human colonic mucosae. European journal of pharmaceutical sciences : official journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences. 38, 291-300 (2009).
  16. Balda, M. S., et al. Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein. The Journal of cell biology. 134, 1031-1049 (1996).
  17. Behrens, I., Stenberg, P., Artursson, P., Kissel, T. Transport of lipophilic drug molecules in a new mucus-secreting cell culture model based on HT29-MTX cells. Pharmaceutical research. 18, 1138-1145 (2001).
  18. Stefka, A. T., et al. Commensal bacteria protect against food allergen sensitization. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 13145-13150 (2014).
  19. Keely, S., et al. Activated fluid transport regulates bacterial-epithelial interactions and significantly shifts the murine colonic microbiome. Gut microbes. 3, 250-260 (2012).
  20. Barrett, K. E., Keely, S. J. Chloride secretion by the intestinal epithelium: molecular basis and regulatory aspects. Annual review of physiology. 62, 535-572 (2000).
  21. Soni, J., et al. Rat, ovine and bovine Peyer's patches mounted in horizontal diffusion chambers display sampling function. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 115, 68-77 (2006).
  22. Justino, P. F., et al. Regulatory role of Lactobacillus acidophilus on inflammation and gastric dysmotility in intestinal mucositis induced by 5-fluorouracil in mice. Cancer chemotherapy and pharmacology. (2015).
  23. Tran, C. D., Sundar, S., Howarth, G. S. Dietary zinc supplementation and methotrexate-induced small intestinal mucositis in metallothionein-knockout and wild-type mice. Cancer biology & therapy. 8, 1662-1667 (2009).
  24. Musch, M. W., Wang, Y., Claud, E. C., Chang, E. B. Lubiprostone decreases mouse colonic inner mucus layer thickness and alters intestinal microbiota. Digestive diseases and sciences. 58, 668-677 (2013).
<em>Ex Vivo</em> Tarm Sacs å vurdere slimhinner Permeabilitet i modeller av gastrointestinal sykdom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).More

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter