Abstract
Devido à homologia estrutural e funcional para as células ciliadas do ouvido interno de mamífero, os neurónios que enervam os órgãos dos sentidos de Drosophila externos proporcionam um excelente sistema modelo para o estudo de mechanosensation. Este protocolo descreve um comportamento simples toque na mosca da fruta, que podem ser utilizados para identificar as mutações que interferem com mechanosensation. A estimulação táctil de um macrochaete cerdas sobre o tórax de moscas provoca um reflexo da preparação a partir de qualquer da primeira ou terceira perna. As mutações que interferem com mecanotransdutores (tais como NOMPC), ou com outros aspectos do arco reflexo, pode inibir a resposta de preparação. Uma tela tradicional de comportamentos adultos teria perdido mutantes que têm papéis essenciais durante o desenvolvimento. Em vez disso, este protocolo combina a tela de toque com a análise do mosaico com um marcador de células repressible (MarcM) para permitir apenas regiões limitadas de células mutantes homozigotos para ser gerado e marcado pela exprESSÃO da proteína verde fluorescente (GFP). Ao testar clones MarcM para respostas de comportamento anormal, é possível rastrear um conjunto de mutações letais p-elemento de pesquisa para novos genes envolvidos no mechanosensation que teriam sido perdidas por métodos mais tradicionais.
Protocol
1. Cruzes para gerar Flies MarcM
- Manter moscas em meios de fubá melaço (6,5 g / L de agar; 23,5 g / L de levedura; 60 g / L da farinha de milho; 60 ml / L de melaço; 4 ml / mistura de ácido L; 0,13% Tegosept) ou mídia Drosophila padrão a 22 graus Celsius num ciclo luz / escuro de 12 h.
Nota: A Baixa de temperatura padrão é usado para manter MarcM-stocks saudável. Isso amplia o tempo de desenvolvimento entre ovo e idade adulta para 14 dias. - Use fêmeas virgens (cerca de 1 - 8 dias de idade) a partir de um estoque MarcM-pronto contendo os elementos genéticos necessários (GFP sob o controlo de uma sequência a montante activadora (UAS-GFP), a proteína repressora Gal80, o factor de transcrição Gal4, uma de choque térmico recombinase com motor, e um local de recombinação FRT).
Nota: Nossa MarcM prontos-existências conter os seguintes genótipos: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / CYO; tubGal4 / TM3Sb.
Nota: O local DRF específico dependerá da localização da mutaçãono genoma. Por exemplo, FRT40A é usado para testar as mutações no braço esquerdo do cromossoma 2, tal como NOMPC (ver 10 para mais detalhes sobre os protocolos MarcM). - Fêmeas virgens Cruz MarcM pronto para homens que contêm uma mutação de interesse e seu correspondente local DRF (por exemplo, w-; NOMPC3, FRT40A / CYO; + / +). Para controlar a indução MarcM eficaz, definir uma segunda cruzada usando as moscas macho contendo o mesmo local DRF, mas sem uma mutação. Use uma proporção aproximada de 5 fêmeas: 1 macho em cruzamentos.
2. Temporário postura de ovos
- Depois de permitir que as moscas para acasalar para pelo menos uma noite, mover adultos em novos tubos de ensaio com meio fresco. Permitir moscas para colocar ovos em um ambiente escuro por cerca de 4 horas antes de voltar a transferir as cruzes em novos frascos. Observe os horários de início e de término do período de postura de ovos.
Nota: Intervalos mais curtos são aceitáveis quando parece haver um elevado número de ovos sobre a mídia antes do final do interva 4-hreu.- Mantenha os frascos com um número suficiente de ovos (aproximadamente superior a 20) e armazenar em um ciclo claro / escuro de 12 horas a 22 graus Celsius para ser a choque térmico posterior.
Nota: Os frascos com um baixo número de ovos na mídia (menos de cerca de 20) não são susceptíveis de produzir um número suficiente de moscas adultas para o teste comportamental e no interesse da eficiência, recomenda-se não ser retidos por mais testes.
Nota: Os nossos moscas são levantadas com as luzes acesas 08:00-20:00. Nós descobrimos que o tempo do entardecer pontos levam a densidades mais elevadas de ovos, por isso costumam realizar cruzamentos programados entre 4-8 pm e 8:00-meia-noite. As moscas põem os seus ovos à temperatura ambiente numa câmara escura e, em seguida, são devolvidos para a incubadora no dia seguinte, de modo a não perturbar o ciclo de luz-escuro normal na incubadora.
- Mantenha os frascos com um número suficiente de ovos (aproximadamente superior a 20) e armazenar em um ciclo claro / escuro de 12 horas a 22 graus Celsius para ser a choque térmico posterior.
3. Execute choque térmico para induzir Mitotic Recombinação
- Cerca de 85-100 horas após a postura dos ovos, lugar vIals num banho de água a 37 graus Celsius durante 1 hora. Certifique-se que o nível da água atinge acima da altura dos meios de comunicação nos frascos, mas não submergir totalmente os frascos para evitar que as larvas do afogamento.
- Remova frascos de banho de água e permitir um período de recuperação de 1 hora em temperatura ambiente.
- Colocar os frascos de volta para 37 graus Celsius banho de água durante 1 h.
- Remova frascos de banho de água e guarde na incubadora em 12 horas ciclo claro / escuro, a 22 graus Celsius até eclosão.
4. Preparação para o Teste Comportamental
- Seguindo eclosão, anestesiar moscas no gelo. Selecione moscas com genótipos que contêm todos os elementos genéticos para MarcM e indicam clones marcados de expressão GFP provavelmente será observado com base nos marcadores fenotípicos observáveis usados nos estoques pai. Decapitar moscas com iridectomy tesoura.
Nota: Por exemplo, foram selecionados para as moscas sem os marcadores genéticos CYO (asas chaves) e Sb (cerda restolho) a identimoscas fy que contêm todos os elementos genéticos necessários para criar regiões de mosaico marcadas com GFP.
Nota: decapitação é necessário para evitar que os adultos de voar para longe quando estimulados. - Coloque moscas sem cabeça em um ambiente fechado, úmido e permitir que cerca de 10-20 horas de recuperação. Só uso voa esse direito-se quando perturbado por mais testes. Teste voa dentro de 30 horas de decapitação.
5. Teste Comportamental
- Ao observar moscas decapitados sob um microscópio de fluorescência de dissecação, os clones homozigóticos identificar marcadas com GFP nas cerdas órgãos sensoriais externas. Grave o nome de cerdas e do lado esquerdo ou direito. Para eliminar qualquer viés potencial, o membro do laboratório de realizar a estimulação de cerdas devem ser cego para o genótipo da cerda, do tipo selvagem ou mutante.
- Provocar um reflexo aliciamento, desviando o GFP marcado cerda para o corpo da mosca com um cabelo duro ou uma pinça fina e observar a re pernasponse. Dê uma nota de um a moscas que levantar a perna em resposta à estimulação de cerdas e uma pontuação de zero a moscas que não se movem as suas pernas.
Nota: Anterior estudos 6,7 caracterizaram a resposta perna que é provocada por estimular uma cerda particular. Isto inclui a perna que responde a cada cerda e a percentagem de moscas que respondem à estimulação de cerdas que em particular. Nós só marcou para os movimentos da perna que o esperado para responder baseado na classificação de Vandervorst 6. - Realizar cinco ensaios espaçados 2 min de intervalo.
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Representative Results
O sucesso deste protocolo depende em grande medida o rendimento global de moscas testáveis, a eficácia do choque térmico para induzir a recombinação mitótica, e a capacidade de obter uma resposta comportamental robusto em moscas estimuladas em intervalos de 2 min. Dado que cerca de 12,5% de embriões conter os elementos necessários MarcM e estima-se que 16,67% da população adulta que EFeche têm o potencial para a expressão de GFP, que é fundamental para obter um elevado número de ovos durante temporizada coloca. Um exemplo de um sucesso temporizada estabelecer durante um intervalo de 4 horas, que seria usado no resto do protocolo é mostrado na Figura 1A.
Quando o choque térmico é realizado 85 - 100 horas após a postura de ovos, o rendimento de GFP marcada órgãos sensoriais externas é mais elevada, com a maioria das moscas tendo um dos macroquetas marcado. Numerosas áreas de interesse pode conter células homozigotos nas bases de testable cerdas quando choques térmicos são realizados dentro deste período de tempo, com o dorsal de cerdas central e pós-alar sendo encontrado mais freqüentemente rotulado (Figura 2A). Os pontos fora do tempo de janela este resultado em manchas de expressão da GFP fora das regiões do corpo de interesse ou ausência de expressão de GFP (Figura 2B).
Moscas naturalmente responder a um estímulo que aparece ao iniciar uma resposta de fuga 19. A fim de evitar a fuga de moscas, moscas que decapitados. O circuito resposta aliciamento permanece intacto no cordão nervoso ventral 5. As moscas não se recuperam bem se decapitado sob anestesia dióxido de carbono, mas recuperar em poucas horas quando decapitado com anestesia frias no gelo. Após a decapitação, moscas deve ser armazenado em um ambiente úmido fechado durante o período de recuperação para evitar a dessecação. Enquanto algumas moscas podem desidratar ou ser incapaz de estar (Figura 1B),apenas aqueles capazes de suportar (Figura 1C) são usados para testes. Antes do teste, as moscas são verificados quanto à capacidade de resposta geral, observando para o movimento depois de um toque para o notum. Muitas moscas continuar respondendo por vários dias, mas o teste deve ser concluído até 24 - 36 horas após a decapitação. Voe hiperatividade pode ser um problema durante o teste comportamental porque um observador pode ter dificuldade em distinguir entre uma verdadeira resposta aliciamento dependente de estímulos e movimentos gerais da mosca. Em animais com excesso de movimento não provocada por estimulação tátil, resultados mais confiáveis são alcançados por esperando por moscas hiperativas para se tornar inativo.
Descobrimos que 47% das moscas do tipo selvagem responder pelo menos uma vez quando tocado em uma cerda cinco vezes, espaçadas em intervalos de 2 minutos para evitar a habituação. Vários grupos mostraram que a estimulação de diferentes cerdas provoca uma resposta modelado a partir de uma perna específica 6,7 6. Nas nossas experiências, moscas do tipo selvagem de controlo responde a um toque de luz de 14% (dorsal central) para 86% (Noto-pleural) de ensaios (Figura 3). Em uma tela à base de MarcM com mutantes desconhecidos, aquelas moscas contendo uma mutação não envolvido na mechanosensation pode-se esperar que exibem uma resposta comportamental fiável semelhante à observada em animais de controlo do tipo selvagem.
O mutante mechanosensitive conhecido, NOMPC interrompeu a resposta de aliciamento como esperado. Moscas de controlo respondeu a cerda estimulações em homozigotos clonado pós-alar cerdas 37% do tempo (Figura 4). Em contraste, animais com cerdas que eram homozigóticos para NOMPC respondeu 2% do tempo (Figura 4). Enquanto moscas do tipo selvagem rerespondem de forma diferente a estimulação de cerdas diferentes, estes resultados sugerem que uma mutação mechanosensitive, tais como NOMPC, praticamente elimina a resposta preparação. Em uma tela com mutantes desconhecidos, várias mutações envolvidas no mechanosensation que inibem a resposta de preparação são esperados.
Figura 1. condições adequadas Elevando são necessários para Optimal teste comportamental. (A) Um número suficiente de embriões são necessários após o 2 - período de postura de ovos 4 horas. O número de embriões após 4 h leigo temporizada é susceptível de produzir um número suficiente de moscas adultas para o teste comportamental. (B) Durante o período de recuperação após a decapitação, algumas moscas não sobrevivem e não pode ser utilizada em mais testes. (C) Uma mosca decapitado que foi devidamente armazenado em um ambiente úmido durante o período de recuperação é testável em um ensaio comportamental. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. MarcM Clones em Cerdas quando Heat-choque entre 85-100 horas após a oviposição. (A) a expressão da GFP em moscas adultas quando o calor chocado 98-101 horas após a postura dos ovos. Como muitos como 10 cerdas macrochaete conter homozigotos mutantes órgãos dos sentidos externos e são apropriados para o teste na resposta comportamental ensaio de aliciamento (B) a expressão da GFP em moscas adultas quando o calor chocados 161 -. 164 horas após a postura dos ovos. Note-se a falta de expressão de GFP nas bases das cerdas macrochaete, indicando que não há manchas de células homozigóticas para um órgão sensorial externo testáveis."target =" _ blank arge.jpg "> Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3. A frequência de resposta à estimulação táctil é dependente da cerda de identidade. O número total de respostas de uma mosca individuais à estimulação de uma única cerda foi dividido pelo número de estímulos para se obter uma resposta por cento. Percentagens foram calculadas para cada cerda (N = número de moscas testados, 22 Publicar Alar, 21 Dorsal Central 14, escutelar, 7 Notopleural). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4. Mutantes NOMPC não respondem à estimulação tátil. A estimulação do pcerdas Ost-alar provoca uma resposta em clones MarcM do tipo selvagem. No entanto, a estimulação dos clones MarcM sobre as cerdas pós alar que estavam NOMPC 3 - / - (barra verde) resultou em algumas respostas (N = 23 de tipo selvagem, e 12 NOMPC - / -). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Este protocolo utiliza um ensaio comportamental adulto para o rastreio de mutações que afectam mechanosensation em Drosophila. Uma vez que a colecção de mutantes contém letais mutações P-elemento, que evitarão a rastreio como adultos, este protocolo faz uso de uma técnica genética complexa primeiro descrito por Lee e Luo , (1999) e detalhada como um protocolo por Wu e Luo, (2006) para contornar adulto letalidade. MarcM induz recombinações mitóticas entre cromossomos homólogos para gerar regiões clonais de células homozigotos. Estas regiões são marcadas com GFP devido à perda da proteína repressora, GAL80-banheira, que ocorre durante a recombinação mitótica. Ao utilizar MarcM para gerar células que são homozigóticas para um locus genético particular, a função do gene pode ser estudada em moscas adultas utilizando uma variedade de métodos, incluindo o ensaio comportamental descrito no presente documento.
O principal fator limitante tanto o número e os genes específicos que podem Be é testada a presença de um local DRF no genoma da mosca. Existências Fly deve conter um local DRF no braço cromossómico da mutação de interesse. MarcM existências pronto mosca deve conter um local DRF idênticos, como o cromossoma mutante para permitir a recombinação mitótica. Em nosso laboratório, nós desenvolvemos stocks mosca contendo MarcM fundos com sites de FRT40A e FRT42D. Estes estoques nos permitirá rastrear qualquer adulto letal p-elemento já combinado com um local DRF correspondentes nos 2L e 2R cromossômicas braços, respectivamente. Para maximizar o potencial de MarcM em telas de mutações que afetam mechanotransduction ou o reflexo de aliciamento, as ações da mosca adicionais com MarcM fundos capazes de testar genes em ambos os braços do terceiro cromossomo e cromossomo X será criado. Uma vez desenvolvido, estes stocks permitirá para adultos mais mutações letais P-element combinados com um local DRF para ser testado para o envolvimento em mechanosensation.
O calendário do sh calorock protocolo foi desenvolvido para maximizar o número de regiões de células homozigóticas para os órgãos sensoriais externas, deixando a maior parte do resto do heterozigoto mosca no locus de interesse. Numerosas regiões de interesse podem ser marcados por expressão da GFP na sequência de um choque de calor dupla, permitindo múltiplas cerdas para ser testado (Figura 2). O protocolo MarcM oferece uma excelente oportunidade para criar mutações homozygous letais em regiões específicas de interesse, mas o nosso protocolo MarcM baseia-se na indução de choque térmico da atividade recombinase, tornando-se um processo aleatório como a que cerdas acabará por ser testável. Porque cada cerda provoca uma preparação específica perna reflexo 6,7, que era importante para nós para confirmar se as respostas em clones MarcM do tipo selvagem são comparáveis aos descritos anteriormente. Maximizando a eficiência de uma tela à base de MarcM requer a capacidade de testar qualquer das cerdas macrochaete para uma resposta mutante e para comparar estes DATuma contra a taxa de resposta a partir de uma cerda correspondente num estoque MarcM-pronto. Temos confirmou os resultados de Corfas e Dudai 7 em cerdas expressando GFP em moscas MarcM.
A capacidade de distinguir facilmente entre as respostas comportamentais mosca normais e anormais é fundamental para determinar quais mutações interferir com mechanotransduction. Uma mutação num gene envolvido na mecanotransdutores ou outro aspecto do reflexo de preparação deve inibir a resposta da perna; uma taxa de resposta significativamente inferior ao das cerdas correspondente num estoque MarcM-pronto é esperado. As taxas de resposta comportamental em mosaico NOMPC e moscas do tipo selvagem servir como uma prova do princípio de que a tela comportamental baseada em MarcM pode ser usado para diferenciar entre mutantes mecanosensorial e moscas normais. Demonstrámos que nos mutantes NOMPC clones de mosaico, o reflexo da preparação em resposta à estimulação de cerdas é praticamente abolida. Apenas dois moscas da catorze testados, exibiramuma resposta perna. Cada uma destas moscas respondeu apenas uma vez durante o curso do ensaio, sugerindo que um ensaio comportamental à base de MarcM é eficaz na identificação de um defeito mechanosensation. Um observador pode distinguir entre mutante mechanosensitive voa e voa sem uma mutação ou com uma mutação que não está envolvido na resposta da preparação. Devido ao alto grau de variabilidade nas respostas do tipo selvagem, a tela irá identificar os alelos fortes, mas provavelmente vai perder mudanças mais sutis no comportamento devido a alelos mais fracos. A colecção de mutantes para ser rastreados inclui alelos homozigóticos letais única, por isso, é provável que estes alelos são fortes ou nulos e são susceptíveis de suprimir a função da proteína. No entanto, a tela iria perder alelos que podem ser letais em desenvolvimento, mas produzir um defeito mecanosensorial mais sutil quando fez homozigose de uma forma mais limitada por MarcM.
Nós escolhemos um sistema de pontuação tudo-ou-nada pela simplicidade. Este método produz um generosomarcar em comparação com o sistema utilizado pelo Corfas e Dudai 7 que atribui uma pontuação de 0 - 4, dependendo da extensão do movimento da perna. No sistema tudo-ou-nada, qualquer resposta é dado crédito completo com o pressuposto de que qualquer resposta à estimulação indica que o sistema sensorial é detectar o estímulo e de sinalização para o sistema motor.
Esta tela pode identificar mutações que afectam qualquer passo no circuito comportamental. Testes adicionais, tais como electrofisiologia (como em Kernan et ai 5) ou imagiologia de cálcio, teria de ser utilizado para determinar se a mutação afectado directamente mecanotransdutores ou algum outro aspecto do desenvolvimento ou a função do arco reflexo sensorial-motora.
Drosophila melanogaster fornecer um excelente sistema modelo para o estudo de mechanosensation. Os órgãos sensoriais externos partilham muitas semelhanças estruturais e funcionais com as células ciliadas da orelha interna de mamíferos20. A elucidação das moléculas envolvidas neste processo em Drosophila tem o potencial de revelar os homólogos de mamífero e ortólogos. Telas que visam descobrir mutações que perturbam mechanosensation irá pavimentar o caminho para celular subsequente biológica, eletrofisiológica e estudos bioquímicos para identificar e caracterizar essas moléculas, aprofundando o nosso entendimento deste processo em ambas as moscas e mamíferos. A tela à base de MarcM para mutações que afetam mechanosensation usará uma técnica genética bem estabelecida emparelhado com um ensaio de resposta comportamental preparação para revelar novos genes envolvidos no mechanotransduction eo reflexo mosca aliciamento.
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Disclosures
Os autores não têm interesses financeiros concorrentes.
Acknowledgments
Os autores gostariam agradecer o centro de Bloomington estoque, Liqun Luo, Charles Zuker, e Lily e Yuh Nung Jan para a partilha generosa de ações da mosca ea seguinte para financiamento: SOMAS-URM (de JD e SW), Bacharel Ford Faculdade de Verão Fellowship (a sudoeste), BD Corporação Verão Research Fellowship (a CL e DL), The Renee e Anthony M. Marlon, MD '63 Verão Research Fellowship (a DL) James C. '75 e Jane Colihan Verão Research Fellowship (TO) através os alunos / pais Fundo do College of the Holy Cross Research Verão e da Fundação Stransky Research Fellowship Verão (a TO). Um agradecimento especial ao Departamento de Biologia e Gabinete do Reitor da College of the Holy Cross para o apoio de todo o trabalho no laboratório.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
