Abstract
På grunn av den strukturelle og funksjonelle homologi til håret celler av pattedyr indre øret, nervecellene som innerverer Drosophila ytre sanseorganene gir en utmerket modellsystem for studier av mechanosensation. Denne protokollen beskriver en enkel berøring oppførsel i fruktfluer som kan brukes for å identifisere mutasjoner som forstyrrer mechanosensation. Den taktile stimulering av en macrochaete bust på thorax av fluer utløser en grooming refleks fra enten første eller tredje etappe. Mutasjoner som påvirker mechanotransduction (som NOMPC), eller sammen med andre aspekter av refleks bue, kan hemme stell respons. En tradisjonell skjerm av voksen atferd ville ha gått glipp av mutanter som har viktige roller under utvikling. I stedet kombinerer denne protokollen berøringsskjermen med mosaikk analyse med en repressible cellemarkør (MARCM) for å tillate kun begrensede områder av homozygot mutante celler som skal genereres og preget av expression av grønt fluorescerende protein (GFP). Ved å teste MARCM kloner for unormale atferdsmessige reaksjoner, er det mulig å skjerme en samling av dødelige p-element mutasjoner for å søke etter nye gener involvert i mechanosensation som ville ha vært savnet av mer tradisjonelle metoder.
Protocol
1. Crosses å generere MARCM Flies
- Opprettholde fluer på cornmeal melasse medier (6,5 g / L agar; 23,5 g / L gjær, 60 g / L cornmeal, 60 ml / L melasse, 4 ml / L syre mix; 0,13% Tegosept) eller standard Drosophila media på 22 grader Celsius i en 12-timers lys / mørke syklus.
Merk: En lavere enn standard temperatur brukes til å holde MARCM-aksjer sunt. Dette forlenger utviklingstiden mellom egg og voksen alder til 14 dager. - Bruk jomfrue hunner (ca. 1-8 dager gamle) fra en MARCM-klar masse som inneholder de nødvendige genetiske elementer (GFP under kontroll av en oppstrøms aktiverende sekvens (UAS-GFP), den Gal80 repressor protein, Gal4 transkripsjonsfaktor, en varmesjokk drevet rekombinase, og en FRT rekombinasjon stedet).
Merk: Vår MARCM ferdig aksjer inneholde følgende genotyper: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / CYO; tubGal4 / TM3Sb.
Merk: Den spesifikke FRT området vil avhenge av plasseringen av mutasjoneni genomet. For eksempel er FRT40A brukes til å teste mutasjoner på venstre arm av kromosom 2, slik som NOMPC (se 10 for mer informasjon om MARCM protokoller). - Cross MARCM-ready jomfruelige kvinner til menn som inneholder en mutasjon av interesse og korresponderende FRT nettstedet (for eksempel W-, NOMPC3, FRT40A / CYO; + / +). For å kontrollere for effektiv MARCM induksjon, satt en annen kryss ved hjelp mannlige fluer som inneholder samme FRT området, men uten en mutasjon. Bruk et omtrentlig forhold på 5 tisper: en mann i kors.
2. Tidsbestemt egglegging
- Etter at fluene å pare seg for minst én natt, flytte voksne inn i nye flasker med frisk media. Tillat fluer å legge egg i mørke omgivelser for ca 4 timer før igjen overfører korsene inn nye ampuller. Legg merke til start- og sluttid for egglegging perioden.
Merk: Kortere intervaller er akseptabelt når det synes å være et stort antall egg på mediet før slutten av den 4-timers interval.- Hold hetteglass med et tilstrekkelig antall egg (ca. større enn 20) og oppbevar i en 12-timers lys / mørke syklus på 22 grader Celsius til å være varme sjokkert senere.
Merk: Ampuller med et lavt antall egg på media (mindre enn ca. 20) er usannsynlig å gi tilstrekkelig antall av voksne fluer for atferds testing og av hensyn til effektivitet, anbefales det at de ikke skal beholdes for videre testing.
Merk: Våre fluer er oppvokst med lysene på fra 8 om morgenen til 20:00. Vi har funnet kvelden tid poeng føre til høyere egg tettheter, derfor vanligvis utfører tidsbestemte kors mellom 4 - 8 PM og 20:00-midnatt. Fluene legger sine egg ved RT i et mørkt skap og deretter returneres til inkubatoren neste dag for ikke å forstyrre den vanlige lys-mørke-syklus i inkubatoren.
- Hold hetteglass med et tilstrekkelig antall egg (ca. større enn 20) og oppbevar i en 12-timers lys / mørke syklus på 22 grader Celsius til å være varme sjokkert senere.
3. Utfør Heat Shock å indusere Mitotisk rekombinasjon
- Omtrent 85-100 timer etter egglegging, sted vials inn i et vannbad ved 37 ° C i 1 time. Sørg for at vannstanden når over høyden av media i ampullene, men ikke fullt senk hetteglassene for å forhindre at larver fra å drukne.
- Fjern ampullene fra vannbadet og lar en 1 time restitusjonsperiode ved romtemperatur.
- Plasser flaskene tilbake til 37 grader Celsius vannbad i en time.
- Fjern hetteglass fra vannbadet og butikk i kuvøse på 12-timers lys / mørke syklus på 22 grader Celsius til eklosjonshormon.
4. Forberedelse til Behavioral Testing
- Etter eklosjonshormon, bedøve fluer på is. Velg fluer med genotyper som inneholder alle de genetiske elementer for MARCM og indikerer GFP uttrykk-merket kloner vil trolig bli observert basert på observer fenotype markører som brukes i foreldre aksjer. Halshogge fluer med iridectomy saks.
Merk: For eksempel, valgte vi for fluer uten genetiske markører CYO (krøllete vinger) og Sb (halm bust) til IdentiFy fluer som vil inneholde alle de genetiske elementer som er nødvendige for å lage mosaikk regioner merket med GFP.
Merk: Decapitation er nødvendig for å hindre voksne i å fly bort når stimulert. - Plasser hodeløse fluer i en lukket, fuktig miljø og la ca 10 - 20 timer for utvinning. Bare bruk flyr det rett til selv når opprørt for videre testing. Test flyr innen 30 timer fra halshogging.
5. Behavioral Testing
- Ved å observere halshugde fluer under en fluorescens dissekere mikroskop, identifisere homozygot kloner merket med GFP på bust eksterne sanseorganer. Spill bust navn og venstre eller høyre side. For å eliminere eventuelle skjevheter, bør laboratoriet medlem utfører bust stimulering være blind til genotypen av bustvilltype eller mutant.
- Lokke fram en grooming refleks ved å avlede GFP merket bust mot flue kroppen med en stiv hår eller fin pinsett og observere beinet rerespons. Gi en poengsum på én til fluer som løfter sine ben i respons til bust stimulering og en poengsum på null til fluer som ikke beveger seg på beina.
Note: Forrige studier 6,7 har preget beinet respons som utløses ved å stimulere en bestemt bust. Dette omfatter ben som reagerer på hver bust og andelen av fluer som reagerer på stimulering av den aktuelle bust. Vi bare scoret for bevegelser av beinet som vi forventet å svare basert på Vandervorst klassifisering 6. - Gjennomføre fem forsøk fordelte 2 min fra hverandre.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Suksessen til denne protokollen i stor grad er avhengig av det totale utbytte av testbare fluer, til effektiviteten av varmesjokk induserer mitotisk rekombinasjon, og evnen til å oppnå en robust atferdsrespons i fluer stimulert ved 2 minutters intervaller. Gitt at anslagsvis 12,5% av embryoer inneholde de nødvendige MARCM elementene og en beregnet 16,67% av voksne som ELukk har potensial for GFP uttrykk, er det avgjørende å oppnå et høyt antall egg i løpet av tidsbestemte legger. Et eksempel på en vellykket tidsbestemt legge over en 4 timers intervall som vil bli brukt i resten av protokollen er vist i Figur 1A.
Når varmesjokk utføres 85-100 timer etter egglegging, er utbyttet av GFP-merket ytre sanseorganene høyeste, med de fleste fluer som har en av de macrochaetae merket. Mange områder av interesse kan inneholde homozygot celler på baser av testable bust når varmesjokk utføres innenfor denne tidsperioden, med rygg sentral og etter alar bust blir funnet merket hyppigst (Figur 2A). Tids punkter utenfor dette vinduet resultat i lapper av GFP uttrykk utenfor kroppen regioner av interesse eller ingen GFP uttrykk (figur 2B).
Fluer naturligvis svare på en truende stimuli ved å initiere en flukt respons 19. For å hindre at fluer fra å unnslippe, vi falt fluer. Den grooming respons krets forblir intakt i ventral nerve ledningen 5. Fluer ikke gjenopprette godt hvis falt etter karbondioksid anestesi, men komme i et par timer når falt med kalde anestesi på is. Etter halshogging, bør fluer lagres i et lukket, fuktig miljø under utvinning perioden for å hindre uttørking. Mens noen fluer kan desiccate eller være ute av stand til å stå (figur 1B),bare de som er i stand til å skille seg (figur 1C) blir brukt for testing. Før testing, er fluer sjekket for generell respons ved å se for bevegelse etter en touch til notum. Mange fluer forblir responsiv i flere dager, men testing bør være ferdig innen 24 - 36 timer etter halshogging. Fly hyperaktivitet kan være et problem under atferds testing fordi en observatør kan ha problemer med å skille mellom en ekte stimulus-avhengig grooming respons og generelle bevegelser av fly. Hos dyr med overflødig bevegelse ikke utløst av taktil stimulering, er mer pålitelige resultater oppnås ved å vente for hyperaktive fluer å bli stillestående.
Vi fant at 47% av villtype fluer reagere minst en gang når den berøres med en bust fem ganger, med en avstand på 2 minutters intervaller for å forhindre tilvenning. Flere grupper har vist at stimulering av forskjellige børstehår utløser en mønstret respons fra et bestemt ben 6,7 6. I våre eksperimenter, vill-type kontroll fluer svart på en lett berøring fra 14% (dorsal sentral) til 86% (Noto-pleural) forsøk (figur 3). I en MARCM-basert skjerm med ukjente mutanter, kan disse fluene som inneholder en mutasjon som ikke deltar i mechanosensation forventes å vise en pålitelig atferdsrespons lik den som ble observert i vill-type kontrolldyrene.
Den kjente mechanosensitive mutant, NOMPC forstyrret grooming respons som forventet. Kontroll fluer svart på bust stimulations på homozygot klonet post-alar bust 37% av tiden (figur 4). I motsetning til dette dyr med bust som var homozygote for NOMPC reagert 2% av tiden (figur 4). Mens villtype fluer respond forskjellig på stimulering av forskjellige buster, antyder disse resultatene at en mechanosensitive mutasjon, slik som NOMPC, eliminerer nesten stell respons. I en skjerm med ukjente mutanter, er flere mutasjoner involvert i mechanosensation som hemmer grooming respons forventet.
Figur 1. Riktig stell betingelser er nødvendig for Optimal Behavioral Testing. (A) Et tilstrekkelig antall embryoer er nødvendig etter 2 - 4 timers egglegging perioden. Antall embryoer etter en 4 timers tidsbestemt lay er egnet til å gi et tilstrekkelig antall voksne fluer for adferdstesting. (B) I restitusjonsperioden etter halshugging, trenger noen fluer ikke overlever og kan ikke brukes i ytterligere forsøk. (C) En overfalt flue som ble riktig lagret i et fuktig miljø under utvinning perioden er testbar i en atferdsanalyse. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. MARCM Clones i bust når Heat-sjokkert mellom 85-100 timer etter egg-legging. (A) GFP uttrykk i voksen flyr når varmen sjokkert 98-101 timer etter egglegging. Så mange som 10 macrochaete bust inneholde homozygote muterte eksterne sanseorganer og er aktuelle for testing i grooming respons atferdsanalyse (B) GFP uttrykk i voksen flyr når varmesjokk 161 -. 164 timer etter egglegging. Legg merke til mangelen på GFP uttrykk på baser av macrochaete bust, som indikerer ingen flekker av homozygot celler på en testbar ytre sanseorgan.arge.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Frekvensrespons til Taktil stimulering er avhengig av bust identitet. Det totale antall responser hos et individ fly til stimulering av en enkelt bust ble delt med antall stimuli for å gi en prosent respons. Prosenter ble i gjennomsnitt for hver bust (N = antall fluer testet, 22 Post Alar, 21 Dorsal Central 14, Scutellar, 7 Notopleural). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. NOMPC Mutants ikke responderer på Taktil Stimulering. Stimulering av pOST-alar bust utløser en reaksjon i villtype MARCM kloner. Men stimulering av MARCM kloner på innlegg alare bust som var NOMPC 3 - / - (grønn bar) resulterte i få svar (N = 23 villtype, og 12 NOMPC - / -). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokollen benytter en voksen atferds assay for å screene for mutasjoner som påvirker mechanosensation i Drosophila. På grunn av at samlingen av mutanter som inneholder letale p-element mutasjoner som ville forhindre screening som voksne, denne protokollen gjør bruk av en kompleks genetisk teknikk som først ble beskrevet av Lee og Luo , (1999), og detaljert som en protokoll av Wu og Luo, (2006) for å omgå voksen dødelighet. MARCM induserer mitotisk rekombinasjon mellom homologe kromosomer å generere klonale regioner av homozygot celler. Disse regionene er merket med GFP på grunn av tap av repressor protein, kar-GAL80 som oppstår under mitotisk rekombinasjon. Ved å bruke MARCM å generere celler som er homozygote ved en bestemt genetisk locus, kan genfunksjon studeres i voksne fluer ved hjelp av en rekke metoder, inkludert de atferdsmessige analysen beskrevet i denne artikkelen.
Den primære faktor begrense både antall og de spesifikke gener som kan be testet er tilstedeværelsen av et FRT område i genomet av fly. Fly aksjer må inneholde en FRT nettsted på kromosom arm av mutasjon av interesse. MARCM klar flue bestandene må inneholde et identisk FRT området som mutant kromosom for å tillate mitotisk rekombinasjon. I vår lab, utviklet vi flue aksjer som inneholder MARCM bakgrunner med FRT40A og FRT42D nettsteder. Disse aksjene vil tillate oss å screene alle voksne dødelig p-element allerede kombinert med en tilsvarende FRT nettstedet på 2L og 2R kromosomarmer, henholdsvis. Å maksimere potensialet i MARCM i skjermbildene for mutasjoner som påvirker mechanotransduction eller grooming refleks, flere flue aksjer med MARCM bakgrunn i stand til å teste gener på begge armene av tredje kromosom og X-kromosomet vil bli opprettet. Når utviklet, vil disse bestandene tillate for de fleste voksne dødelig p-element mutasjoner kombinert med en FRT nettsted for å bli testet for involvering i mechanosensation.
Tidspunktet for varme shock protokollen har blitt utviklet for å maksimere antall homozygot celle regioner på eksterne sanseorganer, og samtidig la mye av resten av flua heterozygous på locus av interesse. Mange områder av interesse kan markeres ved GFP uttrykket etter en dobbel varmesjokk, slik at flere børstehår som skal testes (figur 2). Den MARCM protokollen gir en utmerket mulighet til å skape homozygot dødelige mutasjoner i bestemte områder av interesse, men vår MARCM protokollen er avhengig av varmesjokk induksjon av rekombinase aktivitet, noe som gjør det til en tilfeldig prosess som som bust til slutt vil være etterprøvbar. Fordi hver bust utløser en bestemt etappe grooming refleks 6,7, var det viktig for oss å bekrefte at svarene i villtype MARCM kloner er sammenlignbare med de som tidligere beskrevet. Maksimere effektiviteten av en MARCM-basert skjerm krever evne til å teste en hvilken som helst av de macrochaete børstehår for en mutant respons og å sammenligne disse daten mot svarprosenten fra en tilsvarende bust i en MARCM-ready lager. Vi har bekreftet resultatene av Corfas og Dudai 7 i bust uttrykker GFP i MARCM fluer.
Evnen til lett å skille mellom normale og unormale flueatferdsmessige reaksjoner er avgjørende å finne ut hvilke mutasjoner forstyrre mechanotransduction. En mutasjon i et gen som er involvert i mechanotransduction eller et annet aspekt av stell refleksen skal hemme ben respons; en betydelig lavere svarprosent på tilsvarende bust i en MARCM-ready lager er forventet. Atferdsresponsrate mosaikk NOMPC og vill-type fluer tjene som et bevis på prinsippet om at MARCM-baserte atferds skjermen kan brukes til å skille mellom mechanosensory mutanter og normale fluer. Vi har vist at det i NOMPC mutant mosaikk kloner blir stell refleks i respons til stimulering bust nesten opphevet. Bare to fluer av de fjorten testet utstilten etappe respons. Hver av disse fluer reagerte bare en gang i løpet av testingen, noe som tyder på at en MARCM basert atferds-analysen er effektiv til å identifisere en defekt mechanosensation. En observatør kan skille mellom mechanosensitive mutant fluer og fluer uten en mutasjon eller med en mutasjon som ikke er involvert i stell respons. På grunn av den høye grad av variasjon i vill-type svar, vil skjermen identifisere sterke alleler, men vil trolig gå glipp av mer subtile endringer i atferd som følge av svakere alleler. Samlingen av mutanter som skal siktes omfatter bare homozygote dødelige lene, slik at det er sannsynlig at disse er sterke eller null-alleler og kan forventes å avskaffe protein funksjon. Imidlertid ville skjermen savne alleler som kan være dødelig i utvikling, men gir et mer subtil mechanosensory defekt når laget homozygot på en mer begrenset måte ved MARCM.
Vi valgte en alt-eller-ingen scoring system for enkelhet. Denne metoden gir en sjenerøsscorer i forhold til systemet som brukes av Corfas og Dudai 7 som tildeler en score på 0 - 4, avhengig av omfanget av bevegelse av bena. I alt-eller-ingen-systemet, er noen respons gitt full kreditt med antagelsen om at noen respons på stimulering indikerer at sensoriske systemet registrerer stimulans og signaliserte til motorsystem.
Denne skjermen kan identifisere mutasjoner som påvirker ethvert trinn i atferds krets. Ytterligere testing, for eksempel elektro (som i Kernan et al 5) eller kalsium-imaging, ville måtte bli brukt for å bestemme om mutasjonen direkte berørt mechanotransduction eller et annet aspekt av utviklingen eller funksjon av den sansemotoriske refleks bue.
Drosophila melanogaster gir en utmerket modellsystem for å studere mechanosensation. De eksterne sanseorganer dele mange strukturelle og funksjonelle likheter med hårcellene i pattedyr indre øret20. Opplysning av de molekyler som er involvert i denne prosessen i Drosophila har potensiale til å avdekke pattedyr homologer og ortologer. Screens sikte på å oppdage mutasjoner som forstyrrer mechanosensation vil bane vei for senere celle biologiske, elektrofysiologiske og biokjemiske studier for å ytterligere identifisere og karakterisere disse molekylene, utdype vår forståelse av denne prosessen i både fluer og pattedyr. En MARCM-basert skjerm for mutasjoner som påvirker mechanosensation vil bruke et veletablert genetisk teknikk sammen med en grooming respons atferdsanalyse for å avdekke nye gener involvert i mechanotransduction og sparket grooming refleks.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker takke Bloomington lager senteret, Liqun Luo, Charles Zuker, og Lily og Yuh Nung Jan for den sjenerøse deling av flue aksjer og følgende for finansiering: SOMAS-URM (til JD og SW), Bachelor Ford Fakultet Summer Fellowship (til SW), BD Corporation Summer Research Fellowship (til CL og DL), The Renee og Anthony M. Marlon, MD '63 Summer Research Fellowship (til DL) James C. '75 og Jane Colihan Summer Research Fellowship (TO) gjennom Alumni / Parent Summer Research Fund of College of the Holy Cross og Stransky Foundation Summer Research Fellowship (til TO). Spesiell takk til Institutt for biologi og dekanus kontor ved College of the Holy Cross til støtte for alt arbeidet i laboratoriet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
