Préservation des nerfs Obstruction à mi-urétrale (NEMO) chez les femelles petits rongeurs
Summary
modélisation classique de l'obstruction partielle de la vessie chez les rongeurs se heurte à la mortalité des animaux. Une blessure à la dénervation de dissection autour de l'urètre proximale et col de la vessie est également une préoccupation majeure. Nous avons développé et évalué un modèle d'obstruction à mi-urétrale sûre et fiable, en évitant les lacunes du modèle traditionnel.
Abstract
obstruction partielle de sortie de la vessie (pBOO) a une prévalence élevée, provoque la charge des patients importants et des coûts énormes de soins de santé. Le modèle animal le plus commun pour étudier le remodelage de la vessie chez les rongeurs femelles pBOO sont soumis à une obstruction partielle à l'urètre proximal. Variabilité dans le degré d'obstruction et de la mortalité des animaux sont des préoccupations majeures avec obstruction proximale. En outre, la dissection autour du col de la vessie et l'urètre proximal met en danger l'innervation de la vessie.
Nous avons développé un modèle avec préservation nerveuse obstruction à mi-urétrale (NEMO) pour pBOO éviter les inconvénients du modèle traditionnel. Nous avons approché l'urètre juste inférieur à la symphyse pubienne, ce qui rend inutile pour laparotomie, ainsi que pour la dissection dans ce domaine; En outre, le sphincter urétral striée est restée intacte. Nous avons effectué NEMO chez des rats Sprague-Dawley femelles (12 obstructions, 6 animaux fictifs), ainsi que chez les souris C57 / BL6 femelles (20 obstructions, 18 animaux sham). Au bout de deux semaines, nous avons évalué la fonction de la vessie, de la masse de la vessie, et la masse corporelle.
Nous avons eu aucune mortalité chez les rats femelles obstructed- ou une opération fictive; comme décrit pour la partie proximale traditionnelle pBOO-méthode, on a attaché le fil de suture autour de l'urètre proximal et placé temporairement tige métallique de 0,9 mm. NEMO induit une masse de la vessie en augmentation de 85% au bout de deux semaines, le volume d'urine résiduelle moyenne est de 0,4 mL chez le rat partiellement obstrués tandis que seulement 0,03 mL chez les animaux fictifs. Chez les souris, nous avons testé 3 tailles de canules que nous avons placé le long de l'urètre lors de l'amarrage de la suture. Nous avons constaté que l'aide d'une canule de calibre 27 a donné lieu à plus de 50% la mortalité des animaux; placer la canule de calibre 25 n'a donné la réponse souhaitée en augmentant la masse de la vessie; en utilisant une canule de calibre 26 a donné des résultats favorables avec la mortalité animale minimale (08/01) encore une importante augmentation de 2 fois la masse de la vessie.
Introduction
Obstruction partielle de sortie de la vessie (pBOO) a une prévalence élevée et peut conduire à un dysfonctionnement de la vessie sévère 1; le spectre va de malformations congénitales telles que des valves de l'urètre postérieur ou hypospadias, plus de rétrécissement de l'urètre acquises à l'hyperplasie bénigne de la prostate. Celle – ci touche plus de 30% des hommes de soixante ans et plus 2. Grande charge des patients et des coûts énormes de soins de santé associés à pBOO justifient l'effort de recherche considérable mis en étudier le remodelage de la vessie en réponse à la résistance à l'écoulement accrue 3. De 2006 à 2015, plus de 220 PubMed indexé articles ont été publiés sur l'effet de pBOO sur la vessie.
Bien que les modèles animaux pour pBOO ont été mis au point dans plusieurs espèces 4, comme le rat 5, le lapin 6, porc 7, et des protocoles d' ententee 8, 9, sans doute le modèle animal le plus couramment utilisés sont des rats femelles subissant toutefois une obstruction partielle de l'urètre proximal; l'accès à l'abdomen des animaux, extériorisant de la vessie, et la dissection autour du col de la vessie sont inévitables avec cette technique d'obstruction urétrale traditionnelle proximale. Variabilité dans le degré d'obstruction et de la mortalité des animaux ne sont quelques – unes des préoccupations liées à cette procédure 10, 11; nous avons montré que dans les animaux opérés de manière fictive, dissection autour de l'urètre proximal entraîne des changements physiologiques qui sont en corrélation avec une perte de fibres nerveuses au niveau du col de la vessie 12. Ce résultat indique que le plus couramment utilisé modèle animal pBOO, qui consiste à accéder à l'urètre proximal chez les rongeurs femelles, conduit à une lésion de la dénervation avec des changements structurels et fonctionnels associés de la vessie, affectanttrompe-l'œil et les animaux obstruées. Par conséquent, une approche alternative en évitant les blessures de dénervation était nécessaire. Notre laboratoire a développé et évalué un nerf épargnant Obstruction mi-urétrale (NEMO) approche, efficace pour induire des changements associés d'obstruction prévu dans la vessie tels que l'augmentation de la masse d'organes et de l'urine résiduelle, tandis que les animaux opérés de manière fictive étaient impossibles à distinguer des animaux témoins non opérés . En outre, le sphincter strié de l'urètre est resté intact car il se trouve à proximité du niveau de dissection. En outre, la variabilité augmentation induite par l'obstruction de la masse de la vessie était significativement plus faible que dans l'obstruction urétrale traditionnelle proximale et la mortalité des animaux a été nulle.
Nous avons également appliqué avec succès NEMO chez les souris femelles avec moins de 10% de mortalité chez les animaux obstruées, alors que tous les modèles pBOO pour les souris décrites à ce jour ont été associées à une mortalité d'environ 50%. L'étude de remodelage de la vessie dans le contexte de pBOO chez la souris bénéficiera de APPLICABILlité de l'ensemble du spectre des modifications transgéniques.
Dissection autour du milieu de l'urètre chez les rongeurs femelles ne provoque pas les modifications structurelles ou fonctionnelles indésirables et de confusion dans la vessie urinaire observée dans le modèle d'obstruction proximale traditionnelle. Néanmoins, l'induction d'une obstruction partielle au niveau de la mi-urétrale provoque encore l'hypertrophie de la vessie et l'urine résiduelle a augmenté, comme prévu à partir d'un modèle animal pour pBOO. Fait important, l'exécution NEMO chez la souris ouvre une enquête de remodelage de la vessie dans pBOO des procédés transgéniques, qui sont pratiquement indisponible chez les rongeurs plus grandes.
Protocol
Representative Results
Discussion
La mortalité des animaux est l' une des principales préoccupations du modèle traditionnel de pBOO à l'urètre proximale, à 15% ou plus dans de nombreux rapports 10, 11, 13. NEMO semble avoir un minimum de mortalité lorsqu'elle est appliquée chez les rats femelles. obstruction de l'urètre proximal chez la souris est techniquement plus difficile que chez les rats et donc encore plus sujett…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The work was funded by a CHIR operating grant (DJB).
Materials
| Female rat | Charles-River Canada | Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400 | about 200g |
| Isoflorane vaporizer | Benson medical industries inc. | TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO | |
| Isoflorane | Fresenius Kabi Animal Health | Isoflorane; product code CP0406V2 | 250ml bottle |
| Disposable scalpell | Ted Pella, Inc. | #15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S | |
| Microscopy forceps | Ted Pella, Inc. | Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443 | |
| Adson forceps | Ted Pella, Inc. | Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9 | |
| Curved surgical scissors | Ted Pella, Inc. | Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376 | |
| 0.9mm inox metal rod | goodfellow.com | Stainless Steel – AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65 | |
| Skin hooks – self made from inox steel | goodfellow.com | Stainless Steel – AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65 | |
| 4-0 Silk suture | esutures.com | 4-0 Sofsilk black 98" strand; product number LS640 | |
| 5-0 Vicry suture | esutures.com | 5-0 Vicryl undyed 27" RB-1 taper; product number J213H | |
| Needle holder | Medsupplier.com | Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder – 5 1/2"; product code SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC |
|
| Temgesic (Buprenorphine) | first veterinary supply | Buprenex 0.3MG/ml inj amps; item #075701 | |
| 1ml syringe with 27G needle | Fisher Scientific | BD Tuberculin Syringe, BD 309623 | |
| 20G Angiocath | Fisher Scientific | Andwin Scientific ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906 | |
| Recovery diet | clearh2o | DietGel 31M; 72-08-5022 | |
| C57Bl/6 female mice | Charles-River Canada | C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027 | about 18g |
| 24G angiocath | Fisher Scientific | Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc. IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340 | |
| 5-0 Ethibond | esutures.com | 5-0 Ethibond green 30" RB-1 taper; product number X550H | |
| 26G syringe needle | Sigma-Aldrich | BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392 | |
| Normal Saline | Baxter | 0.9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043 |
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