Kirurgisk ocklusion av en distal mellersta cerebral artär gren (MCAo) är en ofta använd modell i experimentell stroke forskning. Detta manuskript beskriver den grundläggande tekniken för permanent MCAo, kombinerat med insättning av en lateral kraniell fönster, vilket ger möjlighet för längs intravital mikroskopi i möss.
Fokal cerebral ischemi (dvs ischemisk stroke) kan orsaka allvarliga hjärnskador, vilket leder till en allvarlig förlust av neuronal funktion och följaktligen till en värd av motoriska och kognitiva funktionsnedsättningar. Den höga förekomsten utgör en allvarlig hälsobörda, som stroke är bland de främsta orsakerna till långvarig funktionsnedsättning och död över hela världen en. Återvinning av neuronal funktion är, i de flesta fall endast partiell. Hittills är behandlingsalternativ mycket begränsade, särskilt på grund av den snäva tidsfönster för trombolys 2,3. Fastställande metoder för att påskynda återhämtningen från stroke fortfarande ett utmärkt medicinsk mål; men detta har hindrats av otillräckliga mekaniska insikter i återhämtningsprocessen. Experimentella strokeforskare använder ofta gnagarmodeller av fokal cerebral ischemi. Bortom den akuta fasen, är stroke allt mer fokuserat på subakut och kronisk fas efter cerebral ischemi. De flesta strokeforskare gäller permanent eller transient ocklusion av MCA hos möss eller råttor. Hos patienter, inneslutningar av MCA är bland de vanligaste orsakerna till ischemisk stroke 4. Förutom proximal ocklusion av MCA använder trådmodellen, är kirurgisk ocklusion av distala MCA förmodligen den mest använda modellen i experimentell stroke forskning 5. Ocklusion av en distal (till förgrening av lenticulo-striate artärer) MCA gren reservdelar typiskt striatum och främst drabbar neocortex. Kärlocklusion kan vara permanent eller övergående. Hög reproducerbarhet av skada volym och mycket låga dödstal i förhållande till den långsiktiga resultat är de viktigaste fördelarna med denna modell. Här visar vi hur du utför en kronisk kraniell fönster (CW) förberedelse sidled till sinus sagittalis, och därefter hur man kirurgiskt framkalla en distal slag under fönstret med hjälp av en kraniotomi tillvägagångssätt. Denna metod kan användas för sekventiell avbildning av akuta och kroniska förändringar efter ischemi viaepi-belysning, konfokala laserskanning, och två-foton intravital mikroskopi.
Stroke is among the principal causes of long-term disability and death worldwide1, coming second after coronary heart disease. In addition, stroke is the primary cause of long-term disability, underscoring its tremendous socioeconomic impact6-8. Beyond acute treatment, investigating new approaches and mechanisms to accelerate and enhance recovery after stroke remains a prime medical goal7.
In the last few decades, data from experimental stroke research has contributed substantially to understanding the complex pathophysiological cascades triggered by ischemia9,10. Excitotoxicity, apoptosis, peri-infarct depolarization, and inflammation have been identified as the most relevant mediators of cell death following focal cerebral ischemia. Moreover, using animal models of cerebral ischemia, important concepts, diagnostic modalities, and therapeutic approaches have been developed and validated (e.g., “penumbra” and thrombolysis)11.
The availability of experimental stroke models, combined with non-invasive imaging modalities (e.g., magnetic resonance imaging (MRI), computed tomography, or laser speckle contrast analysis), enables the researcher to investigate hyperacute and chronic pathophysiological changes induced by the ischemic insult in a longitudinal manner12. Along with studying the spatiotemporal profile of the evolving lesion, changes resembling neuronal plasticity can be investigated and correlated to functional outcomes and histological findings. Within the last few years, further methodological advances have been made using the combination of cerebral ischemia models and in vivo microscopy via cranial windows13. These new techniques allow investigators to analyze the neurovascular unit at the cellular and molecular level, with great analytic power in the acute, subacute, and chronic phases following focal cerebral ischemia14. Moreover, in vivo microscopy imaging of microcirculatory dynamics has revealed novel aspects of cerebral microvasculature function and angioarchitecture, with significant pathophysiological relevance15-17.
In this protocol, we present how to perform a chronic CW preparation lateral to the sagittal sinus and how to surgically induce a distal stroke underneath the window. This mouse model can be applied to sequential imaging of acute, subacute, and chronic changes following focal cerebral ischemia via epi-illuminating, confocal laser scanning, and two-photon intravital microscopy.
Stroke är en av de främsta orsakerna till långvarig funktionsnedsättning och död över hela världen en. Utöver akut behandling, undersöka nya metoder och mekanismer för att påskynda och förbättra återhämtningen efter stroke är fortfarande ett utmärkt medicinsk mål 7. Experimentella strokeforskare använder ofta gnagarmodeller av fokal cerebral ischemi. I själva verket, modeller inducerar övergående eller permanent MCAo efterlikna en av de vanligaste typerna av fokal cerebral isc…
The authors have nothing to disclose.
VP is a participant in the Charité Clinical Scientist Program, funded by the Charité – Universitätsmedizin Berlin and the Berlin Institute of Health. TB is an SNSF PostDoc Mobility fellow. The authors receive grant support from EinsteinStiftung/A-2012-153 to PV.
Binocular surgical microscope | Zeiss | Stemi 2000 C | |
Light source for microscope | Zeiss | CL 6000 LED | |
Heating pad with rectal probe | FST | 21061-10 | |
Stereotactic frame | Kopf | Model 930 | |
Anaethesia system for isoflurane | Draeger | ||
Isoflurane | Abott | ||
Dumont forceps #5 | FST | 11251-10 | |
Dumont forceps #7 | FST | 11271-30 | |
Bipolar Forceps | Erbe | 20195-501 | |
Bipolar Forceps | Erbe 20195-022 | ||
Microdrill | FST 18000-17 | ||
Needle holder | FST | 12010-14 | |
5-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
7-0 silk suture | Feuerstein,Suprama | ||
8-0 silk suture | Feuerstein, Suprama | ||
Veterinary Recovery Chamber | Peco Services | V1200 |