Introduction
Sedan den första beskrivningen 2001 av tre oberoende grupper 1-3 v livmodern elektroporering har blivit en allmänt använd standardverktyg för att analysera genuttryck i gnagare centrala nervsystemet. Jämfört med alstringen av knockout-möss, som är, trots att kontinuerligt förbättra tekniska, fortfarande tid och pengar krävande, de i livmodern elektroporering talar på grund av dess enkelhet. Så, i livmodern elektroporering möjliggör snabb och effektiv GAIN- och förlust-of-funktion studier 4.
Att transfektera de cerebrala regioner, är den lösning som innehåller den negativt laddade plasmiden injiceras i en hjärtkammare. Under elektrisk puls, migrerar det negativt laddade DNA: t mot den positiva polen och kan därför väljas den transfekterade regionen helt enkelt genom att ändra läget för den positiva polen. Det har ofta visat sig att ett flertal regioner i det centrala nervsystemet kan vara TArgeted 3,5-8. Till exempel, nya studier visar specifika transfektioner av hippocampus, den piriform cortex eller striatum 9-11. Men information om lämpliga positioner är ofta bara knappt standardiserade och är inte alltid lätta att överföra till olika musstammar.
Transfektion av vissa embryonala stadier är långt ifrån trivialt. Många påverkande faktorer måste beaktas vid val av set-up för specifik i livmodern elektroporering. Först, för att optimalt transfektera respektive embryonala stadier, behövs kunskap om lämpliga spänningar. Höga spänningar minskar överlevnaden, medan låga spänningar minskar transfektionseffektiviteten 2,3,12. Även storleken på elektrod paddel spelar en avgörande roll, eftersom användningen av elektrod paddlar som är alltför stora resulterar i reducerad specificitet eller kan leda till döden på grund av påverkan av hjärtrytmen 4,12,13. Det appliceradespänning och storleken och placeringen av elektrod paddeln är de viktigaste funktionerna att tänka på, men det finns också andra faktorer som påverkar resultatet av elektroporering, liksom det applicerade mängden DNA-lösning.
Vi har utvecklat ett detaljerat protokoll som möjliggör snabb och effektiv transfektion av olika cerebrala regioner i C57BL / 6-mus 12. I detta protokoll detaljerad information om spänningarna som skall användas och storleken på elektrod paddeln för ökad specificitet tillhandahålls. Vidare information om ventrikeln att fyllas tillsammans med rekommendationer för mängd plasmid-lösning och positionen för elektroden tillförs. Uppgiften om den detaljerad information i en karta och ytterligare visualisering av dessa positioner möjliggör enkel specifik och effektiv i livmodern elektroporering av retrosplenial cortex, motor cortex, somatosensoriska cortex, den piriform cortex, than Cornu Ammonis 1-3, gyrus dentatus, striatum, den laterala septal nucleus, thalamus och hypothalamus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Etik uttalande: Hanteringen av mössen och de experimentella procedurer genomfördes i enlighet med europeiska, nationella och institutionella riktlinjer för djurvård.
1. I livmodern elektroporering
Obs: In utero elektroporering utfördes som tidigare publicerats 12,14. Därför är metoden beskrivs endast kortfattat i det följande (figur 1).
- Beredningar
- Förbered snabb grönfärgad endotoxinfri avancerade transfektion kvalitet plasmid-lösning (innehållande 1,5 pCAGGS) som tidigare beskrivits 12.
- Dra och slipa (35 ° vinkel) borosilikatglas kapillärer (0,8-0,9 diameter) för injektioner.
- Sterilisera instrument.
- Kirurgi
- Administrera analgetika (carprofen, 4 mg / kg kroppsvikt, sc, 24 tim depå) minst 30 minuter innan operationen.
- Hålla längden påanestesi till maximalt 35-45 minuter (etapp III - skede av kirurgisk anestesi enligt Guedel 15 - maximal 25-30 min).
- Söva tidsinställda gravida möss med isofluran (induktion i en kammare: 2,8%, kirurgi via mask: 2,5%). Bekräfta anestesi genom okänslighet till tå-nypa.
- Applicera ögonsalva att förhindra ögon torrhet under narkos.
- Sterilisera kirurgiska området med 7,5% providon-jod-lösning och täcka mus med steril gasväv (fuktigt med 0,9% bensylalkohol saltlösning) med endast operationsområdet exponeras.
- Skär öppna bukhålan med en skalpell (hud snitt: 1,5-2 cm, muskel snitt: 1-1,5 cm).
- Bevara den öppnade bukhålan från uttorkning genom att fukta med värmde 0,9% bensylalkohol saltlösning eller något annat sterilt isoton lösning enligt anvisningar från veterinärpersonal eller kommitté.
- Försiktigt extrahera livmoderhornen (med ring pincett, inte röra livmodern med fingrets).
- Injektion av DNA och elektroporation. Obs: De exakta detaljerna för att fokusera på specifika områden anges i avsnitt 2.
- Långsamt injicera den färgade DNA-lösningen i kammaren som visas i figur 1 och 2 § via förberedda borsilikat kapillärerna.
- Applicera lämplig spänning för motsvarande fosterstadiet (t.ex.., 36-38 V för E14) via specialiserade tång typ platinaelektroder (intervallcykellängd 50 ms, intervall paus 950 ms). Puls elektroporation paddlar under anbringandet av spänningen för att minimera skada på livmoderväggen.
- Post elektroporation / postoperativ vård
- Försiktigt ersätta livmoderhornen i bukhålan.
- Sutur muskeln och huden snittet separat.
- Låt musen vila på en termisk stödanordning för återvinning.
- Övervaka musen under återhämtningen (beteende, foder ochvattenförbrukning), 4 timmar, 24 timmar och 48 timmar efter operationen. Vid behov kan ytterligare analgetika (carprofen, 4 mg / kg kroppsvikt, 24 timmar depå) för ytterligare 2 dagar.
2. Transfektion av specifika Cerebral områden
Obs: Läget för den positiva polen visas som vinkeln mellan den vertikala centrumlinjen genom ventrikeln fylld med DNA-lösning (den högra eller tredje ventrikeln) och positionen för den positiva polen. Vid påfyllning av vänstra ventrikeln positionerna är spegelvända. I figur 4 positionerna i örat ursprunglig visas, som ger viktiga referenspunkter.
- Transfektion av kortikala områden (Figur 2A, tabell 1).
- Operera som beskrivs i avsnitt 1.2. För elektroporation av kortikala områden i livmodern använda E14-embryon.
- Injicera 1,5-2 il DNA-lösning innehållande 4 pg DNA i den högra laterala ventrikelnvia de förberedda borsilikat kapillärerna.
- Sätt försiktigt embryot genom att använda ring pincett så att det inte finns några synliga fartyg över punktionsstället.
- Långsamt injicera DNA-lösningen cirka 0,75 mm koronalt från lambdoidal suturen och 0,5 mm lateralt från sagittal suturen (Figur 3). Se till att insticksdjupet är 1,2 mm (E14, mätt från livmoderväggen). Kontrollera om en blå-grön färg med en skarp avgränsning.
- Applicera spänning via de specialiserade pincett typ platinaelektroder (intervall cykellängd 50 ms, intervall paus 950 ms).
- Använd en 3 eller 5 mm elektrod paddla.
- Använd en spänning i intervallet 36 till 38 V.
- Placera mitten av elektroderna bara främre av öron primordia.
- Att transfektera retrosplenial cortex använder vinklar 330-0 °, för att transfektera motor cortex 0-40 °, för att transfektera somatosensoriska cortex 40-95 °, för att transfekteraden piriform cortex 95-110 ° (Figur 2A).
- Utför efter elektroporering / postoperativ vård som beskrivs i avsnitt 1.4. Offra möss och analysera embryon 4 dagar efter elektroporering (E18) som beskrivs i avsnitt 3.
- Transfektion av hippocampus (figur 2B, tabell 1).
- Operera som beskrivs i avsnitt 1.2. För i livmodern elektroporering av hippocampus formation använda E15 embryon.
- Injicera 2 pl DNA-lösning innehållande 4 pg DNA i den högra laterala ventrikeln via förberedda borsilikat kapillärerna.
- Applicera spänning via de specialiserade pincett typ platinaelektroder (intervall cykellängd 50 ms, intervall paus 950 ms).
- Använd en 3 eller 5 mm elektrod paddla.
- Använd en spänning i intervallet 38 till 40.
- Placera centrum av den negativa polen bara främre av örat primordium och centrum of den positiva polen vid mitten av öron primordium.
- Att transfektera gyrus dentatus använda vinklar 190-210 °, för att transfektera Cornu Ammonis (CA) 3 210-230 °, för att transfektera CA2 230-250 °, för att transfektera CA1 250-275 ° (Figur 2B).
- Utför efter elektroporering / postoperativ vård som beskrivs i avsnitt 1.4. Utför analys efter fullständig hippocampus bildning (efter födseln, p21) som beskrivs i avsnitt 3.
- Transfektion av den laterala septala kärnan och striatum (figur 2C, Tabell 1)
Obs: Vinklarna lappar med de för transfektion hippocampus. För att effektivt transfektera den laterala kärnan septal och striatum utan oönskad hippocampus transfektion tidigare embryonala stadier (E12) måste användas.- Operera som beskrivs i avsnitt 1.2. För elektroporering av den laterala septala kärnan och striat i livmodernum använda E12-embryon.
- Injicera 1 pl DNA-lösning innehållande 4 pg DNA i den högra laterala ventrikeln via förberedda borsilikat kapillärerna.
- Applicera spänning via de specialiserade pincett typ platinaelektroder (intervall cykellängd 50 ms, intervall paus 950 ms).
- Använd en 0,5 mm elektrod.
- Använd 33 V.
- Placera mitten av elektroderna vid nivån för de öron primordia.
- Att transfektera sido septal nucleus använda vinklar 100-170 °, för att transfektera striatum 170-240 ° (figur 2C).
- Utför efter elektroporering / postoperativ vård som beskrivs i avsnitt 1.4. Offra möss och analysera embryon 6 dagar efter elektroporering (E18) som beskrivs i avsnitt 3.
- Transfektion av thalamus och hypothalamus (figur 2D, Tabell 1)
- Operera som beskrivs i avsnitt 1.2. För iuTero elektroporering av thalamus och hypothalamus använda E12-E13 embryon.
- Injicera 1-1,5 il DNA-lösning innehållande 4 pg DNA i den laterala ventrikeln (vänster eller höger) via de förberedda borsilikat kapillärerna. Vänta 2-3 minuter, tills lösningen diffunderas in i den tredje ventrikeln. Alternativt direkt injicera i tredje ventrikeln.
Obs: Detta ökar specificitet men kan orsaka en minskad överlevnad (hög risk för skador). - Applicera spänning via de specialiserade pincett typ platinaelektroder (intervall cykellängd 50 ms, intervall paus 950 ms).
- Använd en 0,5 eller 3 mm elektrod.
- Använd en spänning i intervallet 33 till 35 V.
- Placera mitten av elektroderna bara bakre öron primordia.
- Att transfektera thalamus använda vinklar 25-40 °, för att transfektera hypothalamus 90-180 ° (figur 2D).
- Utför inlägget elektroporation / postoperativ vård som desfaktorer beskrivs i avsnitt 1.4. Offra möss och analysera embryon 6 dagar efter elektroporering (E18) som beskrivs i avsnitt 3.
3. Perfusion Fixering
- Beredningar
- Varm 4% paraformaldehyd (PFA) till 37 ° C.
- Fyll en 50 ml spruta med PBS (4 ° C) och en andra spruta med värmas PFA. Undvika bubblor.
- Anslut sprutorna till en trevägskran. Anslut den tredje änden till en bevingad infusionssetet (fjäril).
- Spola bevingade infusionssetet med PBS.
- Perfusion
- Djupt söva möss (gravida eller postnatal transfekteras) med subkutan tillämpning av ketamin-hydroklorid (60 mg / kg) och xylazin (7,5 mg / kg).
- Bekräfta kirurgiska tolerans scenen av okänslighet till tå-nypa.
- Öppna bukhålan precis under bröstkorgen.
- Skär försiktigt membranet.
- Öppna försiktigt bröstkorgen via ett snitt på each webbplats upp till nyckelbenet.
- In spetsen av fjärilen in i den vänstra hjärtkammaren (med början från spetsen av hjärtat).
- Skär vänster förmak bihang.
- Sakta BEGJUTA musen med PBS (ca 10 ml).
- Växla trevägskran.
- Perfundera musen med 5-10 ml 4% PFA.
- Halshugga musen med sax och dissekera hjärnan börjar vid foramen magnum. Utför dissekering som tidigare publicerats 16.
- Postfixate hjärnan i 2 dagar i 4% PFA. Håll hjärnan vid 4 ° C i mörker.
4. Immunohistokemi
- Generera 70 um sektioner (t.ex. med en vibratome).
- Tillval: Förbättra fluorescens med antikroppsfärgning.
- Blockera sektioner för en timme vid RT (0,1-0,2% Triton X-100, 5% normalt getserum)
- Inkubera O / N med den lämpliga antikroppen (anti-GFP-, 1: 1000)
- Tvätta 3-5 Gånger med 0,1 M fosfatbuffert.
- Inkubera 3-5 h med det lämpliga fluorescens-konjugerade sekundära antikroppar (Alexa Fluor 488-konjugerad anti-kanin-IgG, 1: 1000).
- Valfritt: motfärg med 4-6-diaminodino-2-fenylindol (DAPI, 0,2 g / ml i 0,1 M fosfatbuffert) under 1 minut.
- Analysera fluorescens med en lämplig fluorescensmikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 2 visar exempel på det specifika i livmodern elektroporering av de regioner som utvecklas till den retrosplenial cortex, motor cortex, somatosensoriska cortex, den piriform cortex, Cornu Ammonis 1-3, gyrus gyrus, striatum, sido septal nucleus , thalamus och hypothalamus. Resultaten av transfektionerna visas bredvid det rekommenderade vinkel (Figur 2). För bättre visualisering av vinklarna in vivo placeringen av elektroden (0,5 mm) visas också på ett embryo (Figur 5, embryo in utero, embryo i fostersäcken, dissekeras embryot). För att ge en överblick Tabell 1 sammanfattas relevanta fakta för specifik transfektion.
Vidare visades det att storleken på elektrod spelar en avgörande roll för specificiteten (figur 6). Större storlek elektrod paddlar leder till larger transfekterade områden, som ett exempel visas i figur 6. Vidare elektroder som är för stora omslag för mycket av embryot, vilket ökar risken för påverkan på embryon hjärtrytmen (Figur 7). Till exempel kan en 10 mm elektrod paddla täcker hela E12 embryot (Figur 7).
Fig 1. I livmodern elektroporering. Grundläggande steg av utförandet av i livmodern elektroporering visas. (A) visar hela installationen av operationen, med musen placerades på en värmeplatta som redan bedövades med isofluran. (B) desinfektion av operationsområdet är ett avgörande steg före öppning av bukhålan (C) hos musen. (D) DNA-lösningen är färgad med snabb Green, vilket möjliggör visualisering av lyckad injektion (E, F). Framgångsrik injektion i en lateral ventrikel leder till halvmåneformade plats. (G) Efter injektionen rätt spänning tillförs via pincett typ platinaelektroder. (H) Efter att noggrant ersätta livmodern i bukhålan operationssåret sys. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Vinkel karta för elektroporering av specifika områden i murina cortex, hippocampus, lateral septal nucleus, striatum, thalamus och hypothalamus. De lämpliga positioner för de positiva och negativa pol, anges i den schematiska ritningen. För (AC ng>) Positionerna är indicerat för injicering av DNA-lösningen i höger kammare. För injektioner i vänster kammare, vinklarna är spegelvända. De specifika transfektioner histologiskt verifierad. (A) visar positionerna för de positiva och negativa pol för transfektion kortikala områden (retrosplenial cortex (RSC), motor cortex (MC), somatosensoriska cortex (SSC) och piriform cortex (PC). (B) Visar positionerna för de positiva och negativa pol för transfektion av hippocampus formationerna (Cornu Ammonis 1-3 (CA1, CA2, CA3) och dentate gyrus (GD). (C) Visar positionerna för de positiva och negativa pol för transfektion striatum (STR) och sido kärnan septal (LS). (D) Visar lämpliga positioner av elektroderna för transfektion thalamus (TH) och hypothalamus (HY). Anpassad från Baumgart J. & Grebe N., 2015 12. ps: //www.jove.com/files/ftp_upload/53303/53303fig2large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. punktionsställe. Den optimala positionen för injektion av DNA-lösningen är ungefär 0,75 mm koronalt från lambdoidal suturen och 0,5 mm i sidled från sagittalis sutur. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Placering av öron primordium. Placeringen av örat primordium är klart definierat (pil).nk "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. Visualisering av vinklarna på ett embryo. För bättre visualisering lämpliga positioner för den positiva (anges med en blå plustecken) och den negativa polen för specifika transfektioner av de kortikala områden (retrosplenial cortex, motor cortex, somatosensoriska cortex, Piriform cortex), hippocampus områden (Cornu Ammonis (CA) 1-3, dentate gyrus (GD)),sido septal nucleus, striatum, thalamus och hypothalamus visas på ett embryo i livmodern, ett embryo i fostersäcken och på dissekerade embryot (alla E15,5). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6. Specificitet av transfektion beroende på elektrodstorlek. Ökad storlek på elektroden paddel reducerar specificiteten hos transfektion. Detta är särskilt tydligt hos yngre embryonala stadier (E12, överst), men också synlig i sena embryonala stadier (E17, botten). Anpassad från Baumgart J. & Grebe N., 2015 12. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7. storlek elektrod paddla jämfört med storleken på en E12 embryo. Elektroder som är för stora omslag för mycket av embryot och därmed ökar risken för påverkan av hjärtrytmen. Till exempel, en 10 mm elektrod (till höger) täcker hela E12 embryo och därför rekommenderas inte, även om specificitet är inte det primära målet. Anpassad från Baumgart J. & Grebe N., 2015 12. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Målområdet | Vinkel | Placering av elektroden | Age of embryo | DNA amount / koncentration | Spänning | Storlek på elektrod | |
| Retrosplenial Cortex | 330 ° - 0 ° | Center av elektroderna bara främre av öron primordia | E14 (E11-E17) | 1,5- 2 ul / 2.7- 2 ug / ul | 36- 38 | 3- 5 mm | |
| Motoriska cortex | 0 ° - 40 ° | Center av elektroderna bara främre av öron primordia | E14 (E11-E17) | 1,5- 2 ul / 2.7- 2 ug / ul | 36- 38 | 3- 5 mm | |
| Somatosensoriska Cortex | 40 ° - 95 ° | Center av elektroderna bara främre av öron primordia | E14 (E11-E17) | 1,5- 2 ul / 2.7- 2 ug / ul | 36- 38 | 3- 5 mm | |
| Piriform Cortex | 95 ° - 110 ° | Center av elektroderna bara främre av öron primordia | E14 (E11-E17) | 1,5- 2 ul / 2.7- 2 ug / ul | 36-3 8 | 3- 5 mm | |
| Cornu Ammonis (CA) 1 | 250 ° - 275 ° | Centrum av den positiva polen vid mitten av öron primordium | (E14-) E15 | 2 ul / 2 ug / ul | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| CA2 | 230 ° - 250 ° | Centrum av den positiva polen vid mitten av öron primordium | (E14-) E15 | 2 ul / 2 ug / ul | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| CA3 | 210 ° - 230 ° | Centrum av den positiva polen vid mitten av öron primordium | (E14-) E15 | 2 ul / 2 ug / ul | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| Gyrus dentatus | 190 ° - 210 ° | Centrum av den positiva polen vid mitten av öron primordium | (E14-) E15 | 2 ul / 2 ug / ul | 38- 40 | 3- 5 mm | |
| Striatum | 170 ° - 240 ° | Centrum av elektrod vid nivån av örat primordia | E12 | 1 | il / 4 ug / ul | 33 | 0,5 mm | |
| Lateral Septal Nucleus | 100 ° - 170 ° | Centrum av elektrod vid nivån av örat primordia | E12 | 1 | il / 4 ug / ul | 33 | 0,5 mm | |
| Thalamus | 25 ° - 40 ° | Mitten av electodes bara bakre öron primordia | E12- E13 | 1-1,5 | il / 4-2,7 ug / ul | 33- 35 | 0,5- 3 mm | |
| Hypothalamus | 90 ° - 180 ° | Mitten av electodes bara bakre öron primordia | E12- E13 | 1-1,5 | il / 4-2,7 ug / ul | 33- 35 | 0,5- 3 mm | |
Tabell 1:. Sammanfattning av resultat ingår i denna tabell är all relevant information för specifik transfektion av de beskrivna kortikala områden. Den innehåller information om den målsökta regionen, vinkeln, positionen för elektroden, fosterstadiet, den applicerade mängden och koncentrationen av DNA-lösningen, spänningen och storleken av elektroden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EndoFree Plasmid Maxi Kit | QIAGEN | 12362 | |
| Fast Green | Roth | 0301.1 | |
| pCAGGS | Addgene | ||
| borosilicate glass capillaries (0.8-0.9 mm diameter) | Wold Precision Instrument Inc. | 1B100F-4 | |
| Isoflurane (Forene) | Abbott | PZN 4831850 | |
| Carprofen (Rimadyl) | Pfizer GmbH | approval number: 400684.00.00 | |
| eye ointment (Bepanthen Augen und Nasensalbe) | Bayer | PZN 01578681 | |
| 0.9% benzyl alcohol 0.9% saline solution | Pharmacy of the University Medical Center Mainz |
||
| gauze (ES-Kompressen) | Hartmann | 407835 | |
| sterile 5-0 Perma-Hand Silk Suture | Ethicon Johnson & Johnson | K890H | |
| ring forceps 1/ 1.5 mm | Fine Science Tools | 11101-09 | |
| ring forceps 4.8/ 6 mm | Fine Science Tools | 11106-09 | |
| ring forceps 2.2/ 3 mm | Fine Science Tools | 11103-09 | |
| Adson Forceps-Serrated Straight 12 cm | Fine Science Tools | 1106-12 | |
| IrisScissors-Delicate Straight-Sharp/Blunt 10 cm | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Mayo-Stille Scissors-Straight 15 cm | Fine Science Tools | 14012-15 | |
| Dumont #5 Forceps-Inox | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Castroviejo NeedleHolder-with Lock-Tungsten Carbide 14 cm | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| Elektroporator CUY21 SC | Nepa Gene Co. | ||
| FST 250 Hot Bead Sterilizer | Fine Science Tools | 18000-45 | |
| Microgrinder EG-44 | Narishige | ||
| P-97 Micropette Puller | Sutter Instrument Company | P-97 | |
| Platinum electrodes 650P 0.5 mm | Nepagene | CUY650P0.5 | |
| Platinum electrodes 650P 3 mm | Nepagene | CUY650P3 | |
| Platinum electrodes 650P 5 mm | Nepagene | CUY650P5 | |
| Platinum electrodes 650P 10 mm | Nepagene | CUY650P10 | |
| Anesthesia system | Rothacher-Medical GmbH | CV-30511-3 Vapor 19.3 | |
| Heating plate | Rothacher-Medical GmbH | HP-1M | |
| Temperature Controller 220V AC | Rothacher-Medical GmbH | TCAT-2LV |
References
- Fukuchi-Shimogori, T., Grove, E. A. Neocortex patterning by the secreted signaling molecule FGF8. Science. 294 (5544), 1071-1074 (2001).
- Saito, T., Nakatsuji, N. Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation. Dev Biol. 240 (1), 237-246 (2001).
- Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).
- LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex. Cereb Cortex. 19 Suppl 1. (July), i120-i125 (1991).
- Nakahira, E., Yuasa, S. Neuronal generation, migration, and differentiation in the mouse hippocampal primoridium as revealed by enhanced green fluorescent protein gene transfer by means of in utero electroporation. J Comp Neurol. 483 (3), 329-340 (2005).
- Navarro-Quiroga, I., Chittajallu, R., Gallo, V., Haydar, T. F. Long-term, selective gene expression in developing and adult hippocampal pyramidal neurons using focal in utero electroporation. J Neurosci. 27 (19), 5007-5011 (2007).
- Borrell, V., Yoshimura, Y., Callaway, E. M. Targeted gene delivery to telencephalic inhibitory neurons by directional in utero electroporation. J Neurosci Methods. 143 (2), 151-158 (2005).
- Kolk, S. M., de Mooij-Malsen, A. J., Martens, G. J. M. Spatiotemporal Molecular Approach of in utero Electroporation to Functionally Decipher Endophenotypes in Neurodevelopmental Disorders. FNMOL. 4 (November), 37 (2011).
- Tomita, K., Kubo, K. I., Ishii, K., Nakajima, K. Disrupted-in-schizophrenia-1 (Disc1) is necessary for migration of the pyramidal neurons during mouse hippocampal development. Hu Mol Gen. 20 (14), 2834-2845 (2011).
- Niwa, M., Kamiya, A., et al. Knockdown of DISC1 by In Utero Gene Transfer Disturbs Postnatal Dopaminergic Maturation in the Frontal Cortex and Leads to Adult Behavioral Deficits. Neuron. 65 (4), 480-489 (2010).
- Nakahira, E., Kagawa, T., Shimizu, T., Goulding, M. D., Ikenaka, K. Direct evidence that ventral forebrain cells migrate to the cortex and contribute to the generation of cortical myelinating oligodendrocytes. Dev Biol. 291 (1), 123-131 (2006).
- Baumgart, J., Grebe, N. C57BL/6-specific conditions for efficient in utero electroporation of the central nervous system. J Neurosci Methods. 240, 116-124 (2015).
- Saito, T. In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system. Nat Protc. 1 (3), 1552-1558 (2006).
- Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection. JoVE. (54), (2011).
- Guedel, A. E. Inhalation anesthesia: a fundamental guide. , Macmillan. New York. (1937).
- Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents. JoVE. (65), e3564 (2012).
- Mizutani, K., Saito, T. Progenitors resume generating neurons after temporary inhibition of neurogenesis by Notch activation in the mammalian cerebral cortex. Development. 132 (6), 1295-1304 (2005).
- Tabata, H., Nakajima, K. Labeling embryonic mouse central nervous system cells by in utero electroporation. Dev, Growth & Differ. 50 (6), 507-511 (2008).
