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Neuroscience

Subretinal अंतरिक्ष पहुँच के लिए वैकल्पिक और पुष्टि इंजेक्शन विधि Published: December 7, 2016 doi: 10.3791/54808
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1
1Jules Stein Eye Institute, University of California, Los Angeles

Abstract

Subretinal इंजेक्शन सफलतापूर्वक interphotoreceptor / subretinal डिब्बे फोटोरिसेप्टर को प्रत्यक्ष निवेश और रेटिना वर्णक उपकला (RPE) है कि करने के लिए प्रोटीन की उपचारात्मक उपायों, वायरल एजेंटों, और कोशिकाओं देने के लिए दोनों मानव और कृन्तकों में इस्तेमाल किया गया है। plasminogen के subretinal इंजेक्शन के रूप में अच्छी तरह से हाल के प्रीक्लिनिकल और क्लिनिकल परीक्षण की सुरक्षा और / या उन्नत रेटिना की बीमारी के साथ व्यक्तियों के लिए वायरल वैक्टर और स्टेम सेल पहुंचाने की प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया है। रेटिना की बीमारी है, विशेष रूप से वंशानुगत रेटिना अपविकास के माउस मॉडल, इन उपचारों के परीक्षण के लिए आवश्यक हैं। मूषक में सबसे आम इंजेक्शन प्रक्रिया रेटिना को एक पूर्वकाल दृष्टिकोण के साथ छोटे transcorneal या transcleral चीरों का उपयोग है। इस दृष्टिकोण के साथ, इंजेक्शन सुई neurosensory रेटिना अंतर्निहित RPE और प्रविष्टि पर खलल न डालें प्रवेश आसानी से कर सकते निक लेंस, लेंस अपारदर्शन और noninvasive Imagi की हानि के कारणएनजी। एक transcleral के माध्यम से subretinal अंतरिक्ष तक पहुँचने, पीछे दृष्टिकोण से इन समस्याओं से बचा जाता है: सुई, श्वेतपटल पार रेटिना पैठ बिना ऑप्टिक तंत्रिका से लगभग 0.5 मिमी और कांच का खलल न डालें से बचा जाता है। जमानत के नुकसान फोकल sclerotomy और एक क्षणिक, तरल रेटिना टुकड़ी के प्रभाव के साथ जुड़े है कि करने के लिए सीमित है। विधि की सादगी, नेत्र चोट को कम करता है तेजी से रेटिना reattachment और वसूली सुनिश्चित करता है, और एक कम विफलता दर है। रेटिना और RPE करने के लिए कम से कम नुकसान प्रभावकारिता का स्पष्ट निर्धारण और चिकित्सीय एजेंट स्वयं का प्रत्यक्ष प्रभाव के लिए अनुमति देता है। यह पांडुलिपि एक उपन्यास subretinal इंजेक्शन तकनीक है कि, वायरल वैक्टर, औषधीय एजेंट लक्ष्य उच्च प्रभावकारिता, कम से कम क्षति, और तेजी से वसूली के साथ चूहों में subretinal अंतरिक्ष के लिए कोशिकाओं या प्रेरित pluripotent स्टेम (आईपीएस) कोशिकाओं को स्टेम करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का वर्णन है।

Introduction

Subretinal इंजेक्शन चूहों के रेटिना के लिए सेलुलर और वायरल एजेंटों पहुंचाने फोटोरिसेप्टर और अंतर्निहित RPE 1,2 पर उनके प्रभाव का अध्ययन करने के प्राथमिक साधन हैं। चूहों में अधिकांश subretinal इंजेक्शन प्रोटोकॉल एक transcorneal या भूमध्यरेखा के एक transcleral इंजेक्शन साइट पूर्वकाल (चित्रा 1) का उपयोग करें। यह दृष्टिकोण निहित जमानत के नुकसान nicking और लेंस के एवज में झाई, कांच, neurosensory रेटिना और आइरिस, रेटिनल नकसीर, पर्याप्त रेटिना टुकड़ी और स्थायी subretinal शोफ 3-9 के प्रवेश की अखंडता के विघटन भी शामिल है कि हो सकता है। प्रायोगिक जोड़तोड़ आदेश उपचारात्मक उपायों 3,7,10,11 के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए इन प्रभावों को दूर करना होगा। इस अध्ययन के एक विस्तृत वर्णन और एक पीछे transcleral इंजेक्शन तरीका है कि इन जटिलताओं से बचा जाता है की मान्यता प्रदान करता आघात को कम करता है और उप निशाना बनाने का एक उच्च सफलता दर हैरेटिना अंतरिक्ष।

चूहों में subretinal अंतरिक्ष को निशाना इंजेक्शन अक्सर प्रदर्शन करने के लिए बहुत मुश्किल हो जाता है और सबसे जांचकर्ताओं असफल प्रयासों जिसमें वेक्टर कोई गलत स्थान के लिए दिया जाता है या महत्वपूर्ण रेटिना क्षति एक पूरा रेटिना टुकड़ी 6 में उदाहरण के लिए वहाँ है, के एक उच्च आवृत्ति मुठभेड़। क्योंकि इंजेक्शन जटिलताओं के विश्लेषण से बाहर रखा आंखों की संख्या आम तौर पर माउस अध्ययन की रिपोर्ट में नहीं है, लेकिन हमारे अपने अनुभव में और अन्य जांचकर्ताओं के साथ चर्चा में विफल रहा है, इंजेक्शन की संख्या में 50% के रूप में उच्च हो सकता है और अनुभव पर निर्भर भिन्न हो सकते हैं और अन्वेषक जो इंजेक्शन प्रदर्शन कर रहा है की क्षमताओं। इंजेक्शन की सफलता के लिए आम तौर पर प्रत्यक्ष बुध्न इमेजिंग और / या ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (अक्टूबर) 7.9 से मूल्यांकन किया है। चूहों में subretinal इंजेक्शन के लिए उच्च सफलता दर के साथ एक आसानी से महारत हासिल विधि प्रयोग की रफ्तार बढ़ और tre के preclinical अध्ययन की लागत कम कर सकते हैंरेटिना रोगों है कि संयुक्त राज्य अमेरिका में अंधापन का प्रमुख कारण होते हैं के लिए atments।

पीछे, transcleral subretinal इंजेक्शन तकनीक यहाँ वर्णित नैदानिक और preclinical प्रोटोकॉल 9,12 से एक रूपांतर है। noninvasive नैदानिक ​​इंजेक्शन चूहों में प्रदर्शन के आकलन हल्के और अत्यधिक स्थानीय क्षति का प्रदर्शन और अतिरिक्त जमानत लेंस, रेटिना और RPE चोट की कमी है। (- 90% या बेहतर 80) है, जिससे इस तरह के अध्ययन के साथ जुड़े लागत को कम करने के अलावा, अपेक्षाकृत थोड़ा अभ्यास के साथ, एक प्रयोगकर्ता एक उच्च सफलता दर के साथ इन परिणामों को प्राप्त कर सकते हैं। यह प्रक्रिया preclinical अध्ययन में फोटोरिसेप्टर और / या RPE करने के लिए, सेलुलर वायरल, या औषधीय उपचारात्मक उपायों वितरित करने के लिए और आसानी से प्रयोगात्मक हस्तक्षेप का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

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Protocol

पशु: जंगली प्रकार C57BL / 6J चूहों लॉस एंजिल्स में कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय (यूसीएलए) में पैदा की। 17 सप्ताह पुरानी है, और पुरुष और महिला चूहों शामिल - सभी जानवरों 11 के बीच थी। सभी चूहों समूह रखे, भोजन और पानी यथेच्छ के साथ एक 12:12 / प्रकाश अंधेरे चक्र में बनाए रखा गया। सभी प्रयोगों नेत्र और विजन रिसर्च में जानवरों के इस्तेमाल के लिए यूसीएलए और विजन में अनुसंधान के लिए एसोसिएशन और नेत्र विज्ञान वक्तव्य के संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार में प्रदर्शन किया गया।

नोट: सभी दवाओं और इंजेक्शन एजेंटों संयुक्त राज्य अमेरिका फार्माकोपिया (खासियत) ग्रेड रहे हैं।

1. शल्य चिकित्सा की तैयारी

  1. एक नमकीन मिश्रण में 100 मिलीग्राम / किग्रा ketamine और 8 मिलीग्राम / किलो xylazine की intraperitoneal इंजेक्शन के साथ माउस anesthetize। गहराई माउस कोई पैर की अंगुली चुटकी या कार्निया स्पर्श सजगता है कि इस तरह के संज्ञाहरण प्रशासन।
  2. एक घूम पानी पैड के साथ 37.0 डिग्री सेल्सियस पर शरीर का तापमान बनाए।
  3. साथ 2.5% phenylephrine आंख डी विद्यार्थियों चौड़ा करनाrops और ट्रिम मूंछ दृश्य की सुविधा के लिए। मूंछ, माउस के लिए महत्वपूर्ण संवेदी इनपुट प्रदान इसलिए, गलमुच्छा trimming कि आंखों के लिए ब्लॉक स्पष्ट का उपयोग, और गलमुच्छा के आधार पर न केवल भाग को दूर करना चाहिए। हमारे अनुभव में, चूहों इस प्रक्रिया के बाद सामान्य वसूली दिखा। Methylcellulose आंख लागू सूखापन को रोकने और संवेदनाहारी प्रेरित क्षणिक मोतियाबिंद 13 को कम करने के लिए चला जाता है।
  4. सर्जरी (यानी, betadine और इथेनॉल या गर्म मोती) से पहले उपकरणों जीवाणुरहित।
  5. पतला fluorescein (0.01% 0.9% खारा का उपयोग) एक बाँझ वातावरण में तैयार (यानी, जैव सुरक्षा कैबिनेट) यदि दृश्य प्रदर्शन किया जाएगा (नीचे धारा 3 देखें)।

2. इंजेक्शन साइट तैयारी

  1. उचित इंजेक्शन की मात्रा (जैसे, 0.3 करने के लिए 1.0 μl) के साथ एक सिरिंज (जैसे, 5 μl सिरिंज) तैयार करें।
  2. माउस की स्थिति तो आंख सामना करना पड़ रहा है और Di में स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा हैमाइक्रोस्कोप ssecting।
  3. धीरे ठीक इत्तला दे दी संदंश के साथ लौकिक कंजाक्तिवा चुटकी। घुमावदार Vannas कैंची का उपयोग लगभग 90 डिग्री के एक परिधीय चीरा।
  4. अंतर्निहित चूल के कैप्सूल के साथ दोहराएँ कदम 2.3।
  5. ठीक इत्तला दे दी संदंश के साथ आसपास के संयोजी ऊतक बांटना जबकि नाक से दुनिया भर में घूर्णन। इंजेक्शन साइट लगभग 0.5 मिमी ऑप्टिक तंत्रिका लौकिक की ओर काम करते हैं। रेट्रो कक्षीय साइनस में खलल न डालें से बचने के लिए बड़ी सावधानी का प्रयोग करें।

3. Sclerotomy और subretinal इंजेक्शन

नोट: यह सिफारिश की है कि 0.9% खारा में 0.01% fluorescein के इंजेक्शन दृश्य के साथ सहायता के लिए इस प्रक्रिया सीखने जबकि इस्तेमाल किया जाएगा। fluorescein के स्थलाकृतिक वितरण को प्रभावी ढंग से बुध्न इमेजिंग (नीचे धारा 4 देखें) के साथ प्रलेखित किया जा सकता।

  1. धीरे से एक 22.5 डिग्री नेत्र ब्लेड के साथ eyecup scratching द्वारा इंजेक्शन स्थल पर एक छोटा सा scleral चीरा। यह चीरा दिवाकेवल पर्याप्त बड़ी सुई की नोक श्वेतपटल के माध्यम से पारित करने के लिए अनुमति देने के लिए हो LD।
  2. Beveled 33 जी सुई (angled 5 डालें -। 10 डिग्री के उठाव का सामना करना पड़ और रेटिना को कोणीय समानांतर के साथ sclerotomy में वांछित मात्रा इंजेक्ट (जैसे, सीखने प्रयोजनों के लिए 0.01% Fluorescein के 0.3 से 1.0 μl)।
    नोट: अच्छी तरह से एक उपयुक्त विलायक और प्रत्येक इंजेक्शन से पहले डि पानी की लगातार washes के साथ सफाई से सिरिंज के बाँझपन बनाए रखें।
  3. सुई ले जाए बिना और यहां तक ​​कि दबाव के साथ सवार धीरे धीरे (ओवर ~ 3 सेकंड) दबाना।
    नोट: जब सुई subretinal अंतरिक्ष में है, एक मामूली प्रतिरोध जबकि सवार निराशाजनक महसूस किया जाएगा। वहाँ कम से कम प्रतिरोध करने के लिए नहीं किया जाएगा सुई रेटिना, और उच्च प्रतिरोध punctures अगर सुई श्वेतपटल या RPE घुसना नहीं करता है।
  4. सुई वापस लेने backflow को कम करने से पहले कई सेकंड रुको।
  5. बाँझ खारा बफर के साथ नजर कुल्ला और आंख ज सुनिश्चितवापस अपनी सामान्य स्थिति में घुमाया जाता है।

अक्टूबर और बुध्न इमेजिंग द्वारा रेटिना टुकड़ी का आकलन 4.

  1. तुरंत इंजेक्शन की गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए इंजेक्शन के बाद और उचित समय पर अक्टूबर इमेजिंग प्रदर्शन के बाद इंजेक्शन के रूप में रेटिना संरचना का मूल्यांकन करने की जरूरत बताते हैं।
    नोट: इसी तरह के अध्ययन में अक्टूबर के उपयोग के उदाहरण पहले से 7,14 वर्णित किया गया है।
    1. समायोजित करें और इंजेक्शन के स्थल को निशाना लिए OCT छवि संरेखित। इंजेक्शन साइट midline और 0.5 मिमी ऑप्टिक तंत्रिका सिर के लिए अस्थायी होना चाहिए। यदि टुकड़ी फ्रेम से बाहर है की जरूरत है या नहीं के रूप में बेहतर केंद्रित दोहराएँ।
  2. रेटिना टुकड़ी कल्पना और एन चेहरे बुध्न इमेजिंग 7,14 के साथ इंजेक्शन क्षेत्र डाई।
    नोट: एक अक्टूबर इमेजिंग प्रणाली उपलब्ध नहीं है, तो अभ्यास के लिए एक वेक्टर के साथ fluorescein की एक छोटी राशि के इंजेक्शन किसी भी बुध्न कैमरा है कि fluorescein Angio करता है के साथ दृश्य की अनुमति देगाएक ही उत्तेजना तरंग दैर्ध्य का उपयोग कर और फिल्टर अवरुद्ध ग्राफी। हाइपर-प्रतिदीप्ति के स्थानीय क्षेत्रों वाहिका के नीचे दिखाई देगा और वाहिका तेज और विशिष्ट सीमाओं subretinal अंतरिक्ष सही ढंग से लक्षित है, तो होगा। इंजेक्शन से छाला के किनारे hypo- प्रतिदीप्ति के लिए अति से संक्रमण द्वारा सीमांकन कर दिया जाएगा। कई उपकरणों माउस के लिए इस क्षमता प्रदान करते हैं; यहां इस्तेमाल इंस्ट्रूमेंटेशन कहीं और 14 में वर्णित है।

5. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल

  1. इंजेक्शन आंख की कॉर्निया की सतह के लिए ट्रिपल एंटीबायोटिक नेत्र क्रीम की एक मोटी कोट लागू करें।
  2. वसूली के लिए स्वच्छ एकान्त पिंजरों में चूहों रखें। चूहों कि सर्जरी, जब तक वे पूरी तरह से ठीक कर रहे हैं आया है गठबंधन नहीं है।
  3. संज्ञाहरण वसूली के दौरान श्वसन और तापमान की निगरानी। जानवरों पर नजर रखने के लिए जब तक वे स्टर्नल लेटना बनाए रख सकते हैं।
  4. अतिरिक्त उचित पोस्ट ऑपरेटिव निगरानी प्रदर्शनऔर शल्य चिकित्सा के बाद दर्द प्रबंधन के लिए Carprofen की एक उप-त्वचीय इंजेक्शन (5 मिलीग्राम / किग्रा) सहित उपचार,।

Electroretinography द्वारा रेटिना समारोह के 6. आकलन (एर्ग)

  1. एर्ग विश्लेषण पूर्व इंजेक्शन प्रदर्शन और उचित समय पर बाद इंजेक्शन के रूप में रेटिना समारोह का मूल्यांकन करने की जरूरत है। अगर इंजेक्शन subretinal अंतरिक्ष में बनाया गया था, रेटिना टुकड़ी 72 घंटा के भीतर हल करना चाहिए।
    1. पहले और इंजेक्शन के बाद के रूप में पहले 14,15 वर्णित रेटिना समारोह का मूल्यांकन करने के लिए मानक एर्ग तकनीकों का प्रयोग करें।

7. 3 डी पुनर्निर्माण और छाला मात्रा मात्रा

नोट: OCT उच्च विपरीत देखने की सीमा के भीतर पूरी टुकड़ी को शामिल के साथ स्कैन का उपयोग के लिए उपयोगी हैं। ImageJ / फिजी 17,18 और Imaris इस्तेमाल किया गया है, लेकिन अन्य सॉफ्टवेयर का इस्तेमाल किया जा सकता है।

  1. निर्यात ब्याज की बी-स्कैन, ImageJ / फिजी और फसल (छवि> फसल) अक्टूबर अनुसूचित जाति के हिस्से के लिए आयातएक आयताकार चयन उपकरण का उपयोग कर मॉडलिंग किया जाना है।
    1. समायोजित विपरीत (छवि> समायोजित> चमक / विपरीत) और एक लाइन के साथ दो वर्गों को जोड़ने से किसी भी लापता सीमाओं को चित्रित।
    2. लाइन उपकरण (पकड़े पारी) के साथ एक सीधी रेखा है कि फोटोरिसेप्टर परत करने के लिए RPE तक फैला ड्रा। उपाय (विश्लेषण> उपाय) लाइन की लंबाई 7.8 कदम के लिए अधिकतम टुकड़ी का आकार प्राप्त करने के लिए।
  2. आयात फसली 3 डी पुनर्निर्माण सॉफ्टवेयर करने के लिए फ्रेम (सामग्री की तालिका देखें) "ग्रे आरजीबी" प्लगइन और MATLAB संकलक क्रम का उपयोग कर।
  3. voxel आकार (छवि गुण के तहत) अक्टूबर स्कैन (एक्स, वाई, जेड) से अंशांकन मापदंडों का उपयोग कर सेट करें।
  4. प्रत्येक चैनल के लिए "आरजीबी ग्रे करने के लिए" प्लगइन (छवि गुण के तहत), बराबर भार के साथ निष्पादित, चौथी चैनल बनाने के लिए। मूल लाल-हरे-नीले चैनलों को हटाएँ।
  5. इसके विपरीत परिवर्तन का उपयोग कर ग्रे चैनल उलटें। दुकान छवि।
  6. "एक जोड़ें क्लिक करेंईडब्ल्यू सतह "3 डी दृश्य टैब में बटन, और सतह बनाने के निर्देशित 4 कदम प्रक्रिया शुरू करते हैं।
    1. सतह स्तर पर विस्तार (4 कदम का 1) की स्थापना की।
      नोट: हमारे अनुभव में 8.0 12.0 करने के लिए सबसे प्रभावी सीमा था।
    2. अधिकतम क्षेत्र आकार (पृष्ठभूमि चयन) के तहत अधिकतम टुकड़ी आकार 7.1.2 में मापा तुलना में थोड़ा कम करने के लिए सेट करें। सतह बनाने और ग्रे चैनल उलटा (चरण 4 का 2) पूर्ववत।
    3. अधिकतम मूल्य के लिए सीमा निर्धारित करें, ताकि रेटिना के बाहर नकारात्मक रिक्त स्थान है और सेना की टुकड़ी की सतह से संपर्क (4 के चरण 3) में नहीं आते हैं।
    4. voxels की संख्या के फिल्टर प्रकार निर्धारित करें और आकार से सेना की टुकड़ी साइट में नकारात्मक अंतरिक्ष अलग। सतह (चरण 4 के 4) समाप्त।
      नोट: सेना की टुकड़ी की सतह की मात्रा आंकड़ों टैब में मात्रा के नीचे स्थित है।

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Representative Results

पीछे दृष्टिकोण transcleral subretinal इंजेक्शन 0.3 μl (एन = 18), 0.5 μl (एन = 8) और 1.0 0.01% fluorescein के μl (एन = 5) के इंजेक्शन के साथ 16 जंगली प्रकार चूहों से 31 स्वस्थ आंखों पर प्रदर्शन किया गया। एक आंख के लिए एक पूर्व मौजूदा कार्निया अस्पष्टता है कि संरचनात्मक और कार्यात्मक विश्लेषण के कारण रोका इंजेक्शन से बाहर रखा गया था। हर इंजेक्शन आँख इस रिपोर्ट में शामिल है। कोई अनायास ही रेटिना टुकड़ी, neurosensory रेटिना, या शीशे में रिसाव के छिद्र का पता चला है और न ही लेंस Nicking, भड़काऊ प्रतिक्रियाओं, यूवाइटिस, या शल्य चिकित्सा के बाद संक्रमण के किसी भी मनाया आँखों में से किसी का सबूत था।

रेटिना संरचना पूर्व इंजेक्शन, 10 मिनट के बाद इंजेक्शन और 4 सप्ताह के बाद इंजेक्शन अक्टूबर इमेजिंग का उपयोग (आंकड़े 2 और 3) मूल्यांकन किया गया था। एक 9 सूत्री ग्रिड, अधिक से अधिक सेना की टुकड़ी के केंद्र overlying केंद्र बिंदु के साथ, 10 मिनट पर रखा गया थाबाद इंजेक्शन एन चेहरे स्कैन (चित्रा 2 बी)। संवहनी स्थलों, पूर्व इंजेक्शन और 4 सप्ताह के बाद इंजेक्शन स्कैन का उपयोग करते हुए 10 मिनट के बाद इंजेक्शन स्कैन के साथ पंजीकरण में होना घुमाया गया। यह ठीक है कि पूर्व और बाद इंजेक्शन रेटिना स्कैन (चित्रा 2A, सी) में एक ही स्थानों की पहचान की अनुमति दी।

Subretinal इंजेक्शन छाला गठन में हुई है कि जहां सुई subretinal अंतरिक्ष (चित्रा 2 बी तीर) में प्रवेश किया इंजेक्शन साइट से दूर केंद्रित था, और एक उथले टुकड़ी एक विस्तारित क्षेत्र में खींच या गुंबददार (चित्रा 3 बी के साथ या तो फ्लैट (चित्रा 3 ए) थे - डी) एक विवश क्षेत्र में गहरी टुकड़ी (तालिका 1) के साथ। एक गुंबददार छाला किसी भी टुकड़ी कि 50 माइक्रोन RPE के लिए orthogonal को पार कर के रूप में परिभाषित किया गया था। कोई धब्बे, एक लहराती पैटर्न बाहरी रेटिना परतों की खींच द्वारा उत्पादित, मनाया गया। भूतपूर्वइंजेक्शन बयान के तम्बू एन चेहरे अक्टूबर (चित्रा 2 डी, धराशायी लाइन), fluorescein बुध्न इमेजिंग (चित्रा 2 ई) और अक्टूबर बी-स्कैन (चित्रा 3) के साथ कल्पना की गई थी। blebs के बहुमत (31 से 29) अक्टूबर स्कैन, जो माउस रेटिना के लगभग 10% धरना के मद्देनजर क्षेत्र से आगे बढ़ाया। अधिक से अधिक मात्रा में इंजेक्शन (तालिका 1) के साथ गुंबददार blebs की वृद्धि की आवृत्ति के अलावा अन्य छाला आकार पर कोई नियंत्रण नहीं था। सभी blebs 2 सप्ताह के द्वारा हल (डेटा) नहीं दिखाया।

कुल रेटिना मोटाई (Bruch के तंत्रिका फाइबर परत करने के लिए झिल्ली) मात्रात्मक में ग्रिड वर्तमान पर प्रत्येक बिंदु पर 0.3 μl (चित्रा 3 ए), 0.5 μl (चित्रा 3 बी) और 1.0 μl (चित्रा 3 सी) इंजेक्शन की मात्रा के लिए 4 सप्ताह इंजेक्शन के बाद मूल्यांकन किया गया था इसी बी-स्कैन (1 टेबल)। प्रतिशत के अंतर (% Δ) wके रूप में दोनों के रूप में संरचनात्मक और कार्यात्मक मैट्रिक्स के लिए पूर्व इंजेक्शन माप के अंतर रिश्तेदार गणना की थी। सब ग्रिड अंक सभी इमेजिंग सत्र के दौरान हासिल किया गया नहीं। उदाहरण के लिए, 3 आँखों 1 या 2 अंक था, 4 आंखें 3 या 4 अंक था, और 23 आंखों के सभी स्कैन में 5 से 9 तक अंक था। के बाद से कुल रेटिना मोटाई पूर्व और बाद के इंजेक्शन के लिए काफी अलग नहीं था गुंबददार और फ्लैट blebs, और इंजेक्शन की मात्रा, ध्वस्त हो गया, हालांकि रेटिना पतले होने की दिशा में एक समग्र प्रवृत्ति दोनों (तालिका 2) के लिए मनाया गया।

आगे के विश्लेषण ± 6.5% की छोटी लेकिन महत्वपूर्ण सांख्यिकीय पतले होने से पता चला 1.9 समग्र (पूर्व = 196 ± 1, एन = 31; पोस्ट = 183 ± 4, एन = 31, टी 60 = 3.4, पी = 0.001) (3 टेबल)। जहां निर्धारित करने के रेटिना thinning हुई, कि सभी 9 ग्रिड अंक के लिए मोटाई माप निहित 10 आंखों की एक सबसेट विश्लेषण किया गया था। सब आँखों के लिए विश्लेषण करने के लिए भी इसी तरह,आँखों के सबसेट भी (± 3.5 10.3% पूर्व = 199 ± 1, एन = 10; पोस्ट = 179 ± 8, एन = 10, टी 18 = 2.4, पी = 0.02) छोटी लेकिन महत्वपूर्ण समग्र रेटिना thinning दिखाया। कोई रेटिना thinning इंजेक्शन साइट के लिए बाहर का स्थलों पर मनाया गया (± 4.0 7.2%, पूर्व = 199 ± 2 n = 10; पोस्ट = 185 ± 8, एन = 10, टी 18 = 1.7, पी = 11)। रेटिना thinning अधिक से अधिक रेटिना टुकड़ी के स्थल पर मनाया गया (11.2% ± 5.0, पूर्व = 201 ± 2 n = 10; पोस्ट = 179 ± 10, एन = 10, टी 18 = 2.1, पी = 0.04), इंजेक्शन साइट क्षति के बिना (13.8 ± 6.0, पूर्व = 201 ± 1, एन = 4; पोस्ट = 173 ± 10, एन = 4, टी 6 = 2.8, पी = 0.03), रेटिना का एक छोटा सा क्षेत्र है जब रेटिना क़ैद के साथ इंजेक्शन साइटों और इंजेक्शन scarring के साथ साइटों (26.5%, (पोस्ट = 171 ± 3, एन = 3, टी 4 = 8.9, पी = 0.001 1.0, पूर्व = 199 ± 1, एन = 3 ± 14.1%) सुई वापसी पर श्वेतपटल के माध्यम से निकाला ± 1.6, पूर्व = 200 ± 3, एन = 3; पीओएसटी = 147 ± 10, एन = 3, टी 4 = 5.1, पी = 0.007)। कुल में, incarcerations 31 में से 14 इंजेक्शन, जिनमें से 3 बाहरी परतों रेटिना (चित्रा 3E) के आधे तक की हानि के साथ रंजित के निशान गठन के परिणामस्वरूप में हुई। प्रत्येक उदाहरण में, हालांकि, इन अत्यधिक स्थानीय प्रभाव थे।

पूरे क्षेत्र electroretinography इंजेक्शन से पहले प्रदर्शन किया और 4 सप्ताह कार्यात्मक परिवर्तन (तालिका 1) का आकलन करने के लिए एक आँख के लिए व्यक्तिगत रूप से मूल्यांकन रिश्तेदार परिवर्तन के साथ इंजेक्शन के बाद दोहराया गया था। केवल काले अनुकूलित और रॉड की मध्यस्थता की प्रतिक्रियाएं दर्ज किए गए। तीव्रता प्रतिक्रिया कार्यों दोनों फोटोरिसेप्टर (एक -waves) और मध्य रेटिना (ख -waves) के लिए Vmax प्राप्त करने के लिए Michaelis-Menten समीकरणों के साथ लगे थे। उत्तर करने छाला आकार से प्रभावित नहीं थे और इसलिए ढह गया (तालिका 4)। पर Vmax में एक छोटी लेकिन सांख्यिकीय महत्वपूर्ण कमी नहीं थीएक -waves (एफ (1, 28) = 7.1, पी = 0.013) नहीं बल्कि ख -waves (एफ (1, 28) = 4.0, पी = 0.055) इंजेक्शन के बाद (तालिका 4)। पूर्व और 0.3 μl, 0.5 और 1.0 μl μl के बाद इंजेक्शन के लिए प्रतिनिधि waveforms (चित्रा 4) दिखाए जाते हैं। और ख -waves (एफ (2, 28) = 6.2, पी = 0.006 और एफ (2, 28) = 8.8, पी = 0.001, क्रमशः) - दोनों एक पर इंजेक्शन की मात्रा का एक प्रभाव था।

अन्त में, 3 डी मॉडलिंग दोनों गुंबददार और फ्लैट blebs की संरचना कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। एक गुंबददार छाला (चित्रा 5 ए) का एक उदाहरण एक गुंबददार तरल पदार्थ से भरे टुकड़ी स्कैन क्षेत्र के भीतर निहित पता चलता है। फ्लैट blebs (चित्रा 5 ब, सी) से उदाहरण उथले तरल पदार्थ से भरे क्षेत्रों है कि स्कैन के क्षेत्र से परे का विस्तार दिखा। जब रेटिना क़ैद होती है, पुनर्निर्माण में एक छोटा सा छेद देखा जाता है (चित्रा 5C)। कृत्रिम सीमाओं एक टी स्कैन के किनारे पर दिखाए जाते हैंओ पुनर्निर्माण (चित्रा 5C) की अनुमति है। इन नमूना इंजेक्शन से छाला की मात्रा की गणना संकेत दिया कि 0.15 μl और 0.01 μl की एक न्यूनतम सफलतापूर्वक 0.3 μl, गुंबददार और फ्लैट blebs में जिसके परिणामस्वरूप क्रमश इंजेक्शन के लिए subretinal अंतरिक्ष को निशाना बनाया गया था। के रूप में मानव subretinal इंजेक्शन में होता है गणना की संभावना इंजेक्शन की मात्रा प्रक्रिया के दौरान इमेजिंग और पुनर्निर्माण, तरल पदार्थ के अवशोषण के संकल्प के कारण वास्तविक मात्रा underestimates, और फ्लैट या गुंबददार blebs के लिए विशेष रूप से, पूरी टुकड़ी अक्टूबर स्कैन में प्रतिनिधित्व नहीं किया गया था।

तालिका एक
टेबल subretinal इंजेक्शन के 1. कार्यात्मक और संरचनात्मक प्रभाव नेत्र द्वारा। व्यक्तिगत आँखों के मेट्रिक्स और subretinal इंजेक्शन से उनके परिणामों। प्रकाश में रेटिना की प्रतिक्रियाएं (मध्य रेटिना ख -waves और एक -wave फोटोरिसेप्टरएस) और रेटिना मोटाई माप (तंत्रिका फाइबर की परत को Bruch झिल्ली) दिया जाता है। फुटनोट:
एक बीटी = छाला प्रकार, फ्लैट (एफ) या गुंबददार (डी)
ख #gp = ग्रिड अंकों की संख्या मापा
* इंजेक्शन की मात्रा के पुनर्निर्माण के लिए प्रयोग किया जाता है आंखें।
** केवल 1 ग्रिड बिंदु निशान पर माप के लिए उपलब्ध है।
निशान गठन के साथ # आंखें।

पहर गुंबददार छाला फ्लैट छाला 0.3 μl 0.5 μl 1.0 μl
(माइक्रोन) (माइक्रोन) (माइक्रोन) (माइक्रोन) (माइक्रोन)
पूर्व इंजेक्शन 194 ± 2 197 ± 3 195 ± 1 197 ± 1 197 ± 3
बाद इंजेक्शन 176 ± 8 188 ± 3 180 ± 6 184 ± 5 192 ± 5

तालिका 2 कुल रेटिना मोटाई पर subretinal इंजेक्शन के प्रभाव। छाला आकार और मोटाई रेटिना पर इंजेक्शन की मात्रा का विश्लेषण।

मोटाई (माइक्रोन)
साइट n (आंखें) पूर्व 4 विकेटकीपर Δ % Δ
रेटिना (सभी सहमत अंक) 31 196 ± 1 183 ± 4 -13 ± 4 -6.5 ± 1.9
सभी 9 ग्रिड अंक के साथ रेटिना * 10 199 ± 1 179 ± 8 -20 ± 7 -10.3 ± 3.5
इंजेक्शन के लिए बाहर * 10 199 ± 2 185 ± 8 -14 ± 7 -7.2 ± 4.0
अधिकतम टुकड़ी * 10 201 ± 2 179 ± 10 -22 ± 9 -11.2 ± 5.0
क्षति के बिना इंजेक्शन * 4 201 ± 1 173 ± 10 -28 ± 12 -13.8 ± 6.0
इंजेक्शन में क़ैद * 3 199 ± 1 171 ± 3 -28 ± 2 -14.1 ± 1.0
इंजेक्शन पर निशान * 3 201 ± 3 147 ± 10 -53 ± 10 -26.5 ± 1.6

तालिका 3. रेटिना संरचना पर नुकसान का प्रभाव। साइट पर निर्भर रेटिना पतले होने का विश्लेषण। फुटनोट: * सभी 9 ग्रिड अंक से डेटा के साथ 10 चूहों से विश्लेषण।

Vmax (μV) गुंबददार (एन = 12) फ्लैट (एन = 6) 0.3 μl (एन = 18) 0.5 μl (एन = 8) 1.0 μl (एन = 5)
एक -waves
पूर्व इंजेक्शन -338 ± 13 -351 ± 13 -347 ± 9 -334 ± 16 -425 ± 15
बाद इंजेक्शन -311 ± 8 -321 ± 16 -318 ± 11 -318 ± 18 -355 ± 29
ख -waves
पूर्व इंजेक्शन 604 ± 30 578 ± 11 595 ± 20 542 ± 26 708 ± 21
बाद इंजेक्शन 537 ± 35 551 ± 15 542 ± 24 538 ± 31 612 ± 45

भीतर-पेज = "1"> टी Scotopic पर subretinal इंजेक्शन के लिए सक्षम 4. प्रभाव रॉड की मध्यस्थता एक - और ख -waves। छाला आकार और प्रकाश के लिए रेटिना प्रतिक्रियाओं पर इंजेक्शन की मात्रा (मध्य रेटिना ख -waves और फोटोरिसेप्टर एक -waves) का विश्लेषण।

आकृति 1
चित्रा 1. subretinal इंजेक्शन की योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। सॉकेट में एक चूहे के आंखों की एक ऊपर से नीचे योजनाबद्ध में दृष्टिकोण से पता चलता पारंपरिक subretinal इंजेक्शन, (तीर एक) या transcleral (तीर ख) pars प्लाना के पास इंजेक्शन साइट एक transcorneal का उपयोग कर। इस पद्धति का एक transcleral नाक से आंख घूर्णन पीछे ध्रुव को बेनकाब करने के द्वारा प्राप्त पीछे ध्रुव (तीर सी) के पास दृष्टिकोण का उपयोग करता है।लेस / ftp_upload / 54808 / 54808fig1large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2 अक्टूबर छवियाँ का पंजीकरण मोटाई विश्लेषण के लिए रेटिना साइटों की पहचान देता है। एसी, एन मूल ओरिएंटेशन में माउस 1OS के चेहरे अक्टूबर छवि। ए) इनकार पंजीकरण ग्रिड के साथ रेटिना पूर्व इंजेक्शन की छवि। बी) रेटिना 10 मिनट के बाद इंजेक्शन की छवि। एक 9 सूत्री ग्रिड अधिक से अधिक रेटिना टुकड़ी के स्थल पर केंद्र बिंदु के साथ तैनात किया गया था। इंजेक्शन साइट दिखाई (तीर) है। सी) रेटिना 4 सप्ताह इनकार पंजीकरण ग्रिड के साथ के बाद इंजेक्शन की छवि। डे, माउस 9OS की छवियों। डी) एन चेहरे अक्टूबर रेटिना 4 सप्ताह के बाद इंजेक्शन subretinal टुकड़ी का विस्तार दिखा की छवि। ई)बुध्न (हरा) का और एन रेटिना 10 मिनट के बाद इंजेक्शन के चेहरे अक्टूबर छवियों ओवरले। स्केल बार = 100 माइक्रोन। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. subretinal इंजेक्शन मिनिमल रेटिना पतले साथ अस्थाई रेटिना टुकड़ी कारण। अधिक से अधिक रेटिना टुकड़ी के स्थल पर प्रतिनिधि अक्टूबर बी-स्कैन पूर्व इंजेक्शन, 10 मिनट के बाद इंजेक्शन और 4 सप्ताह के बाद इंजेक्शन के लिए दिखाए जाते हैं। ए) के गठन और 0.3 μl इंजेक्शन से एक फ्लैट छाला का संकल्प। बी) के गठन और एक 0.5 μl इंजेक्शन से एक गुंबददार छाला का संकल्प। सी) संरचना और एक 1.0 μl इंजेक्शन से एक गुंबददार छाला का संकल्प। डी) गंभीर चो का उदाहरणroidal scarring और इंजेक्शन स्थल पर रेटिना thinning। स्केल बार = 100 माइक्रोन। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4. Retinas छाला संकल्प के बाद सामान्य कार्य को बनाये रखें। Scotopic रॉड की मध्यस्थता प्रतिक्रिया के लिए waveforms पूर्व इंजेक्शन (काला लाइन) और 4 सप्ताह एक के लिए बाद इंजेक्शन (लाल धराशायी लाइन)) 0.3 μl, बी) के 0.5 μl और सी) 9 रोशनी से लेकर तीव्रता 1.0 μl इंजेक्शन के लिए दिखाए जाते हैं, 4.37 x 10 -6 के लिए 0.51 सीडी / एम 2। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।


चित्रा 5. blebs के 3D पुनर्निर्माण। ए) सॉफ्टवेयर जनित प्रतिनिधि एक के 3D पुनर्निर्माण) गुंबददार और बी, सी) 0.3 μl इंजेक्शन से फ्लैट blebs। काटने का निशान पुनर्निर्माण सॉफ्टवेयर का एक विरूपण साक्ष्य है। कृत्रिम सीमाओं सी में रखा गया पुनर्निर्माण की अनुमति है। स्केल बार = 150 माइक्रोन। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

Subretinal इंजेक्शन वायरल वैक्टर के वितरण के लिए पसंद की विधि हैं और फोटोरिसेप्टर और दोनों बुनियादी अनुसंधान और चिकित्सीय उपचार में RPE जोड़ तोड़ के लिए सेल व्युत्पन्न चिकित्सा स्टेम। रोगियों में, subretinal इंजेक्शन आम तौर पर एक पूर्वकाल sclerotomy साथ pars प्लाना में प्रत्यक्ष दृश्य के साथ सुई द्वारा किया जाता है, एक पीछे कोर vitrectomy और रेटिना की पैठ। सबसे vitrectomy प्रक्रियाओं के साथ के रूप में, यह आम है मोतियाबिंद गठन को समय से पहले होने के लिए जब तक आंख पहले से ही pseudophakic है। चूहों में, subretinal इंजेक्शन पारंपरिक रूप से रेटिना को sclerotomy पूर्वकाल, अक्सर लेंस है, जो आंख के पीछे गुहा के बहुमत में रह रहे दोनों Nicking के साथ जुड़े एक विधि है, और transretinal पैठ है कि कांच का फंसाने और पूरा करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं के साथ किया जाता है रेटिना टुकड़ी। का प्रयोग चूहों में एक पीछे-दृष्टिकोण तकनीक इन अवांछित परिणामों को कम करता है और एफई व्याख्या करने की क्षमता में सुधारइरादा गड़बड़ी की fects।

Subretinal इंजेक्शन तकनीक यहां बताया के लाभ कम से कम संरचनात्मक या कार्यात्मक प्रभाव और कम जमानत के नुकसान शामिल हैं (जैसे, लेंस Nicking, कांच का लीक या सूजन से झाई युक्त) है कि प्रयोगात्मक परिणामों और तेजी से वसूली समय की आसान आकलन अनुमति देता है। इस तकनीक को आंख का अधिक से अधिक हेरफेर की आवश्यकता पीछे ध्रुव तक पहुंचने के लिए, लेकिन लगभग 10 में पूरा किया जा सकता है - 15 एक उच्च सफलता दर के साथ आंख प्रति मिनट के रूप में कोई आँखों विश्लेषण से खारिज कर दिया गया। इंजेक्शन के बहुमत में, सामान्य रेटिना संरचना और समारोह 4 हफ्तों के भीतर मनाया गया। संरचना और समारोह की वसूली के लिए 8 सप्ताह या एक वसूली समय 6.7 रिपोर्ट नहीं है - तुलना करके, पिछले अध्ययनों 5 की रिपोर्ट। नतीजतन, प्रयोगों कम जानवरों के साथ कम समय में पूरा किया जा सकता है।

इस subretinal इंजेक्शन तकनीक की जटिलताओं निशान गठन और की हानि शामिलइंजेक्शन के लगभग 10% में फोटोरिसेप्टर, महत्वपूर्ण संरचनात्मक और कार्यात्मक घाटे के केवल तीन मामलों के साथ। रेटिना केवल सबसे बड़ा निशान पूर्व इंजेक्शन की तुलना में फोटोरिसेप्टर प्रतिक्रिया के 80% और भीतर रेटिना प्रतिक्रिया के 77% करने के लिए समारोह में कमी के साथ प्रकाश के लिए सामान्य प्रतिक्रियाओं को बनाए रखा। रेटिना incarcerations, हर इंजेक्शन के लिए एक नई सुई के उपयोग के साथ कम किया जा सकता है, हालांकि इस वर्तमान अध्ययन में मूल्यांकन नहीं किया गया। वैकल्पिक रूप से, वे नकारात्मक दबाव के कारण हो सकता है और इस तरह अपरिहार्य हो। Incarcerations मानव subretinal इंजेक्शन में बहुत आम हैं, तथापि, क्योंकि आंख के बड़े आकार के, incarcerations कुल रेटिना को कम नुकसान प्रतिनिधित्व करते हैं। नतीजतन, अगर एक चिकित्सीय एजेंट इंजेक्शन दिया गया था, इंजेक्शन आँखों का 90% है कि हस्तक्षेप के प्रभाव के मूल्यांकन के लिए उपलब्ध होगा।

पहले और subretinal इंजेक्शन के बाद रेटिना मोटाई माप में परिवर्तनशीलता टी के reproducibility को दर्शाता हैवह अक्टूबर चूहों पर साधन, छवियों भर में रेटिना स्थानों संरेखित की सटीक, और कम खुराक fluorescein डाई के साथ शारीरिक खारा के इंजेक्शन से रेटिना बदल जाता है। इन मापों आँखें और subretinal इंजेक्शन का एक परिणाम या नहीं, एक चिकित्सीय एजेंट के रूप में मौजूद है सांख्यिकीय मान्य परिवर्तन का पता लगाने के लिए आवश्यक रेटिना स्थानों की संख्या के लिए बिजली की गणना में जांचकर्ताओं को मार्गदर्शन करने के लिए सेवा कर सकते हैं। 10 मामलों में जिसके लिए वहाँ सभी रेटिना स्कैन में 9 ग्रिड अंक थे, इंजेक्शन साइट के बाहर रेटिना मोटाई की परिवर्तनशीलता (5 - आंख के अनुसार 8 अंक) 7.2% ± 4.0% थी, यहां तक ​​कि एक जहरीले के अभाव में या चिकित्सीय एजेंट या एक वंशानुगत रेटिनल डिस्ट्रोफी। ऐसे परिवर्तनशीलता subretinal उपचार के लिए माउस मॉडल का उपयोग नैदानिक परिणामों की तुलना करने के लिए मापदंड की स्थापना के लिए एक विचार है, और दृढ़ता से पता चलता है कि उचित नियंत्रण के बजाय एक uninjected आंख 3 वाहन के subretinal इंजेक्शन शामिल हैं। अन्त में, हम investig प्रोत्साहितators सभी स्कैन में इंजेक्शन साइट के कवरेज में सुधार करने से पहले इंजेक्शन के लिए कई रेटिना क्षेत्रों के कई अक्टूबर स्कैन करने के लिए।

जब प्रयोगात्मक एजेंटों रेटिना का अधिक से अधिक विस्तार के लिए दिया जाता चिकित्सीय प्रभावकारिता संभावना हासिल किया जाएगा। इन मामलों में, बड़ी मात्रा में आदर्श होते हैं लेकिन जरूरी नहीं हो सकता है के रूप में 0.3 μl इंजेक्शन अक्सर फ्लैट blebs है कि एक बड़े रेटिना की सतह क्षेत्र को कवर का गठन किया। छाला आकार हालांकि बड़े इंजेक्शन की मात्रा अधिक गुंबददार blebs का उत्पादन किया, चलाया हुआ नहीं था। 1 μl तक, नकारात्मक परिणामों के बिना इंजेक्शन जा सकता है हालांकि, यह संभव है कि गुंबददार blebs इसलिए बढ़ाया हो गया है कि रेटिना छूए और विशेष रूप से कम कांच का संस्करणों के साथ युवा चूहों में, लेंस के पीछे कैप्सूल का पालन करता है। सिरिंज से बचाया मात्रा के बावजूद, वास्तविक subretinal अंतरिक्ष के लिए लक्षित मात्रा कम हो जाती है। यह मात्रा अक्टूबर स्कैन में हासिल नहीं है, विशेष रूप से गुंबददार या एफ के लिए प्रतिबिंबित कर सकते हैंLat blebs, या अक्टूबर स्कैन और बाद के पुनर्निर्माण के एक विरूपण साक्ष्य है, लेकिन सुई की वापसी पर backflow से मात्रा घटाने प्रतिबिंबित कर सकते हैं।

सारांश में, subretinal इंजेक्शन के लिए एक पीछे दृष्टिकोण का उपयोग कर लक्ष्य-निर्धारण और बहिष्कार की कम दर के एक उच्च सफलता दर है, जिसके परिणामस्वरूप कम जटिलताओं और बेहतर वसूली है। इस तकनीक कृंतक रेटिना की, वायरल औषधीय, और सेलुलर जोड़तोड़ के लिए आदर्श है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hamilton Model 62 RN SYR Hamilton 87942 Syringe x 1
Hamilton Needle 33 G, 1.0", 20 DEG, point 3 (304 stainless steel) Hamilton 7803-05 Needles x 6
Vannas Curved Scissors Ted Pella, INC. 1347 5 mm Blade
22.5 Degree Microsurgery Knife Wilson Ophthalmic Corp. 91204
Ketaject  Phoenix NDC 57319-609-02 Ketamine
Anased Lloyd Laboratories NDC 61311-482-10 Xylazine
Fluorescein 10% AK-Fluor Akorn NDC 17478-253-10 100 mg/ml
0.9% Saline USP Hospira NDC 0409-4888-50 0.9% NaCl
Antibiotic Ointment Akorn NDC 17478-235-35 Ophthalmic
Water Circulating Pump Gaymar TP-500 T/Pump  P/N 07999-000
sd-OCT Bioptigen R-Series Commercial
Fundus Camera Phoenix Research Laboratories MICRON III
Tweezers Type 3 Ted Pella, INC. 5385-3SU
2.5% Phenylephrine Paragon BioTeck NDC 42702-102-15 Ophthalmic
IMARIS8 Bitplane Version 8.1.2
ImageJ NIH V1.8.0_77
Hypromellose 2.5% Goniovisc AX0401 Methylcellulose
Eye Drops (Rinse) Bausch & Lomb Saline Solution
Microscope Zeiss Stemi 2000 Microscope
Light source Fostec P/N 20520 Light source

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References

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तंत्रिका विज्ञान अंक 118 subretinal इंजेक्शन चिकित्सा transcleral रेटिना टुकड़ी जीन थेरेपी आईपीएस सेल थेरेपी स्टेम सेल थेरेपी एर्ग अक्टूबर रेटिना मोटाई
Subretinal अंतरिक्ष पहुँच के लिए वैकल्पिक और पुष्टि इंजेक्शन विधि<i&gt; के माध्यम से</i&gt; एक Transcleral पोस्टीरियर दृष्टिकोण
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Parikh, S., Le, A., Davenport, J.,… More

Parikh, S., Le, A., Davenport, J., Gorin, M. B., Nusinowitz, S., Matynia, A. An Alternative and Validated Injection Method for Accessing the Subretinal Space via a Transcleral Posterior Approach. J. Vis. Exp. (118), e54808, doi:10.3791/54808 (2016).

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