Abstract
Vanwege de structurele en functionele homologie met de haarcellen van het binnenoor zoogdier, de neuronen die het Drosophila uitwendige zintuigen innerveren verschaffen een uitstekend model voor de studie van mechanosensation. Dit protocol beschrijft een eenvoudige aanrakingsgedrag fruitvliegen die kunnen worden gebruikt om mutaties die interfereren met mechanosensation identificeren. De tactiele stimulatie van een macrochaete borstelharen op de thorax vliegen wekt een verzorging reflex van de eerste of derde been. Mutaties die interfereren met mechanotransduction (zoals NOMPC), of andere aspecten van de reflexboog kan de verzorging te remmen. Een traditioneel scherm van volwassen gedrag zou mutanten die een essentiële rol hebben bij de ontwikkeling gemist hebben. In plaats daarvan, dit protocol combineert de touch screen met mozaïek analyse met een onderdrukbaar celmarker (MARCM) mogelijk te maken voor slechts een beperkte regio van homozygote mutante cellen worden gegenereerd en wordt gekenmerkt door de exprsessieschijven van groen fluorescerend eiwit (GFP). Door het testen MARCM klonen abnormale gedragsreacties, is het mogelijk een verzameling van dodelijke p-element mutaties te screenen op zoek naar nieuwe genen betrokken bij mechanosensation die zou zijn gemist meer traditionele methoden.
Protocol
1. Kruisen om MARCM Flies genereren
- Handhaaf vliegen op maïsmeel melasse medium (6,5 g / l agar, 23,5 g / l gist, 60 g / l maïsmeel; 60 ml / L melasse, 4 ml / l acid mix, 0,13% Tegosept) of standaard Drosophila media bij 22 graden Celsius in een 12-uur licht / donker-cyclus.
Opmerking: een lager dan standaard temperatuur wordt gebruikt om MARCM-voorraden gezond te houden. Dit verlengt de ontwikkelingstijd tussen ei en volwassenheid 14 dagen. - Gebruik maagdelijke vrouwtjes (ongeveer 1 - 8 dagen oud) vanaf een MARCM-klaar voorraad bevattende de noodzakelijke genetische elementen (GFP onder de controle van een upstream-activerende sequentie (UAS-GFP), de GAL80 repressor eiwit, het Gal4 transcriptiefactor, een heat-shock gedreven recombinase en een FRT recombinatie site).
Let op: Onze MARCM ready-aandelen bevat de volgende genotypes: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / CYO; tubGal4 / TM3Sb.
Opmerking: De specifieke FRT site zal afhangen van de locatie van de mutatiein het genoom. Zo wordt FRT40A gebruikt om mutaties te testen op de linker arm van chromosoom 2, zoals NOMPC (zie 10 voor meer informatie over MARCM protocollen). - Cross MARCM ready maagdelijke vrouwtjes mannetjes dat een mutatie van interesse en de bijbehorende FRT-plaats bevatten (bijvoorbeeld w-, NOMPC3, FRT40A / Cyo; + / +). Om te bepalen effectieve MARCM inductie, stel een tweede kruis behulp mannelijke vliegen die dezelfde FRT-plaats, maar zonder mutatie. Gebruik een verhouding van 5 vrouwtjes benadering: 1 man in kruisen.
2. Timed eierleggende
- Nadat men vliegt te paren minstens één nacht, bewegen volwassenen naar nieuwe buisjes door vers medium. Laat vliegen om eieren te leggen in een donkere omgeving gedurende ongeveer 4 uur voor gegevensoverdracht opnieuw kruisen in nieuwe buisjes. Let op de begin- en eindtijden van de eileg periode.
Opmerking: Kortere aanvaardbaar wanneer er lijkt een groot aantal eieren op het medium voor het einde van de 4-hr interval.- Houd flesjes met een voldoende aantal eieren (ongeveer groter dan 20) en op een 12-uur licht / donker-cyclus bij 22 graden Celsius te zijn warmte later geschokt.
Opmerking: Flesjes met lage aantal eieren op de media (minder dan ongeveer 20) waarschijnlijk niet voldoende opbrengst van volwassen vliegen voor gedragstesten en omwille van efficiëntie is het raadzaam ze niet worden bewaard voor verdere tests.
Let op: Onze vliegen worden verhoogd met de lichten op 08:00-08:00. 08:00 en 08:00-middernacht - we hebben de avond tijdstippen leiden tot hogere dichtheden ei, dus meestal uitvoeren getimede kruisingen tussen 4 gevonden. De vliegen leggen hun eieren bij kamertemperatuur in een donker en keert terug naar de incubator de volgende dag om niet het normale licht-donker cyclus in de incubator verstoren.
- Houd flesjes met een voldoende aantal eieren (ongeveer groter dan 20) en op een 12-uur licht / donker-cyclus bij 22 graden Celsius te zijn warmte later geschokt.
3. Voer heat shock te induceren Mitotische recombinatie
- Ongeveer 85-100 uur na het leggen van eieren, plaats vials in een waterbad bij 37 ° C gedurende 1 uur. Zorg ervoor dat het water niveau bereikt boven de hoogte van de media in de flesjes, maar de flesjes niet volledig onderdompelen om te voorkomen dat de larven van de verdrinkingsdood.
- Verwijder flacons uit waterbad en laat een 1 uur herstelperiode bij RT.
- Plaats flesjes terug naar 37 graden Celsius waterbad gedurende 1 uur.
- Verwijder flacons uit waterbad en winkel in incubator op 12-uur licht / donker-cyclus bij 22 graden Celsius tot eclosion.
4. Voorbereiding voor Behavioral Testen
- Volgende eclosion, verdoven vliegen op ijs. Selecteer vliegt met genotypen die alle genetische elementen voor MARCM en een opgave GFP-expressie gemarkeerde klonen zal waarschijnlijk worden waargenomen op basis van het fenotype waarneembare markers gebruikt in de bovenliggende voorraden. Onthoofden vliegen met iridectomie schaar.
Opmerking: Zo hebben we voor vliegen gekozen zonder dat de genetische merkers Cyo (gekrulde vleugels) en Sb (stoppel borstel) naar identify vliegen die alle genetische elementen die nodig zijn om mozaïek regio te creëren zou bevatten gemarkeerd met GFP.
Opmerking: Onthoofding is nodig om te voorkomen dat de volwassenen uit wegvliegen wanneer gestimuleerd. - Plaats headless vliegen in een gesloten vochtige omgeving en laat ongeveer 10 - 20 uur herstel. Alleen gebruik vliegt dat recht zelf wanneer verstoord voor verdere testen. Test vliegt binnen de 30 uur van onthoofding.
5. Behavioral Testen
- Door het observeren onthoofde vliegen onder een fluorescentie microscoop ontleden, te identificeren homozygote klonen gemerkt met GFP in de borstelhaar uitwendige zintuigen. Noteer de naam van haren en links of rechts. Om mogelijke vertekening te elimineren, zou de lab lid uitvoeren van de borstelharen stimulatie blind voor het genotype van de borstelharen, wild-type of mutant zijn.
- Ontlokken een verzorgen reflex door het afbuigen van het GFP-gemarkeerd haren in de richting van de vlieg lichaam met een stijve haren of fijne tang en let op de been rerespons. Geef een score van één tot vliegen die hun been op te heffen in reactie op stimulatie en een score van nul tot vliegen die hun benen niet bewegen haren.
Opmerking: Eerdere studies 6,7 hebben het been respons die wordt opgewekt door het stimuleren van een bepaalde haren gekenmerkt. Dit omvat het been dat reageert op elke borstelhaar en het aandeel van vliegen die reageren op stimulatie van dat borstelhaar. We scoorden alleen voor bewegingen van het been, dat we verwacht hadden om te reageren op basis van Vandervorst's classificatie 6. - Voer vijf proeven afstand 2 min elkaar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Het succes van dit protocol grotendeels afhankelijk van de totale opbrengst van testbaar vliegen, de doeltreffendheid van de hitteschok mitotische recombinatie en het vermogen om een robuuste gedragsreactie in vliegen gestimuleerd op 2 minuten tussenpozen verkregen induceren. Aangezien schatting 12,5% van embryo's bevatten de noodzakelijke MARCM elementen en naar schatting 16,67% van de volwassenen die ESluit het potentieel voor GFP expressie, is het essentieel om een groot aantal eieren te vinden in getimede legt. Een voorbeeld van een succesvol getimede lag over een 4 uur interval die worden gebruikt in de rest van het protocol wordt getoond in figuur 1A.
Wanneer de heat shock wordt uitgevoerd 85 - 100 uur na eieren leggen, de opbrengst van GFP gemerkte uitwendige zintuigen het hoogst, met de meeste vliegen met één van de macrochaetae gelabeld. Tal van gebieden van belang kunnen homozygote cellen op de bases van testabl bevattene borstelharen wanneer warmte schokken worden uitgevoerd binnen deze periode, met de dorsale centrale en post-alar haren zijn gevonden gelabeld vaakst (Figuur 2A). Tijdstippen buiten dit venster resultaat in stukken GFP expressie buiten het lichaam regio's van belang of geen GFP expressie (Figuur 2B).
Vliegt natuurlijk reageren op een dreigende stimulus door het initiëren van een ontsnapping respons 19. Om te voorkomen dat vliegen ontsnappen, we onthoofd vliegen. De verzorging reactie circuit blijft intact in de ventrale zenuw snoer 5. Vliegen niet goed te herstellen als onthoofd onder kooldioxide verdoving, maar herstellen in een paar uur toen onthoofd met koud verdoving op ijs. Na onthoofding, moet vliegen in een gesloten, vochtig milieu worden opgeslagen tijdens de herstelperiode om uitdroging te voorkomen. Terwijl sommige vliegen kunnen uitdrogen of niet in staat om op te staan (Figuur 1B),alleen die in staat zijn om (figuur 1C) staan worden gebruikt voor het testen. Voorafgaand aan het testen, zijn vliegen gecontroleerd algemene responsiviteit door te kijken voor beweging na een touch aan de notum. Veel vliegen blijven reageren gedurende enkele dagen, maar testen moeten worden aangevuld met 24-36 uur na onthoofding. Fly hyperactiviteit kan een probleem tijdens de gedrags testen omdat waarnemer moeilijk onderscheid te maken tussen een echte stimulans afhankelijke verzorging respons en de algemene bewegingen van de vlieg kan hebben. Bij dieren met een overmaat beweging niet opgewekt door tactiele stimulatie, meer betrouwbare resultaten bereikt door te wachten op hyperactieve vliegen om rustig te worden.
Wij vonden dat 47% van de wild-type vliegt reageert ten minste een keer bij aanraking op een borstelhaar vijfmaal, verdeeld in 2 min tussenpozen gewenning voorkomen. Verschillende groepen hebben aangetoond dat stimulatie van verschillende borstelharen wekt een patroon reactie van een specifiek been 6,7 6. In onze experimenten, wild-type controle vliegt gereageerd op een lichte aanraking van 14% (dorsale CV) tot 86% (Noto-pleura) van de proeven (figuur 3). In een MARCM gebaseerd scherm met onbekende mutanten, kunnen die vliegen met een mutatie niet betrokken in mechanosensation worden verwacht dat zij een betrouwbare gedragsmatige reactie vergelijkbaar met die waargenomen in wild-type controle dieren vertonen.
De bekende mechanosensitieve mutant, NOMPC verstoorde de verzorging reactie zoals verwacht. Controle vliegt gereageerd haren prikkeling bij homozygote gekloneerd na neusvleugel borstelharen 37% van de tijd (figuur 4). Daarentegen dieren met borstelharen die homozygoot waren voor NOMPC reageerde 2% van de tijd (figuur 4). Terwijl de wild-type vliegt opnieuwspond verschillend stimulatie van verschillende borstels, suggereren deze resultaten dat een mechanosensitieve mutatie, zoals NOMPC bijna elimineert de verzorging respons. In een scherm met onbekende mutanten, zijn meerdere mutaties betrokken bij mechanosensation dat de verzorging reactie remmen verwacht.
Figuur 1. Juiste grootbrengen voorwaarden nodig zijn voor optimale Behavioral testen. (A) een voldoende aantal embryo's nodig zijn na de 2-4 uur leg periode. Het aantal embryo na 4 uur getimede lay waarschijnlijk waarbij een voldoende aantal volwassen vliegen voor gedragstesten. (B) Tijdens de herstelperiode na onthoofding sommige vliegen niet overleven en kan niet worden gebruikt in verdere testen. (C) Een onthoofd vlieg die goed werd bewaard in een vochtige omgeving gedurende de herstelperiode is toetsbare in een gedrags-test. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2. MARCM klonen in Borstelharen wanneer warmte-geschokt tussen 85-100 Hr Na ei-leggen. (A) GFP expressie in volwassen vliegen wanneer warmte geschokt 98-101 uur na de eileg. Maar liefst 10 macrochaete haren bevatten homozygote mutant externe zintuigen en zijn geschikt voor het testen in de verzorging reactie gedrags assay (B) GFP expressie in volwassen vliegen wanneer warmte geschokt 161 -. 164 uur na de eileg. Let op het ontbreken van GFP-expressie op basis van de macrochaete borstelharen, aangeeft dat er geen stukken homozygote cellen bij een testbaar externe zintuig.arge.jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3. Frequentie van respons op tactiele stimulatie is afhankelijk Bristle identiteit. Het totale aantal responsen van een vlieg stimulatie van een enkele borstelhaar gedeeld door het aantal impulsen in een percentage reactie. Percentages werden gemiddeld voor elke haren (N = # vliegen getest, 22 Bericht Alar, 21 dorsale Central 14, schildje, 7 Notopleural). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4. NOMPC Mutants niet reageren op tactiele stimulatie. Stimulatie van de post-alar borstelharen lokt een reactie in wild-type MARCM klonen. Echter, stimulatie van MARCM klonen op de post Alar haren die NOMPC 3 waren - / - (groene balk) resulteerde in enkele reacties (N = 23 wild-type, en 12 NOMPC - / -). Klik hier om een grotere versie te bekijken van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dit protocol maakt gebruik van een volwassen gedrags assay voor het screenen op mutaties die mechanosensation in Drosophila beïnvloeden. Door de verzameling van mutanten bevat dodelijke p-element mutaties die uitsluit screening volwassenen Dit protocol maakt gebruik van complexe genetische techniek eerst beschreven door Lee en Luo , (1999) en gedetailleerd als een protocol door Wu en Luo, (2006) tot volwassen dodelijkheid omzeilen. MARCM induceert mitotische recombinatie tussen homologe chromosomen klonale gebieden van homozygote cellen te genereren. Deze gebieden zijn aangegeven met GFP door het verlies van het repressor eiwit-bad GAL80 die tijdens mitotische recombinatie. Door MARCM naar cellen die homozygoot zijn op een bepaalde genetische locus te genereren, kan genfunctie worden bestudeerd bij volwassen vliegen met behulp van verschillende methoden, waaronder de gedrags assay beschreven in dit document.
De primaire factor die het aantal en de specifieke genen die kunnen be geteste de aanwezigheid van een FRT plaats in het genoom van de vlieg. Vlieg voorraden moet een FRT site op het chromosomale arm van de mutatie van belang bevatten. MARCM klaar fly voorraden moet een identieke FRT-plaats bevatten als de mutant chromosoom om voor mitotische recombinatie. In ons lab, ontwikkelden we vliegen voorraden met MARCM achtergronden met FRT40A en FRT42D sites. Deze voorraden zal ons toelaten om elke dodelijke p-element volwassene al gecombineerd met een overeenkomstige FRT site op de 2L en 2R chromosoom armen te screenen, respectievelijk. Om het potentieel van MARCM in schermen voor mutaties die mechanotransductie of de verzorging reflex, extra fly voorraden beïnvloeden met MARCM achtergronden geschikt voor het testen genen op beide armen van de derde chromosoom en het X-chromosoom wordt gemaakt maximaliseren. Eenmaal ontwikkeld, zullen deze bestanden mogelijk maken de meeste volwassen dodelijke p-element mutaties gecombineerd met een FRT-plaats getest worden op betrokkenheid bij mechanosensation.
De timing van de warmte shock protocol is ontwikkeld om het aantal homozygote cellen regio's op het uitwendige zintuigen te maximaliseren, terwijl veel van de rest van de vlieg heterozygote de locus van belang. Talrijke gebieden van belang kan worden gekenmerkt door GFP-expressie na een dubbele heat shock, waardoor meerdere borstelharen te testen (Figuur 2). De MARCM protocol biedt een uitstekende gelegenheid om homozygote dodelijke mutaties in specifieke gebieden van belang te creëren, maar onze MARCM protocol is gebaseerd op de heat shock inductie van recombinase activiteit, waardoor het een willekeurig proces over welke borstelharen uiteindelijk toetsbaar zijn. Omdat elke varkenshaar lokt een specifieke been verzorging reflex 6,7, was het belangrijk voor ons om te bevestigen dat de reacties in wild-type MARCM klonen zijn vergelijkbaar met die eerder beschreven. Het maximaliseren van het rendement van een MARCM gebaseerde scherm is de mogelijkheid om elk van de borstelharen macrochaete testen op een mutant reactie en deze te vergelijken DATeen tegen de respons van een overeenkomstige varkenshaar in een MARCM-klaar voorraad. We hebben de resultaten van Corfas en Dudai 7 bevestigd haren die GFP in de MARCM vliegen.
Het vermogen om gemakkelijk onderscheid te maken tussen normaal en abnormaal fly gedragsreacties is cruciaal om te bepalen welke mutaties interfereren met mechanotransduction. Een mutatie in een gen voor mechanotransduction of ander aspect van de verzorging reflex moet het been te remmen; een significant lagere respons op de overeenkomstige haren in een MARCM-klaar voorraad wordt verwacht. De behavioral respons in mozaïek NOMPC en wild-type vliegt dienen als bewijs van het principe dat de MARCM-based behavioral scherm kan worden gebruikt om onderscheid te maken tussen mechanosensorische mutanten en normaal vliegen. We hebben aangetoond dat NOMPC mutant mozaïek klonen, het verzorgen reflex als reactie op stimulatie varkenshaar wordt nagenoeg opgeheven. Slechts twee vliegen van de veertien geteste tentoongesteldeen been reactie. Elk van deze vliegen reageerden slechts eenmaal in de loop van de test, wat suggereert dat een MARCM gebaseerde gedrags- test is effectief bij het identificeren van een defect mechanosensation. Een waarnemer kan onderscheiden mechanosensitieve mutant vliegen en vliegen zonder mutatie of een mutatie die niet betrokken is bij de verzorging reactie. Vanwege de hoge mate van variabiliteit in wild-type responsen, zal het scherm sterke allelen te identificeren, maar meer subtiele veranderingen in het gedrag als gevolg van zwakkere allelen waarschijnlijk missen. De verzameling mutanten te screenen omvat alleen homozygote letale allelen, dus is het waarschijnlijk dat deze sterk of nul allelen en waarschijnlijk proteïnefunctie schaffen. Toch zou het scherm allelen die dodelijk in de ontwikkeling kunnen missen, maar produceren een meer subtiele mechanosensorische defect bij homozygote in een meer beperkte mate door MARCM.
We kozen voor een alles-of-niets scoresysteem eenvoud. Deze methode levert een royalescore vergeleken met het systeem dat door Corfas en Dudai 7 die een score van 0 wijst - 4 afhankelijk van de omvang van de beenbeweging. In het alles-of-niets-systeem, wordt een reactie gegeven volledig vermeld in de veronderstelling dat een reactie op stimulatie geeft het sensorisch systeem detecteert de stimulus en signalering naar het motorsysteem.
Dit scherm kan mutaties die elke stap in de gedragswetenschappen circuit beïnvloeden. Verder testen, zoals elektrofysiologie (zoals in Kernan et al 5) of calcium beeldvorming, moet worden bepaald of de mutatie direct betrokken mechanotransduction of een ander aspect van de ontwikkeling en functie van de sensomotorische reflexboog.
Drosophila melanogaster bieden een uitstekend model voor de studie van mechanosensation. De uitwendige zintuigen delen vele structurele en functionele gelijkenissen met de haarcellen van het binnenoor zoogdieren20. Het ophelderen van de bij dit proces Drosophila moleculen heeft de potentie om zoogdier homologen en orthologen onthullen. Schermen gericht op het ontdekken van mutaties die mechanosensation verstoren zal de weg voor de volgende celbiologische, elektrofysiologische effenen, en biochemische studies verder te identificeren en te karakteriseren deze moleculen, de verdieping van ons begrip van dit proces, zowel in vliegt en zoogdieren. A-MARCM gebaseerde scherm mutaties die mechanosensation zal een gevestigde genetische techniek gecombineerd met een verzorging reactie gedrags test gebruiken om nieuwe genen betrokken bij mechanotransductie en de vlieg verzorgen reflex onthullen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen.
Acknowledgments
De auteurs willen graag bedanken de Bloomington voorraad centrum, Liqun Luo, Charles Zuker en Lily en Yuh Nung Jan voor de royale verdeling van de vlieg voorraden en de volgende voor financiering: Somas-URM (JD en SW), Bachelor Ford faculteit Summer Fellowship (SW), BD Corporation Summer Research Fellowship (aan CL en DL), The Renee en Anthony M. Marlon, MD '63 Summer Research Fellowship (DL) James C. '75 en Jane Colihan Summer Research Fellowship (TO) door middel van de Alumni / Parent Zomer Fund Research van de Universiteit van het Heilig Kruis en de Stransky Stichting Summer Research Fellowship (tot TO). Speciale dank aan het Departement Biologie en de Dean's Office van de Universiteit van het Heilig Kruis voor de ondersteuning van al het werk in het lab.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
