Summary

Nerve sparende Mittelharnröhrenobstruktion (NEMO) in Female Kleine Nagetiere

Published: April 25, 2017
doi:

Summary

Traditionelle Modellierung von Teil Blasenauslassobstruktion bei Nagetieren ist voller Tiersterblichkeit. Eine Denervierung Verletzung von Dissektion um den proximalen Harnröhre und Blasenhals ist ebenfalls von großer Bedeutung. Wir entwickeln und evaluiert eine sichere und zuverlässige Obstruktion Modell Mitte der Harnröhre, die Mängel des traditionellen Modells zu vermeiden.

Abstract

Partielle Blasenauslassobstruktion (pBOO) hat eine hohe Prävalenz, verursacht erhebliche Patientenbelastung und immens Kosten im Gesundheitswesen. Das häufigste Tiermodell Blase Umbau in pBOO zu untersuchen sind weibliche Nager unterziehen partielle Obstruktion am proximalen Harnröhre. Veränderlichkeit in dem Grad der Behinderung und Tiersterblichkeit sind wichtige Anliegen mit proximaler Obstruktion. Außerdem gefährdet Blase Innervation um den proximalen Harnröhre und Blasenhals zu sezieren.

Wir entwickelten eine nervenschonenden mittleren Harnröhrenobstruktion (NEMO) Modell für pBOO die Nachteile des traditionellen Modells zu vermeiden. Wir näherten uns der Harnröhre unmittelbar unterhalb der Schambeinfuge, die die Notwendigkeit für Laparotomie sowie für die Präparation in diesem Bereich vermieden; Auch blieb die gestreifte Harnröhrenschließmuskel unberührt. Wir führten NEMO in weiblichen Sprague-Dawley-Ratten (12 Hindernisse, 6 Scheintiere) sowie bei weiblichen C57 / BL6-Mäuse (20 Behinderungs, 18 Schein Tiere). Nach zwei Wochen werteten wir die Blasenfunktion, Blasenmasse und Körpermasse.

Wir hatten keine Todesfälle unter obstructed- oder scheinoperierten weiblichen Ratten; wie für das traditionelle proximale pBOO-Verfahren beschrieben, banden wir die Naht um die proximale Urethra und ein 0,9 mm Metallstab vorübergehend platziert. NEMO induzierte eine 85% ige Erhöhung der Blasenmasse nach zwei Wochen, durchschnittliche Resturinvolumen betrug 0,4 ml in Ratten teilweise verstopft, während nur 0,03 ml in sham Tieren. Bei Mäusen testeten wir drei Größen von Kanülen, die sie entlang der Harnröhre platziert, wenn die Naht zu binden. Wir fanden heraus, dass eine 27-Gauge-Kanüle führte zu mehr als 50% Tiersterblichkeit; Platzieren der Kanüle 25-gauge nicht die gewünschte Reaktion bei der Erhöhung Blasenmasse brachte; eine 26-Gauge-Kanüle Verwendung ergab positive Ergebnisse mit minimaler Tiersterblichkeit (1/8) noch eine signifikanten 2-fache Erhöhung der Blasenmasse.

Introduction

Die partielle Blasenaustrittsobstruktion (pBOO) hat eine hohe Prävalenz und kann zu einer schweren Blasenfunktionsstörung führen 1 ; Das Spektrum reicht von angeborenen Fehlbildungen wie posterioren Harnröhrenventilen oder Hypospadien, über erworbene urethrale Strikturen bis hin zu einer gutartigen Prostatahyperplasie. Letzteres betrifft mehr als 30% der Männer sechzig Jahre und älter 2 . Große Patientenbelastung und immense Gesundheitspflege Kosten im Zusammenhang mit pBOO rechtfertigen die beträchtliche Forschung Anstrengungen in das Studium Blase Remodeling als Reaktion auf erhöhte Abfluss Widerstand 3 . Von 2006 bis 2015 wurden über 220 PubMed indizierte Artikel über die Wirkung von pBOO auf die Harnblase veröffentlicht.

Obwohl Tiermodelle für pBOO in mehreren Arten 4 , wie der Ratte 5 , dem Kaninchen 6 , Schwein 7 und Mous, entwickelt worden sinde 8, 9, die wohl am häufigsten verwendeten Tiermodell jedoch sind weibliche Ratten partielle Obstruktion der proximalen Harnröhre unterziehen; Zugriff auf den Bauch der Tiere, exteriorisieren der Blase, und Dissektion um den Blasenhals sind unvermeidlich mit dieser traditionellen Technik proximalen Harnröhrenobstruktion. Veränderlichkeit in dem Grad der Behinderung und Tiersterblichkeit sind nur einige der Bedenken bei diesem Verfahren 10, 11 zugeordnet ist ; wir haben gezeigt , dass in scheinoperierten Tieren, Dissektion um den proximalen Harnröhre zu physiologischen Veränderungen führt , die 12 mit einem Verlust von Nervenfasern am Blasenhals zu korrelieren. Dieses Ergebnis zeigt, dass die am häufigsten pBOO Tiermodell verwendet, die bei weiblichen Nagern Zugriff auf die proximale Harnröhre beinhaltet, führt zu einer Denervierung Verletzung mit verbundenen strukturellen und funktionellen Veränderungen der Blase, beeinflussteSchein und behindern Tiere. Daher wurde eine alternative Ansatz zu vermeiden Denervierung Verletzung erforderlich. Unser Labor entwickelt und evaluiert einen Nerve sparende Mittelharnröhrenobstruktion (NEMO) Ansatz, wirksam bei der Induktion der erwartete Obstruktion assoziierte Veränderungen in der Blase, wie Erhöhung der Organmasse und Restharn, während scheinoperierten Tiere von nicht operierten Kontrolltieren nicht zu unterscheiden waren . Auch blieb die gestreifte Harnröhrenschließmuskel unangetastet, da sie proximal zu der Ebene der Präparation liegen. Die Weitere Variabilität in Massen Obstruktion-induzierte Zunahme der Blase war signifikant niedriger als bei herkömmlicher proximaler Harnröhrenobstruktion und Tiersterblichkeit war Null.

Wir wandten auch erfolgreich NEMO bei weiblichen Mäusen mit weniger als 10% Mortalität bei Tieren behindert, während alle pBOO Modelle für bisher beschriebenen Mäuse um 50% mit einer Mortalität verbunden waren. Studieren Blase Umbau im Zusammenhang mit pBOO bei Mäusen profitieren von applicability des gesamten Spektrums von transgenen Modifikationen.

Sezieren um die Mitte des Harnröhre bei weiblichen Nagern induzieren nicht die unerwünschten und verwirrende strukturellen oder funktionellen Veränderungen in der Harnblase im traditionellen proximalen Obstruktion Modell beobachtet. Trotzdem induziert immer noch eine teilweise Verstopfung in der Mitte der Harnröhre Ebene induzierende Blase Hypertrophie und erhöhte Restharn, wie für pBOO aus einem Tiermodell erwartet. Wichtig ist, dass bei Mäusen NEMO Durchführung eröffnet Untersuchung von Blasen Remodeling in pBOO transgene Verfahren, die in größeren Nagetieren praktisch nicht erreichbar sind.

Protocol

Das folgende experimentelle Protokoll wurde von der Institution Tierpflegekommission genehmigt. 1. NEMO bei weiblichen Ratten Vorbereitung Legen Sie eine weibliche Sprague-Dawley Ratten mit einem Gewicht von etwa 200 g unter 3% Isofluran-Narkose, wiege das Tier, und rasieren und desinfizieren prepubic Bereich 3 mal ein Iodatom chirurgischen Peeling. Auf einem Heizkissen, Bandhinterbeinen und Schwanz nach unten und die Blase mit einem 20-Gauge-An…

Representative Results

Nerve sparende Mittelharnröhrenobstruktion (NEMO) bei weiblichen Ratten Mortalität Wir führten eine Mitte Harnröhrenobstruktion auf mehr als 40 weibliche Ratten so weit und hatte keine Mortalitäten. Blase Masse <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1…

Discussion

Tiersterblichkeit ist eines der wichtigsten Anliegen des traditionellen Modells der pBOO am proximalen Harnröhre, bei 15% oder mehr in vielen Berichten 10, 11, 13. NEMO erscheint minimal Sterblichkeit zu haben, wenn bei weiblichen Ratten angewendet. Proximale Harnröhrenobstruktion bei Mäusen ist technisch anspruchsvoller als bei Ratten und damit auch anfälliger für Komplikationen. Unter Verwendung einer 26…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The work was funded by a CHIR operating grant (DJB).

Materials

Female rat  Charles-River Canada Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400 about 200g
Isoflorane vaporizer Benson medical industries inc. TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO 
Isoflorane Fresenius Kabi Animal Health Isoflorane; product code CP0406V2  250ml bottle
Disposable scalpell Ted Pella, Inc. #15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S
Microscopy forceps Ted Pella, Inc. Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443
Adson forceps Ted Pella, Inc. Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9
Curved surgical scissors Ted Pella, Inc. Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376
0.9mm inox metal rod goodfellow.com Stainless Steel – AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65
Skin hooks – self made from inox steel goodfellow.com Stainless Steel – AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65
4-0 Silk suture esutures.com 4-0 Sofsilk black 98" strand; product number LS640
5-0 Vicry suture esutures.com 5-0 Vicryl undyed 27" RB-1 taper; product number J213H
Needle holder Medsupplier.com Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder – 5 1/2"; product code SKU NEE4484-8-40TC
SKU NEE4484-8-40TC
SKU NEE4484-8-40TC 
Temgesic (Buprenorphine) first veterinary supply Buprenex 0.3MG/ml inj amps; item #075701
1ml syringe with 27G needle Fisher Scientific BD Tuberculin Syringe, BD 309623
20G Angiocath Fisher Scientific Andwin Scientific ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906
Recovery diet clearh2o DietGel 31M; 72-08-5022
C57Bl/6 female mice Charles-River Canada C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027 about 18g
24G angiocath Fisher Scientific Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc. IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340
5-0 Ethibond esutures.com 5-0 Ethibond green 30" RB-1 taper; product number X550H
26G syringe needle Sigma-Aldrich BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392
Normal Saline Baxter 0.9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043

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Cite This Article
Sidler, M., Aitken, K. J., Jiang, J. X., Bägli, D. J. Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents. J. Vis. Exp. (122), e55288, doi:10.3791/55288 (2017).

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