Abstract
På grund av den strukturella och funktionella homologi med hårcellerna i däggdjursinnerörat, de neuroner som innerverar Drosophila yttre sinnesorganen ger en utmärkt modellsystem för studier av mechanosensation. Detta protokoll beskriver ett enkelt tryck beteende fruktflugor som kan användas för att identifiera mutationer som stör mechanosensation. Den taktila stimulering av en macrochaete borst på thorax flugor framkallar ett grooming reflex från antingen den första eller tredje benet. Mutationer som stör mechanotransduction (såsom NOMPC), eller med andra aspekter av reflexbågen, kan hämma grooming svaret. En traditionell skärm av vuxna beteenden skulle ha missat mutanter som har viktiga roller under utveckling. I stället detta protokoll kombinerar pekskärm med mosaik analys med en undertryckcellmarkör (MARCM) för att möjliggöra endast begränsade områden av homozygota mutantceller som ska genereras och markeras med expression av grönt fluorescerande protein (GFP). Genom att testa marcm kloner för onormala beteendemässiga reaktioner, är det möjligt att screena en samling av dödliga p element mutationer för att söka efter nya gener som är involverade i mechanosensation som skulle ha missat med mer traditionella metoder.
Protocol
1. Crosses att generera marcm Flugor
- Behåll flugor på majsmjöl melass media (6,5 g / L agar, 23,5 g / L jäst, 60 g / L majsmjöl, 60 ml / L melass, 4 ml / L syra mix, 0,13% Tegosept) eller standard Drosophila media vid 22 grader Celsius i en 12-tim ljus / mörker-cykel.
Obs: En lägre än normal temperatur används för att hålla marcm-aktier friska. Detta förlänger utvecklingstiden mellan ägg och vuxen ålder till 14 dagar. - Använd jungfru honor (ca en - åtta dagar gamla) från en MARCM färdiga lager som innehåller de nödvändiga genetiska elementen (GFP under kontroll av en uppströms-aktiverande sekvensen (UAS-GFP), den GAL80-repressorproteinet, Gal4 transkriptionsfaktor, en värmechock driven rekombinas och en FRT rekombinationsställe).
OBS: Vår marcm färdiga bestånd innehålla följande genotyper: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / cyo; tubGal4 / TM3Sb.
Obs: Det specifika FRT-säte kommer att bero på placeringen av mutationeni genomet. Till exempel är FRT40A används för att testa mutationer på den vänstra armen av kromosom 2, såsom NOMPC (se 10 för mer detaljer om marcm protokoll). - Cross marcm-redo jungfru honor till hanar som innehåller en mutation av intresse och dess motsvarande FRT-säte (t ex w-; NOMPC3, FRT40A / cyo; + / +). För att kontrollera för effektiv MARCM induktion, ställa in en andra tvär använder manliga flugor som innehåller samma FRT plats, men utan en mutation. Använd ett ungefärligt förhållande av 5 honor: 1 hane i kors.
2. Tids äggläggningen
- Efter att flugor att para sig för åtminstone en natt, flytta vuxna i nya flaskor med färskt medium. Låt flugor att lägga ägg i en mörk miljö för ca 4 timmar innan han åter överför korsen i nya flaskor. Notera start- och sluttider för äggläggning perioden.
Obs: Kortare intervaller är acceptabelt när det verkar finnas ett stort antal ägg på medierna före utgången av den 4-hr interval.- Håll injektionsflaskor med ett tillräckligt antal ägg (ungefär större än 20) och förvara i en 12-timmars ljus / mörker-cykel vid 22 grader Celsius till värmechock senare.
Obs: Flaskor med ett lågt antal ägg på mediet (mindre än ca 20) är osannolikt att ge ett tillräckligt antal av vuxna flugor för beteendetestning och i syfte att effektivisera rekommenderas de inte behållas för ytterligare tester.
Obs: Våra flugor höjs med lampor på 08:00 till 08:00. Vi har funnit kvällen tid poäng leder till högre ägg täthet, därför brukar utföra tids korsningar mellan 4-8 PM och 08:00 midnatt. Flugorna lägger sina ägg vid RT i en mörkt skåp och sedan återförs till inkubatorn följande dag för att inte störa den regelbundna ljus-mörkercykel i inkubatorn.
- Håll injektionsflaskor med ett tillräckligt antal ägg (ungefär större än 20) och förvara i en 12-timmars ljus / mörker-cykel vid 22 grader Celsius till värmechock senare.
3. Utför Heat Shock att Framkalla Mitotisk rekombination
- Cirka 85-100 timmar efter äggläggning, plats vIALS i ett vattenbad vid 37 ° C i 1 timme. Se till att vattennivån når ovanför höjden av media i flaskorna, men inte helt dränka flaskorna för att förhindra larverna från att drunkna.
- Ta bort flaskorna från vattenbadet och låt en 1 timme återhämtningsperiod vid RT.
- Placera flaskorna tillbaka in 37 grader Celsius vattenbad under 1 timme.
- Ta bort flaskorna från vattenbad och förvara i kuvös på ljus / mörkercykel 12-h vid 22 grader tills eclosion.
4. Förberedelse för beteendetestning
- Efter eclosion, söva flugor på is. Välj flugor med genotyper som innehåller alla de genetiska element för MARCM och indikerar GFP uttryck-märkta kloner kommer sannolikt observeras baserat på observerbara fenotyp markörer som används i moder lager. Halshugga flugor med iridektomi sax.
Obs: Till exempel valde vi för flugor utan genetiska markörer CYO (lockigt vingar) och Sb (stubb borst) att IdentiFY flugor som skulle innehålla alla de genetiska element som är nödvändiga för att skapa mosaik regioner märkta med GFP.
Obs: Halshuggning är nödvändig för att förhindra att vuxna från att flyga iväg när stimuleras. - Placera huvudlös flugor i en sluten, fuktig miljö och låter ungefär 10-20 timmar av återhämtning. Bruk flyger denna rätt själva när störd för ytterligare tester. Test flyger inom 30 timmar av halshuggning.
5. Behavioral Test
- Genom att observera avhuggna flugor under ett fluorescens dissekera mikroskop, identifiera homozygota kloner märkta med GFP vid borst yttre sinnesorganen. Anteckna borst namn och vänster eller höger sida. För att eliminera varje eventuell bias bör labbet utövande organet borst stimulering vara blind för genotypen av borst, vildtyp eller mutant.
- Framkalla en grooming reflex genom att böja GFP märkt borst mot flugan kropp med en styv hår eller fin pincett och observera benet reResponse. Ge en poäng från ett till flugor som lyfter deras ben som svar på borst stimulans och en poäng från noll till flugor som inte rör sina ben.
Obs: Tidigare studier 6,7 har präglat benet respons som framkallas genom att stimulera en viss borst. Detta innefattar benet som svarar på varje borst och andelen flugor som svarar på stimulering av den specifika borst. Vi gjorde bara för förflyttning av benet som vi förväntas svara baseras på Vandervorst indelning 6. - Genomföra fem försök fördelade 2 minuter från varandra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Framgången för detta protokoll beror till stor del på det totala utbytet av testbara flugor, effektiviteten av värmechock inducerar mitotisk rekombination, och möjligheten att få en robust beteendesvar i flugor stimulerade med 2 minuters intervall. Med tanke på att uppskattningsvis 12,5% av embryon innehåller nödvändiga marcm elementen och uppskattningsvis 16,67% av de vuxna som Eclose har potential för GFP uttryck, är det viktigt att få ett stort antal ägg under tidsinställd innehåller. Ett exempel på en framgångsrik tidsinställd låg över en 4 h-intervall som skulle användas i resten av protokollet visas i figur 1A.
När värmechock utförs 85-100 timmar efter äggläggning, är utbytet av GFP märkt externa sinnesorgan högsta, med de flesta flugor med en av macrochaetae märkt. Många områden av intresse kan innehålla homozygota celler vid baserna av testable borst när värmechocker utförs inom denna tidsperiod, med rygg centrala och efter alar borst upptäcks märkt oftast (Figur 2A). Tidpunkter utanför detta fönster resulterar i fläckar av GFP-uttryck utanför kroppen regioner av intresse eller inget uttryck av GFP (Figur 2B).
Flugor naturligtvis svara på en hotande stimulus genom att initiera en flykt svar 19. För att förhindra att flugor från att fly, halshögg vi flugor. Grooming svarskretsen förblir intakt i den ventrala nerv sladd 5. Flugor inte återhämta sig bra om halshöggs enligt koldioxid anestesi, men återhämtar sig inom några timmar när halshuggen med kalla anestesi på is. Efter halshuggning, bör flugor förvaras i en sluten, fuktig miljö under återhämtningsperioden för att förhindra uttorkning. Medan vissa flugor kan torka ut eller inte kan stå (Figur 1B),bara de som kan stå (Figur 1C) används för testning. Före testning, är flugor kontrolleras för allmän lyhördhet genom att titta för rörelse efter en touch till notum. Många flugor fortfarande reagerar i flera dagar, men testning bör kompletteras med 24-36 timmar efter halshuggning. Fly hyperaktivitet kan vara ett problem under beteendetester eftersom en observatör kan ha svårt att skilja mellan en sann stimulansberoende grooming svar och allmänna rörelser flugan. Hos djur med överskott rörelse inte framkallats av taktil stimulering, är mer tillförlitliga resultat som uppnåtts genom att vänta på hyperaktiva flugor att bli vilande.
Vi fann att 47% av vild typ flugor svara åtminstone en gång vid beröring på en borst fem gånger, åtskilda med 2 minuters intervall för att förhindra tillvänjning. Flera grupper har visat att stimulering av olika borst framkallar en mönstrad svar från en viss ben 6,7 6. I våra experiment, vildtyp kontroll flugor svarade på en lätt beröring från 14% (rygg central) till 86% (Noto-pleural) försök (Figur 3). I en MARCM-baserad skärm med okända mutanter, kan dessa flugor som innehåller en mutation inte är involverad i mechanosensation förväntas uppvisa en pålitlig beteende svar som liknar den som observerats i vild-typ kontrolldjur.
Den kända mechanosensitive mutant, NOMPC störde grooming svar som förväntat. Kontroll flugor svarade på borst stimuleringar vid homozygot klonade efter alar borst 37% av tiden (Figur 4). I motsats till djur med borst som var homozygota för NOMPC svarade 2% av tiden (Figur 4). Medan vildtyp flugor restämmer olika på stimulering av olika borst, antyder dessa resultat att en mechanosensitive mutation, såsom NOMPC, eliminerar nästan grooming svaret. I en skärm med okända mutanter, finns flera mutationer inblandade i mechanosensation som hämmar grooming svar förväntas.
Figur 1. Korrekt uppfödningsförhållanden krävs för Optimal Behavioral testning. (A) Ett tillräckligt antal embryon behövs efter 2-4 timmar äggläggning period. Antalet embryon efter en 4 timmars tidsinställd lay kommer sannolikt att ge ett tillräckligt antal vuxna flugor för beteendetestning. (B) Under återhämtningsperioden efter halshuggning, vissa flugor inte överleva och kan inte användas i ytterligare tester. (C) En halshuggen fluga som förvaras på rätt sätt i en fuktig miljö under återhämtningsperioden är testbar i en beteendeanalys. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. marcm Kloner i Bristles när Värme chockade mellan 85-100 timmar efter äggläggande. (A) GFP uttryck hos vuxna flugor när värme chockade 98-101 timmar efter äggläggningen. Så många som 10 macrochaete borst innehåller homozygota muterade externa sinnesorgan och är lämpliga för testning i grooming svar beteendeanalys (B) GFP uttryck hos vuxna flugor när värmechock 161 -. 164 timmar efter äggläggningen. Notera avsaknaden av GFP-uttryck vid baserna hos de macrochaete borst, vilket indikerar inga fläckar av homozygota celler vid en testbar extern sensoriskt organ.arge.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Frekvens av Svar på Taktil Stimulering är beroende av borst Identitet. Det totala antalet svar hos en individ fluga till stimulering av en enda borstdividerades med antalet impulser för att ge en procent svar. Procentsatser beräknades för varje borst (N = # av flugor testas, 22 Post Alar, 21 Rygg Central 14, Scutellar, 7 Notopleural). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. NOMPC Mutants inte svarar på Taktil Stimulering. Stimulering av pOst-alar borst framkallar ett svar i vildtyp marcm kloner. Men stimulering av marcm kloner på efter Alar borsten som var NOMPC 3 - / - (grön stapel) resulterade i några svar (N = 23 vild-typ och 12 NOMPC - / -). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Detta protokoll använder en vuxen beteendeanalys för att screena för mutationer som påverkar mechanosensation i Drosophila. Eftersom insamling av mutanter innehåller dödliga p element mutationer som skulle hindra screening som vuxna, detta protokoll utnyttjar en komplex genetisk teknik som först beskrivits av Lee och Luo , (1999) och detaljerad som ett protokoll av Wu och Luo, (2006) för att kringgå vuxen dödlighet. MARCM inducerar mitotisk rekombination mellan homologa kromosomer att generera klonala regioner homozygota celler. Dessa regioner är markerade med GFP på grund av förlusten av repressorproteinet, badkar-GAL80 som inträffar under mitotisk rekombination. Genom att använda MARCM att generera celler som är homozygota vid ett speciellt genetiskt ställe, kan studeras genfunktion i vuxna flugor under användning av en mängd olika metoder, inklusive beteendeanalysen som beskrivs i detta papper.
Den primära faktorn som begränsar både antalet och de specifika gener som kan Be testas är närvaron av en FRT-säte inom genomet av flugan. Fly bestånd måste innehålla ett FRT-säte på den kromosomala armen av mutationen av intresse. Marcm redo flyga aktier måste innehålla en identisk FRT plats som den muterade kromosomen för att möjliggöra mitotisk rekombination. I vårt labb har vi utvecklat flyga spad innehållande marcm bakgrunder med FRT40A och FRT42D webbplatser. Dessa lager ger oss möjlighet att undersöka någon vuxen dödlig p-elementet redan kombinerat med en motsvarande FRT plats på 2L och 2R kromosomarmar, respektive. För att maximera potentialen hos MARCM i skärmar för mutationer som påverkar mechanotransduction eller grooming reflex, extra flyga aktier med marcm bakgrunder kan testa gener på båda armarna i tredje kromosom och X-kromosomen kommer att skapas. När utvecklas, kommer dessa bestånd möjliggöra för de flesta vuxna dödlig p-elementet mutationer i kombination med en FRT webbplats som ska testas för sin inblandning i mechanosensation.
Tidpunkten för värme shock protokoll har utvecklats för att maximera antalet homozygota cellområden vid de yttre sinnesorganen, medan en stor del av resten av flugan heterozygot på stället av intresse. Talrika intresseområden kan markeras genom GFP-uttryck efter en dubbel värmechock, vilket möjliggör multipla borst som skall testas (Figur 2). Den MARCM protokollet ger ett utmärkt tillfälle att skapa homozygot letala mutationer i specifika regioner av intresse, men vår MARCM protokoll bygger på värmechock induktion av rekombinasaktivitet, vilket gör det till en slumpmässig process om vilka borst i slutändan kommer att vara testbara. Eftersom varje borst framkallar en viss ben grooming reflex 6,7, var det viktigt för oss att bekräfta att svaren i vildtyp marcm kloner är jämförbara med de tidigare beskrivna. Maximera effektiviteten i en MARCM-baserad skärm kräver förmåga att testa någon av de macrochaete borsten för en mutant svar och jämföra dessa data mot svarsfrekvensen från en motsvarande borst i en MARCM färdiga lager. Vi har bekräftat resultatet av Corfas och Dudai 7 i borst som uttrycker GFP i marcm flugor.
Förmågan att lätt skilja mellan normala och onormala flyga beteendemässiga reaktioner är avgörande för att bestämma vilka mutationer störa mechanotransduction. En mutation i en gen som är involverad i mechanotransduction eller annan aspekt av grooming reflex ska hämma benet svar; en betydligt lägre svarsfrekvens på motsvarande borst i en MARCM färdiga lager förväntas. Beteende svarsfrekvensen i mosaik NOMPC och vildtyp flugor fungerar som ett bevis på principen att MARCM Baserade beteende skärmen kan användas för att skilja mellan mechanosensory mutanter och normala flugor. Vi har visat att i NOMPC mutanta mosaik kloner är grooming reflexen som gensvar på borststimulering nästan avskaffas. Endast två flugor i fjorton testade uppvisadeett ben svar. Var och en av dessa flugor svarade endast en gång under loppet av tester, vilket tyder på att en MARCM baserad beteendeanalys är effektiv på att identifiera en mechanosensation defekt. En observatör kan skilja mellan mechanosensitive mutanten flugor och flyger utan en mutation eller med en mutation som inte är inblandad i grooming svaret. På grund av den höga grad av variabilitet i vild-typ svar, kommer skärmen att identifiera starka alleler, men kommer sannolikt att missa mer subtila förändringar i beteende på grund av svagare alleler. Insamlingen av mutanter som ska screenas omfattar endast homozygota dödliga alleler, så det är troligt att dessa är starka eller noll alleler och kommer sannolikt att avskaffa proteiners funktion. Men skulle skärmen missar alleler som kan vara dödlig i utveckling, men ger en mer subtil mechanosensory fel när de görs homozygot på ett mer begränsat sätt genom MARCM.
Vi valde en allt-eller-inget poängsystem för enkelhet. Denna metod ger en generöspoäng jämfört med det system som används av Corfas och Dudai 7 som tilldelar en poäng av 0-4 beroende på omfattningen av benrörelser. I allt-eller-inget-system är något svar ges full kredit med antagandet att varje svar på stimulering indikerar att sensoriska systemet detektera stimulans och signalering till motorsystemet.
Denna skärm kan identifiera mutationer som påverkar varje steg i beteende kretsen. Ytterligare testning, såsom elektrofysiologi (såsom i Kernan et al 5) eller kalcium avbildning, skulle behöva användas för att fastställa huruvida mutationen direkt berörs mechanotransduction eller någon annan aspekt av utveckling eller funktion sensomotorisk reflexbågen.
Drosophila melanogaster ger en utmärkt modellsystem för studier av mechanosensation. De yttre sinnesorgan dela många strukturella och funktionella likheter med hårcellerna i däggdjursinnerörat20. Klarläggande av de molekyler som är involverade i denna process i Drosophila har potential att avslöja däggdjurshomologer och ortologer. Skärmar som syftar till att upptäcka mutationer som stör mechanosensation kommer att bana väg för efterföljande cellbiologiska, elektrofysiologiska och biokemiska studier för att ytterligare identifiera och karakterisera dessa molekyler, fördjupa vår förståelse av denna process i både flugor och däggdjur. En MARCM-baserad skärm för mutationer som påverkar mechanosensation kommer att använda en väletablerad genetisk teknik parat med en trimning svar beteendeanalys för att avslöja nya gener som är inblandade i mechanotransduction och flugan grooming reflex.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
Författarna vill tacka Bloomington aktie centrum Liqun Luo, Charles Zuker och Lily och Yuh Nung Jan för generösa delning av flyga aktier och följande om finansiering: SOMAS-URM (till JD och SW), Bachelor Ford fakulteten Summer Fellowship (till SW), BD Corporation Summer Research Fellowship (till CL och DL), The Renee och Anthony M. Marlon, MD '63 Summer Research Fellowship (DL) James C. '75 och Jane Colihan Summer Research Fellowship (TO) genom Alumni / moderbolaget Summer Research Fund av högskolan av det heliga korset och Stransky Foundation Summer Research Fellowship (TO). Särskilt tack till Institutionen för biologi och dekanus kansli vid College of the Holy Cross till stöd för allt arbete i labbet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
