This protocol describes a high throughput assay for testing egg-laying preferences of Drosophila melanogaster at single-animal resolution. This assay provides a simple, efficient, and scalable platform to identify genes and circuit components that control a simple decision-making process.
हाल ही में, ड्रोसोफिला के अंडे बिछाने वरीयता सरल निर्णय लेने की प्रक्रिया के तंत्रिका आधार अध्ययन करने के लिए एक आनुवंशिक रूप से विनयशील मॉडल के रूप में उभरा है। जब साइटों का चयन अपने अंडे जमा करने के लिए, मादा मक्खियों उनके विकल्प के रिश्तेदार आकर्षण रैंकिंग और चुनने के लिए सक्षम हैं "अधिक से अधिक के दो माल।" हालांकि, ज्यादातर अंडे बिछाने वरीयता assays अगर एक सर्किट आधार इस सरल निर्णय लेने की प्रक्रिया अंतर्निहित के लिए खोज करने के लिए एक व्यवस्थित आनुवंशिक स्क्रीनिंग दृष्टिकोण लेने के लिए, के रूप में वे जनसंख्या के आधार पर और स्थापित करने के लिए श्रमसाध्य हैं चाहता व्यावहारिक नहीं हैं। एकल महिलाओं के अंडे बिछाने वरीयताओं का अध्ययन करने के throughput बढ़ाने के लिए, हम चाहते हैं कि अप करने के लिए तीस व्यक्ति के प्रत्येक कर सकते हैं एक साथ परख अंडे बिछाने वरीयताओं को एक प्रोटोकॉल सुनिश्चित करता है कि प्रत्येक महिला एक उच्च अंडे बिछाने दर है और साथ ही मक्खियों कस्टम कक्षों विकसित (ताकि उनकी वरीयता आसानी से discernable और अधिक ठोस है कि)। हमारा दृष्टिकोण पर अमल करने के लिए सरल हैऔर बहुत अनुरूप परिणाम पैदा करता है। इसके अतिरिक्त, इन कक्षों वीडियो अंडे बिछाने जानवरों की रिकॉर्डिंग और optogenetics अध्ययन के लिए प्रकाश देने के लिए अनुमति देने के लिए विभिन्न अनुलग्नकों के साथ सुसज्जित किया जा सकता। यह लेख मक्खियों इन कक्षों में यत्न किया जा करने के लिए तैयार करने के लिए इन कक्षों और प्रक्रिया fabricating के लिए ब्लूप्रिंट प्रदान करता है।
Drosophila melanogaster is a powerful genetic model organism to study the neural basis of behaviors. The rapid developments of genetic tools to manipulate neurons in a targeted manner and the emergence of sophisticated behavioral analysis tools have significantly improved our ability to dissect the circuit mechanisms that underlie the sensory-motor transformation processes of several innate and learned behaviors1-3.
Drosophila egg-laying is a suitable model to study the neural basis of simple decision making processes. In particular, Drosophila females have been shown to possess the ability to compare and rank their options before “committing” to depositing an egg onto a given option4-8. For example, when given only a plain (sucrose-free) substrate or only a sucrose-containing substrate, females readily accept either option for egg-laying. However, when presented with both options, females robust reject the sucrose substrate in some contexts7,9,10. Relatively little is known about the neural mechanisms that allow females to “choose the greater of two goods”, however. A major obstacle has been the lack of an efficient method to assay egg-laying preferences such that one can use a systematic genetic screening approach to study this problem.
In this report, we describe the protocol we developed that allows egg-laying preferences of females to be assayed at single-animal resolution and with substantially improved throughput and consistency over previous methods. Specifically, we provide the blueprints for constructing the chambers we designed, the protocol for preparing the females so that each is primed to lay many eggs, and the protocol for using the chambers.
कक्षों और यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल पिछले अंडे बिछाने assays पर कई सुधार किया है। पहला, वे काफी एकल जानवरों की वरीयताओं को परख करने की क्रिया के throughput वृद्धि हुई है। प्रत्येक कक्ष में 30 एकल महिलाओं परख सकते हैं औ?…
The authors have nothing to disclose.
We thank the Duke Physics Shop, especially Phil Lewis, for helping us build the behavioral apparatus and attachments and creating the drawing. This work is funded by the National Institutes of Health under award number R01GM100027.
UltraPure Agarose | Invitrogen | 16500-500 | |
Sucrose | Sigma | S0389 | |
Water bath | Fisher | 15-462-6Q | |
LifeCam Cinema webcam | Microsoft | H5D-00013 | |
Red LEDs | Cree | C503B-RAN-CA0B0AA1 | |
Egg-laying chambers | Custom Built | ||
Camera holders | Custom Built | ||
LED holders | Custom Built | ||
Fly vials (narrow) | Genesee | 32-116BC |