Het doel van dit document en instructie video te beschrijven hoe bloot en verwijder de pig postmortem hersenen en hypofyse in intacte toestand, geschikt voor daaropvolgende macroscopische en histologische analyse.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Blootstelling van het varken voor CNS Histologische analyse: A Manual voor onthoofding, Schedel openen en Brain verwijdering
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Varkens zijn steeds populairder geworden in grote dieren translationeel neurowetenschappelijk onderzoek als een economisch en ethisch haalbaar alternatief voor niet-menselijke primaten. De grote omvang van de hersenen van het varken maakt het gebruik van conventionele klinische hersenen imagers en de directe gebruik en het testen van neurochirurgische procedures en apparatuur uit de menselijke kliniek. Verdere macroscopische en histologische analyse vereist echter postmortem blootstelling van het varken centrale zenuwstelsel (CZS) en daaropvolgende verwijdering hersenen. Dit is niet eenvoudig, aangezien de pig CNS wordt ingekapseld door een dikke, benige schedel en wervelkolom. Het doel van dit document en instructie video te beschrijven hoe bloot en verwijder de pig postmortem hersenen en de hypofyse in intacte toestand, geschikt voor daaropvolgende macroscopische en histologische analyse.
Inleiding
Translationele neurowetenschappen studies in varkens hebben steeds populairder geworden in de afgelopen twee decennia. De grote omvang van de varkenshersenen maakt het gebruik van conventionele klinische hersenen beeldschermen en direct gebruik en testen van neurochirurgische procedures en apparatuur uit de menselijke kliniek 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. In de laatste 20 jaar, varkens, minivarkens bijz....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dierlijke anesthesie en euthanesia werd uitgevoerd volgens "Principles of proefdier care" (NIH publicatie nr 86-23, herzien 1985) en door de Deense Raad voor dierlijke Research Ethics goedgekeurd.
1. Instrumenten
- Verzamel de instrumenten die in de video en in de tabel van Materialen vermeld.
2. Onthoofding
OPMERKING: Anesthesie werd geïnduceerd door een intramusculaire injectie van 5 ml midazolam (5 mg / ml) en 5 ml ketamine (25 mg / ml). 5-10 min later, als het dier diep verdoofd was, een oorader gecannuleerd en een dodelijke overdosis (100 mg / kg ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Het weefselmateriaal uitdroging te voorkomen, wordt aanbevolen om de verwijderde hersenen en hypofyse slaan in een pot gevuld met lijm of isotone zoutoplossing onmiddellijk na macroscopische analyse is uitgevoerd. Het weefselmateriaal kan worden opgeslagen in het fixeermiddel jaren, terwijl opslag in isotone zoutoplossing, zelfs in de koelkast, leidt tot weefselverval tijd.
De verwijderde hypofyse kan ook direct worden bevrore.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Meest experimentele neurologie studies worden uitgevoerd in kleine diersoorten, zoals muizen en ratten, waarbij toegang tot het CNS wordt vergemakkelijkt door een dunne schedel- en durale dikte. In grote proefdieren als varkens 1, 4, 8, schapen 32 en niet-humane primaten, de aanzienlijke dikte van deze structuren is het gebruik van robuuste instrumenten (tabel van materialen) en goede ingangspunten voor .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs erkennen met dankbaarheid de bekwame hulp van Mrs. Trine W. Mikkelsen, mevrouw Lise M. Fitting, en het personeel in Påskehøjgaard. De Deense Medical Research Council, de Lundbeck Foundation, en de Novo Nordisk Foundation financieel ondersteund de studie.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Heavy Scalpel Handle #4 | FST (Fine Science Tools) | 10008-13 | Goed voor huidsnede en verwijdering van zacht weefsel |
| Non-Sterile Scalpel Blades #23 | FST | 10023-00 | |
| Scalpel Handle #7 | FST | 10007-12 | Optimaal voor dura-incisie en precisiewerk |
| Non-Sterile Scalpel Blades #11 | FST | 10011-00 | |
| Surgical Forceps | FST | 11024-18 | De punt van de chirurgische forceps zorgt voor een stevige greep |
| Kerrison Bone Punch | Aesculap Neurosurgery | FF713R | Moet robuust zijn, bijtwoordgrootte 3-5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | MD615 | Moet robuust zijn, bijtwoordgrootte 15 x 5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | FO551R | Moet robuust zijn, bijtwoordgrootte 25 x 15 mm |
| Bone Chisel | Lawton | 67-0335 | De grootte van het beitelhoofd mag niet groter zijn dan 20 mm |
| Mallet (Hammer) | Millarco | 5624108 | Gewicht 300 g, lengte 30 cm, slagoppervlak van de kop 2 x 2 cm |
| Micro-Scissor | FST | 14002-14 | |
| Dissector | Aesculap Neurosurgery | OL165R | |
| Göttingen minipigs | Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denemarken | ||
| Euthanimal | pentobarbital | ||
| Ketamine | Pfizer | ||
| Midazolam | Hameln Pharmaceuticals |
Referenties
- Lind, M. N., Moustgaard, A., Jelsing, J., Vajta, G., Cumming, P., Hansen, A. K. The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders. Neurosci Biobehav Rev. 31, 728-751 (2007).
- Bjarkam, C. R., et al. Neuromodulation in a minipig model of Parkinson disease. British ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
Meer artikelen verkennen
