Abstract
때문에 포유류 내이의 머리 셀 구조 및 기능의 상 동성, 초파리 외부 감각 기관을 뉴런에 분포 mechanosensation의 연구에 훌륭한 모델 시스템을 제공한다. 이 프로토콜은 mechanosensation 방해 변이를 식별하는데 사용될 수 초파리 간단한 터치 동작을 설명한다. 파리의 가슴이 중 첫 번째 또는 세 번째 다리에서 정리 반사를 이끌어에 macrochaete의 촉각 자극은 다름. mechanotransduction (예 : NOMPC 등)을 방해 돌연변이는, 또는 반사 아크의 다른 측면과 함께, 정리 반응을 억제 할 수 있습니다. 성인 행동의 전통적인 화면은 개발 과정에서 중요한 역할을 돌연변이를 놓친 것이다. 대신,이 프로토콜은 expr에 의해 생성 및 표시 할 동형 접합성 돌연변이 세포의 제한된 영역을 허용하도록 repressible 세포 마커 (MARCM) 모자이크 분석과 터치 스크린을 결합녹색 형광 단백질 (GFP)의 ession. 비정상적인 행동 반응을 위해 MARCM 클론을 시험함으로써,보다 전통적인 방법에 의해 누락되었을 mechanosensation 관련된 새로운 유전자를 검색 치명적인 P 요소 돌연변이 컬렉션 선별 할 수있다.
Protocol
1. 십자가는 MARCM의 파리를 생성하려면
- 22도 섭씨 또는 표준 초파리 미디어 옥수수 가루 당밀 미디어 (0.13 % Tegosept, 23.5 G / L 효모, 60g / L의 옥수수 가루 60 ㎖ / L 당밀, 4 ㎖ / L 산 믹스 6.5 g /의 L 한천)에 파리를 유지 12 시간 빛 / 어둠주기.
참고 : 표준 온도보다 낮은 건강 MARCM-주식을 유지하는 데 사용됩니다. 이 14 일에 계란과 성인 사이의 개발 시간을 연장한다. - 상류 활성화 서열 (UAS-GFP) Gal80 리프레 서 단백질, GAL4 전사 인자의 제어하에 (GFP를 필요한 유전자 요소를 함유 MARCM 준비 스톡에서 - (8 일 오래 대략 1) 버진 암컷을 사용 열충격 종동 네이즈 및 FRT 재조합 부위).
참고 : 우리의 MARCM 준비 주식은 다음과 같은 유전자형 포함 : elavGal4, UAS-CD8 - GFP, HS-flipase을; FRT40A, tubGal80 / CYO; tubGal4 / TM3Sb.
주 : 특정 FRT 부위가 돌연변이의 위치에 의존 할 것이다게놈. 예를 들어, FRT40A는 NOMPC (MARCM 프로토콜에 대한 자세한 내용은 10 참조)와 같은 염색체 2의 왼쪽 팔에 돌연변이를 테스트하는 데 사용됩니다. - 관심의 돌연변이와 해당 FRT 사이트가 포함되어 남성에 대한 상호 MARCM 준비 처녀 여성 (; NOMPC3, FRT40A / CYO 예를 들어, W-를 + / +). 효과적인 MARCM 유도 제어하기 위해, 동일한 FRT 부위를 포함하는 남성 초파리를 이용한 제 2 단면을 설정하지만, 돌연변이없이. 십자가에서 1 남성 : 5 여성의 대략적인 비율을 사용합니다.
레이아웃 2. 시간 제한 계란
- 파리는 적어도 하룻밤 짝을 할 수 있도록 한 후, 새로운 미디어와 새로운 유리 병으로 성인 이동합니다. 파리 다시 새로운 유리 병에 십자가를 전송하기 전에 약 4 시간 동안 어두운 환경에서 알을 낳기하도록 허용합니다. 달걀 누워 기간의 시작 시간과 종료 시간을합니다.
참고 : 4 시간의 interva이 끝나기 전에 미디어에 계란의 높은 수있을 나타날 때 짧은 간격 허용엘.- 열이 나중에 충격으로 섭씨 22도에서 12 시간의 빛 / 어둠주기에 충분한 계란의 수 (약보다 큰 20) 및 저장소와 튜브를 유지합니다.
참고 : 성인이 그들이 더 테스트를 유지하지 않는 것이 좋습니다 행동 테스트 및 효율성의 이익 파리의 미디어에 계란의 수가 적은 튜브를 (이하 20 정도 이상이) 충분한 숫자를 양보하지 않을 수 있습니다.
참고 : 우리의 파리는 오전 8시에서 오후 8시까지에 조명과 함께 발생합니다. 오후 8시 8 PM-자정 - 우리는 포인트 높은 계란 밀도로 이어질 저녁 시간, 따라서 보통 4 사이에 시간 제한 십자가를 수행을 발견했다. 인큐베이터에서 일반 명암주기를 방해하지 않도록 파리는 다음날 인큐베이터로 돌아갑니다 다음 어두운 캐비닛에 실온에서 알을 낳고.
- 열이 나중에 충격으로 섭씨 22도에서 12 시간의 빛 / 어둠주기에 충분한 계란의 수 (약보다 큰 20) 및 저장소와 튜브를 유지합니다.
3. 유사 분열 재조합을 유도하는 열 충격을 수행
- 약 85 - 달걀 누워 후 100 시간, 장소 V1 시간 동안 섭씨 37도에서 물 중탕으로 IALS. 수위가 유리 병에 미디어의 높이 이상에 도달 할 수 있지만 완전히 익사에서 유충을 방지하기 위해 튜브를 잠수함하지 않도록하십시오.
- 수조에서 튜브를 제거하고 실온에서 1 시간의 회복 기간을 허용합니다.
- 다시 37도 섭씨 물을 욕조에 1 시간 동안 장소 유리 병.
- 우화까지 22 섭씨 온도에서 12 시간의 빛 / 어둠주기에 인큐베이터에서 물 목욕 및 저장소에서 튜브를 제거합니다.
행동 테스트 4. 준비
- 우화 후, 얼음에 파리를 마취. MARCM에 대한 모든 유전 적 요소를 포함하고 GFP 발현 마크 클론 가능성이 상위 종목에 사용되는 관찰 표현형 마커를 기반으로 관찰됩니다 나타내는 유전자형과 파리를 선택합니다. 홍채 절제술 가위 파리 목을 벨.
참고 : 예를 들어, 우리는 유전자 마커없이 파리에 대한 CYO (곱슬 날개)와 Sb를 (그루터기 다름) 식별자로 선택모자이크 영역을 만드는 데 필요한 모든 유전 적 요소를 포함 할 것 년도 파리는 GFP 표시.
참고 : 목 베기 자극 할 때 날아에서 성인을 방지 할 필요가있다. - 폐쇄, 습한 환경에서 헤드리스 파리를 놓고 약 10 수 - 복구의 20 시간을. 만 사용 바로 자신하는 것은 더 테스트를 위해 교란 때 파리. 테스트 잘린 30 시간 내 날아간다.
5. 행동 테스트
- 형광 해부 현미경으로 해고 파리를 관찰함으로써, 강모 외부 감각 기관에서 GFP 표시 동형 접합 클론을 식별합니다. 강모 이름과 왼쪽이나 오른쪽을 기록한다. 잠재적 인 편견을 제거하기 위해 강모 자극을 수행 랩 부재는 강모, 야생형 또는 돌연변이 체의 유전형을 블라인드이어야한다.
- 뻣뻣한 머리카락이나 미세 집게로 비행 몸으로 모 GFP를 편향에 의해 손질 반사를 표시된 유도하고, 다리를 다시 관찰sponse. 자극과 자신의 다리를 움직이지 않는 파리에 0의 점수 강모에 대한 응답으로 자신의 다리를 들어 파리에 하나의 점수를 제공합니다.
주 : 이전 연구 6,7 특정 칫솔모를 자극하여 유발되어 다리 응답을 특징으로하고있다. 이 각각 다름에 응답하는 다리와 특정 강모의 자극에 반응 파리의 비율을 포함한다. 우리는 우리가 Vandervorst의 분류 (6)을 기반으로 대응할 것으로 예상되는 다리의 움직임습니다. - 떨어져 2 분 간격으로 다섯 시험을 실시한다.
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Representative Results
이 프로토콜의 성공은 크게 쓸만한 파리의 전체 수율에 따라, 열 쇼크의 효과는 유사 분열 재조합하고, 2 분 간격으로 자극 파리에서 강력한 행동 반응을 얻을 수있는 능력을 유발한다. 배아의 약 12.5 %가 필요 MARCM 요소 및 GFP 발현의 가능성이 eclose 성인의 약 16.67 %를 포함하는 것을 감안할 때, 그것은 시간 제한이 낳는 동안 계란의 높은 번호를 확인하는 것이 중요합니다. 성공적인 타임 드의 예는도 1a에 도시 된 프로토콜의 나머지 부분에서 사용되는 4 시간 간격을 걸치.
열 쇼크가 85 행하는 경우 - 알을 낳는 후 100 시간을, 외부 감각 기관의 GFP 표지 수율은 가장 파리 표지 macrochaetae 하나 갖는, 가장 높다. 관심이 많은 지역은 testabl의 기지에서 동형 접합 세포를 포함 할 수있다열 충격은 지느러미 중앙 및 사후 ALAR 강모 것을 발견 표지 가장 자주 (그림 2A)로,이 기간 내에 수행 할 때 전자는 강모. 관심없는 또는 GFP 발현 (도 2B)의 바디 영역의 외부 GFP 발현이 윈도우 패치 결과 외부 시점.
자연적으로 탈출 응답 (19)를 시작하여 어렴풋한 자극에 반응 파리. 파리 탈출을 방지하기 위해, 우리는 파리를 참수. 손질 응답 회로는 복부 신경 코드 (5)에 그대로 유지됩니다. 파리는 이산화탄소 마취 참수 경우도 복구하지만, 얼음 차가운 마취로 해고 할 때 몇 시간 만에 복구하지 않습니다. 잘린 후 파리 탈수를 방지하기 위해 회복 기간 동안 밀폐 습한 환경에서 저장되어야한다. 일부 파리 건조하는 또는 (그림 1B) 서 할 수 없습니다 수 있지만,만 (그림 1C)를 서있을 그 테스트를 위해 사용된다. 테스트에 앞서, 파리는 notum에 터치 후 움직임을 보면서 일반 응답을 검사한다. 많은 파리는 며칠 동안 반응 남아 있지만 테스트는 24 일까지 완료되어야한다 - 잘린 후 36 시간. 관찰자가 진정한 자극에 의존 정리 반응과 파리의 일반적인 움직임을 구별 어려움이있을 수 있기 때문에 과잉 행동은 행동 테스트 중에 문제가 될 수있다 플라이. 촉각 자극에 의해 유발하지 과도한 운동과 동물에서 더 신뢰할 수있는 결과가 정지되고 활동적인 파리 기다리고에 의해 달성된다.
우리는 칫솔모에 습관화 않도록 2 분 간격으로 다섯번, 만졌을 때 야생형 파리의 47 %가 적어도 한 번 반응하였습니다. 몇몇 그룹은 다른 강모 자극 특정 레그 -6,7-에서 패터닝 된 응답을 유도하는 것으로 나타났다 6. 우리의 실험에서 야생 형 제어 파리는 시험의 86 % (노토 흉막)에 14 % (중앙 지느러미)에서 가벼운 터치로 (그림 3) 반응했다. 알려지지 않은 돌연변이와 MARCM 기반 화면에서 mechanosensation에 관여하지 돌연변이를 함유하는 파리는 야생형 대조군 동물에서 관찰 된 것과 유사한 행동 안정적인 반응을 나타낼 것으로 기대 될 수있다.
예상대로 알려진 mechanosensitive 돌연변이는 NOMPC는 손질 응답을 중단. 제어 파리는 동형 접합 복제 후 ALAR에 자극이 시간의 37 % (그림 4) 강모 강모에 응답. 반면, NOMPC에 대한 동형 접합했다 강모와 동물 (그림 4) 시간의 2 %를 응답했습니다. 야생형 파리는 다시 동안않고 단지 다르게 다른 강모의 자극에, 이러한 결과는 NOMPC 같은 mechanosensitive 돌연변이가 거의 정리 응답을 제거하는 것이 좋습니다. 알 수없는 돌연변이와 화면에서 정리 반응을 억제 mechanosensation에 관련된 여러 가지 돌연변이가 예상된다.
그림 1. 적절한 양육 조건은 최적의 행동 테스트가 필요합니다. 4 시간 달걀 누워 기간 - (A) 배아의 충분한 수가 2 다음 필요한. 4 시간 타이밍 된 바닥 후 배아의 개수는 성인의 충분한 수의 행동 테스트 날아간 수득 할 가능성이있다. (B) 잘린 다음 회복 기간 동안 일부 파리 생존하지 않고 추가 테스트에서 사용될 수 없다. (C) 정상적으로 회복 기간 동안 습한 환경에서 저장 하였다 참수 플라이는 행동 분석에서 쓸만한. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2. 강모에 MARCM 클론 열 충격 (85) 사이 - 100 시간 후 알을 낳는. 달걀 누워 후 101 시간 - 열 (98)을 충격 할 때 성인 (A) GFP 발현은 날아간다. 10 개의 macrochaete 강모는 동형 접합 돌연변이 외부 감각 기관을 포함하고 손질 응답 행동 분석에서 시험에 적합한 열이 161 충격을 때 성인 (B) GFP 발현은 파리 -. 달걀 누워 후 164 시간을. 검증 가능한 외부 감각 기관에서 동형 접합 세포의 어떤 패치를 표시하지 macrochaete 강모의 기지에서 GFP 발현의 부족을합니다.arge.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
촉각 자극에 대한 반응의 빈도는도 3 강모 신원에 의존한다. 단일 칫솔모의 자극에 대한 개인의 반응 플라이의 총 수는 퍼센트 응답을주고, 자극의 수에 의해 분할되었다. 각 (테스트 파리의 N = #, 22 포스트 날개의를, 21 지느러미 중앙 14, 순판, 7 Notopleural) 강모에 대한 백분율은 평균되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4. NOMPC 돌연변이는 P의 촉각 자극. 자극에 반응하지 않는이스트 ALAR 강모 야생형 MARCM 클론에 대한 응답을 유도한다. 그러나 NOMPC 3 있었다 포스트 ALAR 강모에 MARCM 클론의 자극 - / - (녹색 바는) 몇 응답 결과 (N = 23 야생형, 12 NOMPC - / -). 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오 이 그림의.
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Discussion
돌연변이의 컬렉션 성인 선별 곤란할 것 치명적인 P 요소 돌연변이가 포함되어 있기 때문에이 프로토콜은이 프로토콜은 먼저 리와 루오 설명 복잡한 유전 적 기술을 사용한다. 초파리 mechanosensation에 영향을 미치는 돌연변이 선별 성인 행동 분석을 활용 (1999) 성인 치사를 회피 우와 루오로 프로토콜, (2006) 등의 상세한. MARCM은 동형 접합 세포의 클론 영역을 생성하는 상동 염색체 사이의 유사 분열 재조합을 유도한다. 이 영역은 때문에 유사 분열 재조합 동안 발생 리프레 서 단백질, 욕조 - GAL80의 손실 GFP로 표시되어 있습니다. 특정 유전자 유전자좌에서 동형 접합체 세포를 생성하는 MARCM를 사용함으로써, 유전자 기능은이 문서에서 설명 된 행동 분석 등 다양한 방법을 사용하여 날아 성인에서 연구 될 수있다.
숫자와 B 수 특정 유전자를 모두 제한 요인테스트 E는 파리의 게놈 내의 FRT 부위의 존재이다. 플라이 주식은 관심의 돌연변이의 염색체 팔에 FRT 사이트를 포함해야합니다. MARCM 준비 플라이 주식은 유사 분열 재조합이 가능하도록 돌연변이 염색체로 동일한 FRT 사이트를 포함해야합니다. 우리가 실험실에서, 우리는 FRT40A과 FRT42D 사이트와 MARCM 배경을 포함하는 비행 주식을 개발했다. 이 주식은 우리가 각각 이미 2L와 2R 염색체 팔에 해당 FRT 사이트와 함께 모든 성인 치명적인 P-요소를 선별 할 수 있습니다. 두 번째 염색체의 팔과 X 염색체가 생성됩니다에 유전자를 검사 할 MARCM 배경으로 mechanotransduction 또는 정리 반사, 추가 플라이 주식에 영향을 미치는 돌연변이 화면에 MARCM의 잠재력을 극대화합니다. 개발되면 FRT 사이트와 함께 대부분의 성인 치명적인 P 요소 돌연변이가 mechanosensation에 참여 테스트 할 수 있도록,이 주식 수 있습니다.
열 SH의 타이밍관심 유전자좌 플라이 이형의 나머지의 대부분을 남겨 두면서 옥랑 프로토콜은, 외부 감각 기관에 동형 접합 셀 영역의 수를 최대화하기 위해 개발되었다. 관심 분야는 수많은 여러 강모 (도 2)을 테스트 할 수있게하는, 두 열충격 GFP 다음 식에 의해 표시 될 수있다. MARCM 프로토콜은 관심의 특정 지역에 동형 접합 치명적인 돌연변이를 만들 수있는 좋은 기회를 제공하지만, 우리의 MARCM 프로토콜은 궁극적으로 테스트 할 수 있습니다 강모있는대로 그것을 임의의 프로세스를 만들고, 재조합 효소 활동의 열 충격 유도에 의존한다. 각각의 특정 다리 정리가 6,7 리플렉스 이끌어 강모 때문에 우리가 야생형 MARCM 클론의 반응은 이전에 설명 된 것과 비교할 수 있는지 확인하는 것이 중요했다. MARCM 기반 스크린의 효율을 극대화 돌연변이 응답 macrochaete 칫솔모 중 하나를 테스트하기 위해 이들 DAT를 비교하는 능력이 필요MARCM 준비 재고 해당 강모의 응답 속도에 대한. 우리는 MARCM 파리에서 GFP를 표현 강모에 Corfas과 Dudai 7의 결과를 확인했다.
쉽게 정상 및 비정상 플라이 행동 반응을 구별하는 능력은 mechanotransduction 방해하는 돌연변이를 결정하는 것이 중요하다. mechanotransduction 또는 레그 응답을 억제한다 손질 반사의 다른 양태에 관련된 유전자의 돌연변이; MARCM 준비 재고 해당 강모에서 상당히 낮은 응답 속도가 예상된다. 모자이크 NOMPC 야생형 초파리 행동 반응율 MARCM 기반 행동 화면 mechanosensory 돌연변이 정상 파리 구별하는데 사용될 수 있다는 원칙의 증명으로서 작용한다. 우리는 NOMPC 돌연변이 모자이크 클론에 자극을 곤두에 대한 응답으로 정리 반사가 거의 폐지하는 것으로 나타났습니다. 십사 만이 파리를 전시하여 테스트레그 응답. 이들 초파리 각각 MARCM 기반 행동 분석법 mechanosensation 결함을 식별하는데 효과적임을 시사 테스트의 과정을 통해 한 번만 반응. mechanosensitive 돌연변이를 구별 할 수 관찰자는 날아 돌연변이없이 또는 정리 반응에 관여하지 않는 돌연변이로 날아갑니다. 인해 야생형 반응에서 변동성 높아도, 스크린은 강한 대립 유전자를 식별하지만 가능성으로 인해 약한 대립 유전자에 이상 동작의 미묘한 변화를 놓칠 것이다. 스크리닝되는 변이체의 콜렉션은 치명적인 대립 유전자 동형 접합체를 포함하고, 그래서 이러한 강한 널 또는 대립 유전자이고 단백질 기능을 폐지 할 가능성이있는 것으로 보인다. 그러나, 화면 개발에 치명적일 수있다 대립 유전자를 그리워하지만, MARCM에 의해 더 제한된 방식으로 동형 접합했을 때 더 미묘한 mechanosensory 결함을 생성합니다.
우리는 간단하게하기 위해 모 아니면 없음 채점 시스템을 선택했다. 이 방법은 관대를 산출다리 운동의 정도에 따라은 4 - 0의 점수를 할당하고 Corfas Dudai (7)에 의해 사용되는 시스템과 비교하여 점수. 전부 아니면 안됨 시스템에서, 임의의 응답은 어떤 자극에 응답 시스템 감각 자극을 검출 및 모터 시스템에 시그널링되는 것을 나타낸다는 가정으로 전체 신용 주어진다.
이 화면에서 어떤 행동 회로 공정에 영향을 미치는 돌연변이를 식별 할 수있다. 또는 칼슘 이미징 (Kernan 동부 알 5와) 같은 전기 생리학과 같은 추가 테스트는, 돌연변이가 직접 mechanotransduction 또는 감각 모터 반사 아크 현상 또는 기능의 다른 양태에 영향 여부를 결정하기 위해 사용되어야 할 것이다.
초파리는 mechanosensation의 연구를위한 훌륭한 모델 시스템을 제공 melanogaster의. 외부 감각 기관은 포유류 내이의 유모 세포와 많은 구조적 기능적 유사성을 공유(20). 초파리에서이 과정에 관여하는 분자의 해명은 포유 동물의 동족체와 orthologs를 공개 할 가능성이있다. 이후 세포 생물학, 전기 생리학에 대한 방법을 포장합니다 mechanosensation을 방해 돌연변이를 발견하기위한 화면, 생화학 적 연구는 더 확인하고 파리와 포유류 모두에서이 과정에 대한 우리의 이해를 심화, 이러한 분자의 특성을. mechanotransduction 및 비행 손질 반사에 관여하는 새로운 유전자를 공개 손질 응답 행동 분석과 짝을 잘 설립 유전자 기술을 사용합니다 mechanosensation에 영향을 미치는 돌연변이 MARCM 기반 화면.
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Disclosures
저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없습니다.
Acknowledgments
하고 싶은 저자는 블루밍턴 재고 센터, Liqun 루오, 찰스 Zuker, 그리고 릴리와 여운 Nung 월 플라이 주식의 관대 한 공유 및 자금 조달을 위해 다음과 감사 : 학사 포드 학부 여름 원정대 (JD 및 SW에) SOMAS-URM (SW에), 르네와 앤서니 M. 말론, MD (DL에) 63 여름 연구 활동 (CL과 DL에) BD 회사 여름 연구 활동 제임스 '75 제인 Colihan 여름 연구 활동 (TO)를 통해 동창 / 홀리 크로스 대학의 부모 여름 연구 기금 (IMF)과 Stransky 재단 여름 연구 활동 (TO)이다. 실험실에서 모든 작업의 지원을위한 거룩한 십자가의 대학에서 생물학과 및 학장의 사무실에 특별 감사합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
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