Abstract
Aufgrund der strukturellen und funktionellen Homologie zu den Haarzellen des Innenohrs Säuger, die Neuronen, die Drosophila externen Sinnesorgane innervieren einen hervorragenden Modellsystem für das Studium der Mechanosensation. Dieses Protokoll beschreibt eine einfache Berührung Verhalten in Fruchtfliegen, die verwendet werden, um Mutationen, die mit Mechanosensation stören zu identifizieren. Die taktile Stimulation eines macrochaete Borsten auf den Brustkorb von Fliegen löst eine grooming Reflex entweder aus der ersten oder dritten Bein. Mutationen, die mit mechanotransduction (wie NOMPC) eingreifen, oder in Verbindung mit anderen Aspekten der Reflexbogen kann die Optimierungs Reaktion hemmen. Eine traditionelle Bildschirm des Erwachsenen Verhaltensweisen würden Mutanten, die eine essentielle Rolle während der Entwicklung haben verpasst. Stattdessen Dieses Protokoll verbindet die Touch-Screen mit Mosaik-Analyse mit einem repressible Zellmarker (MARCM), die für nur eine begrenzte Regionen homozygot mutierten Zellen zu ermöglichen, erzeugt und durch den expr markiert werdenession des grün fluoreszierenden Proteins (GFP). Durch Testen MARCM Klone für anormalen Verhaltens-Reaktionen ist es möglich, eine Sammlung von letalen p-Element-Mutationen zu screenen, um neue Gene, die durch die herkömmlichen Methoden entgangen wären in Mechanosensation beteiligt suchen.
Protocol
1. Kreuze zu MARCM Flies generieren
- Aufrechtzuerhalten Fliegen auf Maismehl Melasse-Medien (6,5 g / l Agar; 23,5 g / l Hefe, 60 g / L Maismehl, 60 ml / l Melasse, 4 ml / l Säuremischung; 0,13% Tegosept) oder Standard Drosophila Medium bei 22 Grad Celsius in einem 12-stündigen Hell / Dunkel-Zyklus.
Hinweis: eine niedrigere als Standardtemperatur wird verwendet, um MARCM-Aktien gesund zu halten. Dadurch verlängert sich die Entwicklungszeit zwischen Ei und Erwachsenenalter bis 14 Tagen. - Verwenden jungfräulichen Weibchen (ca. 1-8 Tage alt) aus einem MARCM-ready Lager, die die notwendigen genetischen Elemente (GFP unter der Kontrolle von einem vorgeschalteten-Aktivierungssequenz (UAS-GFP), der Gal80 Repressor-Protein, das Gal4-Transkriptionsfaktor, ein Hitzeschock angetrieben Rekombinase und eine FRT-Rekombinationsstelle).
Hinweis: Unsere MARCM ready-Aktien die folgenden Genotypen enthalten: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / Cyo; tubGal4 / TM3Sb.
Anmerkung: Die spezifische FRT-Stelle ist am Ort der Mutation abhängtim Genom. So wird beispielsweise verwendet werden, um Mutationen FRT40A am linken Arm von Chromosom 2, wie zum Beispiel NOMPC (siehe 10 für weitere Details über MARCM Protokolle) zu testen. - Quer MARCM-ready jungfräulichen Weibchen zu Männchen, die eine Mutation von Interesse und seine entsprechende FRT-Stelle enthalten (beispielsweise w-; NOMPC3, FRT40A / Cyo; + / +). Für eine wirksame MARCM Induktions steuern, stellen eine zweite Quer mit männlichen Fliegen denselben FRT-Stelle enthielt, aber ohne Mutation. Verwenden Sie einen ungefähren Verhältnis von 5 Frauen: 1 Männchen im Kreuze.
2. Timed Eiablage
- Nachdem man fliegt, für mindestens eine Nacht paaren, bewegen Erwachsenen in neue Flaschen mit frischem Medium. Lassen Sie entfernt, um Eier in einer dunklen Umgebung für ca. 4 Stunden vor dem erneuten Übertragen der Kreuze in neue Gefäße zu legen. Beachten Sie die Start- und Endzeit der Eiablage Periode.
Anmerkung: Kürzere Intervalle akzeptabel sind, wenn es angezeigt wird, um eine hohe Anzahl von Eiern auf dem Medium vor dem Ende der 4-stündigen Interval.- Halten Sie Durchstechflaschen mit einer ausreichenden Anzahl von Eiern (ungefähr größer als 20) und an einem 12-stündigen Hell / Dunkel-Zyklus bei 22 Grad Celsius zu sein Wärme später schockiert.
Anmerkung: Ampullen mit einer geringen Anzahl von Eiern auf dem Medium (weniger als etwa 20), sind wahrscheinlich nicht ausreichende Zahl Ausbeute von erwachsenen Fliegen für Verhaltenstests und im Interesse der Effizienz ist es empfehlenswert, sie nicht für weitere Tests erhalten werden.
Hinweis: Unsere Fliegen sind mit den Lichtern auf 08.00 bis 20.00 angehoben. 08.00 Uhr und 08.00 Uhr bis Mitternacht - Wir haben die Zeit des Abends Punkte führen zu höheren Eierdichten, also in der Regel führen zeitgesteuerten Kreuzungen zwischen 4 gefunden. Die Fliegen legen ihre Eier bei RT in einem dunklen Schrank und dann am folgenden Tag in den Inkubator gegeben, um nicht das normale Licht-Dunkel-Zyklus in den Inkubator zu stören.
- Halten Sie Durchstechflaschen mit einer ausreichenden Anzahl von Eiern (ungefähr größer als 20) und an einem 12-stündigen Hell / Dunkel-Zyklus bei 22 Grad Celsius zu sein Wärme später schockiert.
3. Führen Sie Heat Shock mitotische Rekombination induzieren
- Etwa 85 bis 100 Stunden nach Eiablage statt vrialien in ein Wasserbad bei 37 Grad Celsius für 1 Stunde. Stellen Sie sicher, dass der Wasserstand erreicht, über die Höhe der Medien in den Fläschchen, aber nicht vollständig versenken die Fläschchen, um die Larven vor dem Ertrinken zu verhindern.
- Fläschchen entfernen Wasserbad und ermöglichen eine 1 Stunde Erholungszeit bei RT.
- Platz Fläschchen zurück in 37 Grad Celsius Wasserbad für 1 Stunde.
- Fläschchen aus Wasserbad und bewahren Sie im Inkubator auf 12-Stunden-Hell / Dunkel-Zyklus bei 22 Grad Celsius bis zum Schlüpfen.
4. Vorbereitung für Behavioral Testing
- Nach dem Schlüpfen, betäuben Fliegen auf Eis. Wählen Fliegen mit Genotypen, die alle genetischen Elemente für MARCM enthalten und zeigen GFP-Expression markierte Klone wird wahrscheinlich auf der Grundlage der beobachtbaren Phänotyp-Marker in den Mutter Lagerbestände zu beobachten. Enthaupten Fliegen mit Iridektomie Schere.
Hinweis: Zum Beispiel für Fliegen wählten wir ohne die genetische Marker Cyo (geschweifte Flügel) und Sb (Stoppelborsten) zu identify Fliegen, die alle genetischen Elemente notwendig, Mosaik Regionen zu schaffen enthalten würde mit GFP markiert.
Hinweis: Enthauptung ist nötig, die Erwachsenen aus fliegen weg, wenn stimuliert verhindern. - Zeigen kopflose Fliegen in einem geschlossenen, feuchten Umgebung und lassen Sie ca. 10 - 20 Stunden der Erholung. Nur Verwendung fliegt dieses Recht selbst, wenn eine weitere Prüfung erforderlich gestört. Test fliegt innerhalb von 30 Stunden der Enthauptung.
5. Behavioral Testing
- Durch die Beobachtung enthauptet Fliegen unter dem Fluoreszenz Binokular, identifizieren homozygot Klone mit GFP an den Borsten äußeren Sinnesorgane markiert. Notieren Sie sich die Borsten Namen und linken oder rechten Seite. Um eine mögliche Voreingenommenheit zu beseitigen, sollte die Labor Mitglied Durchführung des Borsten Stimulation blind gegenüber dem Genotyp des Borsten, Wildtyp oder Mutante sein.
- Rufen eine grooming Reflex durch Ablenken des GFP markierte Borsten in Richtung der Flugkörper mit einem steifen Haaren oder feinen Pinzette und das Bein re beobachtenAntwort. Geben Sie einen Wert von eins bis Fliegen, die das Bein heben in Reaktion auf die Stimulation und eine Punktzahl von null auf Fliegen, die ihre Beine nicht bewegen Borsten.
Hinweis: Frühere Studien 6,7 haben die Bein Reaktion, die durch die Förderung eine besondere Borsten ausgelöst wird gekennzeichnet. Dies schließt die Schenkel, die an jeder Borste anspricht und den Anteil an Fliegen, die auf die Stimulation des jeweiligen Borsten reagieren. Wir erzielte nur für Bewegungen des Beins, die wir erwartet, basierend auf Vandervorst Klassifizierung 6 reagieren. - Führen Sie fünf Studien 2 Minuten Abstand voneinander.
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Representative Results
Der Erfolg dieses Protokoll hängt weitgehend von der Gesamtausbeute von testbaren Fliegen, die Wirksamkeit des Hitzeschock mitotische Rekombination und die Fähigkeit, einen robusten Verhaltensreaktion bei Fliegen in 2 min Intervallen stimuliert erhalten induzieren. Gegeben, dass schätzungsweise 12,5% der Embryonen enthalten alle notwendigen MARCM Elemente und eine geschätzte 16,67% der Erwachsenen, die das Potential für eine GFP-Expression schlüpfen, ist es wichtig, eine hohe Anzahl von Eiern während zeitlich fest erhalten. Ein Beispiel eines erfolgreichen Zeit lag über einen 4 Stunden Intervall, das in den Rest des Protokolls verwendet würde, ist in 1A gezeigt ist.
Wenn die Hitzeschock ist 85 durchgeführt - 100 Stunden nach Eiablage ist die Ausbeute von GFP-markierten äußere Sinnesorgane höchsten, wobei die meisten Fliegen mit einer der macrochaetae beschriftet. Zahlreiche Bereiche von Interesse können homozygote Zellen an den Basen der testabl enthaltene Borsten bei Wärmeschocks werden innerhalb dieses Zeitraums durchgeführt wird, mit der dorsalen Mittel und Post-Flügel Borste gefunden markierte am häufigsten (Abbildung 2A). Zeitpunkte, die außerhalb dieses Fensters ergeben Patches der GFP-Expression außerhalb der Körperbereiche von Interesse oder keine GFP-Expression (2B).
Fliegen natürlich zu einer sich abzeichnenden Konjunktur reagieren, indem sie die Einleitung einer Fluchtreaktion 19. Um Fliegen der Flucht zu hindern, enthauptet wir Fliegen. Die Pflege Antwortschaltung bleibt intakt im Bauchmark 5. Fliegen nicht gut erholen, wenn unter Kohlendioxidnarkose enthauptet, aber erholen in ein paar Stunden, wenn mit kaltem Narkose auf Eis enthauptet. Nach der Enthauptung, sollte Fliegen in einem geschlossenen, feuchten Umgebung während der Erholungsphase, um ein Austrocknen zu verhindern gespeichert werden. Während einige Fliegen kann austrocknen oder nicht in der Lage zu stehen (Abbildung 1B),nur die in der Lage, (1C) stehen zum Testen verwendet. Vor der Prüfung sind Fliegen für die allgemeine Reaktionsfähigkeit durch die Beobachtung für die Bewegung nach einer Berührung mit dem notum geprüft. Viele Fliegen bleiben für einige Tage reagiert, aber Tests sollten um 24 abgeschlossen sein - 36 Stunden nach der Enthauptung. Fliegen Hyperaktivität kann ein Problem während des Verhaltenstests, weil ein Beobachter nur schwer zwischen einem echten Stimulus-abhängigen Reaktion und Grooming allgemeinen Bewegungen des fliegen. Bei Tieren mit einem Überschuss an Bewegung nicht durch taktile Stimulation hervorgerufen werden zuverlässigere Ergebnisse durch das Warten auf hyperaktive Fliegen Ruhe zu werden, erreicht.
Wir fanden, dass 47% der Wildtyp-Fliegen reagieren zumindest einmal, wenn sie auf einem Borsten berührt fünfmal in 2 min Intervallen beabstandet Habituation verhindern. Mehrere Gruppen haben gezeigt, dass die Stimulation verschiedener Borsten löst eine gemusterte Reaktion von einem bestimmten Bein 6,7 noto-pleural) 6. In unseren Experimenten reagierten Wildtyp-Kontrollfliegen auf eine leichte Berührung von 14% (dorsale Zentral) auf 86% (noto-pleural) der Studien (Abbildung 3). In einer MARCM-basierten Bildschirm mit unbekannten Mutanten, können diese entfernt eine Mutation enthalten, die noch nicht in Mechanosensation Beteiligten erwartet, dass eine zuverlässige Verhaltensreaktion ähnlich der in Wildtyp-Kontrolltieren beobachtet ausstellen werden.
Die bekannte mechanosensitive Mutante, NOMPC störten die Pflege Antwort als erwartet. Steuer Fliegen reagierten auf Borsten Stimulationen bei homozygot geklont post-Flügel Borsten 37% der Zeit (Abbildung 4). Dagegen Tiere mit Borsten, die für NOMPC homozygot waren reagierte 2% der Zeit (Abbildung 4). Während Wildtyp-Fliegen neuchen unterschiedlich auf Stimulation verschiedener Borsten legen diese Ergebnisse nahe, dass eine Mutation mechanosensitive wie NOMPC nahezu eliminiert das Grooming Antwort. In einem Bildschirm mit unbekannten Mutanten sind mehrere Mutationen in Mechanosensation beteiligt, die die Pflege Reaktion hemmen erwartet.
Abbildung 1. Ordnungsgemäße Aufzuchtbedingungen für eine optimale Behavioral Testing erforderlich. (A) Eine ausreichende Anzahl von Embryonen werden brauchte nach dem 2-4 hr Legeperiode. Die Anzahl der Embryonen nach einer 4 Std zeitlich Laien dürfte ergeben eine ausreichende Anzahl der erwachsenen Fliegen für Verhaltenstests. (B) Während der Erholungsperiode nach Enthauptung, einige entfernt nicht überleben und nicht in weiteren Tests verwendet werden. (C) Ein enthauptet Fliege, die ordnungsgemäß in einer feuchten Umgebung während der Erholungsphase gespeichert wurde ist testbare in einem Verhaltenstest. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 2. MARCM Clones in Borsten beim Hitzeschock zwischen 85 bis 100 Stunden nach der Eiablage. (A) GFP-Expression in erwachsenen Fliegen, wenn Hitzeschock von 98 bis 101 Stunden nach der Eiablage. So viele wie 10 macrochaete Borsten enthalten homozygote Mutante äußeren Sinnesorgane und sind für die Prüfung in der Pflege Antwortverhaltenstest geeignete (B) GFP-Expression in erwachsenen Fliegen, wenn Hitzeschock 161 -. 164 Stunden nach der Eiablage. Beachten Sie den Mangel der GFP-Expression in den Basen der macrochaete Borsten, was keine Flecken von homozygoten Zellen bei einer prüfbaren externen Sinnesorgan zu.arge.jpg "target =" _ blank "> Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 3. Die Häufigkeit der Antwort auf taktile Stimulation ist abhängig von Borsten Identität. Die Gesamtzahl der Antworten eines einzelnen Fliege auf die Stimulation eines einzelnen Borsten wurde durch die Anzahl der Impulse geteilt, um eine Antwort zu geben Prozent. Die Prozentsätze wurden gemittelt für jede Borste (N = Anzahl der Fliegen untersucht, 22 Beitrag Alar, 21 Rückenmittel 14, Scutellarzellen, 7 Notopleural). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 4. NOMPC Mutanten reagieren nicht auf taktile Stimulation. Stimulation der post-Flügel Borsten löst eine Reaktion in Wildtyp-MARCM Klone. Allerdings Stimulation MARCM Klone auf den Beitrag alar Borsten, die NOMPC 3 waren - / - (grüner Balken) führte zu wenig Antworten (N = 23 Wildtyp und 12 NOMPC - / -). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version zu sehen dieser Figur.
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Discussion
Dieses Protokoll verwendet eine erwachsene Verhaltenstest für Mutationen, Mechanosensation in Drosophila beeinflussen screenen. Da die Sammlung von Mutanten enthält letale p-Element Mutationen, Screening ausschließen würden als Erwachsene Dieses Protokoll verwendet eine komplexe genetische Technik zuerst durch Lee und Luo beschrieben , (1999) und detaillierter als Protokoll von Wu und Luo, (2006) bis zur Erwachsenen Letalität zu umgehen. MARCM induziert mitotische Rekombination zwischen homologen Chromosomen zu klonalen Regionen homozygote Zellen zu erzeugen. Diese Regionen werden mit GFP, weil der Verlust des Repressorproteins wannen GAL80, die während der mitotischen Rekombination markiert. Mithilfe MARCM auf Zellen, die homozygot in einer bestimmten genetischen Locus zu erzeugen, kann die Genfunktion in erwachsenen Fliegen mit einer Vielzahl von Methoden, einschließlich der in dieser Veröffentlichung beschriebene Verhaltenstest untersucht werden.
Der primäre Faktor, der sowohl die Anzahl und die spezifischen Gene, die Be geprüft, ist das Vorhandensein einer FRT-Stelle innerhalb des Genoms der Fliege. Fliegenvorräte müssen eine FRT-Stelle auf der chromosomalen Arm der Mutation von Interesse enthalten. MARCM bereit fly Bestände müssen einen identischen FRT-Stelle als die Mutante Chromosom enthalten, um mitotische Rekombination zu ermöglichen. In unserem Labor haben wir fly Aktien enthalten MARCM Hintergründe mit FRT40A und FRT42D Websites. Diese Bestände können wir jeden Erwachsenen tödlich p-Element bereits mit einem entsprechenden FRT-Stelle auf den 2L und 2R Chromosomenarme kombiniert Bildschirm auf. Um das Potenzial der MARCM in Bildschirme für Mutationen, die Mechanotransduktion oder die Pflege Reflex, zusätzliche Flug Aktien beeinflussen mit MARCM Hintergründen in der Lage zu testen Gene an beiden Armen des dritten Chromosom und das X-Chromosom wird erstellt maximieren. Einmal entwickelt, werden diese Aktien zu ermöglichen für die meisten Erwachsenen tödlich p-Element-Mutationen in Verbindung mit einer FRT-Stelle, um für die Beteiligung an Mechanosensation getestet werden.
Der zeitliche Verlauf der Wärme shock Protokoll wurde entwickelt, um die Anzahl von homozygoten Zellen-Bereichen an den Außensinnesorgane zu maximieren, wobei aber viel von dem Rest des Schalt heterozygot am Ort von Interesse. Zahlreiche Bereiche von Interesse kann durch die GFP-Expression nach einer doppelten Wärmeschock markiert werden, so dass für mehrere Borsten (2) getestet werden. Die MARCM Protokoll bietet eine ausgezeichnete Gelegenheit, die homozygot letale Mutationen in spezifischen Interessenbereiche zu erstellen, aber unsere MARCM Protokoll stützt sich auf die Hitzeschock-Induktion von Rekombinase-Aktivität, so dass es ein Zufallsprozess, um die Borsten wird letztlich testbar sein. Weil jede Borste löst eine bestimmte Bein Pflege Reflex 6,7, war es für uns wichtig, um zu bestätigen, dass die Antworten in Wildtyp-MARCM Klone sind vergleichbar mit denen zuvor beschrieben. Maximierung der Effizienz eines MARCM-basierten Bildschirm erfordert die Fähigkeit, einen der macrochaete Borsten für einen mutierten Reaktion zu testen und diese dat vergleicheneine gegen die Rücklaufquote von einem entsprechenden Borsten in einem MARCM-ready Lager. Wir haben die Ergebnisse von Corfas und Dudai 7 in Borsten, die GFP in den MARCM entfernt bestätigt.
Die Fähigkeit, leicht zwischen normalen und abnormalen fly Verhaltensreaktionen ist kritisch, um zu bestimmen, welche Mutationen mit mechanotransduction stören. Eine Mutation in einem Gen in Mechanotransduktion oder andere Aspekt der Pflege Reflex sollte das Bein Reaktion hemmen beteiligt sind; eine deutlich geringere Rücklaufquote bei der entsprechenden Borsten in einem MARCM-ready Lager erwartet. Die Verhaltens Ansprechraten bei Mosaik NOMPC und Wildtyp-Fliegen dienen als Nachweis der Grundsatz, dass die MARCM basierte Verhaltens Bildschirm kann zwischen mechanosensorischen Mutanten und normale Fliegen zu unterscheiden. Wir haben gezeigt, dass in NOMPC Mutante Mosaik-Klone, die Pflege Reflex in Reaktion auf die Stimulation Borsten nahezu abgeschafft. Nur zwei Fliegen der vierzehn geprüften ausgestellteine Bein Antwort. Jede dieser entfernt reagierte nur einmal im Verlauf des Tests, was darauf hindeutet, dass eine MARCM basierten Verhaltenstest wirksam auf die Ermittlung einer Mechanosensation Defekt ist. Ein Beobachter kann zwischen mechanosensitive Mutante unterscheiden fliegt und fliegt ohne Mutation oder mit einer Mutation, die in der Pflege Reaktion beteiligt ist. Durch die hohe Variabilität in den Antworten vom Wildtyp, wird der Bildschirm stark Allele zu identifizieren, sondern wird wahrscheinlich verpassen subtilere Veränderungen im Verhalten auf Grund der schwächeren Allele. Die Sammlung von Mutanten gescreent werden umfasst nur homozygot letale Allele, so ist es wahrscheinlich, dass es sich stark oder Nullallele und geeignet sind, die Proteinfunktion zu beseitigen. Allerdings würde der Bildschirm Allele, die tödlich in der Entwicklung sein kann vermissen, aber produzieren eine subtilere mechanosensorischen Defekt, wenn homozygot auf eine eher begrenzte Weise durch MARCM gemacht.
Wir haben uns für einen Alles-oder-Nichts-Scoring-System zur Vereinfachung. Dieses Verfahren ergibt eine großzügigeNote im Vergleich zu dem System durch Corfas und Dudai 7 verwendet, die eine Bewertung von 0 zugewiesen - 4 in Abhängigkeit vom Ausmaß der Bewegung des Beins. In der Alles-oder-nichts-System wird jede Antwort die volle Punktzahl mit der Annahme, dass jede Reaktion auf die Stimulation zeigt, dass die sensorische System Erfassung der Reiz und Signalisierung an den Motor-System gegeben.
Auf diesem Bildschirm können Mutationen, die jeden Schritt in der Verhaltensschaltung beeinflussen zu identifizieren. Weitere Tests wie beispielsweise Elektrophysiologie (wie in Kernan et al 5) oder Calcium-Bildgebung, hätte verwendet werden, um festzustellen, ob die Mutation mechanotransduction oder einen anderen Aspekt der Entwicklung oder Funktion der sensomotorischen Reflexbogen direkt betroffen.
Drosophila melanogaster einen hervorragenden Modellsystem für das Studium der Mechanosensation. Die äußeren Sinnesorgane haben viele strukturelle und funktionelle Ähnlichkeiten mit den Haarzellen des Innenohrs Säuger20. Aufklärung der Moleküle in diesem Prozess in Drosophila beteiligt hat das Potential, Säuger-Homologe und Orthologe offenbaren. Bildschirme zu entdecken Mutationen ausgerichtet, die Mechanosensation stören wird den Weg für nachfolgende zellbiologischen, elektrophysiologischen ebnen, und biochemische Untersuchungen zur weiteren Identifizierung und Charakterisierung dieser Moleküle, unser Verständnis dieses Prozesses in beiden Fliegen und Säugetieren. Ein MARCM-basierten Bildschirm für die Mutationen, die Mechanosensation eine gut etablierte genetische Technik, gepaart mit einem Grooming Antwortverhaltenstest nutzen, um neue Gene in Mechanotransduktion und die Fliege Grooming Reflex beteiligt zu offenbaren.
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Disclosures
Die Autoren haben keine konkurrierenden finanziellen Interessen.
Acknowledgments
Die Autoren danken danken der Bloomington Stock Center, Liqun Luo, Charles Zuker und Lily und Yuh Nung Jan für die großzügige Aufteilung der Fliege Aktien und den folgenden für die Finanzierung: SOMAS-URM (JD und SW), Bachelor Ford Fakultät Sommer Fellowship (bis SW), BD Corporation, Sommer-Forschungsstipendium (CL und DL), der Renee und Anthony M. Marlon, MD '63 Summer Research Fellowship (DL) James C. '75 und Jane Colihan Sommer-Forschungsstipendium (TO) durch die Alumni / Eltern Sommerforschungsfonds der Universität vom Heiligen Kreuz und der Stransky Foundation Sommer-Forschungsstipendium (TO). Besonderer Dank gebührt dem Institut für Biologie und das Dekanat bei College des Heiligen Kreuzes für die Unterstützung von all der Arbeit im Labor.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
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