Abstract
På grund af den strukturelle og funktionelle homologi med hårcellerne i pattedyr indre øre, de neuroner, som innerverer Drosophila eksterne sanseorganerne giver en fremragende model til undersøgelse af mechanosensation. Denne protokol beskriver en enkel berøring adfærd i bananfluer, der kan anvendes til at identificere mutationer, der interfererer med mechanosensation. Den taktile stimulering af en macrochaete stritter på brystkassen af fluer fremkalder en grooming refleks fra enten den første eller tredje ben. Mutationer, der interfererer med mechanotransduction (såsom NOMPC), eller med andre aspekter af refleksbuen kan hæmme grooming respons. En traditionel skærm af voksne adfærd ville have forpasset mutanter, der har væsentlige roller under udvikling. I stedet denne protokol kombinerer touch skærm med mosaik analyse med repressibel celle markør (MARCM) at give mulighed for kun begrænsede områder af homozygote mutant celler, der skal genereres og præget af expression af grønt fluorescerende protein (GFP). Ved at teste MARCM kloner for unormale adfærdsmæssige reaktioner, er det muligt at screene en samling af dødelige p-element mutationer for at søge efter nye gener involveret i mechanosensation der ville have været savnet ved mere traditionelle metoder.
Protocol
1. Crosses at generere MARCM Fluer
- Opretholde fluer på majsmels melasse medier (6,5 g / L agar, 23,5 g / L gær 60 g / l majsmel, 60 ml / L melasse; 4 ml / L acid mix, 0,13% Tegosept) eller standard Drosophila medier ved 22 grader Celsius i en 12-timers lys / mørke-cyklus.
Bemærk: En Lavere end standard temperatur bruges til at holde MARCM-lagre sunde. Dette udvider den udviklingsmæssige tid mellem æg og voksenalderen til 14 dage. - Brug jomfruelige hunner (ca. 1 - 8 dage gamle) fra en MARCM-ready stock indeholder de nødvendige genetiske elementer (GFP under kontrol af en opstrøms aktiverende sekvens (UAS-GFP), i Gal80 repressorproteinet, Gal4 transcription faktoren, en varme-shock drevet rekombinase, og en FRT rekombinationssted).
Bemærk: Vores MARCM klar-aktier indeholder følgende genotyper: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / cyo; tubGal4 / TM3Sb.
Bemærk: Den specifikke FRT-sted vil afhænge af placeringen af mutationeni genomet. For eksempel er FRT40A anvendes til at teste mutationer på venstre arm af kromosom 2, såsom NOMPC (se 10 for flere detaljer om MARCM protokoller). - Cross MARCM-klar jomfruelige hunner til hanner, der indeholder en mutation af interesse og dens tilsvarende FRT-sted (f.eks W; NOMPC3, FRT40A / cyo; + / +). For at kontrollere for effektiv MARCM induktion, indstille en anden kryds ved hjælp af mandlige fluer, der indeholder det samme FRT site, men uden en mutation. Brug et omtrentligt forhold på 5 tæver: 1 han i kors.
2. Timed æglægning
- Efter at have ladet fluer at parre i mindst én nat, flytter voksne i nye hætteglas med friske medier. Tillad fluer at lægge æg i mørke omgivelser i ca. 4 timer, før igen overføre kors i nye hætteglas. Bemærk start og slut tidspunkter af æglægning periode.
Bemærk: Kortere intervaller er acceptable, når der synes at være et stort antal æg på mediet før udløbet af den 4-timers interval.- Hold hætteglas med et tilstrækkeligt antal æg (ca. større end 20), og opbevar det i en 12-timers lys / mørke cyklus ved 22 grader Celsius til at være varme chokeret senere.
Bemærk: Hætteglas med et lavt antal æg på medierne (mindre end ca. 20) er usandsynligt, at give et tilstrækkeligt antal af voksne fluer til adfærdsmæssige test og af hensyn til effektivitet, anbefales det at de ikke opbevares til yderligere testning.
Bemærk: Vores fluer er rejst med lysene på 8:00 til 8:00. Vi har fundet aften tid punkter føre til højere æg tætheder, derfor normalt udfører tidsindstillede krydsninger mellem 4-8 PM og 8:00-midnat. Fluerne lægge deres æg ved stuetemperatur i et mørkt skab og derefter returneres til inkubatoren den følgende dag for ikke at forstyrre den regelmæssige lys-mørke-cyklus i inkubatoren.
- Hold hætteglas med et tilstrækkeligt antal æg (ca. større end 20), og opbevar det i en 12-timers lys / mørke cyklus ved 22 grader Celsius til at være varme chokeret senere.
3. Udfør Heat Shock at fremkalde Mitotisk Rekombination
- Ca. 85-100 timer efter æglægning, sted valer i et vandbad ved 37 grader Celsius i 1 time. Sikre, at vandstanden når over højden af medierne i hætteglassene, men ikke fuldstændigt nedsænkes hætteglassene for at forhindre larverne fra at drukne.
- Fjern hætteglas fra vandbadet og tillade en 1 time opsving periode på RT.
- Place hætteglas tilbage i 37 grader Celsius vandbad i 1 time.
- Fjern hætteglas fra vandbad og opbevares i inkubator den 12-timers lys / mørke cyklus ved 22 grader Celsius indtil eclosion.
4. Forberedelse til Behavioral Testing
- Efter eclosion, bedøver fluer på is. Vælg fluer med genotyper, der indeholder alle de genetiske elementer til MARCM og angiver GFP-ekspression-mærket kloner vil sandsynligvis blive overholdt på grundlag af de observerbare fænotype markører, der anvendes i moderselskabet bestande. Halshugge fluer med iridectomy saks.
Bemærk: For eksempel har vi valgt til fluer uden de genetiske markører cyo (krøllede vinger) og Sb (stubbe stritter) til identifikationfy fluer, der vil indeholde alle de genetiske elementer, der er nødvendige for at skabe mosaik regioner markeret med GFP.
Bemærk: Decapitation er nødvendig for at forhindre voksne i at flyve væk, når stimuleret. - Placer hovedløse fluer i et lukket, fugtigt miljø og tillade ca 10 - 20 timer for inddrivelse. Brug kun fluer at rette sig selv, når urolig for yderligere undersøgelser. Test flyver inden for 30 timer af halshugning.
5. Behavioral Test
- Ved at observere halshuggede fluer under et fluorescens dissektionsmikroskop, identificere homozygote kloner markeret med GFP ved børstehårsgrupper eksterne sanseorganer. Optag børsternes navn og venstre eller højre side. For at eliminere enhver risiko for bias, bør laboratoriet medlem udfører børstehårsfladen stimulation være blind for genotypen af børster, vildtype eller mutant.
- Fremkalde en grooming refleks ved at afbøje GFP markeret stritter mod fluen krop med en stiv hår eller fine pincet og observere benet respons. Giv en score på en til fluer der løfter deres ben i respons på børster stimulering og en score på nul til fluer, der ikke bevæger sig deres ben.
Bemærk: Forrige studier 6,7 har karakteriseret benet respons, der fremkaldes ved at stimulere en bestemt stritter. Dette omfatter benet, der reagerer på hvert børstehår og andelen af fluer, der reagerer på stimulering af denne særlige børstehår. Vi har kun scorede for bevægelser af benet, som vi forventes at reagere baseret på Vandervorst klassifikation 6. - Foretage fem forsøg afstand 2 min fra hinanden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Succesen af denne protokol høj grad afhænger af det samlede udbytte af fluer afprøves, at effektiviteten af varmechok inducerer mitotisk rekombination og evnen til at opnå en solid adfærdsmæssig reaktion i fluer stimuleret ved 2 minutters intervaller. Eftersom en anslået 12,5% af embryoner indeholder de nødvendige MARCM elementer og en anslået 16,67% af voksne, der Eclose har potentiale for GFP-ekspression, er det afgørende at opnå et stort antal æg i tidsindstillet indeholder. Et eksempel på en succesfuld tidsindstillet lå over en 4 timers interval, vil blive anvendt i resten af protokollen er vist i figur 1A.
Når varmechok udføres 85 - 100 timer efter æglægning, er højest udbyttet af GFP mærkede eksterne sanseorganer, med de fleste fluer har en af macrochaetae mærket. En lang række områder af interesse kan indeholde homozygote celler ved grundlaget for testable børster, når varme stød udføres inden for denne periode, med den dorsale centrale og post-alar børster bliver fundet mærket hyppigst (figur 2A). Tidspunkter uden for dette vindue resultat i pletter af GFP-ekspression uden for kroppen regioner af interesse eller ingen GFP-ekspression (figur 2B).
Fluer naturligvis reagere på en truende stimulus ved at indlede en flugt reaktion 19. For at forhindre fluer i at undslippe, vi halshugget fluer. Den grooming respons kredsløb forbliver intakt i den ventrale nerve ledning 5. Fluer ikke komme sig godt, hvis halshugget under kuldioxid anæstesi, men komme i et par timer, når halshugget med kolde anæstesi på is. Efter halshugning, bør fluer opbevares i et lukket, fugtigt miljø i løbet af tilbagebetalingsperioden for at forhindre udtørring. Mens nogle fluer kan udtørre eller være ude af stand til at stå (figur 1B),kun dem i stand til at stå (figur 1C) anvendes til testning. Før testning, er fluer kontrolleret for generel lydhørhed ved at se bevægelse efter en touch til notum. Mange fluer forbliver lydhør i flere dage, men testning skal være afsluttet inden 24-36 timer efter halshugning. Fly hyperaktivitet kan være et problem under adfærdsmæssig test, fordi en observatør kan have svært ved at skelne mellem en ægte stimulus-afhængig grooming respons og generelle bevægelser af fluen. Hos dyr med overskydende bevægelse ikke fremkaldt af taktil stimulation, er mere pålidelige resultater opnås ved at vente på hyperaktive fluer bliver hvilende.
Vi fandt, at 47% af vildtype-fluer svare mindst én gang ved berøring på en børstehåret fem gange anbringes med 2 minutters intervaller for at forhindre tilvænning. Flere grupper har vist, at stimulering af forskellige børstehår fremkalder et mønstret svar fra en bestemt ben 6,7 6. I vores eksperimenter, vildtypekontrollen fluer reageret på en let berøring fra 14% (dorsale central) til 86% (Noto-pleural) forsøg (figur 3). I et MARCM-baserede skærm med ukendte mutanter, kan disse fluer, der indeholder en mutation ikke er involveret i mechanosensation forventes at udvise en pålidelig adfærdsmæssig respons svarende til den observeret hos dyr vildtype kontrol.
Den kendte mekanosensitiv mutant, NOMPC forstyrrede grooming svar som forventet. Kontrol fluer svarede på stritter stimulationer på homozygot klonet post-alar børstehår 37% af tiden (figur 4). I modsætning hertil dyr med børster, der var homozygote for NOMPC svarede 2% af tiden (figur 4). Mens vildtype fluer respond forskelligt på stimulering af forskellige børster, tyder disse resultater på, at en mutation mekanosensitive, såsom NOMPC, næsten eliminerer grooming respons. I en skærm med ukendte mutanter, er flere mutationer involveret i mechanosensation der inhiberer grooming respons forventet.
Figur 1. Korrekte opdrætsforhold er nødvendige for optimal Behavioral Testing. (A) et tilstrækkeligt antal embryoner er brug efter 2 - 4 timer æglægning periode. Antallet af embryoner efter en 4 timers timet lay sandsynligvis give et tilstrækkeligt antal voksne fluer for adfærdsmæssig testning. (B) i restitutionsperioden efter halshugning, nogle fluer ikke overleve og kan ikke anvendes i yderligere forsøg. (C) En halshugget flue, der var korrekt opbevaret i et fugtigt miljø i restitutionsperioden er testes i en adfærdsmæssig analyse. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. MARCM Kloner i Børster når Heat-chokeret mellem 85-100 timer efter æglægning. (A) GFP-ekspression i voksne fluer, når varmen chokeret 98-101 timer efter æglægning. Så mange som 10 macrochaete børster indeholder homozygote mutant eksterne sanseorganer og er egnede til testning i grooming reaktion adfærdsmæssige assay (B) GFP-ekspression i voksne fluer, når varmen chokeret 161 -. 164 timer efter æglægning. Bemærk manglen på GFP-ekspression ved grundlaget for de macrochaete børster, hvilket indikerer ingen pletter af homozygote celler ved en testes eksterne sanseorgan.arge.jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Frekvens af responsen på berøringsstimulering er afhængig af Bristle Identitet. Det samlede antal svar fra en individuel flyver til stimulering af en enkelt børstebærende blev divideret med antallet af stimuli til at give en procent respons. Procenter blev midlet for hver stritter (N = # af fluer testet, 22 post Alar, 21 Dorsal Central 14, skjoldepitellaget, 7 Notopleural). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4. NOMPC Mutanter reagerer ikke på Taktile Stimulation. Stimulering af pOst-Alar børster fremkalder en reaktion i vildtype MARCM kloner. Men stimulering af MARCM kloner på de post Alar børster, der var NOMPC 3 - / - (grøn bar) resulterede i nogle få besvarelser (N = 23 vildtype og 12 NOMPC - / -). Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokol udnytter en voksen adfærdsmæssige assay til screening for mutationer, der påvirker mechanosensation i Drosophila. Fordi samling af mutanter indeholder dødelige p-element mutationer, som ville udelukke screening som voksne, denne protokol gør brug af en kompleks genetisk teknik først blev beskrevet af Lee og Luo , (1999) og detaljeret som en protokol af Wu og Luo, (2006) til at omgå voksne dødelighed. MARCM inducerer mitotisk rekombination mellem homologe kromosomer til at generere klonale regioner homozygote celler. Disse regioner er markeret med GFP grund af tabet af repressorproteinet, badekar-GAL80, der opstår under mitotisk rekombination. Ved at bruge MARCM at generere celler, som er homozygote på et bestemt genetisk locus, kan genfunktion studeres i voksne fluer ved hjælp af en række fremgangsmåder, herunder adfærdsmæssige assay beskrevet i dette dokument.
Den primære faktor, der begrænser både antallet og de specifikke gener, der kan btestet e er tilstedeværelsen af en FRT-sted i genomet af fluen. Fly lagre skal indeholde en FRT site på kromosomale arm af mutationen af interesse. MARCM klar flyve lagre skal indeholde en identisk FRT sted som den mutant kromosom at give mulighed for mitotisk rekombination. I vores laboratorium, udviklede vi flyve lagre indeholder MARCM baggrunde med FRT40A og FRT42D websteder. Disse lagre vil give os mulighed for at screene enhver voksen dødbringende p-element der allerede kombineret med en tilsvarende FRT websted på 2L og 2R kromosom arme, hhv. For at maksimere potentialet i MARCM i skærme for mutationer, der påvirker mechanotransduction eller grooming refleks, yderligere flyve lagre med MARCM baggrunde i stand til at teste gener på begge arme af tredje kromosom og vil blive oprettet X-kromosomet. Når udviklet, vil disse bestande muliggøre fleste voksne dødelige p-element mutationer kombineret med en FRT-sted, der skal testes for involvering i mechanosensation.
Timingen af varmen shock protokol er blevet udviklet for at maksimere antallet af homozygote celleområder ved de ydre sanseorganer, mens meget af resten af fluen heterozygote på locus af interesse. En lang række områder af interesse kan være præget af GFP-ekspression efter en dobbelt varmechok, der giver mulighed for flere børster, der skal testes (figur 2). Den MARCM protokol giver en glimrende mulighed for at skabe homozygot dødelige mutationer i specifikke områder af interesse, men vores MARCM protokol er afhængig af varme chok induktion af rekombinase aktivitet, hvilket gør det en tilfældig proces, hvilke børster i sidste ende vil være testbare. Fordi hver stritter fremkalder et specifikt ben grooming refleks 6,7, var det vigtigt for os at bekræfte, at svarene i vildtype-MARCM kloner er sammenlignelige med dem, der tidligere er beskrevet. Maksimere effektiviteten af en MARCM-baseret screening kræver evnen til at teste en hvilken som helst af de macrochaete børster for en mutant respons og sammenligne disse daten mod svarprocenten fra en tilsvarende stritter i en MARCM-klar lager. Vi har bekræftet resultaterne af Corfas og Dudai 7 i børster udtrykker GFP i MARCM fluer.
Evnen til at skelne mellem let normale og unormale flyve adfærdsmæssige reaktioner er afgørende at bestemme, hvilke mutationer forstyrre mechanotransduction. En mutation i et gen involveret i mechanotransduction eller det andet aspekt af grooming refleks bør hæmme benet reaktion; Der forventes et væsentligt lavere responsrate på den tilsvarende stritter i en MARCM-klar lager. De adfærdsmæssige responsrater i mosaik NOMPC og vildtype fluer tjene som bevis på princippet om, at MARCM-baserede adfærdsmæssige skærm kan bruges til at skelne mellem mechanosensory mutanter og normale fluer. Vi har vist, at i NOMPC mutante mosaik kloner, er grooming refleks som reaktion på stimulation børster næsten afskaffet. Kun to fluer af de fjorten testede udvisteet ben respons. Hver af disse fluer reagerede kun én gang i løbet af test, hvilket tyder på, at en MARCM-baserede adfærdsmæssige assay er effektiv til at identificere en mechanosensation defekt. En observatør kan skelne mellem mekanosensitiv mutant fluer og flyver uden en mutation eller med en mutation, der ikke er involveret i grooming svar. På grund af den høje grad af variabilitet i vildtype reaktioner, vil skærmen identificere stærke alleler, men vil sandsynligvis gå glip af mere subtile ændringer i adfærd som følge af svagere alleler. Indsamlingen af mutanter, der skal screenes kun omfatter homozygote dødelige alleler, så det er sandsynligt, at disse er stærke eller null alleler og vil sandsynligvis afskaffe proteinfunktion. Imidlertid vil skærmen brænde alleler, der kan være dødelig i udvikling, men giver en mere subtil mechanosensory defekt, når gjort homozygot i et mere begrænset måde ved MARCM.
Vi valgte en alt-eller-ingen Pointsystemet for enkelhed. Denne metode giver en generøsscore i forhold til det system, der anvendes af Corfas og Dudai 7, som tildeler en score på 0 - 4 afhængigt af omfanget af bevægelsen ben. I alt-eller-intet-system, er et svar gives fuld kredit med den antagelse, at enhver reaktion på stimulation indikerer at sensoriske systemet registrerer stimulus og signaler til motoren systemet.
Denne skærm kan identificere mutationer, der påvirker en skridt i den adfærdsmæssige kredsløb. Yderligere testning, såsom elektrofysiologi (som i Kernan et al 5) eller calcium imaging, skulle anvendes til at bestemme, om mutationen direkte berørt mechanotransduction eller en anden aspekt af udvikling eller funktion af sensomotoriske refleksbuen.
Drosophila melanogaster giver en fremragende model for studiet af mechanosensation. De eksterne sanseorganer deler mange strukturelle og funktionelle ligheder med hårceller i pattedyr indre øre20.. Belysning af de involverede i denne proces i Drosophila molekyler har potentialet til at afsløre pattedyr homologer og ortologer. Skærme der tager sigte på at opdage mutationer, der forstyrrer mechanosensation vil bane vejen for efterfølgende celle biologiske, elektrofysiologiske og biokemiske undersøgelser for yderligere at identificere og karakterisere disse molekyler, uddybe vores forståelse af denne proces i både fluer og pattedyr. En MARCM-baseret skærm for mutationer påvirker mechanosensation vil bruge en veletableret genetiske teknik parret med en grooming reaktion adfærdsmæssige analyse til at afsløre nye gener involveret i mechanotransduction og fluen grooming refleks.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne takke Bloomington bestanden center, Liqun Luo, Charles Zuker, og Lily og Yuh Nung Jan for den generøse deling af flyve lagre og følgende om støtte: SOMA-URM (til JD og SW), Bachelor Ford Fakultet Summer Fellowship (til SW), BD Corporation Summer Research Fellowship (til CL og DL), The Renee og Anthony M. Marlon, MD '63 Summer Research Fellowship (til DL) James C. '75 og Jane Colihan Summer Research Fellowship (TO) gennem de Alumni / Parent Summer Research Fund af kollegiet af det hellige Kors og Stransky Foundation Summer Research Fellowship (til TO). Særlig tak til Biologisk Institut og dekanatet på College of Hellig Kors til støtte for alt det arbejde i laboratoriet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G.
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M.
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P.
