Abstract
Debido a la homología estructural y funcional de las células pilosas del oído interno de los mamíferos, las neuronas que inervan los órganos de los sentidos externos de Drosophila proporcionan un excelente sistema modelo para el estudio de mechanosensation. Este protocolo describe un comportamiento simple toque en moscas de la fruta que se pueden usar para identificar mutaciones que interfieren con mechanosensation. La estimulación táctil de un macrochaete de cerdas en el tórax de la mosca provoca un reflejo de aseo de la primera o tercera pierna. Las mutaciones que interfieren con mechanotransduction (tales como NOMPC), o con otros aspectos del arco reflejo, pueden inhibir la respuesta preparación. Una pantalla tradicional de conductas adultas habría perdido mutantes que tienen un papel esencial durante el desarrollo. En lugar de ello, este protocolo combina la pantalla táctil con el análisis de mosaico con un marcador de células reprimible (MARCM) para permitir sólo las regiones limitadas de células mutantes homocigotos para ser generado y marcado por la exprESIÓN de la proteína fluorescente verde (GFP). Al probar clones MARCM para las respuestas de comportamiento anormales, es posible para escrutar una colección de mutaciones letales p de elementos para buscar nuevos genes implicados en mechanosensation que habrían sido perdidas por métodos más tradicionales.
Protocol
1. Los cruces de generar moscas MARCM
- Mantener moscas en medios de harina de maíz melaza (6,5 g / L de agar; 23.5 g / L de levadura; 60 g / L de harina de maíz, 60 ml de melaza / l; 4 ml / mezcla de ácido L; 0,13% Tegosept) o medios de comunicación estándar de Drosophila a 22 grados Celsius en una luz de 12 h / oscuridad ciclo.
Nota: A Inferior a temperatura estándar se utiliza para mantener MARCM stocks saludable. Esto amplía el tiempo de desarrollo entre el huevo y la edad adulta a 14 días. - Utilice hembras vírgenes (aproximadamente 1 - 8 días de edad) de una población-MARCM listo que contiene los elementos genéticos necesarios (GFP bajo el control de una secuencia de activación aguas arriba (UAS-GFP), la proteína represora GAL80, el factor de transcripción Gal4, una choque térmico recombinasa impulsada, y un sitio de recombinación FRT).
Nota: Nuestro MARCM listos stocks contienen los siguientes genotipos: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / CyO; tubGal4 / TM3Sb.
Nota: El sitio FRT específico dependerá de la localización de la mutaciónen el genoma. Por ejemplo, FRT40A se utiliza para probar las mutaciones en el brazo izquierdo del cromosoma 2, como NOMPC (ver 10 para obtener más detalles sobre los protocolos MARCM). - Cross-MARCM listo hembras vírgenes a los varones que contienen una mutación de interés y su sitio FRT correspondiente (por ejemplo, en peso; NOMPC3, FRT40A / CYO; + / +). Para controlar para la inducción MARCM eficaz, establecer una segunda cruz usando las moscas macho que contienen el mismo sitio de FRT, pero sin una mutación. Utilice una relación aproximada de 5 hembras: 1 masculina en cruces.
2. Programado Huevo Acostado
- Después de permitir que las moscas para aparearse durante al menos una noche, mover adultos en nuevos viales con medio fresco. Permitir a las moscas a poner huevos en un ambiente oscuro durante aproximadamente 4 horas antes de transferir nuevamente las cruces en nuevos viales. Tenga en cuenta los tiempos de inicio y fin del período de puesta de huevos.
Nota: Los intervalos más cortos son aceptables cuando parece que hay un alto número de huevos en los medios de comunicación antes de la final de la InterVA 4-hrl.- Mantenga los frascos con un número suficiente de huevos (aproximadamente es mayor de 20) y almacenar en una luz de 12 h / oscuridad ciclo a 22 grados Celsius a ser calor conmocionado después.
Nota: Frascos con un bajo número de huevos en los medios de comunicación (menos de aproximadamente el 20) es poco probable que producir un número suficiente de moscas adultas para las pruebas de comportamiento, y en aras de la eficiencia, se recomienda que no se conservarán para su análisis posterior.
Nota: Nuestros moscas se crían con las luces encendidas 08 a.m.-8 p.m.. Hemos encontrado el tiempo de la tarde puntos conducen a densidades más altas de huevo, por lo tanto, por lo general realizar cruces cronometrados entre 4-8 pm y 20:00 medianoche. Las moscas ponen sus huevos a temperatura ambiente en un armario oscuro y luego se devuelven a la incubadora al día siguiente con el fin de no perturbar el ciclo luz-oscuridad regular en la incubadora.
- Mantenga los frascos con un número suficiente de huevos (aproximadamente es mayor de 20) y almacenar en una luz de 12 h / oscuridad ciclo a 22 grados Celsius a ser calor conmocionado después.
3. Realice choque térmico para inducir recombinación mitótica
- Aproximadamente 85 a 100 horas después de la puesta de huevos, lugar vmate- en un baño de agua a 37 grados centígrados durante 1 hora. Asegúrese de que el nivel del agua alcanza por encima de la altura de los medios de comunicación en los viales, pero no anula completamente los viales para evitar que las larvas de ahogarse.
- Retirar los viales del baño de agua y permitir un período de recuperación de 1 hora a temperatura ambiente.
- Coloque los viales de nuevo en 37 grados centígrados baño de agua durante 1 hora.
- Retire los viales de baño de agua y almacenar en la incubadora de 12 horas de luz / oscuridad ciclo a los 22 grados Celsius, hasta la eclosión.
4. Preparación para las pruebas de comportamiento
- Tras la eclosión, anestesiar las moscas en el hielo. Seleccione moscas con genotipos que contienen todos los elementos genéticos para MARCM e indican probablemente se observaron clones de expresión marcadas GFP a partir de los marcadores fenotípicos observables utilizados en las existencias de los padres. Decapitar a las moscas con iridectomía tijeras.
Nota: Por ejemplo, hemos seleccionado para las moscas sin los marcadores genéticos CyO (alas rizadas) y Sb (cerda rastrojo) para identimoscas fy que contener todos los elementos genéticos necesarios para crear regiones de mosaico marcadas con GFP.
Nota: La decapitación es necesario para prevenir los adultos a partir de volar lejos cuando son estimuladas. - Coloque moscas sin cabeza en un ambiente cerrado, húmedo y permitir que aproximadamente el 10 - 20 h de recuperación. Sólo uso vuela sí mismos ese derecho cuando perturbado para su análisis posterior. Prueba vuela dentro de 30 horas de la decapitación.
5. Pruebas de Comportamiento
- Mediante la observación de las moscas decapitados bajo un microscopio de fluorescencia de disección, identificar clones homocigotos marcados con GFP en los órganos sensoriales externas de cerdas. Registre el nombre de cerdas y el lado izquierdo o derecho. Para eliminar cualquier sesgo potencial, el miembro del laboratorio que realiza la estimulación de cerdas debe ser ciego al genotipo de la cerda, de tipo salvaje o mutante.
- Provocar un reflejo de aseo desviando la GFP marcado cerdas hacia el cuerpo de la mosca con un pelo tieso o unas pinzas finas y observar la pierna rerespuesta. Dar una puntuación de uno a moscas que levantan la pierna en respuesta a la estimulación de cerdas y una puntuación de cero a las moscas que no se mueven sus piernas.
Nota: Previo estudios 6,7 han caracterizado la respuesta de la pierna que está provocada por la estimulación de una cerda en particular. Esto incluye la pierna que responde a cada cerda y la proporción de moscas que responden a la estimulación de ese cerdas particular. Sólo nos marcamos para los movimientos de la pierna que esperábamos para responder en base a la clasificación de Vandervorst 6. - Llevar a cabo cinco ensayos espaciados 2 minutos de diferencia.
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Representative Results
El éxito de este protocolo depende en gran medida del rendimiento total de moscas comprobables, la eficacia del choque térmico para inducir recombinación mitótica, y la capacidad de obtener una respuesta de comportamiento robusto en moscas estimuladas a intervalos de 2 min. Dado que aproximadamente el 12,5% de los embriones contiene los elementos necesarios MARCM y un estimado de 16,67% de los adultos que Eclose tener el potencial para la expresión de GFP, es crítica para obtener un alto número de huevos durante establece cronometrado. Un ejemplo de un éxito temporizada se extendía sobre un intervalo de 4 hr que se utilizaría en el resto del protocolo se muestra en la Figura 1A.
Cuando el choque térmico se lleva a cabo 85 - 100 h después de la puesta de huevos, el rendimiento de GFP marcada órganos de los sentidos externos es más alta, con la mayoría de las moscas que tiene uno de los macrochaetae etiquetado. Numerosas zonas de interés pueden contener células homocigóticas en las bases de testable eriza cuando se realizan los choques de calor dentro de este período de tiempo, con el dorsal de cerdas central y post-alar ser encontrado etiquetada con mayor frecuencia (Figura 2). Puntos de tiempo fuera de este resultado ventana en parches de la expresión de GFP fuera de las regiones del cuerpo de interés o ninguna expresión de GFP (Figura 2B).
Las moscas responder de forma natural a un estímulo amenazante, iniciando una respuesta de escape 19. Con el fin de evitar que las moscas escapen, nos decapitado moscas. El circuito de respuesta aseo permanece intacta en el cordón nervioso ventral 5. Las moscas no se recuperan bien si decapitado bajo anestesia dióxido de carbono, pero se recuperan en pocas horas cuando decapitado con anestesia frías en hielo. Después de la decapitación, moscas deben ser almacenados en un lugar cerrado, ambiente húmedo durante el período de recuperación para evitar la desecación. Mientras que algunas moscas se desecan o ser incapaz de soportar (Figura 1B),sólo aquellos capaces de soportar (Figura 1C) se usan para la prueba. Antes de la prueba, las moscas se comprueba la capacidad de respuesta general, observando el movimiento después de un toque a la notum. Muchas moscas permanecen sensibles durante varios días, pero las pruebas se terminen en 24 - 36 horas después de la decapitación. Volar hiperactividad puede ser un problema durante las pruebas de comportamiento, ya que un observador puede tener dificultades para distinguir entre una verdadera respuesta aseo estímulo-dependiente y movimientos generales de la marcha. En los animales con exceso de movimiento no provocada por la estimulación táctil, resultados más fiables se consiguen por la espera de moscas hiperactivos para convertirse en reposo.
Encontramos que el 47% de los de tipo salvaje moscas responder al menos una vez cuando se toca en una cerda cinco veces, espaciadas a intervalos de 2 min para evitar la habituación. Varios grupos han demostrado que la estimulación de diferentes cerdas provoca una respuesta modelada de una pierna específica 6,7 6. En nuestros experimentos, las moscas de control de tipo salvaje respondieron a un toque ligero del 14% (dorsal central) al 86% (noto pleural) de los ensayos (Figura 3). En una pantalla basada en MARCM con mutantes desconocidos, esas moscas que contienen una mutación que no participan en mechanosensation se puede esperar que exhiben una respuesta de comportamiento fiable similar a la observada en los animales de control de tipo salvaje.
El mutante mechanosensitive conocido, NOMPC interrumpió la respuesta de aseo como se esperaba. Moscas de control respondieron a cerdas estimulaciones en homocigotos clonado post-alar cerdas 37% del tiempo (Figura 4). En contraste, los animales con cerdas que eran homocigotos para NOMPC respondieron 2% del tiempo (Figura 4). Mientras que los de tipo salvaje moscas reresponden de manera diferente a la estimulación de diferentes cerdas, estos resultados sugieren que una mutación mechanosensitive, tales como NOMPC, casi elimina la respuesta de aseo. En una pantalla con mutantes desconocidos, se espera que varias mutaciones implicadas en mechanosensation que inhiben la respuesta de aseo.
Figura 1. Condiciones apropiadas Crianza son necesarios para la óptima pruebas de comportamiento. (A) Un número suficiente de embriones se necesitan siguiendo el 2 - período de puesta de 4 horas de huevo. El número de embriones después de un período temporizado 4 hr es probable para producir un número suficiente de moscas adultas para las pruebas de comportamiento. (B) Durante el período de recuperación después de la decapitación, algunas moscas no sobreviven y no pueden ser utilizados en la prueba adicional. (C) Una mosca decapitado que fue almacenado correctamente en un entorno húmedo durante el período de recuperación es comprobable en un ensayo de comportamiento. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2. MARCM Clones en cerdas cuando-Heat shock entre 85 a 100 horas después de la puesta de huevos. (A) la expresión de GFP en moscas adultas cuando el calor conmocionado 98-101 horas después de la puesta de huevos. Nada menos que 10 cerdas macrochaete contienen órganos sensoriales externos mutantes homocigotos y son apropiadas para realizar pruebas en la respuesta del ensayo de comportamiento de aseo (B) expresión de GFP en moscas adultas cuando el calor conmocionado 161 -. 164 horas después de la puesta de huevos. Tenga en cuenta la falta de expresión de GFP en las bases de las cerdas macrochaete, indicando no hay parches de células homocigotos en un órgano sensorial externa comprobable.arge.jpg "target =" _ blank "> Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3. La frecuencia de respuesta a la estimulación táctil depende de la cerda de identidad. El número total de respuestas de una mosca individual a la estimulación de una sola cerda se dividió por el número de estímulos para dar una respuesta por ciento. Los porcentajes se promediaron para cada cerda (N = # de moscas probado, 22 Publicar Alar, 21 Dorsal central 14, escutelar, 7 Notopleural). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4. Los mutantes nompC no responden a la estimulación táctil. La estimulación de la pcerdas-ost alar provoca una respuesta en los clones MARCM de tipo salvaje. Sin embargo, la estimulación de clones MARCM sobre las cerdas después alares que eran NOMPC 3 - / - (barra verde) dio lugar a pocas respuestas (N = 23 de tipo salvaje, y 12 NOMPC - / -). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta cifra.
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Discussion
Este protocolo utiliza un ensayo de comportamiento adulto para la detección de mutaciones que afectan mechanosensation en Drosophila. Debido a que la colección de mutantes contiene letales mutaciones p-elemento que impida la detección como adultos, este protocolo hace uso de una técnica genética compleja primero descrito por Lee y Luo , (1999) y detallada como un protocolo por Wu y Luo, (2006) para eludir la letalidad adulto. MARCM induce la recombinación mitótica entre cromosomas homólogos para generar regiones clonales de células homocigóticas. Estas regiones están marcados con GFP debido a la pérdida de la proteína represora, bañera-GAL80 que se produce durante la recombinación mitótica. Mediante el uso de MARCM para generar células que son homocigotos en un locus genético particular, la función del gen puede ser estudiado en moscas adultas usando una variedad de métodos, incluyendo el ensayo de comportamiento se describe en este documento.
El principal factor que limita el número y los genes específicos que pueden Be probado es la presencia de un sitio de FRT en el genoma de la mosca. Poblaciones de moscas deben contener un sitio de FRT en el brazo cromosómico de la mutación de interés. MARCM reservas de listas de moscas deben contener un sitio de FRT idénticos como el cromosoma mutante para permitir la recombinación mitótica. En nuestro laboratorio, hemos desarrollado las poblaciones de moscas que contienen fondos MARCM con sitios FRT40A y FRT42D. Estas acciones permitirán a la pantalla de cualquier letal p-elemento de adultos ya combinada con un sitio FRT correspondiente en los brazos cromosómicos 2L y 2R, respectivamente. Para maximizar el potencial de MARCM en pantallas de mutaciones que afectan mecanotransducción o el reflejo de la preparación, las poblaciones de mosca adicionales con fondos MARCM capaces de poner a prueba los genes en ambos brazos del tercer cromosoma y el cromosoma X se creará. Una vez desarrollado, estas acciones permitirán que para la mayoría de adultos mutaciones letales p de elementos combinados con un sitio FRT a ensayar para la participación en mechanosensation.
El momento de la sh calorock protocolo ha sido desarrollado para maximizar el número de regiones de células homocigotos en los órganos sensoriales externas, dejando gran parte del resto de la mosca heterocigotos en el locus de interés. Numerosas áreas de interés pueden ser marcados por la expresión de GFP tras un choque térmico doble, lo que permite múltiples cerdas a ensayar (Figura 2). El protocolo MARCM ofrece una excelente oportunidad para crear mutaciones homocigóticos letales en regiones específicas de interés, pero nuestro protocolo MARCM se basa en la inducción de choque térmico de la actividad recombinasa, por lo que es un proceso aleatorio en cuanto a que las cerdas en última instancia, ser comprobable. Debido a que cada cerda provoca un aseo específico pierna reflejo 6,7, que era importante para nosotros para confirmar que las respuestas de los clones MARCM de tipo salvaje son comparables a los descritos anteriormente. Maximizar la eficiencia de una pantalla basada en MARCM requiere la capacidad de probar cualquiera de las cerdas macrochaete una respuesta mutante y compararlos datuna en contra de la tasa de respuesta de una cerda correspondiente en una acción-MARCM listo. Hemos confirmado los resultados de Corfas y Dudai 7 en cerdas que expresan GFP en las moscas MARCM.
La capacidad de distinguir fácilmente entre las respuestas de comportamiento de moscas normales y anormales es crítico para determinar qué mutaciones interfiere con mechanotransduction. Una mutación en un gen implicado en mechanotransduction u otro aspecto del reflejo de la preparación debería inhibir la respuesta de la pierna; Se espera una tasa de respuesta significativamente menor a la cerda correspondiente en una acción-MARCM listo. Las tasas de respuesta de comportamiento en nompC y de tipo salvaje moscas mosaico sirven como una prueba del principio de que la pantalla de comportamiento basados en MARCM se puede utilizar para diferenciar entre los mutantes mechanosensory y moscas normales. Hemos demostrado que en nompC clones mutantes de mosaico, el reflejo de la preparación en respuesta a la estimulación de cerdas está casi abolió. Sólo dos moscas de los catorce probados exhibieronuna respuesta pierna. Cada una de estas moscas respondieron sólo una vez en el transcurso de la prueba, lo que sugiere que un ensayo conductual basada en MARCM es eficaz en la identificación de un defecto mechanosensation. Un observador puede distinguir entre mutante mechanosensitive adorna y vuela sin una mutación o con una mutación que no está involucrado en la respuesta de aseo. Debido al alto grado de variabilidad en las respuestas de tipo salvaje, la pantalla identificará alelos fuertes, pero probablemente se perderá los cambios más sutiles en el comportamiento debido a los alelos más débiles. La colección de mutantes que se proyectarán incluye alelos letales solamente homocigotos, lo que es probable que estos son alelos nulos o fuertes y es probable que abolir la función de la proteína. Sin embargo, la pantalla se perdería alelos que pueden ser letales en el desarrollo, pero producen un defecto mecanosensorial más sutil cuando se hace homocigota de una manera más limitada por MARCM.
Elegimos un sistema de puntuación de todo o nada por la simplicidad. Este método produce un generosoanotar en comparación con el sistema utilizado por Corfas y Dudai 7 que asigna una puntuación de 0 - 4 dependiendo de la magnitud del movimiento de la pierna. En el sistema de todo o nada, ninguna respuesta se de completa con la suposición de que cualquier respuesta a la estimulación indica que el sistema sensorial está detectando el estímulo y la señalización para el sistema motor.
Esta pantalla puede identificar mutaciones que afectan a cualquier paso en el circuito de comportamiento. La prueba adicional, tal como electrofisiología (como en Kernan et al 5) o formación de imágenes de calcio, tendría que ser utilizado para determinar si la mutación afecta directamente mechanotransduction o algún otro aspecto del desarrollo o la función del arco reflejo sensorial-motor.
Drosophila melanogaster proporcionar un excelente sistema modelo para el estudio de mechanosensation. Los órganos de los sentidos externos comparten muchas similitudes estructurales y funcionales de las células ciliadas del oído interno de los mamíferos20. La elucidación de las moléculas implicadas en este proceso en Drosophila tiene el potencial para revelar homólogos y ortólogos de mamíferos. Pantallas encaminadas a descubrir las mutaciones que alteran mechanosensation allanará el camino para la célula posterior biológica, electrofisiológicos y estudios bioquímicos para identificar aún más y caracterizar estas moléculas, profundizar nuestra comprensión de este proceso en las dos moscas y los mamíferos. Una pantalla con sede en MARCM de mutaciones que afectan mechanosensation utilizará una técnica genética bien establecida se combina con una respuesta del ensayo de comportamiento de aseo para revelar nuevos genes implicados en mecanotransducción y el reflejo de la mosca de aseo.
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Disclosures
Los autores no tienen intereses financieros en competencia.
Acknowledgments
Los autores desean agradecer al Centro Bloomington de valores, Liqun Luo, Charles Zuker, y Lily y Yuh Nung Jan como la generosa distribución de las poblaciones de la mosca y la siguiente para su financiación: SOMAS-URM (JD y SW), Licenciado Ford Facultad Summer Fellowship (SW), BD Corporación Summer Research Fellowship (a CL y DL), El Renee y Anthony M. Marlon, MD '63 Summer Research Fellowship (DL) James C. '75 y Jane Colihan verano Becas de Investigación (A) a través de los Antiguos Alumnos / Padres Fondo de Investigación de Verano de la Universidad de la Santa Cruz y la Fundación de Investigación de Verano Stransky Fellowship (TO). Un agradecimiento especial al Departamento de Biología y la Oficina del Decano de Colegio de la Santa Cruz por el apoyo de todo el trabajo en el laboratorio.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
