Nerve-sparing Mid-ostruzione uretrale (Nemo) nel femminile piccoli roditori
Summary
modellazione tradizionale di parziale ostruzione della vescica nei roditori è carico di mortalità degli animali. Una lesione denervazione dalla dissezione attorno alla uretra e la vescica collo prossimale è anche di grande preoccupazione. Abbiamo sviluppato e valutato un modello mid-ostruzione uretrale sicuro ed affidabile, evitando le carenze del modello tradizionale.
Abstract
Parziale ostruzione della vescica (pBOO) ha una elevata prevalenza, provoca notevole onere del paziente, e costi sanitari enormi. Il modello animale più comune per indagare rimodellamento della vescica in pBOO sono roditori di sesso femminile sottoposte a parziale ostruzione al uretra prossimale. Variabilità nel grado di ostruzione e mortalità degli animali sono maggiori preoccupazioni con ostruzione prossimale. Inoltre, sezionare intorno al uretra e la vescica collo prossimale mette a repentaglio innervazione della vescica.
Abbiamo sviluppato un modello un'ostruzione uretrale metà nerve-sparing (Nemo) per pBOO evitando gli svantaggi del modello tradizionale. Ci siamo avvicinati l'uretra appena inferiore alla sinfisi pubica, che ha ovviato alla necessità di laparotomia, nonché per la dissezione in questo settore; Inoltre, lo sfintere uretrale striato rimasta intatta. Abbiamo eseguito nemo in ratti femmina Sprague-Dawley (12 ostruzioni, 6 animali sham), così come nella femminili / topo BL6 C57 (20 ostruzioneS, 18 animali sham). Dopo due settimane abbiamo valutato la funzione della vescica, la massa della vescica e la massa corporea.
Non avevamo alcuna mortalità tra i ratti femminili ostruiti o affamati; Come descritto per il tradizionale metodo pBOO prossimale, abbiamo legato la sutura attorno all'uretra prossimale e un asta metallica temporaneamente posizionata di 0.9 mm. NeMO ha indotto un aumento dell'85% della massa della vescica dopo due settimane, il volume medio di urina residuo è stato di 0,4 mL in ratti parzialmente ostruiti, mentre solo 0,03 mL negli animali affamati. Nei topi abbiamo testato 3 dimensioni di cannole che abbiamo posto lungo l'uretra quando legano la sutura. Abbiamo scoperto che l'utilizzo di una cannula da 27 gauge ha determinato una mortalità animale superiore al 50%; Posizionare la cannula a 25 gauge non ha dato la risposta desiderata in massa aumentante della vescica; Utilizzando una cannula a 26 gauge ha dato risultati favorevoli con una minima mortalità animale (1/8), ma un significativo aumento di massa della vescica di due volte.
Introduction
Parziale di uscita della vescica ostruzione (pBOO) ha una elevata prevalenza e può causare grave disfunzione della vescica 1; lo spettro varia da malformazioni congenite come valvole uretrali posteriori o ipospadia, oltre stenosi uretrale acquisiti a iperplasia prostatica benigna. Quest'ultima colpisce oltre il 30% degli uomini sessant'anni e più 2. Grande peso del paziente e costi sanitari associati immensi pBOO garantiscono il notevole sforzo di ricerca messo in studiare il rimodellamento della vescica in risposta alla resistenza maggiore deflusso 3. Dal 2006 fino al 2015, oltre 220 PubMed indicizzato articoli sono stati pubblicati per quanto riguarda l'effetto di pBOO sulla vescica urinaria.
Sebbene modelli animali per pBOO sono stati concepiti in diverse specie 4, come il ratto 5, il coniglio 6, 7 maiale, e mouse 8, 9, probabilmente il modello animale più comunemente usati sono tuttavia ratti femmina sottoposti parziale ostruzione dell'uretra prossimale; l'accesso alle addome degli animali, esteriorizzante della vescica, e la dissezione attorno al collo della vescica sono inevitabili con questa tecnica tradizionale prossimale ostruzione uretrale. Variabilità nel grado di ostruzione e mortalità degli animali sono solo alcuni dei problemi associati a questa procedura 10, 11; abbiamo dimostrato che in sham operati animali, dissezione intorno all'uretra prossimale provoca cambiamenti fisiologici che correlano con perdita delle fibre nervose al collo vescicale 12. Questa scoperta indica che il pBOO modello più comunemente utilizzati degli animali, che prevede l'accesso alla uretra prossimale nei roditori di sesso femminile, porta ad un infortunio denervazione con i cambiamenti strutturali e funzionali associati della vescica, che colpiscesham e gli animali ostruite. Pertanto, è necessario un approccio evitare infortuni denervazione alternate. Il nostro laboratorio ha sviluppato e valutato un approccio nerve-sparing ostruzione Mid-uretrale (Nemo), efficace nell'indurre cambiamenti ostruzione associate attesi nella vescica, come aumento della massa organo e urina residua, mentre gli animali sham-operati erano indistinguibili da animali di controllo non operati . Inoltre, lo sfintere uretrale striato rimasta intatta come si trova prossimale al livello di dissezione. Inoltre, la variabilità in aumento ostruzione indotta in massa vescica era significativamente inferiore a quello tradizionale ostruzione uretrale prossimale e la mortalità degli animali era zero.
Abbiamo inoltre applicato con successo nemo in topi di sesso femminile con una mortalità inferiore al 10% negli animali ostruiti, mentre tutti i modelli pBOO per topi descritti fino ad oggi sono stati associati ad una mortalità intorno al 50%. Studiare rimodellamento della vescica nel contesto pBOO nei topi beneficerà di applicabilità di tutto lo spettro delle modificazioni transgeniche.
Sezionare intorno alla metà uretra nei roditori femmina non induce cambiamenti strutturali o funzionali indesiderabili e di confusione nella vescica urinaria osservata nel modello ostruzione prossimale tradizionale. Tuttavia, inducendo una parziale ostruzione a livello intermedio uretrale induce ancora ipertrofia vescicale e aumentato urina residua, come previsto da un modello animale per pBOO. È importante sottolineare che l'esecuzione di nemo in topi avvia un'indagine di rimodellamento della vescica in pBOO ai metodi transgenici, che sono virtualmente disponibili nei roditori più grandi.
Protocol
Representative Results
Discussion
Mortalità animale è una delle principali preoccupazioni del modello tradizionale della pBOO presso l'uretra prossimale, al 15% o più in molte relazioni 10, 11, 13. NeMO sembra avere la mortalità minima quando viene applicata nei ratti femmina. Prossimale ostruzione uretrale nei topi è tecnicamente più impegnativo rispetto nei ratti, e quindi anche più inclini a complicazioni. Utilizzando una cannula …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The work was funded by a CHIR operating grant (DJB).
Materials
| Female rat | Charles-River Canada | Sprague Dawley Rat (Crl:SD); Strain Code: 400 | about 200g |
| Isoflorane vaporizer | Benson medical industries inc. | TEC III Isoflurane; product code: 53-T3ISO | |
| Isoflorane | Fresenius Kabi Animal Health | Isoflorane; product code CP0406V2 | 250ml bottle |
| Disposable scalpell | Ted Pella, Inc. | #15 Sterile, Stainless Steel Scalpels; catalogue number 549-9-15S | |
| Microscopy forceps | Ted Pella, Inc. | Aesculap Microscopy Forceps, Finepoint, 115mm; product number 5443 | |
| Adson forceps | Ted Pella, Inc. | Aesculap Adson Dissection Forceps, Curved, 120mm; product number 5002-9 | |
| Curved surgical scissors | Ted Pella, Inc. | Surgical Scissors, Curved, S/S, 105mm; catalogue number 1376 | |
| 0.9mm inox metal rod | goodfellow.com | Stainless Steel – AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65 | |
| Skin hooks – self made from inox steel | goodfellow.com | Stainless Steel – AISI 316L Wire Diameter:0.9mm; order code 911-684-65 | |
| 4-0 Silk suture | esutures.com | 4-0 Sofsilk black 98" strand; product number LS640 | |
| 5-0 Vicry suture | esutures.com | 5-0 Vicryl undyed 27" RB-1 taper; product number J213H | |
| Needle holder | Medsupplier.com | Integra Miltex Carb-N-Sert Baumgartner Needle Holder – 5 1/2"; product code SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC SKU NEE4484-8-40TC |
|
| Temgesic (Buprenorphine) | first veterinary supply | Buprenex 0.3MG/ml inj amps; item #075701 | |
| 1ml syringe with 27G needle | Fisher Scientific | BD Tuberculin Syringe, BD 309623 | |
| 20G Angiocath | Fisher Scientific | Andwin Scientific ANGIOCATH 20 GA; Catalog No. NC9561906 | |
| Recovery diet | clearh2o | DietGel 31M; 72-08-5022 | |
| C57Bl/6 female mice | Charles-River Canada | C57BL/6 Mouse (C57BL/6NCrI); Strain Code: 027 | about 18g |
| 24G angiocath | Fisher Scientific | Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc. IV CATH ANGIOCATH 24GX3/4IN; Catalog No. NC9814340 | |
| 5-0 Ethibond | esutures.com | 5-0 Ethibond green 30" RB-1 taper; product number X550H | |
| 26G syringe needle | Sigma-Aldrich | BD Precisionglide syringe needle, Gauge 26; z192392 | |
| Normal Saline | Baxter | 0.9% Sodium Chloride Injection, USP, 100 mL MINI-BAG; product code 2B0043 |
References
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