Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Ex vivo Intestinal Sacs att bedöma Mukös permeabilitet i Modeller av gastrointestinal sjukdom

doi: 10.3791/53250 Published: February 9, 2016

Abstract

Epitelbarriären är den första medfödda försvaret av mag-tarmkanalen och selektivt reglerar transport från lumen till den underliggande vävnaden fack, begränsa transport av mindre molekyler över epitel och nästan helt förbjuder epitel makromolekylära transport. Denna selektivitet bestämmes av slem gelskikt, vilket begränsar transporten av lipofila molekyler och både de apikala receptorer och snäva junctionala proteinkomplex av epitelet. Cellodling in vitro modeller av epitelet är bekvämt, men som modell, de saknar den komplexiteten hos samspelet mellan mikrobiota, slemhinnor-gel, epitel och immunsystemet. Å andra sidan, kan in vivo bedömning av intestinal absorption eller permeabilitet utföras, men dessa analyser mäter totalt gastrointestinal absorption, utan angivande av plats specificitet. Ex vivo permeabilitet analyser med hjälp av "tarmsäckar"; är en snabb och känslig metod för att mäta antingen total intestinal integritet eller jämförande transport av en specifik molekyl, med den extra fördelen av intestinal-ställespecificitet. Här beskriver vi framställningen av tarmsäckar för permeabilitet studier och beräkningen av den skenbara permeabiliteten (P app) av en molekyl genom tarmbarriären. Denna teknik kan användas som en metod för att bedöma läkemedelsabsorption, eller för att undersöka regional epitelial barriär dysfunktion i djurmodeller av gastrointestinal sjukdom.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tarm epitelial barriär hos mag-tarmkanalen är en mukosal yta uppskattas till 400 m 2 i vuxen människa. Följaktligen är det ständigt utsätts för ifrågasätta från mikrober, intagna läkemedel, näringsämnen och bakterietoxiner. Värden får inte bara skilja mellan tolerabla bakteriefloran och potentiella patogener, men måste förhindra att dessa arter och deras utsöndrade molekyler från att korsa epitelbarriären, medan samtidigt tillåter upptag av näringsämnen. Sålunda är rollen för tarmepitelet för att fungera som en selektiv barriär för de luminala innehållet 1. Detta uppnås, delvis genom det medfödda epiteliala försvarssystem vid slemhinnan, som verkar via ett responsiv biologiskt system som består av konstitutiva och inducerbara mekanismer 2.

Förlust av epitelial barriär funktion är en patologi som är kännetecknande för ett antal gastrointestinala sjukdomar. In vivoundersökning av epitelial barriärfunktion kan bedömas genom oral sondmatning av en spårmolekyl och efterföljande serumanalys 3. Dock erbjuder denna teknik ingen uppgift om platsen för barriärfunktion. In vitro och ex vivo bedömning av transepitelial motstånd med hjälp av Transwell-system 3 och Ussing kamrar 4,5 respektive vanligen användes som surrogatmarkörer för epitelial barriärfunktion, men saknar den bidragande sjukdoms fysiologi djurmodeller 6. I detta protokoll beskriver vi en ex vivo vävnadspreparat modell som möjliggör direkt och lokal bedömning av intestinal integritet och som kan användas för att bedöma mukosal barriärfunktion vid ett antal nivåer. Viktigare, kan denna teknik appliceras på djurmodeller av sjukdom, eller kan vara farmakologiskt manipuleras för att möjliggöra på djupet förhör av slemhinnebarriären dysfunktion.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alla djur arbete i detta protokoll utförs med strikt följsamhet till University of Newcastle Animal etikkommitté godkända förfaranden.

1. Framställning av instrument, odlingsmedia och rätter

  1. Pre-varm Media 199 (TC199) eller Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) media till 37 ° C. Pre-syresätta mediet genom bubbling med 95% O2 / 5% CO2. Kontrollera att mediet har ett slutligt pH av 7,3.
  2. Förbered sutur genom att skära två 5 cm sektioner för varje säck. Loop suturerna till en ej avslutad knut.

2. Dissekering och Beredning av mag-tarmkanalen

  1. Återkalla fast föda 12 timmar före eutanasi. Om så önskas, placera djuren på närings gel tillskott under denna tid.
  2. Euthanize möss genom natriumpentobarbiton överdosering ([200 mg / kg], intraperitoneal injektion), följt av cervikal dislokation i enlighet med institutionella etik protocols och spraya 70% etanol på buken och bröstkorgen.
  3. Med användning av en sax, gör ett horisontellt snitt i mitten av buken och exponera bukhinnan.
  4. Fortsätt att separera och den avlägsna det gastrointestinala området genom att skära den övre tunntarmen från magen på pyloric sphincter och skära tjocktarmen vid den anala kanten. Använd en pincett för att försiktigt ta bort tarmkäxet. Placera tarmkanalen i förvärmt, syremedium.
  5. Identifiera den del av tarmen som skall bedömas för permeabilitet (Figur 1) och skär denna sektion fri från resten av tarmkanalen.
    1. För att upprätthålla konsekvens mellan djur, mäta delar av tolvfingertarmen och jejunum i förhållande till magen, och mäta delar av tjocktarmen och ileum i förhållande till blindtarmen.
    2. Vid val av vävnadssegment, notera närvaron av mukosa-associerad lymfoid vävnad, såsom Peyers plack. Dessa kan identifieras så liten nickduler på serosala sidan av lumen.
    3. Med hjälp av en 1 ml spruta, spola försiktigt de luminala innehållet i tarmsegmentet i en petriskål med förvärmd PBS (37 ° C). Dessa fekala innehåll kan kasseras eller förvaras vid -80 ° C för framtida analys om så önskas.

3. Framställning av Intestinal Sacs

  1. Bered en 1 ml spruta med en 300 | j, l volym av testföreningen eller molekyl. För mukosal integritet, en 1 mg / ml lösning av FITC-Dextran M.Wt. 4400 kan användas. Prober som sträcker sig från 4,400-70,000 Da i storlek kan användas för ökad känslighet. Säkert passa ett litet djur vaskulär kateter på sprutan.
  2. Åtgärd 5 cm från öppningen av tarmsegmentet och knyta segmentet ordentligt stängd med en sutur-slingan vid denna punkt. Placera försiktigt en pre-bundna sutur-slingan runt öppningen i tarmen och infoga trubbiga katetern. Dra snaran stängd för att säkra tarmsegmentetoch släpp 300 il volym från sprutan i tarmen, se till att all lösning injiceras.
  3. Försiktigt bort katetern samtidigt dra suturen snaran att säkra stängning av tarmsäcken. Skär tarmsäcken loss från tarmen och placera i en 50 ml koniskt rör fyllt med 20 ml syresatt medium, förvärmd till 37 ° C.

4. Mätning av Permeabilitet

  1. Placera koniska rör som innehåller tarm säckar i ett uppvärmt vattenbad inställd på 37 ° C. Vid 0, 30, 60, 90 och 120 min tidpunkter, ta ett prov 100 | il från det koniska röret och överför till en 96-brunnsplatta, som ersätter den volym med 100 pl av färskt medium i varje instans.
  2. Efter det slutliga provet tas, uppskuren säckar vid tidpunkten för suturen och ner längden på segmentet exponerar slemhinneytan.
  3. Mäta längden och bredden av varje intestinala segment. Om desiröd, snap frysa segmenten och förvara vid -80 ° C för protein eller biokemisk analys, eller alternativt, lagra i RNA stabiliseringslösning för molekylära analyser.
  4. Konstruera en standardkurva av log späd för FITC-märkta molekyler sträcker sig från 1 till 1 x 10 -6.
  5. Mät prover och standarder för FITC på en fluorescerande plattläsare, FITC excitation / emission: 495 nm / 519 nm.

5. Beräkning av skenbar permeabilitet för varje enskild Intestinal Sac

  1. Konvertera tidsenheter i kapitlet.
  2. För varje tidpunkt, beräkna den kumulativa koncentrationen, Q

    Q t = (C t * V r) + (Q t sum * V s),
    Där:

    Q t = kumulativ koncentration vid tiden t
    C t = koncentration vid tiden t
    Vr = volym på mottagarsidan
    Q t summa = Summan av alla tidigare Q t
    V s =volym samplade
  3. Plot Q mot tid (T) och beräkna lutningen: AQ / At
  4. Beräkna den skenbara permeabiliteten (P app)

    P app = (Aq / At) / (A * Co), Där:

    A = Area av vävnad
    C 0 = Initial koncentration

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Detta protokoll kan användas för att undersöka regionala förändringar i tarmbarriärfunktion i djurmodeller av mag-tarmsjukdomar. Genom att mäta flödet av en paracellulär sond tvärs slemhinneytan vid varierande områden av mag-tarmkanalen 7, kan bedömas integriteten för de epiteliala tight junctions. Dessutom, genom att variera naturen hos den para sonden genom storlek (Figur 2) eller hydrofobiciteten (figur 3), graden av epitelial perturbation, eller integriteten av slemhinnor gelskiktet, kan också mätas. Anställa större molekylviktsmarkörer möjliggör en mer känslig förhör av paracellulära permeabilitet i slemhinnan, upptäcka diskreta förändringar, som kanske inte är uppenbara genom elektrofysiologiska mätningar såsom transepiteliala elektriska motståndet (TEER), men som skulle vara tillräcklig för att paracellulära transport (Figur 2). Mucosal inflammation kan leda till en förlust av bägarceller och minskning av skyddande slem gel som normalt ligger över och skyddar epiteliala gränssnittet. Med hjälp av hydrofoba prober kan också undersökas (Figur 3) integriteten av tarmslem gelskiktet. Dessutom kan regionala barriärintegritet undersökas genom den specifika beredningen av tarmsäckar från olika tarm områden. Regionala förändringar i barriärfunktion varierar inom olika djurmodeller av sjukdom och därmed användningen av tarmsäckar möjliggör en lokal bedömning av tarmbarriärfunktion (Figur 4), jämfört med oral sondmatning av prober och efterföljande serumanalys.

Figur 1
Figur 1. Diagram av den murina magtarmkanalen. En schematisk bild av det gastrointestinala området hos en C57Bl / 6-mus, från magen till than anus. De små tarm korsningar kan inte lätt differentierade makroskopiskt och konsekvent provtagning hjälper till att minimera musen mus variation. I syfte att skapa tarm säckar, kommer en 5 cm långt segment distalt pyloric sphincter omfatta tolvfingertarmen. En 10 cm sektion som sträcker sig proximalt från blindtarmen kommer att omfatta ileum. Den återstående lilla tarmvävnad representerar jejunum. Den ändtarmen ligger 2 cm proximalt till anus, med den återstående tjocktarmen, som sträcker sig till blindtarmen representerar kolon 8. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2.   Storleksberoende paracellulär transport av FITC-dextran molekyler om epitelial slemhinnan i kontroll och DSS kolit animals. Tarm sacs framställdes från kolon av DSS-möss 10 dagar in i sjukdomsförloppet. Sacs laddades med 1 mg / ml lösning av FD-4 (MW 4400 Da), FD-20 (molekylvikt 20000 Da) eller FD-70 (70000 Da) och flussmedel av FITC-dextran permeabilitet markör mättes under 120 min. Åldersmatchade friska djur användes som kontroller. N = 5, 2 tekniska replikat per N. ** p <0,01, t-test. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3 :. Inverkan av slem-gelskikt på barriärintegritet till hydrofoba föreningar. Tarm sacs framställdes från kolon av DSS-möss 10 dagar in i sjukdomsförloppet. Åldersmatchade friska djur användes som kontroller. För negativa slem-gel kontroll, tarmarnaladdades med 10 mM N-acetylcystein (NAC) (300 | al volym per 5 cm av tarmen) och inkuberades vid 37 ° C under 15 min och spolades med färskt medium före sacs framställdes. Sacs laddades med 1 mg / ml lösning av FD-4 (MW 4400 Da) och flussmedel mätt över 120 min. N = 3, 2 tekniska replikat per N. * p <0,05, ** p <0,01, t-test. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 4
Figur 4. Den regionala permeabilitet av tarmen till FD-4 i murina modeller av tarminflammation. Intestinal säckar preparerades från jejunum, ileum eller kolon av friska djur, DSS djur eller antibiotika-inducerad Dysbios (AID) djur. Sacs laddades med 1 mg / ml lösning av FD-4 (MW 4400 Da) och flux mätt över 120 minuter. N = 3, 2 tekniska replikat per N. * p <0,05, ** p <0,01, t-test. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Här har vi detaljerat isolering och beredning av tarmsäckar för att bedöma mukosal barriärfunktion ex vivo. Tarm sac preparat har huvudsakligen använts i läkemedelsforskning, undersöka absorptionen av läkemedelskandidater hela tarmen. Emellertid är denna analys lika väl lämpad för studier av tarmsjukdom. Intestinal permeabilitet kan variera kraftigt från region och platsspecifik bedömning av genomtränglighet tillåter en bättre förståelse av den regionala betydelsen av slemhinnans integritet i matsmältningssjukdomar. Analysen är robust och under korrekta fysiologiska förhållanden, isolerade vävnader förblir lönsamt för upp till 6 timmar efter slakt. Efter eutanasi, är hastigheten på vävnadspreparatet viktig och tarmen ska spolas av dess innehåll och överfördes till oxygenerad mediet så snabbt som möjligt. För att säkerställa överensstämmelse mellan djur, är det viktigt att de rätta tarm regionerna är identified (Figur 1). Det rekommenderas att kolon och ileal segment mäts från blindtarmen, medan delar av tolvfingertarmen och jejunum mäts från magen. Eftersom olika stammar, modeller eller transgena djur kan vara större, och har längre gits, är det värt att karakterisera den genomsnittliga längden eller varje tarmsegment i modellen innan det inleder permeabilitet analyser.

Förutom regionala konsekvensens skull är det viktigt att se till att varje tarm sac kapas till samma längd och säcken är fylld med rätt mängd vätska. Inkonsekvens i dessa faktorer kommer att resultera i ojämn utspänd slemhinnan mellan analyser. Under-distension av tarmsegmentet minskar inte bara exponering av luminala innehåll till slemhinneytan, men ökar även tjockleken av vävnaden genom vilken markören måste färdas. Över utspänd segmentet kan skada vävnaden eller aktivera stress svar i vävnaden, eventuellt samarbetenfounding resultat. Det bör noteras, att för beräkningen av P app inte tar hänsyn till ytarean för villös struktur. Även om detta leder till fel i beräkningen av den faktiska uppenbara permeabilitet av vävnaden, påverkar inte det jämförande resultat mellan modeller, som ytan beräknas som en konstant. Eventuella ändringar i ytan på grund av sjukdom uppvägs av förlust av epitel integritet och protokollet är tillräckligt robust för att identifiera förändringar i permeabilitet med sjukdomsprogression 6.

Användning av vävnadsodlingsmedium rekommenderas. I studier utförda av Barthe et al. Användningen av TC199 befanns signifikant öka livslängden för epitelial livskraft och vävnads histologiska arkitektur, jämfört med enkla saltbuffertar 9. I våra studier både DMEM och TC199-medium som hölls vid 37 ° C förutsatt optimala förhållanden för vävnadsöverlevnad 5,6,10. Den korrekta mediaförser epitel med näringsämnen som krävs för att upprätthålla vävnads integritet, samtidigt som temperaturen under analysen säkerställer optimal vävnadsmetabolism som är nödvändig tät förbindelse integritet och analyser som inbegriper aktiv transport via transcellulära vägar. Temperaturer under 37 ° C orsaka förlust av vävnad livskraft, ökad paracellulära transport och minskar transcellulär transport 11. Således förlänger vävnad livskraft med optimala förhållanden är viktigt och därmed kan analysen användas inte bara för att undersöka den regionala barriär integritet och utan även att undersöka interventionsstudier och fysiologiska och transkriptionssvar.

Även om det främst används för läkemedelsabsorption studier, tekniker undersöka uppenbara permeabilitet (P app) av en markörmolekyl över en epitelial barriär är en mycket känslig mätning av intestinal integritet 12-15. I motsats till surrogat ex vivo MeasureMeNTS av barriärfunktionen, såsom TEER, P app en direkt och mycket känslig mätning av tarmbarriären fyra. Det är värt att notera att Teer mätningar och permeabilitet mätt med P-appen av markörmolekyler inte alltid korrelerar. Teer mätningar omfattar motstånd av både täta förbindelser och transcellulära parallella motstånd 16. Därför TEER är ett mått på den kombinerade motstånd som erbjuds av tight junctions och cellerna själva. Om föreningar cell-cell är svaga (det vill säga de täta förbindelserna är läckande) då detta bidrag till den totala motståndet av ett monolager kommer att vara låg. Sålunda små förändringar i trånga junctionala resistanser för läckande epitel blir försumbara ändringar i resistanserna hos epitelet som helhet. I kontrast, P app analyser mäter förmågan hos en molekyl att korsa slemhinnebarriären 17 och faktiskt, känsligheten hos P app-mätningar kan vara altrerade genom att välja olika storlek markörmolekyler (Figur 1). Behandlingen av markören storlek är viktigt i förhållande till modellen av tarmsjukdom som undersöks. Modeller av allergi eller funktionell sjukdom 18,19, där förlust av integritet är mild till måttlig, kan vara mer lämpade för lågmolekylära markörer, som gör det möjligt att identifiera subtila förändringar i tarmbarriärfunktion. I motsats, med modeller som DSS kolit, vilket innebär denuding av tarmepitelet kan större markörer vara lämpligare att bedöma slemhinneläkning, som relativt små ökningar i barriär integritet kommer att markeras.

Medan tarm säckar erbjuder en fysiologiskt relevant modell av GI barriärfunktion, det finns vissa begränsningar med avseende på variationer i djurmodeller som måste beaktas. Till exempel kan den sekretoriska tillstånd eller epitel påverka både paracellulära transporten över INTEStine 20 och integriteten av slemhinnor gelskiktet 5. Medan ex vivo-analyser som innehåller elektrofysiologiska mätningar, såsom Ussing kammar preparat, kan ta hänsyn till detta, intestinala säckar inte. För det andra, för att förbereda tarm sacs forskare bör redogöra för lymfoida strukturer, såsom Peyers plack, inom sac preparat, eftersom dessa kan påverka permeabilitet vävnaden 21. Trots dessa överväganden, till skillnad från många cellodlingsmodeller, som används för att bedöma epitelial integritet, tarm säckar erbjuder bidrag både en slem gelskikt och ett underliggande lamina propria. Bidraget av slemhinnor gelskikt, i synnerhet, kan bedömas genom användning av mukolytiska medel, såsom N-acetylcystein eller hydrofoba spårmolekyler, såsom dexametason 5,17. Detta kan vara särskilt viktigt i bedömningen av intestinal permeabilitet i modeller av cancerterapi eller inflammatorisk tarmsjukdom, whär förlust av slemhinnor barriären kan vara ett tidigt patologi i slemhinneinflammation 22,23. På samma sätt, i modeller av diarrésjukdomar, funktionella GI sjukdom eller dysbios, tarmslemproduktion och övergripande slem gel integritet kan förändras på regional platser 5,19,24. Oral sondmatning av permeabilitet markörer och efterföljande serumprovtagning är ett annat alternativ för att bedöma tarmpermeabiliteten in vivo. Även om denna metod har minimal manipulering av vävnad är det ett sammansatt mått på tarmbarriärfunktion och det inte bedöma de regionala bidrag till den totala barriären. Olika modeller av GI sjukdom har sannolikt olika platser i relativ betydelse som inte kommer att redovisas genom oral sondmatning metoder. Användningen av tarmsäckar, är därför en snabb, känslig och fysiologiskt relevant analys, som kan användas för att undersöka den regionala tarmslemhinnans integritet i små djurmodeller av sjukdomen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dekantel  Non-absorbable Silk suture Braintree Scientific SUT-S 116
Media 199 (TC199)  Life Technologies 11043-023 No phenol red as this interferes with fluorescence
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Life Technologies 21063-045 No phenol red as this interferes with fluorescence
N-acetylcysteine Sigma Aldrich Use at 10 mM in media
Small animal vascular cathether: Physiocath Data Sciences International 277-1-002
FITC-Dextran 4,400 MW Sigma Aldrich FD-4
FITC-Dextran 20,000 MW Sigma Aldrich FD-20
FITC-Dextran 70,000 MW Sigma Aldrich FD-70

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272 (2013).
  2. Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobial peptides in innate immunity of the human intestine. Journal of gastroenterology. 38, 717-726 (2003).
  3. Robinson, A., et al. Mucosal protection by hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibition. Gastroenterology. 134, 145-155 (2008).
  4. Feighery, L., et al. Increased intestinal permeability in rats subjected to traumatic frontal lobe percussion brain injury. The Journal of trauma. 64, 131-137 (2008).
  5. Keely, S., et al. Chloride-led disruption of the intestinal mucous layer impedes Salmonella invasion: evidence for an 'enteric tear' mechanism. Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 28, 743-752 (2011).
  6. Keely, S., et al. Contribution of epithelial innate immunity to systemic protection afforded by prolyl hydroxylase inhibition in murine colitis. Mucosal immunology. 7, 114-123 (2014).
  7. Sourisseau, T., et al. Regulation of PCNA and cyclin D1 expression and epithelial morphogenesis by the ZO-1-regulated transcription factor ZONAB/DbpA. Mol Cell Biol. 26, 2387-2398 (2006).
  8. Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
  9. Barthe, L., Woodley, J. F., Kenworthy, S., Houin, G. An improved everted gut sac as a simple and accurate technique to measure paracellular transport across the small intestine. European journal of drug metabolism and pharmacokinetics. 23, 313-323 (1998).
  10. Marks, E., et al. Oral Delivery of Prolyl Hydroxylase Inhibitor: AKB-4924 Promotes Localized Mucosal Healing in a Mouse Model of Colitis. Inflammatory bowel diseases. 21, 267-275 (2015).
  11. Keely, S., et al. Hypoxia-inducible factor-dependent regulation of platelet-activating factor receptor as a route for gram-positive bacterial translocation across epithelia. Mol Biol Cell. 21, 538-546 (2010).
  12. Brayden, D. J., Bzik, V. A., Lewis, A. L., Illum, L. CriticalSorb promotes permeation of flux markers across isolated rat intestinal mucosae and Caco-2 monolayers. Pharmaceutical research. 29, 2543-2554 (2012).
  13. Hubbard, D., Ghandehari, H., Brayden, D. J. Transepithelial transport of PAMAM dendrimers across isolated rat jejunal mucosae in ussing chambers. Biomacromolecules. 15, 2889-2895 (2014).
  14. Keely, S., et al. In vitro and ex vivo intestinal tissue models to measure mucoadhesion of poly (methacrylate) and N-trimethylated chitosan polymers. Pharmaceutical research. 22, 38-49 (2005).
  15. Maher, S., et al. Evaluation of intestinal absorption enhancement and local mucosal toxicity of two promoters. I. Studies in isolated rat and human colonic mucosae. European journal of pharmaceutical sciences : official journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences. 38, 291-300 (2009).
  16. Balda, M. S., et al. Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein. The Journal of cell biology. 134, 1031-1049 (1996).
  17. Behrens, I., Stenberg, P., Artursson, P., Kissel, T. Transport of lipophilic drug molecules in a new mucus-secreting cell culture model based on HT29-MTX cells. Pharmaceutical research. 18, 1138-1145 (2001).
  18. Stefka, A. T., et al. Commensal bacteria protect against food allergen sensitization. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 13145-13150 (2014).
  19. Keely, S., et al. Activated fluid transport regulates bacterial-epithelial interactions and significantly shifts the murine colonic microbiome. Gut microbes. 3, 250-260 (2012).
  20. Barrett, K. E., Keely, S. J. Chloride secretion by the intestinal epithelium: molecular basis and regulatory aspects. Annual review of physiology. 62, 535-572 (2000).
  21. Soni, J., et al. Rat, ovine and bovine Peyer's patches mounted in horizontal diffusion chambers display sampling function. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 115, 68-77 (2006).
  22. Justino, P. F., et al. Regulatory role of Lactobacillus acidophilus on inflammation and gastric dysmotility in intestinal mucositis induced by 5-fluorouracil in mice. Cancer chemotherapy and pharmacology. (2015).
  23. Tran, C. D., Sundar, S., Howarth, G. S. Dietary zinc supplementation and methotrexate-induced small intestinal mucositis in metallothionein-knockout and wild-type mice. Cancer biology & therapy. 8, 1662-1667 (2009).
  24. Musch, M. W., Wang, Y., Claud, E. C., Chang, E. B. Lubiprostone decreases mouse colonic inner mucus layer thickness and alters intestinal microbiota. Digestive diseases and sciences. 58, 668-677 (2013).
<em>Ex vivo</em> Intestinal Sacs att bedöma Mukös permeabilitet i Modeller av gastrointestinal sjukdom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).More

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter