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Neuroscience

Neuronal गतिविधि के बाह्य रिकॉर्डिंग जाग चूहों में neuroactive पदार्थों के Microiontophoretic आवेदन के साथ संयुक्त

Published: May 21, 2016 doi: 10.3791/53914
Automatic Translation
1, 1, 1,2, 3, 1,4
1Auditory Neuroscience Laboratory, Institute of Neuroscience of Castilla y León, University of Salamanca, 2Neural Systems Laboratory, Institute for Systems Research, University of Maryland, 3Medical Research Council Institute of Hearing Research, 4Department of Cell Biology and Pathology, Faculty of Medicine, University of Salamanca

Abstract

न्यूरोट्रांसमीटर और neuromodulators, और फलस्वरूप विभिन्न तंत्रिका प्रतिक्रियाओं की गतिविधि में अंतर, anesthetized और जाग पशुओं के बीच पाया जा सकता है। इसलिए, जाग जानवरों में synaptic प्रणालियों के हेरफेर की अनुमति के तरीकों आदेश में neuronal प्रसंस्करण anesthetics से अप्रभावित को अन्तर्ग्रथनी आदानों के योगदान को निर्धारित करने के लिए आवश्यक हैं। यहाँ, हम इलेक्ट्रोड का निर्माण एक साथ बाह्य तंत्रिका गतिविधि रिकॉर्ड और जाग चूहों में रिकॉर्डिंग साइटों के आसपास के क्षेत्र में कई neuroactive पदार्थों को रिहा करने के लिए पद्धति प्रस्तुत करते हैं। इन प्रक्रियाओं के संयोजन से, हम चुनिंदा सिर से रोका चूहों के अवर colliculus के न्यूरॉन्स में गाबा एक रिसेप्टर्स ब्लॉक करने के लिए gabazine की microiontophoretic इंजेक्शन प्रदर्शन किया। Gabazine सफलतापूर्वक ऐसी आवृत्ति प्रतिक्रिया क्षेत्र और प्रोत्साहन-विशिष्ट अनुकूलन के रूप में तंत्रिका प्रतिक्रिया गुण संशोधित। इस प्रकार, हम दिखाना है कि हमारे तरीके recordin के लिए उपयुक्त हैंजी एकल इकाई गतिविधि और श्रवण प्रसंस्करण में विशिष्ट न्यूरोट्रांसमीटर रिसेप्टर्स की भूमिका विदारक के लिए।

वर्णित प्रक्रिया के मुख्य सीमा अपेक्षाकृत कम रिकॉर्डिंग समय (~ 3 घंटा) है, जो रिकॉर्डिंग सत्र के लिए पशु का आदी होना के स्तर से निर्धारित होता है। दूसरी ओर, कई रिकॉर्डिंग सत्रों ही पशु में प्रदर्शन किया जा सकता है। अन्य प्रयोगात्मक न्यूरोट्रांसमिशन या neuromodulation (जैसे प्रणालीगत इंजेक्शन या optogenetic मॉडल के उपयोग के रूप में) के स्तर में हेरफेर करने के लिए इस्तेमाल प्रक्रियाओं पर इस तकनीक का लाभ यह है कि नशीली दवाओं के प्रभाव लक्ष्य न्यूरॉन के लिए स्थानीय अन्तर्ग्रथनी आदानों के लिए ही सीमित है। इसके अलावा, इलेक्ट्रोड के कस्टम निर्माण तंत्रिका संरचना और ब्याज (जैसे रिकॉर्डिंग का संकेत करने वाली शोर अनुपात में सुधार के लिए टिप प्रतिरोध के रूप में) के न्यूरॉन के प्रकार के अनुसार विशिष्ट मानदंडों के समायोजन की अनुमति देता है।

Introduction

तंत्रिका उत्तेजना और निषेध की परस्पर क्रिया संवेदी जानकारी 1 के प्रसंस्करण के लिए मौलिक है। यह भी ज्ञात है संज्ञाहरण cortical सक्रियण और synaptic आदानों 2,3 के अस्थायी पैटर्न की गतिशीलता पर एक मजबूत प्रभाव पड़ता है। उदाहरण के लिए, यह देखा गया है कि anesthetics cortical न्यूरॉन्स 3,4 में नेत्रहीन पैदा प्रतिक्रियाओं की अवधि में परिवर्तन। इसके अलावा, उत्तेजक और निरोधात्मक synaptic सूचनाओं के बीच अनुपात और फेरबदल दोनों पैदा की सहज गतिविधि दरों 6.7 anesthetized और जाग जानवरों 4,5 में अलग है। Synaptic conductances मापने के द्वारा, हैदर और उनके सहयोगियों ने 4 संज्ञाहरण के तहत आयाम में है कि निषेध मिलान किया उत्तेजना पाया जबकि जागना दौरान, निषेध उत्तेजना की तुलना में मजबूत था। इन निष्कर्षों जाग पशुओं में संवेदी प्रसंस्करण पर विशेष अन्तर्ग्रथनी आदानों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के विकास का संकेत।

<पी वर्ग = "jove_content"> (एनए के आदेश पर) छोटे वर्तमान इंजेक्शन लगाने से आरोप लगाया neuroactive पदार्थों के नियंत्रित इंजेक्शन बड़े पैमाने पर अन्तर्ग्रथनी आदानों के योगदान और संवेदी प्रसंस्करण 8-13 में ख्यात सेल रिसेप्टर्स की भूमिका का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । इस तकनीक, microiontophoresis के रूप में जाना जाता है, दर्ज न्यूरॉन, जो एक तेजी से और सीमित प्रभाव के लिए योगदान के आसपास के क्षेत्र में दवाओं के आवेदन की अनुमति देता है। यह प्रक्रिया इस तरह के प्रणालीगत इंजेक्शन, microdialysis या optogenetic तकनीकों के उपयोग के रूप में अन्य प्रयोगात्मक जोड़तोड़ द्वारा हासिल व्यापक प्रभाव की तुलना में, neuroactive पदार्थों के स्थानीय प्रभाव के अध्ययन के लिए अधिक उपयुक्त है। आमतौर पर, एक सूअर का बच्चा वापस इलेक्ट्रोड विन्यास 14,15 एक साथ लक्ष्य न्यूरॉन रिकॉर्ड और ब्याज की neuroactive पदार्थों वितरित करने के लिए प्रयोग किया जाता है। यह एक रिकॉर्डिंग एक multibarrel पिपेट neuroactive पदार्थों किया जाता है कि से जुड़ी इलेक्ट्रोड के होते हैं। ओ का संशोधनriginal प्रक्रिया Havey और Caspary 14 से वर्णित लागू किया गया है। उदाहरण के लिए, एक टंगस्टन इलेक्ट्रोड, बजाय एक गिलास एक, तंत्रिका गतिविधि 16 रिकॉर्ड करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। टंगस्टन तार टिप्स, कांच इन्सुलेशन, और टिप जोखिम के समायोजन के electrolytic नक़्क़ाशी रिकॉर्डिंग की आवश्यकताओं को पूरा करने के लिए: टंगस्टन इलेक्ट्रोड 17,18 के निर्माण के लिए पहले प्रकाशित तरीकों तीन सामान्य चरण शामिल है।

श्रवण तंत्रिका विज्ञान में एक दिलचस्प और आकस्मिक क्षेत्र प्रोत्साहन-विशिष्ट अनुकूलन (एसएसए 19) का अध्ययन है। सर्व शिक्षा अभियान के दोहराव लगता है कि अन्य, शायद ही कभी प्रस्तुत आवाजों को सामान्य नहीं करता तंत्रिका प्रतिक्रिया में एक विशिष्ट कमी है। सर्व शिक्षा अभियान के महत्व को श्रवण मस्तिष्क में तंत्रिका तंत्र एक अंतर्निहित विचलन का पता लगाने, साथ ही श्रवण की देर बेमेल नकारात्मकता घटक के लिए एक संभव न्यूरोनल सहसंबंधी के रूप में अपनी संभावित भूमिका में रहता पैदा की संभावित 20,21। सर्व शिक्षा अभियान के ओश्रवण प्रांतस्था 19,22-24 अप करने के लिए आईसी से ccurs। गाबा एक मध्यस्थता निषेध सर्व शिक्षा अभियान के 7,16,25 पर एक लाभ नियंत्रण तंत्र है, जो भी संज्ञाहरण 26 से प्रभावित हो दिखाया गया है के रूप में कार्य करने के लिए प्रदर्शन किया गया है। यहाँ हम एक प्रोटोकॉल है कि पहले और जाग चूहों में गाबा एक -receptors के एक चयनात्मक प्रतिपक्षी के आवेदन के दौरान आईसी न्यूरॉन्स की एकल इकाई गतिविधि की रिकॉर्डिंग के लिए पहले से वर्णित तरीकों को जोड़ती प्रस्तुत करते हैं। सबसे पहले, हम सूअर का बच्चा वापस इलेक्ट्रोड और अगले, शल्य चिकित्सा और रिकॉर्डिंग तरीकों के निर्माण का वर्णन है। दवा रिहाई की प्रभावकारिता के लिए परीक्षण करने के लिए, हम ग्रहणशील क्षेत्र के रूप में अच्छी तरह से पहले और gabazine की microiontophoretic इजेक्शन दौरान आईसी न्यूरॉन्स के सर्व शिक्षा अभियान के स्तर की तुलना में।

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Protocol

सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के अनुमोदन से Salamanca के विश्वविद्यालय में किए गए थे, और के मानकों के अनुरूप तरीकों का उपयोग कर, Salamanca पशु की देखभाल समिति के विश्वविद्यालय के साथ ही यूरोपीय संघ के मानकों (निर्देशक 2010/63 / ईयू) के लिए तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के क्षेत्र में जानवरों के इस्तेमाल।

1. टंगस्टन इलेक्ट्रोड

नोट:। टंगस्टन इलेक्ट्रोड का निर्माण मेरिल और Ainsworth 27 और Ainsworth एट अल 28 में वर्णित मूल तकनीक पर आधारित है और वर्कस्टेशन बैल एट अल 17 में वर्णित सेटअप का उपयोग किया जाता है।।

  1. 2.5 MΩ - आईसी न्यूरॉन्स की एकल इकाई बाह्य गतिविधि रिकॉर्ड करने के लिए, 1.5 का एक सिरा प्रतिबाधा के साथ इलेक्ट्रोड का उपयोग करें। इधर, टंगस्टन इलेक्ट्रोड निर्माण में शामिल कदम, केवल संक्षिप्त वर्णन किया गया हैं, क्योंकि एक विस्तृत वर्णन उपर्युक्त संदर्भ में पाया जाता है।
  2. एक कस्टम निर्मित संरेखण में टंगस्टन तारों की जगहउपकरण (चित्रा 1 ए) के लिए उन्हें इच्छित लंबाई को काटने की सहायता के लिए। संरेखण उपकरण के तारों के लिए ~ 40 मिमी की लंबाई सीमित करने के लिए 30 सुइयों (25 ग्राम) एक छोर पर 2 मिमी अंतराल पर समानांतर में चिपके, एक रोकने के साथ होते हैं। ध्यान से चिपकने वाला टेप के साथ तारों की बिखरी देते हैं, और मजबूत कैंची से तार के बाकी काटा।
  3. संरेखण उपकरण से टंगस्टन तारों को दूर करने के क्रम में टेप से धीरे से खींच, सुनिश्चित करें कि सभी तारों को टेप करने के लिए संलग्न रहते हैं बना रही है। एक पॉलिश पीतल धुरी (चित्रा 1 बी, सी) पर टेप रोल, धुरी के खिलाफ मजबूती से पकड़े तारों तो वहाँ एक अच्छा विद्युत कनेक्शन है।
  4. कार्य केंद्र में एक 5 आरपीएम मोटर धुरी कनेक्ट करें, और एक नक़्क़ाशी समाधान (KNO 2, 80 मिलीलीटर प्रति 90 ग्राम) में फैला हुआ तार सुझाव दिए विसर्जित कर दिया। कोण अक्ष नक़्क़ाशी समाधान की सतह से 45 डिग्री रिश्तेदार धुरी। तार सुझाव दिए विसर्जित कर दिया है, ताकि ~ 1 / तारों की 3 समाधान से संपर्क करें।
  5. Immनक़्क़ाशी स्नान में एक कार्बन रॉड इलेक्ट्रोड ERSE सर्किट बंद हुआ। जबकि धुरी घूर्णन है धुरी शाफ्ट को नक़्क़ाशी आपूर्ति लागू करने के लिए एक वसंत तांबे चोटी ब्रश का उपयोग करें। वर्तमान कि इलेक्ट्रोड और 250 मा को नक़्क़ाशी समाधान के माध्यम से पारित कर दिया है समायोजित करें। टिप नक़्क़ाशी बंद करो, जब वर्तमान 200 मा के लिए चला जाता है। तार सुझाव बहुत ठीक अंक में etched हो जाएगा।
  6. एक लौ के माध्यम से एक बढ़ाई तार दर्रा किसी भी तेल और चिपकने वाला अवशेषों को हटाने के लिए। तार (कुंद अंत प्रथम) एक borosilicate ग्लास केशिका में रखें (1.5 मिमी आयुध डिपो, 0.86 मिमी आईडी) इसकी कम अंत के साथ क्ले मॉडलिंग के साथ जाम कर दिया। ऊपर और नीचे खड़ी पिपेट दबाना। पिपेट एक हीटिंग का तार (व्यास में 5 मिमी, गहराई 5 मिमी) और एक निलंबित सवार का उपयोग कर खींचो। के रूप में तार सवार के वजन से नीचे खींच लिया है, पिघला हुआ कांच इसके चारों ओर एक बहुत ही सुन्दर कोट रूपों।
  7. सोडियम की एक पिघला हुआ मनका की मदद से इलेक्ट्रोड के तेज अंत में टिप को कवर गिलास हटायेtetraborate। मनका फार्म करने के लिए, पानी (~ 0.5 एमएल) की एक छोटी राशि के साथ सोडियम tetraborate (~ 0.25 छ) का मिश्रण है और धीरे-धीरे एक हीटिंग तत्व पर यह जगह है, जब तक यह एक मनका में पिघला देता है ~ व्यास में 2 मिमी। हीटिंग तत्व का तापमान एक नापने द्वारा नियंत्रित किया जाता है। मनका और एक जोड़तोड़ हाथ मेज पर तय पर हीटिंग तत्व प्लेस, और यह कदम तक मनका कम बढ़ाई खुर्दबीन के नीचे ध्यान केंद्रित किया है।
  8. एक स्लाइड के लिए ग्लास से ढके तार को सुरक्षित और माइक्रोस्कोप के नीचे जगह है। जब तक टिप और tetraborate मनका ध्यान में हैं चरण knobs के साथ स्लाइड ले जाएँ। मनका गर्मी जब तक यह थोड़ा पिघला देता है, और तार टिप ~ 10 डालें - 15 माइक्रोन। हीटिंग नापने बंद कर दें। मनका शांत होता है, यह अनुबंध और इलेक्ट्रोड की नोक से गिलास निकाल देंगे, अंतर्निहित टंगस्टन उजागर। टंगस्टन इलेक्ट्रोड का उपयोग करने के लिए तैयार है।

2. multibarrel गिलास पिपेट विनिर्माण

  1. बहु के सिरों को सुरक्षित रखेंबैरल कांच केशिकाओं गर्मी हटना टयूबिंग के साथ (एच-विन्यास में पांच बैरल), डांड़ी अकड़न के लिए एक बेहतर पकड़ अनुमति देने के लिए और टूटना को रोकने, और ऊर्ध्वाधर खींचने में एक जगह है।
  2. इन मानकों विशेष सेटअप के अनुसार, साथ ही बदलने के बाद 38. ठीक धुन: गर्मी: 84, उप चुंबक बल: 49, मुख्य चुंबक बल ~ का 15 मिमी टिप लंबाई प्राप्त करने के लिए, निम्नलिखित मानकों को खींचने के लिए सेट गर्म करने के तत्व।
  3. केशिका सुझाव दिए occluded के साथ दो pipettes प्राप्त करने के लिए खींचो। एक स्लाइड क्ले मॉडलिंग के प्रयोग पर एक पिपेट माउंट और माइक्रोस्कोप के तहत विंदुक टिप तोड़ने जब तक बाहरी व्यास है ~ 20 - 30 माइक्रोन, ठीक कैंची या संदंश, या एक छुरी के फ्लैट की ओर का उपयोग कर। अगर टूटा बढ़त भी किसी न किसी है, tetraborate मनका तकनीक कदम 1.7 में वर्णित का उपयोग कर इसे परिष्कृत करें।
  4. (खंड 1 से) एक टंगस्टन इलेक्ट्रोड एक 3 अक्ष लघु micropositioner के अंत में एक 20 जी सुई के साथ किए गए एक धारक में जगह माइक्रोस्कोप हरिण पर मुहिम शुरू कीई। 10 डिग्री, नोक से 30 मिमी ~ - संदंश का प्रयोग, इलेक्ट्रोड 5 के अंत मोड़।
  5. माइक्रोस्कोप के तहत, ध्यान से multibarrel नोक पर टंगस्टन इलेक्ट्रोड संरेखित। एक बार जब गठबंधन, संपर्क multibarrel यह जब तक इलेक्ट्रोड के निचले हिस्से, दो ऊपरी बैरल के बीच नाली में ढाले। इलेक्ट्रोड की नोक स्लाइड जब तक यह protrudes ~ 15 - multibarrel की नोक से दूर 20 माइक्रोन। इलेक्ट्रोड और multibarrel एक बेहतर संबंध प्राप्त करने के लिए संभव के रूप में छोटे और एक पतली पहनावा के बीच का कोण बनाते हैं।
  6. सुझावों से दूर प्रकाश का इलाज चिपकने वाला ~ 5 मिमी की एक छोटी सी बूंद लागू करें। सावधान गोंद टिप तक पहुँच नहीं है multibarrel चैनलों को अवरुद्ध करने से बचने के लिए किया जाना है।
  7. गोंद एक नीले रंग की रोशनी एलईडी लैंप का उपयोग कर इलाज। गोंद आवेदन / इलाज दोहराएँ अगर जरूरत है, बेहतर संबंधों के लिए।
  8. जब तक टंगस्टन इलेक्ट्रोड के अंत में इसके धारक से जारी है धीरे खुर्दबीन मंच ले जाएँ। स्लाइड से सूअर का बच्चा वापस पहनावा निकालें।
  9. वें लपेटेंकी एक छोटी लंबाई में सूअर का बच्चा वापस इलेक्ट्रोड के ई मध्यम वर्ग गर्मी हटना ट्यूब और कांच आगे multibarrel करने के लिए टंगस्टन इलेक्ट्रोड को सुरक्षित करने के लिए तेजी से इलाज epoxy उचित लागू होते हैं।

3. Microiontophoresis के लिए दवाओं

नोट: microiontophoresis के लिए इस्तेमाल किया दवाओं के एक बिजली के प्रभारी जब पानी में भंग होना चाहिए। साहित्य की जाँच करें अगर ब्याज की दवा इस प्रक्रिया के लिए उपयुक्त है देखने के लिए। इधर, gabazine के लिए प्रक्रिया, गाबा एक रिसेप्टर के एक विरोधी, वर्णित है।

  1. आसुत पानी फिल्टर पानी बाँझ और कोई विलेय युक्त सुरक्षित करने के लिए एक 0.2 माइक्रोन सिरिंज फिल्टर का उपयोग कर। इस आसुत जल का उपयोग कर gabazine 20 मिमी की ~ 1000 μl तैयार करें।
  2. एक ठीक-टिप पीएच इलेक्ट्रोड का उपयोग कर 0.2 माइक्रोन NaOH फ़िल्टर के साथ 4 को कमजोर पड़ने का पीएच को समायोजित करें।
  3. -20 डिग्री सेल्सियस पर 200 μl aliquots - 100 स्टोर। रिकॉर्डिंग के दिन defrost। उस दिन, को नियंत्रित करने से पहले जानवर हैएक 100 μl microsyringe एक लचीले प्लास्टिक सुई के साथ फिट का उपयोग कर, दवाओं के साथ multibarrel इलेक्ट्रोड की - (5 μl 3) एड, बैरल भरें।

4. सर्जरी और Headpost आरोपण

  1. 27 और 30 ग्राम के वजन के साथ दो पुरुष CBA / जम्मू चूहों (मस मस्कुलस) में प्रयोगों का प्रदर्शन। ब्रायंट और उनके सहयोगियों ने 29 की शल्य चिकित्सा और रिकॉर्डिंग प्रक्रियाओं का पालन करें, Portfors और सहयोगियों 30-32, और डुकी और Malmierca 26।
  2. सर्जरी के पहले दिन में, जानवरों को संभालने और उन्हें स्वतंत्र रूप से पता लगाने के लिए अनुमति देकर रिकार्डिंग कक्ष के लिए उन्हें आदत डालना। प्रति दिन 3 सत्रों, हर एक स्थायी कम से कम 30 मिनट के प्रदर्शन करना। इस तरह से जानवरों रिकॉर्डिंग के दौरान शांत और आरामदायक होगा।
  3. माउस ketamine (50 मिलीग्राम / किग्रा) और xylazine (10 मिलीग्राम / किग्रा) के एक मिश्रण का उपयोग anesthetize intramuscularly इंजेक्शन। इस खुराक के साथ पशु लगभग 1 घंटे के लिए गहरा anesthetized है। एक thir की पूरक खुराक देंप्रारंभिक खुराक की जरूरत के रूप में डी।
  4. एक हीटिंग कंबल 38 ± 1 डिग्री सेल्सियस की एक तापमान बनाए रखने और दो कान सलाखों और एक काटने पट्टी का उपयोग करके एक stereotaxic फ्रेम में पशु के सिर को स्थिर करने के लिए सेट पर पशु रखें। सावधान कान सलाखों के साथ कान की झिल्ली बेध नहीं हो।
  5. नेत्र जेल की एक बूंद को लागू करने से आंखों की रक्षा।
  6. कैंची का उपयोग खोपड़ी दाढ़ी और त्वचा कीटाणुरहित povidone आयोडीन लागू होते हैं।
  7. एक छुरी का प्रयोग, खोपड़ी बेनकाब और पार्श्विका और पश्चकपाल हड्डियों का अधिक व्याख्यान चबूतरे हिस्से को कवर periosteum वापस लेना midline के साथ एक चीरा बनाते हैं।
  8. खोपड़ी पर एक गोल और फ्लैट आधार (5 मिमी व्यास) के साथ एक हल्के duralumin headpost (वजन ~ 0.65 जी, लंबाई 30 मिमी, 2A चित्रा) गोंद। headpost मुक्त अपने सिरों छोड़ने के बीच करने के लिए एक चांदी के तार गोंद। चांदी के तार electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए संदर्भ इलेक्ट्रोड के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा।
  9. निम्न आय वर्ग की एक पतली परत लागू करेंखोपड़ी पर हिंदुस्तान टाइम्स का इलाज चिपकने वाला और headpost के आधार। 10 मिनट रुको और पार्श्विका हड्डियों के व्याख्यान चबूतरे वाला क्षेत्र पर headpost जगह है, midline के साथ।
  10. एक प्रभावी संबंध ताकत के लिए, प्रकाश 20 सेकंड के लिए एक नीले रंग की रोशनी स्रोत का उपयोग चिपकने वाला इलाज।
  11. तीन छेद के आसपास है और headpost एक बिजली की ड्रिल और एक छोटे ड्रिल बिट का उपयोग के आधार के पीछे ड्रिल।
  12. drilled छेद में दो घड़ी शिकंजा (~ 2 मिमी लंबाई) की जगह खोपड़ी और headstage के बीच के रूप में अतिरिक्त संपर्क अंक की सेवा के लिए। शिकंजा की आवश्यकता होती है 1 आधा एक सुखद फिट हासिल करने के लिए बदल जाता है। संदंश के साथ शिकंजा टेस्ट यकीन है कि वे ढीले नहीं कर रहे हैं।
  13. तीसरे छेद यकीन है कि यह संपर्कों ड्यूरा बनाने में चांदी जमीन तार की नोक डालें। खोपड़ी के लिए बाध्य करने के लिए तार पानी प्रतिरोधी cyanoacrylate गोंद की एक छोटी सी बूंद लागू करें।
  14. लागू खोपड़ी के साथ headpost के बंधन को सुदृढ़ करने के लिए प्रकाश इलाज समग्र। headpost के आधार कवर, चांदी के तार से कम हिस्सा है,और शिकंजा, सावधान किया जा रहा लैम्ब्डा के पीछे का विस्तार करने के लिए नहीं, रिकॉर्डिंग के दौरान उपयोग की अनुमति। एक नीले रंग की रोशनी स्रोत का उपयोग कर इलाज।
  15. खोपड़ी पर अपनी प्रविष्टि के पास गर्दन के पीछे पेशी वापस लेना। एक छोटे से trephine (2.35 मिमी व्यास) का उपयोग करना, बस लैम्ब्डा सिवनी और midline के लिए पार्श्व नीचे एक गोल खिड़की ड्रिल, अवर colliculus (आईसी) को बेनकाब करने के लिए। सीमाओं ढीला कर रहे हैं, ठीक चिमटी के साथ कवर हड्डी तक खींच। खून बह रहा होता है, तो इसे रोकने के लिए ठंड बाँझ खारा से कुल्ला।
  16. समग्र और प्रकाश इलाज के लिए इसके साथ एक छोटी सी (~ 1 मिमी चौड़े और ~ 1 मिमी उच्च) खिड़की के चारों ओर दीवार बनाओ।
  17. उजागर खोपड़ी और एंटीबायोटिक मलहम के साथ मांसपेशियों को कवर किया। फिर, बाँझ खारा के साथ आईसी के उजागर सतह गीला और पेट्रोलियम जेली के साथ कवर, रिकॉर्डिंग खिड़की के चारों ओर दीवार बनाने के बाद अच्छी तरह से भरने उत्पन्न।
  18. एक एनाल्जेसिक के रूप buprenorphine subcutaneously (0.03 मिलीग्राम / किग्रा, बाँझ खारा में पतला 1:10) इंजेक्षन।
  19. टी पर पशु रखेंवह कंबल हीटिंग जब तक यह जागता है और वह अपने आवास पिंजरे पर लौटने रिकॉर्डिंग सत्र से पहले तीन दिनों के लिए सर्जरी से उबरने के लिए। व्यक्तिगत rat's आवास पिंजरे में घर पशुओं पिंजरे साथियों जेली बाहर की सफाई को रोकने के लिए और धातु ग्रिड कवर स्पर्श headpost। पिंजरे में कुछ संवर्धन की जगह जब जानवर भी रखे है। इसके अलावा, दैनिक संक्रमण को रोकने के लिए और ध्यान से जाँच करें कि पशु ठीक से ठीक नहीं है और असुविधा के कोई लक्षण नहीं दिखा है चूरा बदल जाते हैं। इसके अलावा अगर जांच पेट्रोलियम जेली रिकॉर्डिंग खिड़की उजागर मस्तिष्क की रक्षा खत्म हो गया है।

5. Electrophysiological रिकॉर्डिंग और Microiontophoresis

  1. वसूली के बाद, पशु समय रिकॉर्डिंग पर्यावरण के लिए acclimate करने के लिए देने के लिए और अपने सिर को होने से रोका। धारक को headpost फिक्सिंग जबकि माउस एक कस्टम बनाया तकिये फोम restrainer अपने शरीर के आकार (चित्रा 2 बी) के लिए खुदी पर बैठा है द्वारा पशु acclimate। इस वसीयत लिमयह माउस के आंदोलनों और इसकी शांति के लिए योगदान देगा।
  2. 10 मिनट के सत्र के साथ शुरू और उत्तरोत्तर 120 मिनट की अवधि को बढ़ा सकते हैं। सत्र के दौरान दिए गए अंतराल 33 पर मीठा तरल पदार्थ के साथ जानवरों (गाढ़ा दूध, पानी में 30:70 पतला) इनाम। बाद में, रिकॉर्डिंग सत्र के दौरान, शुरू में और सत्र के अंत में या जब कोई न्यूरॉन अलग है ही इनाम दे।
  3. जानवर बहुत रिकॉर्डिंग से पहले उत्साहित है, तो हल्के शामक acepromazine (2 मिलीग्राम / किग्रा, intraperitoneal) इंजेक्षन। ब्याज की तंत्रिका प्रणाली के अनुसार, शामक अपने परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं।
  4. 10 मिनट - पशु स्वतंत्र रूप से 5 के लिए रिकॉर्डिंग कक्ष का पता लगाएं।
  5. जानवर के शरीर फोम कस्टम बनाया तकिये restrainer (चित्रा 2 बी) में रखें।
  6. एक धारक स्टीरियोटैक्टिक फ्रेम (चित्रा -2) से जुड़ी को headpost सुरक्षित। यह एक अच्छा समय जानवर एक तरल इनाम दे रहा है।
  7. सहएक कपास कंबल के साथ जानवर के शरीर देखें और शिथिल यह एक प्लास्टिक hemicylinder और चिपकने वाला टेप का उपयोग जकड़ना।
  8. रिकॉर्डिंग खिड़की से पेट्रोलियम जेली निकालें और गर्म बाँझ खारा से कुल्ला।
  9. रिकार्ड तंत्रिका गतिविधि और gabazine की iontophoretic आवेदन।
    1. इसके धारक पर multibarrel इलेक्ट्रोड, एक microdrive द्वारा नियंत्रित और एक micromanipulator से जुड़ी रखें।
    2. रिकॉर्डिंग के लिए तारों कनेक्ट, छोटे मगरमच्छ क्लिप का उपयोग कर। टंगस्टन इलेक्ट्रोड के अंत करने के लिए सकारात्मक टर्मिनल, और चांदी के तार कि संपर्कों ड्यूरा के लिए जमीन टर्मिनल कनेक्ट करें।
    3. एक uncoated चांदी के तार प्रत्येक बैरल के अंदर रखें, ताकि एक छोर संपर्कों के समाधान और दूसरे छोर से सुलभ है। , Microiontophoresis डिवाइस के लिए उन सिरों कनेक्ट निर्माता के निर्देशों का पालन।
    4. टिप संपर्कों मस्तिष्क की सतह तक multibarrel इलेक्ट्रोड ले जाएँ। वें में से सुखाना को रोकने के लिए गर्म बाँझ खारा लागू करेंई मस्तिष्क के ऊतकों। उस समय (gabazine के लिए -10 ना विशेष दवा के लिए साहित्य की जाँच) एक अवधारण वर्तमान लागू बैरल सिरे से दवा के रिसाव से बचने के लिए, जबकि एकल इकाई गतिविधि के लिए लग रही है।
    5. एक न्यूरॉन बाह्य गतिविधि के लिए अलग मानक तकनीक का प्रयोग करें। न्यूरॉन की आवृत्ति प्रतिक्रिया क्षेत्र (एफआरए) प्राप्त करते हैं, यानी, आवृत्तियों और एक प्रतिक्रिया evoking क्योंकि न्यूरॉन इन ध्वनियों 34-36 के प्रति संवेदनशील है करने में सक्षम तीव्रता का संयोजन।
    6. दो आवृत्तियों (F1 और F2) है कि एक समान फायरिंग दर और पैटर्न आह्वान चुनें। oddball प्रतिमान के तहत उन आवृत्तियों से प्रत्येक के रूप में दुर्लभ और दोहराव प्रोत्साहन प्रस्तुत करते हैं।
      नोट: संक्षेप में, oddball प्रतिमान में, एक आवृत्ति (एफ 1) घटना की एक उच्च संभावना के साथ दोहराए प्रोत्साहन के रूप में प्रस्तुत किया जाता है, जबकि दूसरा (F2) शायद ही कभी होने वाली deviant प्रोत्साहन, दोहराए लोगों के बीच बेतरतीब ढंग से बीच-बीच में है। एक दूसरे oddball अनुक्रम में, रिश्तेदारदो उत्तेजनाओं की संभावनाओं उलट हैं। उत्तेजना प्रतिमान के विवरण के पहले 22,37 वर्णित किया गया है।
    7. (- 20 na 10) सकारात्मक मूल्यों को वर्तमान स्थानांतरण द्वारा gabazine रिलीज। फिर एफआरए प्राप्त करें और gabazine आवेदन के तहत oddball प्रतिमान दोहराएँ। फायरिंग दर मनाया जाता है में एक दृश्य प्रभाव जब तक इंजेक्शन बनाए रखना; , 20 मिनट के विशेष दवा, अपनी एकाग्रता, और इंजेक्शन वर्तमान की भयावहता पर निर्भर करता है - यह आमतौर पर 5 लेता है। दवा के प्रभाव के तहत मूल्यों को प्राप्त करने के लिए रिकॉर्डिंग प्रोटोकॉल दोहराएँ।
    8. प्रतिधारण मूल्यों के लिए वर्तमान लौटने से इंजेक्शन बंद करो। दवा के प्रभाव की निगरानी के लिए प्रतीक्षा करें कि एफआरए या oddball प्रतिमान के जवाब मूल्यों को नियंत्रित करने के लिए रिटर्न से दूर धोने के लिए।
      नोट: रिकॉर्डिंग सत्र 2 पिछले कर सकते हैं - प्रति दिन 3 घंटा, और पहले समाप्त किया जाना चाहिए अगर पशु असुविधा या संघर्ष के किसी भी संकेत नहीं दिखाता है। इनाम तरल दें और रिकॉर्डिंग सीएच कवरपेट्रोलियम जेली के साथ एम्बर।

6. डेटा विश्लेषण

  1. पहले और gabazine इंजेक्शन के रूप में अच्छी तरह से सर्व शिक्षा अभियान के स्तर के दौरान एफआरए उपाय।
  2. आम-सर्व शिक्षा अभियान के इंडेक्स (सीएसआई) और आवृत्ति-विशिष्ट सर्व शिक्षा अभियान के सूचकांक (एसआई) के रूप में पहले 19,22,23,38,39 वर्णित द्वारा सर्व शिक्षा अभियान की प्रतिक्रिया की शक्ति यों। सीएसआई और एसआई दुर्लभ प्रोत्साहन के लिए neuronal प्रतिक्रिया और दोहराव से एक के जवाब के बीच सामान्यीकृत अंतर दर्शाते हैं। सकारात्मक सीएसआई और एसआई मूल्यों तंत्रिका प्रतिक्रिया (प्रोत्साहन प्रति spikes) दोहराए टन करने के लिए की तुलना में दुर्लभ करने के लिए अधिक था संकेत मिलता है।
  3. नियंत्रण और नशीली दवाओं के इंजेक्शन हालत से डेटा की तुलना करें।

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Representative Results

हम आईसी के 4 अच्छी तरह से पृथक न्यूरॉन्स की एकल इकाई गतिविधि दर्ज की गई। जाग चूहों में कोशिकी रिकॉर्डिंग के दौरान प्राप्त विशिष्ट संकेत करने वाली शोर अनुपात चित्रा 3 बी में दिखाया जाता है। चित्रा -4 ए के पहले और गाबा ए की नाकाबंदी gabazine साथ -receptors के दौरान प्रत्येक न्यूरॉन की आवृत्ति प्रतिक्रिया क्षेत्र (एफआरए) से पता चलता है। प्रतिक्रिया शक्ति (spikes / प्रोत्साहन) के साथ ही वर्णक्रम ट्यूनिंग के विस्तार में एक वेतन वृद्धि मनाया गया। पैदा की प्रतिक्रिया में वेतन वृद्धि संचित पेरी प्रोत्साहन समय प्रस्तुत (चित्रा 4 बी) सभी आवृत्तियों और तीव्रता को तंत्रिका प्रतिक्रिया से प्राप्त histograms में भी स्पष्ट हो गया था।

न्यूरॉन के एफआरए (चित्रा -4 ए में पार) के भीतर आवृत्तियों की एक या दो जोड़े एस के लिए एक oddball प्रतिमान में दोहराव या दुर्लभ ध्वनियों के रूप में प्रस्तुत करने के लिए चुना गया था,अपनी प्रतिक्रिया में सर्व शिक्षा अभियान के स्तर tudy। पहले और gabazine इंजेक्शन के दौरान दो उदाहरण न्यूरॉन्स, प्रत्येक आवृत्ति (F1 और F2) के लिए ध्वनि पैदा प्रतिक्रियाओं के लिए यह आंकड़ा 5 ए, बी में डॉट rasters के रूप में दिखाया जाता है। दो उदाहरण न्यूरॉन्स के लिए, वहाँ ध्वनि पैदा की प्रतिक्रिया में एक स्पष्ट परिवर्तन के रूप में डॉट रास्टर और PSTHs में मनाया गया।

इसी तरह, गाबा एक -receptors के स्थानीय नाकाबंदी न्यूरोनल हमारे पिछले अध्ययन 16 के साथ समझौते में दुर्लभ और दोहराव टन के महान बहुमत (चित्रा 5C) के जवाब में वृद्धि हुई। सर्व शिक्षा अभियान के विभिन्न स्तरों F1 और F2 करने के लिए तंत्रिका प्रतिक्रियाओं, जो सकारात्मक सीएसआई में परिलक्षित किया गया था में मनाया गया (सीएसआई अंतराल: -0.26 0.43 को 0.25 ± 0.23) और एसआई मूल्यों (एसआईएस अंतराल: -0.41, 0.83 को 0.25 ± 0.23) । अधिकांश मामलों के लिए, दोहराव टोन करने के लिए वृद्धि की प्रतिक्रिया के रूप में चित्रा 5 डी में मनाया उन लोगों के सूचकांकों में एक बूंद का कारण

आकृति 1
चित्रा 1. टंगस्टन इलेक्ट्रोड के निर्माण के लिए सामग्री। (ए) इलेक्ट्रोड संरेखण उपकरण, जगह में कुछ टंगस्टन तारों के साथ। बाईं तरफ हल्का सा टुकड़ा तारों के लिए एक बंद है। कैंची टिप जुड़ी इलेक्ट्रोड के एक बैच के साथ वांछित लंबाई के लिए तारों को काटने के लिए एक गाइड के रूप में इस्तेमाल की ओर इंगित करता है। (बी) खाली धुरी। (सी) तकला, ​​और एक धारक पर आराम कर। एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें यह आंकड़ा की।

चित्र 2
2. जाग चूहों रिकॉर्डिंग के लिए सहायक उपकरण चित्रा। (ए) Headpost। (बी) के कस्टम-तकिये फोम restrainer। प्लेस टीवह दोनों टुकड़ों के बीच में माउस, सिर के बाहर जा रही है। (सी) stereotaxic फ्रेम करने के लिए संशोधन। headpost धारक (ऊपर पट्टी) headpost आरोपण के दौरान सहायता करता है और रिकॉर्डिंग के दौरान सिर restrains। काटने टुकड़ा (कम बार) केवल headpost आरोपण के दौरान प्रयोग किया जाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा जाग माउस में रिकॉर्डिंग के 3. उदाहरण। (ए) माउस आईसी से एक न्यूरॉन की आवृत्ति प्रतिक्रिया क्षेत्र। (ख) इस न्यूरॉन से दर्ज spikes के waveforms। (सी, डी) डॉट रास्टर और peristumulus-बार इस न्यूरॉन से दर्ज की आवृत्तियों पर एक oddball प्रतिमान का उपयोग हिस्टोग्राम संकेत दिया में डॉट्स द्वारा (ए)। डेटा से दोबारा बनाईडुकी और Malmierca 26 में प्रकाशित हुआ। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4. गाबा ए की नाकाबंदी का प्रभाव स्पेक्ट्रल और टेम्पोरल प्रतिक्रिया गुण पर -receptors। चार आईसी (ए) फ़्रिक्वेंसी प्रतिक्रिया क्षेत्र न्यूरॉन्स से पहले और gabazine की microiontophoretic इंजेक्शन के दौरान दर्ज की गई। (ए) में काले पार से संकेत मिलता है आवृत्तियों दुर्लभ और दोहराव ध्वनियों के रूप में प्रस्तुत किया जा करने के लिए चुना है। (बी) संचित सभी आवृत्तियों और तीव्रता से पहले और इंजेक्शन के दौरान प्रतिक्रिया क्षेत्र के निर्माण के लिए प्रस्तुत करने के लिए तंत्रिका प्रतिक्रिया के पेरी प्रोत्साहन समय histograms gabazine की। काली सलाखों ध्वनि अवधि का संकेत है।यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5. गाबा ए की नाकाबंदी का प्रभाव दोहराव और दुर्लभ ध्वनि के जवाब पर रिसेप्टर्स। (ए, बी) के रूप में दुर्लभ (लाल, 10%) और दोहराव प्रोत्साहन (नीले, 90%) प्रस्तुत आवृत्तियों की एक जोड़ी के लिए spiking प्रतिक्रिया के डॉट rasters पहले और gabazine के आवेदन के दौरान। प्रत्येक आवृत्ति दो दृश्यों में खेला जाता है कि इस तरह के हर एक rare- और दोहराव के रूप में पेश किया गया। छायांकित पृष्ठभूमि प्रोत्साहन की अवधि इंगित करता है। (सी)। दुर्लभ के रूप में और पहले और gabazine के आवेदन के दौरान दोहराए ध्वनि के रूप में प्रस्तुत किया आवृत्तियों के सात जोड़े के लिए एकल न्यूरॉन के हिमायती हैं। (डी) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

जाग पशुओं में neuroactive पदार्थों के microiontophoresis जांच और एकल न्यूरॉन्स 40,41 की गतिविधि पर विशेष अन्तर्ग्रथनी आदानों की भूमिका काटना करने के लिए एक शक्तिशाली तकनीक है। इससे भी महत्वपूर्ण बात, इस प्रक्रिया anesthetics के संभावित हस्तक्षेप के बिना न्यूरोट्रांसमीटर और तंत्रिका सर्किट पर neuromodulators के प्रभाव का निर्धारण की अनुमति देता। यहाँ, हम उस जाग चूहों के आईसी में gabazine के आवेदन मजबूती के साथ आवृत्ति ट्यूनिंग (चित्रा 4 ए), लौकिक प्रतिक्रिया पैटर्न (चित्रा 4 बी) और सर्व शिक्षा अभियान (चित्रा 5) बदल प्रदर्शित करता है।

वर्णित प्रक्रिया के मुख्य सीमा अपेक्षाकृत कम रिकॉर्डिंग समय (~ 3 घंटा) है, जो रिकॉर्डिंग सत्र के लिए पशु का आदी होना के स्तर से निर्धारित होता है। दूसरी ओर, कई रिकॉर्डिंग सत्रों ही पशु पर प्रदर्शन किया जा सकता है। microiontophoresis का उपयोग करते हुए यह स्पष्ट नहीं कितनी दूर हैलागू किया neuroactive पदार्थों आसपास के ऊतकों में फैलाना। इसलिए, neuronal नेटवर्क गतिविधि पर एक संभावित असर न केवल दर्ज न्यूरॉन बल्कि आसपास के glial और neuronal कोशिकाओं को प्रभावित करने से हासिल किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, कैंडी और उनके सहयोगियों ने 42 से पता चला है कि कुछ iontophoretically को जन्म दिया अणु है, जो तेजी से नहीं हटा रहे हैं, 600 माइक्रोन तक की फैलाना कर सकते हैं। चूहों आईसी में इस श्रृंखला के वृक्ष के समान arbors की हद तक का सबसे को कवर किया जाएगा, लेकिन यह भी सन्निकट कक्षों की neuronal प्रतिक्रिया प्रभावित करते हैं। के रूप में स्थानिक intracellular दवा डायलिसिस, जो लक्ष्य न्यूरॉन और स्थानीय नेटवर्क का परीक्षण करने के लिए अन्तर्ग्रथनी आदानों की बारीकियों को विस्तार से विच्छेदन की अनुमति देता है 16,43 प्रक्रियाओं, यह अन्य प्रयोगात्मक की तुलना में अधिक विशिष्ट है के रूप में ही सीमित नहीं सारांश में, दवा योणोगिनेसिस द्वारा जारी की है प्रक्रियाओं में इस तरह के प्रणालीगत इंजेक्शन, optogenetic तकनीकों का उपयोग करते हैं, या धक्का-पुल के रूप में न्यूरोट्रांसमिशन या neuromodulation, के स्तर में हेरफेर करने के लिए इस्तेमाल कियाएल डायलिसिस।

कांच pipettes की नोक व्यास और बनाए रखने और इंजेक्शन धाराओं की भयावहता महत्वपूर्ण कारक आदेश के ऊतकों में अविशिष्ट दवा रिसाव से बचने के लिए नजर रखने के लिए कर रहे हैं। (एनए के दसियों के आदेश के) कम इंजेक्शन धाराओं दवा एक दूसरे के करीब न्यूरॉन्स की रिकॉर्डिंग की अनुमति के प्रसार को सीमित। उदाहरण के लिए, के रूप में उदाहरण (न्यूरॉन्स 1 - 3) का इस्तेमाल किया चार न्यूरॉन्स की तीन उन दोनों के बीच 800 माइक्रोन 16 वर्ष की दूरी और साथ ही ट्रैक के साथ दर्ज किए गए। न्यूरॉन 1 और 2 के बीच 16 माइक्रोन से कम दूरी के बावजूद, न्यूरॉन 2 की एक स्पष्ट रूप से अलग-अलग प्रतिक्रिया (चित्रा 4) मनाया गया।

प्रस्तावित सूअर का बच्चा वापस विन्यास के लिए कुछ विकल्प पहले से इस्तेमाल किया गया है। उनमें से एक एक अलग इलेक्ट्रोड के बजाय, रिकॉर्डिंग के लिए multibarrel pipettes में से एक का उपयोग के होते हैं। जबकि टुकड़ियों का निर्माण इस मामले में कम जटिल है, वहाँ कमियां हैं। एफआइआरटी, सभी चैनलों नोक पर एक ही खोलने व्यास, जो दोनों रिकॉर्डिंग और दवा वितरण के लिए इष्टतम नहीं हो सकता होगा। इसके अलावा, सूअर का बच्चा वापस विन्यास में फैला हुआ इलेक्ट्रोड टिप संभावना multibarrel के व्यापक टिप की वजह से लक्ष्य सेल को होने वाले नुकसान से बचाता है। दूसरे आम विकल्प टंगस्टन इलेक्ट्रोड के 15,44 रिकॉर्डिंग के बजाय एकल बैरल कांच pipettes का इस्तेमाल होता है। ग्लास इलेक्ट्रोड लंबे समय रिकॉर्डिंग के दौरान आवश्यक आयाम करने के लिए निर्माण, लेकिन रोकना लिए करते हैं करने के लिए आसान कर रहे हैं या जब मस्तिष्क में गहरी यात्रा है, इसलिए में हमारे अनुभव टंगस्टन इलेक्ट्रोड अधिक विश्वसनीय रिकॉर्डिंग प्रदान करते हैं। इसके अलावा, टंगस्टन इलेक्ट्रोड का उपयोग करके इसे जब एक तंत्रिका ट्रेसर इंजेक्शन 45 प्रयोग किया जाता है की आवश्यकता आगे विस्तृत ऊतकीय प्रक्रियाओं के बिना, रिकॉर्डिंग साइटों का पता लगाने के लिए electrolytic घाव का उत्पादन संभव है। multibarrel कांच pipettes के उपयोग के कई एगोनिस्ट और / या विरोधी बहुत रिकॉर्डिंग के करीब की रिहाई की अनुमति देता हैसाइट है, जो एक जबरदस्त फायदा है संवेदी प्रसंस्करण पर न्यूरोट्रांसमीटर सिस्टम के बीच बातचीत का अध्ययन किया जा रहा है जब।

प्रक्रियाओं सूअर का बच्चा वापस इलेक्ट्रोड के निर्माण के लिए वर्तमान प्रोटोकॉल में वर्णित यह संभव प्रयोग के और एक व्यवस्थित करने में रुचि है, फिर भी अनुकूलित ढंग से लक्षित क्षेत्र की विशेषताओं की विशिष्ट आवश्यकताओं के अनुसार रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड का उत्पादन करने के लिए बनाते हैं। इसके अलावा, headpost निर्धारण के लिए सामग्री पारंपरिक दंत चिकित्सा में उपयोग किया जाता है ताकि वे आसानी से उपलब्ध हैं। इस प्रकार, प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदम पशु आदी होना और टंगस्टन इलेक्ट्रोड, जो अच्छी तरह से पृथक न्यूरॉन्स और स्थिर electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए योगदान मुख्य कारक हैं की नक़्क़ाशी कर रहे हैं। कुल मिलाकर, इस तकनीक अपेक्षाकृत सरल, किफायती और बहुत विश्वसनीय एक साधन के जाग में एकल या बहु इकाई neuronal गतिविधि पर कई neuroactive पदार्थों की भूमिका का अध्ययन करने के लिए के रूप में है, सिरसंयमित चूहों।

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Acknowledgments

इस परियोजना MINECO द्वारा वित्त पोषित किया गया अनुदान BFU201343608-पी और PSI2013-49348-एक्सप्रेस, और एआरपी के लिए एमएसएम और एमआरसी केंद्रीय वित्त पोषण के लिए अनुदान JCYL SA343U14। YAA एक CONACYT (216,106) और एक सितम्बर फैलोशिप का आयोजन किया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Tungsten wire Harvard Apparatus LTD 33-0099 0.005 inches x 3 inches
Borosilicate glass capillary  Harvard Apparatus LTD 30-0053 Borosilicate standard wall without filament, 1.5 mm OD, 0.86 mm ID, 100 mm long
Multibarrel glass capillaries  World Precision Instruments 5B120F-4  5-barrel capillary, 4 inches long, 1.2 mm OD, with filament
Diaplus DiaDent 2001-2101 Light-curing adhesive, used to attach the tungsten electrode to the glas multibarrel pipette
G-Bond GC Corporation 2277 Light-curing adhesive, used to attach the headpost to the animal's skull
Charisma Heraeus Kulzer 66000087 Light-curing composite, used to reinforce the bond of the headpost with the skull
Araldit Cristal Ceys 2-component expoxy, used to further secure the attachment of the tungsten electrode to the glass multibarrel pipette
Heating blanket Cibertec RTC1
Stereotactic frame Narishige SR-6N Modified for mice
Microiontophoretic device Harvard Apparatus LTD Neurophore BH-2 Including IP-2 iontophoresis pumps (one for each drug delivery channel) and a balance module
Multibarrel glass pipette puller Narishige Model PE-21
LED lamp Technoflux CV-215 5 W, 430-485 nm
MicroFil World Precision Instruments MF34G-5 Flexible plastic needle, 34 AWG
Imalgene Merial Ketamine, 100 mg/mL
Rompun Bayer Xylazine, 20 mg/mL
Gabazine / SR-95531 Sigma S106 Prepare ~ 1000µl of 20 mM gabazine in distilled water and adjust the pH to 4

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References

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तंत्रिका विज्ञान अंक 111 श्रवण उत्तेजना-विशिष्ट अनुकूलन अवर colliculus gabazine निषेध आवृत्ति प्रतिक्रिया क्षेत्र multibarrels टंगस्टन इलेक्ट्रोड synaptic आदानों
Neuronal गतिविधि के बाह्य रिकॉर्डिंग जाग चूहों में neuroactive पदार्थों के Microiontophoretic आवेदन के साथ संयुक्त
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Ayala, Y. A., Pérez-González, D., Duque, D., Palmer, A. R., Malmierca, M. S. Extracellular Recording of Neuronal Activity Combined with Microiontophoretic Application of Neuroactive Substances in Awake Mice. J. Vis. Exp. (111), e53914, doi:10.3791/53914 (2016).

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