Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, latéral Septal Nucleus- et le striatum spécifique<em&gt; In Utero</em&gt; L&#39;électroporation dans la souris C57BL / 6

Jan Baumgart; Nadine Baumgart

doi:10.3791/53303

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Article de méthode

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, latéral Septal Nucleus- et le striatum spécifique

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DOI :

10.3791/53303

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18 janvier 2016

Jan Baumgart¹ , Nadine Baumgart¹

¹TARC (Translational Animal Research Center), University Medical Center, JGU Mainz

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit en détail comment transfecter spécifiquement différentes régions du système nerveux central C57BL/6 via électroporation in utero. Ce protocole comprend des instructions détaillées pour les transfections de régions qui se développent dans le cortex, l’hippocampe, le thalamus, l’hypothalamus, le noyau septal latéral et le striatum.

Résumé

L’électroporation in utero est une technique largement utilisée pour la manipulation spatio-temporelle rapide et efficace de divers gènes dans le système nerveux central du rongeur. La surexpression des gènes souhaités est tout aussi possible que les études de perte de fonction médiées par shRNA. Par conséquent, il offre un large éventail d’applications. La possibilité de cibler des cellules particulières dans une zone distincte augmente encore la gamme d’applications potentielles de cette méthode très utile. Pour cibler efficacement des régions spécifiques, il est indispensable de connaître les subtilités, telles que le stade embryonnaire, la tension à appliquer et surtout la position des électrodes.

Ici, nous fournissons un protocole détaillé qui permet une électroporation in utero spécifique et efficace de plusieurs régions du système nerveux central de la souris C57BL/6. En particulier, il est montré comment transfecter des régions qui se développent dans le cortex rétrosplénien, le cortex moteur, le cortex somatosensoriel, le cortex piriforme, le cornu ammonis 1-3, le gyrus denté, le striatum, le noyau septal latéral, le thalamus et l’hypothalamus. Pour cette information sur le stade embryonnaire approprié, la tension appropriée pour le stade embryonnaire correspondant est fournie. Plus important encore, une carte d’angle, qui indique la position appropriée du pôle positif, est représentée. Ce protocole standardisé permet de faciliter l’électroporation in utero efficace, ce qui pourrait également conduire à une réduction du nombre d’animaux.

Introduction

Depuis la première description en 2001 par trois groupes indépendants ^1-3 i n utero électroporation est devenu un outil standard largement utilisé pour l'analyse de l'expression des gènes dans le système nerveux central des rongeurs. Par rapport à la génération de souris knock-out, ce qui est, en dépit de l'amélioration continue des techniques, encore temps et d'argent, de consommer les électroporation in utero appels en raison de sa simplicité. Donc, in utero électroporation permet intensité forte rapide et efficace et des études de perte de fonction ^4.

Pour transf....