Abstract
Из-за структурной и функциональной гомологии с волосковых клеток млекопитающих внутреннее ухо, нейроны, которые иннервируют дрозофилы внешних органов чувств обеспечивают отличную модель системы для изучения mechanosensation. Этот протокол описывает простой сенсорный поведение в плодовых мушек, которые могут быть использованы для идентификации мутаций, которые мешают mechanosensation. Тактильная стимуляция macrochaete щетины на грудную клетку мухи вызывает рефлекса дл ухода из первой или третьей ноге. Мутации, которые мешают механотрансдукции (таких, как NOMPC), или с другими аспектами рефлекторной дуги, могут ингибировать реакцию ухода. Традиционный экран взрослых поведения пропустил бы мутантов, существенную роль в процессе развития. Вместо этого, этот протокол сочетает в себе сенсорный экран с мозаичным анализа с репрессируемый клеток маркера (MARCM), чтобы только ограниченных областях гомозиготных мутантных клеток, которые будут созданы и отмечен выражession из зеленого флуоресцентного белка (GFP). Тестируя MARCM клонов для аномальных поведенческих реакций, можно экранировать коллекцию летальных мутаций р-элементов для поиска новых генов, вовлеченных в mechanosensation, которые были бы пропущенных более традиционными методами.
Protocol
1. Кресты для генерации MARCM Мухи
- Поддержание мух на кукурузной муки мелассы средах (6,5 г / л агара; 23,5 г / л дрожжевого, 60 г / л кукурузной муки, 60 мл / л мелассы; 4 мл / л смеси кислот; 0,13% Tegosept) или стандартного Drosophila средах при 22 градусах Цельсия в 12-ч цикла свет / темнота.
Примечание: Ниже, чем стандартная температура используется для поддержания MARCM-акции здоровым. Это расширяет с развитием время между яйцом и зрелом возрасте до 14 дней. - Использование девственных самок (примерно 1 - 8 дней) от MARCM-готов складе, содержащий необходимые генетические элементы (GFP под контролем вышестоящего активирующий последовательности (UAS-GFP), репрессор белка Gal80, фактора транскрипции Gal4, в теплового шока приводом рекомбиназа, и рекомбинация сайт FRT).
Примечание: Наша MARCM Готовые запасы содержать следующие генотипы: elavGal4, БАС-CD8-GFP, HS-flipase; FRT40A, tubGal80 / суо; tubGal4 / TM3Sb.
Примечание: Удельный FRT-сайт будет зависеть от локализации мутациив геноме. Например, FRT40A используется для проверки мутации на левом плече хромосомы 2, такие как NOMPC (см 10 для более подробной информации по протоколам MARCM). - Кросс-MARCM готов девственные самок и самцов, которые содержат мутацию интерес и соответствующий FRT-сайт (например, W-; NOMPC3, FRT40A / суо; + / +). Для управления для эффективного индукции MARCM, установить второй крест с использованием самцов мух, содержащие один и тот же сайт FRT, но без мутации. Используйте приблизительное соотношение 5: 1 самок самец в крестах.
2. Временный яйцо Прокладка
- После выдерживания мухи сцепиться в течение по крайней мере одну ночь, переместить взрослых в новые флаконы свежей средой. Разрешить мух откладывают яйца в темном помещении в течение примерно 4 часов, прежде чем снова передачи кресты в новых флаконах. Обратите внимание на время начала и окончания того периода откладки яиц.
Примечание: короткие интервалы являются приемлемыми, когда, как представляется, большое количество яиц на СМИ до конца 4-часовой intervaл.- Хранить флаконы с достаточным количеством яиц (примерно более 20) и хранить в 12-ч цикла свет / темнота в 22 градусов по Цельсию, что тепловому шоку позже.
Примечание: Бутылочки с низким количеством яиц на СМИ (менее примерно 20) вряд ли дадут достаточное количество взрослых мух для поведенческого тестирования и в интересах эффективности рекомендуется не сохраняются для дальнейшего тестирования.
Примечание: Наши мухи поднял с освещением в 8 утра до 8 вечера. Мы нашли вечернее время точки привести к более высокой плотности яиц, поэтому обычно выполнять приурочен кресты между 4 - 8 часов и 8 PM-полночь. Мухи откладывают яйца на РТ в темном шкафу, а затем возвращаются в инкубатор на следующий день так, чтобы не нарушить регулярный цикл света-темноты в инкубаторе.
- Хранить флаконы с достаточным количеством яиц (примерно более 20) и хранить в 12-ч цикла свет / темнота в 22 градусов по Цельсию, что тепловому шоку позже.
3. Выполните тепловой шок, чтобы побудить митотической рекомбинации
- Примерно 85 - 100 ч после откладки яиц, место vМОГВ в водяной бане при 37 ° С в течение 1 часа. Убедитесь, что уровень воды достигает высоты над СМИ в пузырьках, но не в полной мере погрузиться флаконов для предотвращения личинок от утопления.
- Удалить флаконы из водяной бани и позволяют восстановительный период 1 час при комнатной температуре.
- Место флаконов обратно в 37 градусов по Цельсию водяной бане в течение 1 часа.
- Удалить из флаконов на водяной бане и в магазине инкубатора на 12-часовой свет / темнота цикла при 22 градусах Цельсия до вылупления.
4. Подготовка к поведенческим тестированием
- После вылупления, обезболить мух на льду. Выберите мух генотипов, которые содержат все генетические элементы для MARCM и указать GFP выражение маркировку клонов, вероятно, будет наблюдаться на основе наблюдаемых маркеров фенотипа, используемых в материнских запасов. Обезглавьте мух иридектомия ножницами.
Примечание: Например, мы выбрали для мух без генетических маркеров суо (фигурные крылья) и Sb (солома щетины), чтобы идентифицируетFY мухи, которые содержат все элементы, необходимые генетические создать мозаичные регионы отмечены GFP.
Примечание: обезглавливание необходимо, чтобы предотвратить взрослых от того, когда стимулируются отлета. - Поместите обезглавленные мухи в закрытой влажной среде и позволяют примерно 10 - 20 ч восстановления. Только использование летит, что право сами, когда возмущенные для дальнейшего тестирования. Тест летит в течение 30 часов обезглавливания.
5. Поведенческие тестирование
- Наблюдая обезглавленные мухи под флуоресцентным микроскопом рассекает, определить гомозиготных клонов, отмеченные GFP в щетины внешних органов чувств. Запишите имя щетины и левую или правую сторону. Для устранения любого потенциального смещения, член лаборатории выполнении стимуляции щетины должна быть слепой к генотипу щетины дикого типа или мутанта.
- Вызвать холить рефлекс отклонения GFP пометкой щетины к телу летучей с жесткой волос или тонких щипцов и наблюдать ног Response. Дайте оценку от одного до мух, которые поднимают их ногу в ответ на стимуляцию щетины и ноль баллов в мух, которые не двигаются ноги.
Примечание: Предыдущие исследования 6,7 охарактеризовали ответ ноги, что, вызванную стимулирования особую щетину. Это включает в себя ногу, которая реагирует на каждой щетинки, а доля мух, которые реагируют на стимуляцию этой конкретной щетины. Мы только забил движений ноги, что мы ожидали, чтобы ответить на основе классификации Vandervorst в 6. - Провести пять испытаний расположенные 2 мин друг от друга.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Успех этого протокола в значительной степени зависит от общего выхода тестируемых мух, эффективность теплового шока, чтобы вызвать митотической рекомбинации, а также возможность получить надежное поведенческую реакцию в мух, стимулированных в 2-минутными интервалами. Учитывая, что, по оценкам, 12,5% эмбрионов содержат необходимые элементы MARCM и оценкам 16,67% от взрослых, которые eclose есть потенциал для выражения GFP, важно, чтобы получить большое количество яиц в течение приурочен лежит. Примером успешного Временный легла на интервал 4 ч, который будет использоваться в остальной части протокола показан на рисунке 1А.
При тепловой шок выполняется 85 - 100 ч после откладки яиц, выход GFP помечены внешние органы чувств является самым высоким, при этом большинство мух, имеющих один из macrochaetae упаковке. Многочисленные сферы интересов может содержать гомозиготных клетки на базах testablе щетина, когда тепловые удары выполняются в течение этого периода времени, с дорсальной центральной и пост-крыла щетины быть найдены помечены наиболее часто (Рисунок 2А). Время указывает за пределы этого результата в окне патчей выражения GFP вне регионами тела интерес или нет GFP выражения (рис. 2В)
Мухи, естественно, ответить на грядущий раздражитель, инициировав ответ побег 19. Для того чтобы предотвратить мух от побега, мы обезглавлены мух. Груминга схема ответ остается неизменным в брюшной нервной 5. Мухи не восстановиться, если обезглавили под анестезией двуокиси углерода, но восстановить в течение нескольких часов, когда обезглавленное с холодными анестезии на льду. После декапитации, мухи должны храниться в закрытом, влажной среде в течение периода восстановления, чтобы предотвратить высыхание. В то время как некоторые мухи могут пересушивают или быть не в состоянии встать (1В),только тех, кто способен встать (рис 1в) используется для тестирования. Перед тестированием, мухи проверяются на общей отзывчивости, наблюдая за движением после прикосновения к нотума. Многие мухи остаются реагировать в течение нескольких дней, но испытания должны быть завершены к 24 - 36 ч после обезглавливания. Fly гиперактивность может быть проблемой во время тестирования поведения, потому что наблюдатель может иметь трудности различения истинного стимула зависит от ответа уход, и общих движений лету. У животных с избыточным движения не вызванной тактильной стимуляции, более надежные результаты достигаются при ожидании гиперактивных мух, чтобы стать покоя.
Мы обнаружили, что 47% из мухи дикого типа отвечают по крайней мере, один раз, когда коснулся щетины в пять раз, расположенных в 2-минутными интервалами, чтобы предотвратить привыкание. Несколько групп показали, что стимуляция различных щетинок вызывает узорчатую ответ от конкретного участка 6,7 6. В наших экспериментах, контроль мухи дикого типа ответ на легкое прикосновение с 14% (спинной центральный) до 86% (Ното-плевральной) испытаний (рисунок 3). В экране MARCM основе неизвестных мутантов с, те мухи, содержащие мутацию не участвует в mechanosensation можно ожидать демонстрируют надежные поведенческую реакцию, аналогичную наблюдаемой в контрольных животных дикого типа.
Известный механочувствительных мутант, NOMPC нарушается холить ответ, как ожидалось. Мухи управления ответил на щетины стимуляции в гомозиготном клонированного после Алар щетина 37% времени (рисунок 4). В отличие от этого, животные с щетинок, которые были гомозиготными по NOMPC ответил 2% времени (рисунок 4). В то время как мухи дикого типа повторноствуют разному стимуляции различных щетиной, эти результаты предполагают, что мутация механочувствительных, такие как NOMPC, почти исключает реакцию ухода. В экране с неизвестными мутантов, несколько мутаций, участвующих в mechanosensation, которые ингибируют реакцию холить ожидается.
Рисунок 1. Собственные Условия Разведение необходимы для оптимального поведенческого тестирования. (A) достаточное количество эмбрионов необходимы следующие 2 - 4 часа откладки яиц период. Число после 4 ч своевременной рельефа эмбрионов число, вероятно, чтобы получить достаточное количество взрослых мух для тестирования поведения. (Б) В течение периода восстановления после декапитации, некоторые мухи не выживают и не могут быть использованы в дальнейших испытаний. (С) обезглавленного муха, которая была должным образом храниться во влажной среде в течение периода восстановления является проверяемым в поведенческой анализа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. MARCM Клоны в Щетина, когда тепло-потрясен от 85 - 100 грн После откладки яиц. (А) GFP выражение у взрослых мух, когда тепло в шоке 98 - 101 ч после откладки яиц. Целых 10 macrochaete щетина содержат гомозиготные мутантные внешних органов чувств и подходят для тестирования в холить ответ поведенческого анализа (Б) GFP выражение у взрослых мух, когда тепло в шоке 161 -. 164 ч после откладки яиц. Обратите внимание на отсутствие экспрессии GFP в основаниями macrochaete щетиной, не указывая никаких патчей гомозиготных клеток в тестируемой внешнего сенсорного органа.arge.jpg "целевых =" _blank "> Нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3. Частота ответ на тактильной стимуляции зависит от щетины идентичности. Общее количество ответов индивидуальной лету на стимуляцию одной щетины была разделена на число стимулов, чтобы дать процентов ответа. Проценты были усреднены для каждой щетинки (N = # мух проверенный, 22 Сообщение Алар, 21 Спинной Центральный 14, Scutellar, 7 Notopleural). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4. NOMPC Мутанты не реагируют на тактильные раздражения. Стимуляция рОст-Алар щетина вызывает отклик в дикого типа MARCM клонов. Тем не менее, стимуляция MARCM клонов на пост Алар щетинок, которые были NOMPC 3 - / - (зеленая полоса) в результате нескольких ответов (N = 23 дикого типа, и 12 NOMPC - / -). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию из этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Этот протокол использует взрослая поведения анализа для выявления мутаций, которые влияют на mechanosensation у дрозофилы. Потому что коллекция мутантов содержит летальные мутации р-элементов, которые могли бы препятствовать скринингу, как взрослых, этот протокол использует сложную техники генной впервые описал Ли и Луо (1999) и подробно, как протокол Ву и Ло, (2006), чтобы обойти взрослых летальность. MARCM вызывает митотическую рекомбинацию между гомологичными хромосомами, чтобы генерировать клоновых регионы гомозиготных клетках. Эти области обозначены GFP из-за потери белка-репрессора, ванна-GAL80, что происходит во время митотического рекомбинации. При использовании MARCM генерировать клетки, которые являются гомозиготными по конкретной генетического локуса, функции гена могут быть изучены в взрослых мух с помощью различных методов, в том числе поведенческих анализа, описанного в этой статье.
Основным фактором, ограничивающим как количество и конкретные гены, которые могут бе испытываемое присутствие FRT сайта в геноме мухи. Запасы Fly должен содержать FRT сайт о хромосомной руку мутации интересов. MARCM запасы готов летать должна содержать идентичную сайт FRT как мутанта хромосомы позволяют митотической рекомбинации. В нашей лаборатории, мы разработали лету запасы, содержащие MARCM фоны с FRT40A и FRT42D сайтов. Эти запасы позволят нам экран любой взрослый смертельную р-элемент уже в сочетании с соответствующей FRT сайта на хромосомных плечах 2L и 2R соответственно. Чтобы максимизировать потенциал MARCM в экранах для мутаций, которые влияют на механотрансдукции или холить рефлекс, дополнительные запасы летать с MARCM фоны, способных испытывать гены на обеих руках третьего хромосомы и Х-хромосома будет создана. После разработки этих запасов позволит наиболее взрослых мутации смертельным р-элементов в сочетании с FRT сайта быть проверены на участие в mechanosensation.
Время тепловой шОка протокол был разработан, чтобы максимально увеличить количество гомозиготных регионах клеток на внешних органов чувств, оставляя большую часть остальной части летучей гетерозиготных в локусе интерес. Многочисленные сферы интересов может быть отмечен GFP выражения следующей двойной теплового шока, позволяя несколько щетинок для тестирования (рисунок 2). Протокол MARCM предоставляет прекрасную возможность для создания гомозиготных летальных мутаций у конкретных регионах, представляющих интерес, но наш протокол MARCM опирается на тепловой шок индукции рекомбиназы деятельности, что делает его случайный процесс, к которому, как щетина в конечном итоге будет проверяемым. Потому что каждый из щетины вызывает специфический уход ногу рефлекс 6,7, это было важно для нас, чтобы подтвердить, что ответы в дикого типа MARCM клонов сопоставимы с ранее описанным. Максимизация эффективности экране MARCM основе требует умения, чтобы проверить любой из macrochaete щетиной для мутантного ответ и сравнить эти DATА с учетом скорости отклика от соответствующего щетины в MARCM готовые складе. Мы подтвердили результаты Corfas и Dudai 7 в щетинок, выражающих GFP в MARCM мух.
Способность легко различать нормальных и ненормальных мух поведенческих реакций имеет решающее значение для определения того, какие мутации мешают механотрансдукции. Мутация в гене, участвующих в механотрансдукции или другой аспект холить рефлекса должны ингибировать реакцию ноги; значительно ниже скорости реагирования на соответствующем щетины в MARCM готовые акции, как ожидается. Поведенческие показатели реагирования в мозаичных NOMPC и дикого типа мухи служить доказательством принципа, что MARCM основе поведенческих экран может быть использован для различия между механосенсорных мутантов и нормальных мух. Мы показали, что в NOMPC мутантных клонов мозаики, то уход рефлекс в ответ на стимуляцию щетины почти отменили. Только две мухи из четырнадцати протестированных выставленыответ нога. Каждый из этих мух ответил только один раз в течение испытаний, предполагая, что MARCM основе поведенческого анализа является эффективным при идентификации дефекта mechanosensation. Наблюдатель может различать механочувствительных мутанта мухи и мухи без мутаций или с мутацией, которая не участвует в реакции ухода. Из-за высокой степени изменчивости в ответах дикого типа, на экране будет определить сильные аллелей, но, скорее всего, пропустит более тонкие изменения в поведении из-за слабых аллелей. Коллекция мутантов будет показан только включает гомозиготных аллелей смертельные, так что вполне вероятно, что эти сильные или нулевые аллели и, скорее всего, отменить функцию белка. Тем не менее, экран будет не хватать аллели, которые могут привести к летальному исходу в разработке, но производить более тонкую механосенсорных дефект когда сделано гомозиготных в более ограниченном порядке по MARCM.
Мы выбрали систему подсчета очков все или ничего для простоты. Этот метод дает щедрыйоценка по сравнению с системой, используемой Corfas и Dudai 7, который назначает счетом 0 - 4 в зависимости от степени движения ног. В все или ничего системы, любой ответ дается полный кредит в предположении, что любой ответ на стимуляцию указывает, что сенсорная система обнаружения и сигнализации стимул к двигательной системы.
Этот экран может определить мутации, которые влияют любой шаг в поведенческой схеме. Дальнейшее испытание, например, электрофизиологических (как в Кернан и др 5) или визуализации кальция, должны быть использованы для определения, является ли мутация напрямую зависит механотрансдукции или некоторый другой аспект разработки или функции рефлекторной дуги сенсомоторного.
Дрозофилы обеспечивают отличную модель системы для изучения mechanosensation. Внешние органы чувств имеют много структурных и функциональных сходство с волосковых клеток млекопитающих внутреннее ухо20. Выяснение молекул, участвующих в этом процессе у дрозофилы имеет потенциал, чтобы выявить гомологи млекопитающих и ортологи. Экраны, направленные на выявление мутации, которые нарушают mechanosensation проложит путь для последующего клеток биологических, электрофизиологических и биохимических исследований для дальнейшей идентификации и характеристики этих молекул, углубления нашего понимания этого процесса в обоих мух и млекопитающих. Экран MARCM основе мутаций, влияющих на mechanosensation будет использовать устоявшуюся генетический метод в паре с холить ответ поведенческого анализа, чтобы выявить новые гены, участвующие в механотрансдукции и лету уход рефлекса.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют конкурирующие финансовые интересы.
Acknowledgments
Авторы хотели бы поблагодарить фондовый центр Блумингтон, Ликун Ло, Чарльз Цукер, и Лили, и йух нун янв за щедрую обмена акций лету и следующая за финансирование: Somas-УРМ (в JD и SW), бакалавр Форд факультет летней стипендий (для SW), BD корпорация Лето исследовательский грант (для CL и DL), то Рене и Энтони М. Марлона, MD '63 Летний исследовательский грант (для DL) Джеймс С. '75 и Джейн Colihan Лето исследовательский грант (К) через Выпускники / Родитель Летний исследовательский фонд колледжа Святого Креста и Странский Фонд Лето исследовательский грант (для ТО). Особая благодарность кафедре биологии и деканат в колледже Святого Креста для поддержки всей работы в лаборатории.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
