Summary
यहां वर्णित एक स्टेज, व्यवहार स्क्रीनिंग दृष्टिकोण है जो कि यौगिकों के लिए स्क्रीन पर इस्तेमाल किया जा सकता है जो β-amyloidosis और tauopathy के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में संज्ञानात्मक और कार्यात्मक मोटर व्यवहार पर विवो प्रभावकारिता में प्रदर्शित होता है। इन विधियों को अल्पकालिक और कार्यशील स्मृति कार्यों में गतिविधि के लिए स्क्रीन यौगिकों के लिए ऑप्टिमाइज़ किया गया है।
Abstract
यहां हम एक चरणबद्ध, व्यवहार परीक्षण दृष्टिकोण का वर्णन करते हैं जो कि यौगिकों के लिए स्क्रीन पर इस्तेमाल किया जा सकता है जो β-amyloidosis और ताओपैथी के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में संज्ञानात्मक और कार्यात्मक मोटर व्यवहार पर विवो प्रभावकारिता में प्रदर्शित होते हैं। इस प्रतिमान में वाई-भूलभुलैया, उपन्यास वस्तु पहचान, और अंग clasping में सहज प्रत्यावर्तन के लिए परीक्षण शामिल हैं। इन परीक्षणों का चयन किया गया क्योंकि वे: 1) संज्ञानात्मक या मोटर डोमेन के कार्य से पूछताछ करते हैं और मानव रोग राज्य से संबंधित तंत्रिका सर्किट के संबंध में पूछताछ करते हैं, 2) स्पष्ट रूप से समापन बिंदुओं को परिभाषित किया गया है, 3) आसानी से कार्यान्वयन योग्य नियंत्रण जांच, 4) एक उदार थ्रूपूट प्रारूप, और 5) अन्वेषक द्वारा कुछ हस्तक्षेप की आवश्यकता होती है। इन विधियों को जांचकर्ताओं के लिए तैयार किया गया है जो अल्पायमर और काम करने वाले मेमोरी कार्य या अलज़ाइमर रोग माउस मॉडल से जुड़े कार्यात्मक मोटर व्यवहार में गतिविधि के लिए यौगिकों को स्क्रीन पर देख रहे हैं। यहां वर्णित विधियां वर्तनात्मक परीक्षणों का प्रयोग करती हैं जोहिप्पोकैम्पस और विभिन्न कॉर्टिकल क्षेत्रों सहित कई अलग-अलग मस्तिष्क क्षेत्रों की उम्र। ऐसे जांचकर्ता जो संज्ञानात्मक परीक्षणों की इच्छा रखते हैं जो विशेष रूप से एक मस्तिष्क क्षेत्र द्वारा मध्यस्थता के आकलन का आकलन करते हैं, अन्य व्यवहार परीक्षणों के पूरक के लिए इन तकनीकों का उपयोग कर सकते हैं।
Introduction
अल्जाइमर रोग (एडी) एक प्रगतिशील neurodegenerative विकार है जिसके परिणामस्वरूप कमजोर संज्ञानात्मक गिरावट आई है जो दुनिया भर में 44 मिलियन लोगों को प्रभावित करती है। इस रोग के लिए उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों की preclinical खोज के लिए तत्काल आवश्यकता के लिए जरूरी जरूरत पर बल देते हुए एडी के लिए कोई उपलब्ध उपचार उपलब्ध नहीं है। कई अलग-अलग ट्रांसजेनिक माउस मॉडल बनाये गये हैं जो कि 1 , 2 के विभिन्न पहलुओं को दोहराते हैं, जिसमें रोगियों में बाधित होने वाले संज्ञानात्मक डोमेन में घाटे शामिल हैं 3 । ये माउस मॉडल विवो में कुशल स्क्रीनिंग की सुविधा के लिए एक उपयोगी उपकरण का प्रतिनिधित्व करते हैं।
विवो प्रभावकारिता में संभावित के लिए एक यौगिक का आकलन करते समय , उपयुक्त मनोचिकित्सक डोमेन में प्रभावकारिता के लिए एक स्टेज दृष्टिकोण लिया जाना चाहिए और उन व्यवहारों पर नज़र रखता है जो विशिष्ट एंडपॉइंट को प्रभावित कर सकते हैंSsess अनुभूति ई। के कई ट्रांसजेनिक माउस मॉडल हाइपरएक्टिविटी और अन्य व्यवहार जो एक विशेष संज्ञानात्मक परीक्षण में हस्तक्षेप कर सकते हैं, और दवा स्क्रीनिंग 4 में इसके उपयोग को रोकते हैं। इसके अलावा, एक दवा स्क्रीनिंग पर्यावरण में लागू करने के लिए एक दृष्टिकोण के लिए, उपयोग किए जाने वाले विशेष परीक्षणों को कम से कम एक मध्यम थ्रुपुट को बनाए रखना चाहिए, स्पष्ट रूप से समापन बिंदुओं को परिभाषित किया जाना चाहिए और एक ऐसी प्रक्रिया जिसके लिए जांचकर्ताओं द्वारा न्यूनतम हस्तक्षेप की आवश्यकता होती है इन मानदंडों का उपयोग करना, व्यवहार स्क्रीन को लागू किया जा सकता है जो कि कंप्यूट स्क्रीनिंग के लिए प्रजननशीलता, कम अंतर-और अंतर-परख विचरण और प्रभाव आकार का प्रदर्शन करता है। यहाँ विस्तृत तरीके हम यौगिकों को β-amyloidosis और tauopathy 5 , 6 के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में मौजूद संज्ञानात्मक और मोटर phenotypes को कम करने में कारगर बनाने के लिए कार्यरत हैं। वर्णित विधियां आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली व्यावहारिक मानदंडों से ली गई हैंविशिष्ट ऑप्टिमाइज़ेशन और गुणवत्ता नियंत्रण जांच के साथ 7 पुनरावृत्ति, ताकि वे एडी से संबंधित ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में उपयोग किए जा सकें। इस प्रोटोकॉल का उपयोग विभिन्न प्रकार के डेटा अधिग्रहण और विश्लेषण प्रणालियों के साथ किया जा सकता है और यह मानता है कि जांचकर्ता को संबंधित सॉफ़्टवेयर का कामकाज ज्ञान है।
Protocol
इस प्रकाशन में विस्तृत तरीके से संबंधित संघीय पशु देखभाल और प्रयोग समिति (हिमाचल प्रदेश प्रयोगशाला) जानवरों पर समीक्षा समिति द्वारा समीक्षा की गई थी ताकि जानवरों के उचित देखभाल, उपयोग और मानवीय व्यवहार को लागू संघीय, राज्य और स्थानीय कानूनों और विनियमों के अनुपालन में सुनिश्चित किया जा सके। संघीय पशु कल्याण विनियम, या एडब्ल्यूआर (सीएफआर 1 9 85), और मानव स्वास्थ्य देखभाल और प्रयोगशाला प्रयोगशालाओं, या पीएचएस नीति (पीएचएस 1996) पर सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा नीति के रूप में।
1. सभी व्यवहारिक आकलन के लिए सामान्य दिशानिर्देश
- किसी भी पशु से निपटने से पहले, एक नया पिंजरे कार्ड के साथ मौजूदा पिंजरे कार्ड को कवर करें जो केवल अनोखे, अंधा पशु पहचानकर्ता को इंगित करता है।
नोट: नियमित परिसर / प्लेसबो डोजिंग के दौरान चूहों को संभालने वाले जांचकर्ताओं को व्यवहार मूल्यांकन के लिए चूहों को संभालने की अनुमति नहीं है। - ओवरहेड रोशनी को मंद या बंद करना और प्रकाश व्यवस्था को समायोजित करना जैसे कि मैदान के तल पर रोशनी 30-35 लक्स है
- एफया अध्ययन जो कई हफ्तों तक फैला है, समग्र स्वास्थ्य के एक अप्रत्यक्ष माप के रूप में साप्ताहिक रिकॉर्ड शरीर भार।
नोट: कोट की गुणवत्ता, आसन, चाल और सहज गतिरोध के लिए अतिरिक्त पिंजरे-पक्ष की जांच शामिल की जा सकती है अगर अधिक मजबूत स्वास्थ्य जांच की गारंटी दी जाती है।
2. जांचकर्ता द्वारा हाथियों को संभालने के लिए चूहे का अधिवास करना
- किसी भी व्यवहार परीक्षण से दो दिन पहले, हैंडलिंग करने के लिए चूहों की आदत डालते हैं। पिंजरे रैक से पिंजरे निकालें और एक स्तर की सतह पर रखें।
- पिंजरे से ढक्कन हटाएं माउस को ठीक से संभाल लें क्योंकि यह आगामी व्यवहार परीक्षण के प्रदर्शन के दौरान संभाला जाएगा। घर के पिंजरे के ऊपर एक कप हाथ में माउस रखें।
- जांचकर्ता के हाथ से वापस घर के पिंजरे में कूदने के लिए विलंबता को मापें अधिकतम 5 एस के लिए चूहों को पकड़ो
नोट: ≥2 के लचीलापन को प्रदर्शित करने वाली चूहों को "घबराहट" समझा जाता है चूहे जो पहले परीक्षण के दौरान <2 एस लक्ज़ेंशन प्रदर्शित करता है 2 अतिरिक्त आवासीय आबादीउस दिन एन सत्र - चूहों की आबादी को संभालने के लगातार 2 दिनों से गुज़रना पड़ता है। किसी भी माउस का ध्यान रखें जो 2 दिन के अंत तक आदत नहीं है।
3. एक वाई-भूलभुलैया 8 में स्वस्थ परिवर्तन को मापकर स्थानिक कार्य मेमोरी का मूल्यांकन करना
- शुरुआती प्रयोग से पहले, वाई-भूलभुलैया को बिना सटे ब्लीच रोगाणुनाशक पोंछे से साफ कर दें, 70% एटओएच, डीएच 2 ओ 9 के बाद । स्पष्ट रूप से 'ए', 'बी' और 'सी' या अन्य तुलनात्मक अद्वितीय पहचानकर्ताओं के रूप में भूलभुलैया के हथियारों को नामित करें।
- परीक्षण सत्र की शुरुआत से पहले, डेटा अधिग्रहण प्रणाली या वीडियो कैमरों को सेट करें और भूलभुलैया में चूहों की उचित ट्रैकिंग सेट करें। एक शासक या ज्ञात लंबाई के अन्य ऑब्जेक्ट के कब्जा किए गए वीडियो चित्रों का उपयोग करके भूलभुलैया में दूरी को कैलिब्रेट करें।
नोट: इस प्रक्रिया में व्यवहार पद्धति विभिन्न प्रकार के डेटा अधिग्रहण प्रणालियों के साथ काम करेगी और लेखकों को किसी भी प्रकार की कल्पना होगीइस प्रक्रिया को निष्पादित करने के लिए उनके चुने हुए डाटा अधिग्रहण प्रणाली के प्रयोग में कुशल है। पावर विश्लेषण से पता चलता है कि प्रति समूह 10-15 चूहों के सैंपल आकार को β ≤0.2 के लिए आवश्यक है। - पिंजरे को रैक से निकालें और धीरे-धीरे इसे वाई-भूलभुलैया के निकट एक मेज पर रखें। माउस को अपने घर पिंजरे से निकालें और धीरे-धीरे इसे वाई-भूलभुलैया के एक हाथ में रखें, केंद्र का सामना करना। अन्वेषक को भूलभुलैया से बहुत दूर दूर रखें ताकि माउस अन्वेषक को नहीं देख सकें।
- भूलभुलैया में माउस की नियुक्ति के तुरंत बाद डेटा / वीडियो अधिग्रहण प्रणाली सक्रिय करें।
- 10 मिनट की अवधि के लिए खेलने के लिए प्रत्येक माउस के लिए सहज व्यवहार को रिकॉर्ड करें और रिकॉर्ड करें एक सत्र पूरा हो जाने के बाद, माउस को अपने घर के पिंजरे में धीरे से रखें और पिंजरे को रैक पर लौटें।
- प्रत्येक सत्र के बीच एक अनसैटेड ब्लीच जिर्मिसिअल पोंछे के साथ पूरी तरह से भूलभुलैया को साफ करें, 70% एटओएच, डीएच 2 ओ द्वारा पीछा किया।ई।
- एक बार सभी चूहों ने वाई-भूलभुलैया की अन्वेषण पूरी कर ली है, अधिग्रहण प्रणाली से डेटा का विश्लेषण या सत्र के वीडियो को मैन्युअल रूप से स्कोरित किया है। एक हाथ प्रविष्टि तब होती है जब माउस के सभी 4 पंजे केंद्रीय क्षेत्र की सीमा पार करते हैं और हाथ में होते हैं और जानवर के थूथन हाथ के अंत की ओर उन्मुख होते हैं।
नोट: समापन बिंदुओं का विश्लेषण किया गया है जिसमें शामिल हैं: भूलभुलैया में कुल दूरी, प्रत्येक बांह (केंद्रीय क्षेत्र सहित) में कुल दूरी, प्रत्येक हाथ (केंद्रीय क्षेत्र सहित) में खर्च कुल समय, हाथ की प्रविष्टियों की कुल संख्या, संख्या प्रत्येक बांह में प्रविष्टियां, और किए गए परिवर्तनों की संख्या का आकलन करने के लिए हथियारों की क्रमिक सूची दर्ज की गई। - एक स्वस्थ प्रत्यावर्तन तब होता है जब एक माउस 3 लगातार हाथ प्रविष्टियों में से प्रत्येक में भूलभुलैया के एक अलग हाथ में प्रवेश करता है। उत्स्फूर्त प्रत्यावर्तन% की गणना तब निम्नलिखित सूत्र के साथ की जाती है।
नोट: उदाहरण के लिए, iएफ हाथ प्रविष्टि के आदेश था: एबीसीसीबीएबीएसीबीसी, अन्वेषक कुल 6 सहज गति से (क्रम में: एबीसी, सीबीए, एबीसी, बीसीए, सीएबी, एबीसी) स्कोर करेगा। कुल 11 आर्म प्रविष्टियों के साथ, स्वैच्छिक प्रत्यावर्तन% 67% होगा - यह सुनिश्चित करने के लिए कि डेटा स्वैच्छिक प्रत्यावर्तन के निष्पक्ष मूल्यांकन का प्रतिनिधित्व करते हैं, निम्न गुणवत्ता नियंत्रण जांच करें।
- उत्तराधिकारी% के लिए पीयरसन के सह-संबंध को निष्पादित करने के लिए कुल दूरी की यात्रा की और हाथों की प्रविष्टियों की संख्या को बनाया।
नोट: अगर किसी भी पैरामीटर के लिए सहज प्रत्यावर्तन% का कोई महत्वपूर्ण सहसंबंध है, तो स्पष्ट संज्ञानात्मक समापन बिंदु 10 पर हाइपरडिएगिक लॉकमोशन के संभावित प्रभाव के कारण डेटा को आगे की जांच करनी चाहिए। - 1-एएनओवीए टेस्ट के साथ प्रत्येक बांह में प्रविष्टियों की संख्या का विश्लेषण करें
नोट: यदि यह विश्लेषण महत्वपूर्ण है तो यह उस वातावरण में संकेतों की उपस्थिति का संकेत देगा जो चूहों को एक विशेष रेजी के लिए आकर्षित कियाभूलभुलैया पर
- उत्तराधिकारी% के लिए पीयरसन के सह-संबंध को निष्पादित करने के लिए कुल दूरी की यात्रा की और हाथों की प्रविष्टियों की संख्या को बनाया।
4. उपन्यास वस्तु मान्यता 11 , 12 , 13 को मापकर इंटरमीडिएट-टर्म रिकॉग्निशन मेमोरी का आकलन
- इस परीक्षण के प्रत्येक चरण के लिए, एक अनसैटेड ब्लीच जिर्मिसियल पोंछे के साथ खुला क्षेत्र क्षेत्र को अच्छी तरह से साफ करें, 70% एटॉएच, प्रारंभिक उपयोग के पहले डीएच 2 ओ द्वारा पीछा किया।
- एक्सपोज़र ऑब्जेक्ट करने से एक दिन पहले खुले मैदान के क्षेत्र में चूहों की आदत हो जाती है।
- अधिवास सत्र की शुरुआत से पहले, डेटा अधिग्रहण प्रणाली या वीडियो कैमरों की स्थापना करें और भूलभुलैया में चूहों की उचित ट्रैकिंग की पुष्टि करें। किसी शासक के कब्जा किए गए वीडियो चित्रों या ज्ञात लंबाई के अन्य ऑब्जेक्ट का उपयोग करते हुए क्षेत्र में दूरी को कैलिब्रेट करें। स्थितीय पूर्वाग्रहों के स्कोरिंग की अनुमति देने के लिए सॉफ़्टवेयर में क्षेत्र के कोनों को चिह्नित करें।
नोट: इस प्रक्रिया में व्यवहार विधियां विभिन्न प्रकार के डाटा अधिग्रहण के साथ कार्य करेगीउपजी और लेखकों का मानना है कि इस प्रक्रिया को करने वाले किसी व्यक्ति को अपने चुने हुए डाटा अधिग्रहण प्रणाली के उपयोग में प्रवीण है। पावर विश्लेषण से पता चलता है कि प्रति समूह 15-20 चूहों के नमूने आकार एक बी 0 β0.2 के लिए आवश्यक हैं। - रैक से पिंजरे को निकालें और धीरे-धीरे एक मेज पर अखाड़ा में निकट स्थान पर रखें।
- घर पिंजरे से माउस निकालें और धीरे-धीरे माउस को क्षेत्र के केंद्र में रखें। माउस को मैदान में रखने के तुरंत बाद ट्रैकिंग सॉफ़्टवेयर और / या वीडियो रिकॉर्डिंग सिस्टम को चालू करें।
- चूहों को स्वतंत्र रूप से 30 मिनट के लिए क्षेत्र का पता लगाने की अनुमति दें
नोट: इस अवधि के दौरान, जांचकर्ता चूहों को परेशान नहीं करेंगे। - आत्मीय सत्र के बाद, अपने घर के पिंजरे में चूहों को वापस लाएं और बिना अछूता ब्लीच रोगाणुनाशक पोंछे के साथ मैदान को साफ करें, 70% एटओएच डीएच 2 ओ द्वारा पीछा किया।
- स्टेप 4.2.2 से दोहराएं जब तक सभी चूहों को क्षेत्र में घूमने नहीं दिया जाता।
- सभी चूहों की आदत हो जाने के बादक्षेत्र के लिए उदार, वीडियो का विश्लेषण करें
नोट: विश्लेषण के लिए समापन बिंदु प्रत्येक कोने के पास बिताए क्षेत्र और समय में किए गए कुल दूरी में शामिल हैं यदि माउस मॉडल के लिए प्रासंगिक है, तो इन विश्लेषकों में रूढ़िबद्ध व्यवहार शामिल हैं ( यानी , मैकलोनिक कॉर्नर कूद, चक्कर आदि )। क्षेत्र के विशेष क्षेत्रों में बिताए गए समय में पक्षपात का प्रदर्शन करने वाले चूहों को आगे के प्रयोग से बाहर रखा गया है क्योंकि यह वस्तु की खोज को प्रभावित करेगा।
नोट: उपन्यास वस्तु पहचान के पहले चरण में किसी वस्तु के लिए चूहों को परिचित करना शामिल है। इस प्रकार उपन्यास वस्तु मान्यता प्रक्रिया के इस हिस्से को नमूना चरण के रूप में संदर्भित किया जाएगा। - एक नमूना चरण सत्र की शुरुआत से पहले, ऑर्गेनाइजेशन में ऑब्जेक्ट्स को जगह दें और उन्हें एक बढ़ते पोटीन के साथ फर्श पर ठीक करें जिससे कि जानवर वस्तुओं को नहीं ले जा सकें। दीवारों और वस्तुओं के बीच पर्याप्त दूरी के साथ एक विशेष दीवार पर दो समान वस्तुओं को संरेखित करें ताकि चूहों को ऑब्जेक्ट को सभी अंगों से स्वतंत्र रूप से पता लगा सके।लेस।
- डेटा अधिग्रहण प्रणाली या वीडियो कैमरों को सेट करें और भूलभुलैया में चूहों और वस्तुओं के उचित ट्रैकिंग की पुष्टि करें। किसी शासक के कब्जा किए गए वीडियो चित्रों या ज्ञात लंबाई के अन्य ऑब्जेक्ट का उपयोग करके क्षेत्र में दूरी को कैलिब्रेट करें।
- स्थितीय पूर्वाग्रहों के स्कोरिंग की अनुमति देने के लिए सॉफ़्टवेयर में क्षेत्र के कोनों को चिह्नित करें। वस्तुओं में सॉफ़्टवेयर चिह्नित करें और प्रत्येक ऑब्जेक्ट के लिए अलग से अपने अन्वेषण व्यवहार को ट्रैक करें ( यानी , "ऑब्जेक्ट ए" और "ऑब्जेक्ट बी")।
- पिंजरे को रैक से निकालें और धीरे-धीरे इसे मैदान पर करीब एक मेज पर रख दें।
- घर पिंजरे से माउस निकालें और धीरे-धीरे ऑब्जेक्ट्स के बीच में, ऑब्जेक्ट्स का सामना कर रखें।
- माउस को आज़ादी से 15 मिनट के लिए ऑब्जेक्ट एक्सप्लोर करने दें। इस अवधि के दौरान चूहों को परेशान मत करना।
- सत्र के अंत में, माउस को अपने घर के पिंजरे में धीरे से रखें। 70% EtOH और डीएच 2 ओ के साथ क्षेत्र और ऑब्जेक्ट को साफ करें। इन ऑब्जेक्ट्स को वापस वें स्थान पर रखेंई क्षेत्र
- चरण 4.2.11 दोहराएं जब तक सभी चूहों को एक वस्तु के लिए परिचित नहीं किया जाता है
- एक बार सभी चूहों को एक वस्तु के लिए परिचित किया गया है, तो वीडियो का विश्लेषण करें।
नोट: ऑब्जेक्ट एक्सप्लोरेशन की गणना निम्न मानदंडों को पूरा करने के बाद की जाती है: माउस ऑब्जेक्ट की ओर उन्मुख है, स्नौउट ऑब्जेक्ट के 2 सेंटीमीटर के भीतर है, पशु के शरीर के मिडपॉइंट ऑब्जेक्ट से 2 सेमी से अधिक है, और पिछला मापदंड कम से कम 1 एस के लिए पूरा किया गया है इसके अतिरिक्त, यदि किसी जानवर ने खोज मानदंडों को संतुष्ट किया है, लेकिन 10 एस के लिए अस्थिरता दर्शाता है, तो खोजी डटकर समाप्त हो गया है। - निम्नानुसार प्रत्येक माउस के लिए ऑब्जेक्ट बैरस स्कोर की गणना करें
नोट: 20% या 80% से अधिक नीचे ऑब्जेक्ट बायस स्कोर का प्रदर्शन करने वाले चूहों को आगे के प्रयोग से बाहर रखा गया है।
- अधिवास सत्र की शुरुआत से पहले, डेटा अधिग्रहण प्रणाली या वीडियो कैमरों की स्थापना करें और भूलभुलैया में चूहों की उचित ट्रैकिंग की पुष्टि करें। किसी शासक के कब्जा किए गए वीडियो चित्रों या ज्ञात लंबाई के अन्य ऑब्जेक्ट का उपयोग करते हुए क्षेत्र में दूरी को कैलिब्रेट करें। स्थितीय पूर्वाग्रहों के स्कोरिंग की अनुमति देने के लिए सॉफ़्टवेयर में क्षेत्र के कोनों को चिह्नित करें।
- उपन्यास वस्तु पहचान के अंतिम चरण में खोजपूर्ण व्यवहार का मूल्यांकन करना शामिल हैपर्यावरण में एक उपन्यास और परिचित वस्तु दोनों की ओर निर्देशित किया गया है, जिसे यहां टेस्ट चरण के रूप में संदर्भित किया गया है। नमूना चरण के पूरा होने के बाद यह चरण 2-3 घंटे किया जाता है।
- एक परीक्षण चरण सत्र की शुरुआत से पहले, ऑर्गेन में ऑब्जेक्ट्स को जगह दें और उन्हें फर्श पर ठीक करें जिससे कि जानवर ऑब्जेक्ट को स्थानांतरित न कर सकें।
- नमूना चरण 13 से संबंधित वस्तुओं में समान स्थिति में वस्तुओं को रखें।
- जैनोटाइप और उपचार समूहों में उपन्यास और परिचित वस्तुओं की रिश्तेदार स्थिति को संतुलित करें।
- सुनिश्चित करें कि दीवारों और वस्तुओं के बीच पर्याप्त दूरी है ताकि चूहों को सभी कोणों से ऑब्जेक्ट्स का स्वतंत्र रूप से पता लगा सके।
- डेटा अधिग्रहण प्रणाली और / या वीडियो कैमरे सेटअप करें भूलभुलैया में चूहों और वस्तुओं के उचित ट्रैकिंग की पुष्टि करें। एक शासक या ज्ञात लंबाई के अन्य ऑब्जेक्ट के कब्जा किए गए वीडियो चित्रों का उपयोग करते हुए क्षेत्र में दूरी को कैलिब्रेट करें
- नरक में मैदान के कोनों को चिह्नित करेंस्थितिगत पूर्वाग्रहों के स्कोरिंग की अनुमति है सॉफ़्टवेयर में वस्तुओं को चिह्नित करें और प्रत्येक ऑब्जेक्ट के लिए व्यक्तिगत रूप से अन्वेषण करें ( यानी , "उपन्यास" और "परिचित")।
- पिंजरे को रैक से निकालें और धीरे-धीरे इसे मैदान पर करीब एक मेज पर रख दें।
- धीरे-धीरे जानवरों को क्षेत्र के केंद्र में रखें, वस्तुओं का सामना करना। रिकॉर्ड्स चूहों को आज़ादी से 10 मिनट के लिए वस्तुओं की तलाश में
- परीक्षण सत्र के अंत में, क्षेत्र से चूहों को हटा दें और चूहों को अपने घर के पिंजरे में वापस करें। पूरी तरह साफ क्षेत्र और ऑब्जेक्ट्स जिनके साथ बिना सांस की ब्लीच जिर्मिसियल पोंछे, 70% एटओएच और डीएच 2 ओ प्रत्येक सत्र के बाद।
- चरण 4.4.3 से दोहराएं जब तक सभी जानवरों का आकलन नहीं किया गया हो।
- ऑब्जेक्ट अन्वेषण के बाद सभी चूहों के लिए मापा जाता है, वीडियो का विश्लेषण किया जाता है।
नोट: निम्न मानदंडों को पूरा करने के बाद ऑब्जेक्ट एक्सप्लोरेशन की गणना की जाती है: माउस ऑब्जेक्ट की ओर उन्मुख होता है, थूथन ऑब्जेक्ट के 2 सेमी के अंदर होता है, मिडपॉइंट ऑफ़जानवर के शरीर वस्तु से 2 सेमी से अधिक है, और पिछले मानदंडों को कम से कम 1 एस के लिए पूरा किया गया है। इसके अतिरिक्त, यदि किसी जानवर ने खोज मानदंडों को संतुष्ट किया है, लेकिन 10 एस के लिए अस्थिरता दर्शाता है, तो खोजी डटकर समाप्त हो गया है। - परिचित वस्तु को उपन्यास की तलाश में बिताए समय की तुलना करके उपन्यास वस्तु पहचान का आकलन करें साहित्य में आमतौर पर तीन तरीकों की सूचना दी जाती है
- दोहराए जाने वाले परीक्षण का उपयोग करते हुए दोनों उपन्यास और परिचित वस्तुओं का पता लगाने के लिए कच्चे समय का विश्लेषण करें। इस विधि का सबसे अच्छा उपयोग किया जाता है जब जीनोटाइप और / या उपचार कुल अन्वेषण समय को प्रभावित नहीं करते हैं।
- समीकरण का उपयोग करके, नवीनता प्राथमिकता की गणना करें:
नोट: यह ऑब्जेक्ट की खोज के लिए कुल समय के सापेक्ष उपन्यास वस्तु की खोज में बिताए समय का प्रतिशत प्रदान करता है। मूल्य 0% (उपन्यास वस्तु का कोई अन्वेषण नहीं) से लेकर 100% तक है (केवल उपन्यास ओबी की खोजजेक्ट), 50% के मूल्य के साथ उपन्यास और परिचित वस्तुओं की तलाश में बराबर का समय दर्शाता है। - समीकरण का उपयोग करते हुए भेदभाव सूचकांक 11 की गणना करें:
नोट: वस्तुओं की खोज में बिताए कुल समय के सापेक्ष उपन्यास और परिचित वस्तुओं की खोज में समय व्यतीत किया गया समय में यह अंतर उत्पन्न करता है। मूल्य -1 (केवल परिचित वस्तु का अन्वेषण) +1 (केवल उपन्यास वस्तु का अन्वेषण, 0 के मूल्य के साथ-साथ उपन्यास और परिचित वस्तुओं की तलाश में बराबर समय का संकेत देता है
- उन जानवरों को निकालें जो परीक्षण सत्र में भाग नहीं लेते हैं क्योंकि हाइपरडीएनिक गतिमान या अन्य स्टिरीटिप्पी के कारण 11
नोट: निकालने के लिए उपयोग किए जाने वाले मानदंड का उद्देश्य होना चाहिए और माउस मॉडल के लिए एक प्राथमिकता निर्धारित किया जाना चाहिए ( यानी , कुल अन्वेषण समय के लिए <5 वें प्रतिशतय और या तो> 100 औसतपरीक्षण सत्र के दौरान बारी कोण या> 50 वीं प्रतिशत्यकालिक माइकोल्ोनिक कोने कूदने का प्रदर्शन करते हुए)
- एक परीक्षण चरण सत्र की शुरुआत से पहले, ऑर्गेन में ऑब्जेक्ट्स को जगह दें और उन्हें फर्श पर ठीक करें जिससे कि जानवर ऑब्जेक्ट को स्थानांतरित न कर सकें।
5. लीब क्लैसिंग के साथ चूहे में कोर्टिकॉस्फीन फंक्शन का आकलन
- वीडियो दस्तावेज़ पूरे सत्र। एक पोर्टेबल हाथ से आयोजित डिवाइस ( यानी , स्मार्टफोन या समतुल्य) का उपयोग करके वीडियो रिकॉर्ड करें।
नोट: पावर विश्लेषण से संकेत मिलता है कि प्रति समूह 10-15 चूहों के नमूने आकार एक β ≤0.2 के लिए आवश्यक हैं। - रैक से घर के पिंजरे को निकालें और इसे एक मेज पर रखें अगले चरण से पहले वीडियो में पशु आईडी दस्तावेज़ करें।
- धीरे से अपने पिंजरे से माउस को हटा दें और 5-10 एस के लिए पूंछ से निलंबित करें निलंबित होने के दौरान वीडियो को पशुओं के हिंद और फॉरेपॉव्स रिकॉर्ड करना होगा।
- कम से कम 5 एस वीडियो पर कब्जा करने के बाद, माउस को अपने घर के पिंजरे में रखें, और पिंजरे को रैक पर लौटें।
- मेज साफ़ करो। चरण 5.2 से दोहराएं जब तक सभी चूहों को रिकॉर्ड नहीं किया गया हो घ।
- 0-4 (स्कोरिंग के विवरण के लिए तालिका 1 देखें) से पैमाने पर अपनी पूंछ द्वारा निलंबित चूहों के वीडियो से स्कोर अंग को चिपकाने। निलंबित चूहों के वीडियो का निरीक्षण करें और फिर निम्न मानदंडों के आधार पर स्कोर असाइन करें।
- कोई अंग clasping नहीं सामान्य एस्केप एक्सटेंशन एक हिंद अंग अपूर्ण एसप्ले और गतिशीलता का नुकसान दर्शाता है। पैर की उंगलियों सामान्य प्रदर्शन splay
- हिंद अंग दोनों अधूरे प्रदर्शन और गतिशीलता का नुकसान दर्शाते हैं। पैर की उंगलियों सामान्य प्रदर्शन splay
- दोनों हिंद अंग, घुमावदार पैर की उंगलियों और स्थिरता के साथ लहराते दिखाते हैं।
- फोरमडिब्स और हिंद अंग, लहराती प्रदर्शित करते हैं और पार कर रहे हैं, पैर की उंगलियां घुमाव और गतिहीनता
- सभी चूहों के 2 स्वतंत्र जांचकर्ताओं द्वारा रन बनाए गए हैं कोई भी माउस जहां 2 अंक 1 से अधिक बिंदु से भिन्न होता है, वह एक बार फिर से बचाया जाता है।
- औसत दर्जे वाले स्कोर औसत हैं
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तालिका 1: लिंब क्लैसिंग स्कोर का विवरण।
Representative Results
वृद्ध Tg2576 चूहों, वाई-भूलभुलैया 15 , 16 , एक फेनोटाइप के भीतर बनाई गई सहज गतियों में मजबूत घाटे को दर्शाती हैं जो यहां वर्णित विधियों का उपयोग करके दोहराया जा सकता है ( चित्रा 1 ए )। जबकि इन चूहों ( चित्रा 1 बी ) में वृद्धि हुई शाखा प्रविष्टियों का रुझान देखा गया है, चूहों की इस रेखा में मनाया जाने वाला सक्रियता सहज गतिशीलता दर ( चित्रा 1 सी ) को प्रभावित नहीं करती है। इसके विपरीत, वयोवृद्ध आरटीजी 4510 चूहों को एक वाई-भूलभुलैया ( चित्रा 1 डी ) में रखा जाने वाला उत्कंठा प्रकोष्ठ बढ़ाया जाता है। यह चरम अति सक्रियता ( चित्रा 1 ई ) और रूढ़िवादी 10 के कारण है , जो सहज रूप से सहज परिवर्तन ( चित्रा 1 एफ ) के माप के साथ हस्तक्षेप करता है। शुरू में इस कार्य में चूहों का आकलन करने पर, यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि हाथ की प्रविष्टियां और / या दूरी यात्रा की नहीं हैबहुत सहज अंतरण दर के साथ सहसंबद्ध
उपन्यास वस्तु पहचान का आकलन करने से पहले, चूहों के क्षेत्र में टेस्ट किया जाता है जहां टेस्ट किया जाएगा। आबादी के दौरान, माउस मॉडल से संबंधित सक्रियता ( चित्रा 2 ए ) और अन्य टकसाली वाला व्यवहार मूल्यांकन किया जा सकता है। नमूना चरण के दौरान, प्रत्येक वस्तु के अन्वेषण को अलग से अलग करना महत्वपूर्ण है ताकि चूहों जो खोजपूर्ण व्यवहार में महत्वपूर्ण पूर्वाग्रहों को प्रदर्शित करता है, उन्हें आगे मूल्यांकन ( चित्रा 2 बी , खुले वृत्त) से बाहर रखा जा सकता है। उपन्यास वस्तु पहचान का परिचित और उपन्यास वस्तु की अन्वेषण की तुलना करके मूल्यांकन किया जाता है, और आमतौर पर तीन अलग-अलग तरीकों से विश्लेषण किया जाता है यदि कुल खोज समय जैनोटाइप और / या उपचार समूहों में तुलनीय है, तो कच्चे समय प्रत्येक ऑब्जेक्ट की खोज कर रहे हैं और एक उपयुक्त दोहराया उपायों का परीक्षण यह निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है कि क्या उपन्यास ऑब्जेक्ट में अंतर होता हैपहचान ( चित्रा 2 सी )। यदि एक विशिष्ट माउस तनाव कुल अन्वेषण समय में अंतर दर्शाता है, तो उपन्यास ऑब्जेक्ट पहचान को नवीनता प्राथमिकता ( चित्रा 2 डी ) या भेदभाव सूचकांक ( चित्रा 2 ई ) का उपयोग करके मूल्यांकन किया जा सकता है।
अंग क्लैसिंग एक कार्यात्मक मोटर परीक्षण है जो कॉर्टिसोस्पिन फंक्शन में घाटे का प्रमाण देता है। अंग संलक्षण, जो कोई संज्ञानात्मक उपाय नहीं है, कई ट्रांसजेनिक ताउ माउस मॉडल 6 , 17 , 18 , 1 9 में मनाया जाता है और देर-चरण एडी रोगियों में मनाया जाने वाला कुछ क्रियात्मक मोटर घाटे का पुनर्कथन करता है। पूंछ द्वारा चूहों के निलंबन से बचने की प्रतिक्रिया ( चित्रा 3 ए , "0") निकलती है। हिंद अंग को चापलूसी करने की क्षमता में घाटे और पैर की उंगलियों को 0-4 ( चित्रा 3) से पैमाने पर उनकी गंभीरता के आधार पर रन बनाए गए हैंए)। यहां उल्लिखित प्रक्रिया का उपयोग करते हुए, कोई भी आरटीजी 4510 चूहों ( चित्रा 3 बी ) में महत्वपूर्ण अंग को चिपका सकता है।
चित्रा 1: वाई-भूलभुलैया में स्वस्थ परिवर्तन। ( ए ) जब एक वाई-भूलभुलैया में रखा जाता है, तो चूहों को खो-पारी की खोज की रणनीति को अपनाना होता है जो नतीजे की खोज में होता है जिससे हर हाथ हर 3 हाथ प्रविष्टियों के लिए एक बार पता लगाया जाता है। वृद्ध Tg2576 चूहों को सहज गति में एक महत्वपूर्ण कमी दिखाई देती है। इस पद्धति में उल्लिखित प्रक्रियाओं का उपयोग करना, मालिकाना परिसर के साथ इलाज के बाद सहज प्रत्यावर्तन की एक महत्वपूर्ण बहाली देखी गई थी। डेटा का विश्लेषण 1-रास्ता एनोवा और टीजी-पीबीएस के बाद-तमाम तुलना Dunnett के परीक्षण का उपयोग कर किया गया था। ** p <0.01 त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM ( बी ) हाथ प्रविष्टियों की संख्या किसी भी में काफी अलग नहीं थीइस प्रयोग में नजर रखी गई समूहों की 1-रास्ता एनोवा टेस्ट का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया। त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM ( सी ) सहज प्रत्यावर्तन और हाथों की प्रविष्टियों की संख्या के बीच कोई संबंध नहीं था, यह दर्शाता है कि सहज गति से गतिविधि में कोई मतभेद स्वस्थ परिवर्तन की मात्रा का ठहराव नहीं करता। पियर्सन के सहसंबंध विश्लेषण का उपयोग करके सहसंबंध परीक्षण किया गया था ( डी ) जब एक वाई-भूलभुलैया में रखा जाता है, तो आरटीजी 4510 चूहों (6 महीने) में लिटरेमेट डब्ल्यूटी चूहों के सापेक्ष काफी अधिक सहज प्रत्यावर्तन प्रदर्शित होता है। डेटा 1-एएनओवीए द्वारा विश्लेषण किया गया और टीएनजी-पीबीएस के बाद-त्यौहार की तुलना डनटट के परीक्षण के द्वारा किया गया। ** p <0.01 त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM ( ई ) आरटीजी 4510 चूहों ने अत्यधिक चरम हाइपरडिएगिक लॉकमोशन के कारण बहुत अधिक हाथ प्रविष्टियां बनाईं। डेटा 1-एएनओवीए द्वारा विश्लेषण किया गया और टीएनजी-पीबीएस के बाद-त्यौहार की तुलना डनटट के परीक्षण के द्वारा किया गया। *** पी <0.001 त्रुटि सलाखों से एसई संकेत मिलता हैएम। ( एफ ) स्वैच्छिक प्रत्यावर्तन व्यवहार, हाथ प्रविष्टियों से काफी सहसंबद्ध होता है, यह दर्शाता है कि हाइपरडिएक गतिरोधी फेनोटाईप ने सही सहज प्रत्यावर्तन को अस्पष्ट किया है। पियर्सन के सहसंबंध विश्लेषण (आर = 0.7, पी <0.0001) का उपयोग करके सहसंबंध परीक्षण किया गया था। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
चित्रा 2: उपन्यास वस्तु मान्यता ( ए ) एरेना आबादी एक विशेष माउस मॉडल के लिए प्रासंगिक सहज गतिरोध और अन्य टकसाली व्यवहार का माप परमिट। यहां, वृद्ध Tg2576 चूहों (22 महीने) लिटरेमेट डब्लूटी चूहों के सापेक्ष काफी अधिक सहज गति से चलने वाला प्रदर्शन दिखाती हैं। डाटा का विश्लेषण 1-रास्ता एनोवा द्वारा किया गया और टीजी-व्हेल के बाद-तमाम तुलना डनेट के प्रयोग से की गई।परीक्षण ** p <0.01 त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM ( बी ) नमूना चरण के दौरान, दो समान वस्तुओं की अन्वेषण अलग से ट्रैक किया गया था। चूहे जो दो ऑब्जेक्ट्स (खुली सर्कल) में से एक के अन्वेषण के लिए बड़े पक्षपात को प्रदर्शित करता है, उन्हें परीक्षण चरण से बाहर रखा गया था। ( सी - ई ) उपन्यास वस्तु पहचान का मूल्यांकन एक उपन्यास और परिचित वस्तु की खोज को मापकर किया गया था। उपन्यास वस्तु पहचान ( सी ) कच्चे अन्वेषण समय, ( डी ) नवीनता प्राथमिकता या ( ई ) भेदभाव सूचकांक का उपयोग करके मूल्यांकन किया गया था। पैनल सी में डेटा दो तरह के उपायों के साथ 2-रास्ता एनोवा का उपयोग करके विश्लेषण किया गया और सिपाक के परीक्षण का उपयोग करके जोड़ों की तुलना की गई। पैनल्स में डेटा डी का विश्लेषण 1-रास्ता एनोवा के साथ किया गया और टीएजी-व्हेज के बाद त्यौहार की तुलना डनट्ट के परीक्षण के जरिए की गई। * पी <0.05, ** p <0.01 त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM फिर से लॉगिन करने के लिएयहाँ इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए।
चित्रा 3: लिंब क्लैसिंग ( ए ) तालिका 1 में वर्णित के रूप में वर्णित अंगों के विभिन्न स्तरों का प्रदर्शन करने वाले चूहों की प्रतिनिधि छवियां। इन बीमारियों का उपयोग करते हुए स्कोर के रूप में लिटरेमेट डब्लूटी चूहों के सापेक्ष महत्वपूर्ण अंगों को जोड़ते हुए, आरटीजी 4510 चूहों (6 महीने) डेटा का विश्लेषण 1-रास्ता एनोवा और टीजी-पीबीएस के बाद-हुक तुलना का उपयोग किया गया था जो डनटट के परीक्षण का उपयोग किया गया था। *** पी <0.001, **** p <0.0001 त्रुटि सलाखों से संकेत मिलता है SEM इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
Discussion
मौजूदा तरीकों से सम्मान के साथ तकनीक का महत्व
इस प्रक्रिया को β-amyloidosis और tauopathy के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में यौगिकों के vivo गतिविधि के लिए स्क्रीन के लिए डिज़ाइन किया गया है। यहां नियोजित चरणबद्ध दृष्टिकोण एडी 3 से संबंधित संज्ञानात्मक डोमेन में प्रभावकारी यौगिकों का पता लगाना सुनिश्चित करता है। इसके अलावा, यहां विस्तृत दृष्टिकोण का उपयोग व्यवहार परीक्षणों का होता है जो स्पष्ट रूप से समापन बिंदुओं को परिभाषित करते हैं, आसानी से कार्यान्वित गुणवत्ता नियंत्रण जांच, एक मध्यम थ्रूपूट प्रारूप में चलाया जा सकता है, और अन्वेषक से थोड़ा हस्तक्षेप की आवश्यकता होती है। इन विशेषताओं का परिणाम है कि जानवरों और पारियों के बीच में अच्छी प्रजननशीलता प्रदर्शित होती है, जिसके परिणामस्वरूप अंतराल और अंतर-अंतर के भिन्नता और प्रभाव के आकार (2 ≤ एफ ≤6) होते हैं जो ड्रग की खोज के वातावरण में व्यवहार की रूपरेखा का समर्थन करने के लिए पर्याप्त हैं।
पीआर के भीतर महत्वपूर्ण कदमotocol
ईडी ड्रग की खोज के प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किए जाने वाले कई माउस मॉडल एक्स्ट्रिब्यूशन व्यवहारों की बढ़ती चिंता और आक्रामकता के अनुरूप हैं। यह यहाँ वर्णित व्यवहार परीक्षणों के किसी भी प्रदर्शन के लिए आवश्यक आबादी का प्रबंधन करता है। चूंकि इन परीक्षणों को अप्रतिबंधित व्यवहारों पर भरोसा है, एक अति सक्रिय और चिंतित या आक्रामक माउस के कारण अन्वेषक द्वारा किसी न किसी तरह से निपटने से प्रदर्शन को काफी प्रभावित किया जा सकता है। ऊंची चिंता ने परीक्षण करने की पूरी शक्ति को कम करने, कार्य करने में विफलता का कारण हो सकता है। इसके अलावा, क्षेत्र में प्रकाश स्तर प्रत्येक परीक्षा के लिए जरूरी सहज गति से स्थान की सुविधा के लिए आवश्यक है। उज्ज्वल प्रकाश चिड़चिड़ियों में चिंता बढ़ाने और दबा देने के लिए, इसलिए अंचल में 30-35 लक्स को परिवेश प्रकाश स्तर समायोजित करने के लिए ध्यान रखना चाहिए।
प्रक्रिया का एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू मजबूत पर्यावरणीय संकेतों के कम से कम है जो कि कार्यों को चलाने के लिए किसी जानवर की क्षमता में हस्तक्षेप करेगा। की सफाईरनों के बीच क्षेत्र और ऑब्जेक्ट आवश्यक है क्योंकि चूहों को पर्यावरण में उपन्यास scents के लिए आकर्षित कर रहे हैं। क्षेत्र और वस्तुओं को अच्छी तरह से साफ करने में विफलता के परिणामस्वरूप माउस की सहज गतिविधि को छूने और सही संज्ञानात्मक प्रदर्शन का मुखौटा लगाना हो सकता है। इन प्रक्रियाओं को करते समय जांचकर्ताओं को निजी स्वच्छता उत्पादों और कोलोन / इत्र के उपयोग को कम करना चाहिए। अन्त में, कृन्तकों ने शिक्षा और स्मृति 21 सहित कई अति व्यवहारों में मजबूत दैनंदनल और सर्कैडियन परिवर्तन प्रदर्शित किए हैं। इसलिए, बेसल व्यवहारों और संज्ञानात्मक प्रदर्शन में दैनिक ताल के कारण विचरण को कम करने के लिए, सभी परीक्षण पूरे समय और अध्ययनों के दौरान पूरे किए जाने चाहिए।
इसके अलावा, विशेष रूप से उपन्यास वस्तु पहचान के संबंध में, नमूना और परीक्षण चरण के बीच विलंब अंतराल, और पर्यावरण में वस्तुओं के चयन और नियुक्ति महत्वपूर्ण पैरामीटर हैं। मेमोरी 3 अलग रूपों में मौजूद है: अल्पावधि मेमओआरआई (एसटीएम), इंटरमीडिएट टर्म मेमोरी (आईटीएम) और लॉन्ग टर्म मेमोरी (एलटीएम) 22 , 23 नमूने और परीक्षण चरणों के बीच मिनट (एसटीएम) से घंटों (आईटीएम) या दिन (एलटीएम) के बीच अंतराल बदलने से प्रक्रिया 12 द्वारा परीक्षण की गई स्मृति का प्रकार बदल जाएगा। इसके अलावा, उपन्यास ऑब्जेक्ट मान्यता परीक्षण चलाने से पहले, अन्वेषण में संभावित पक्षपात के लिए कई वस्तुओं को चूहों के एक परीक्षण समूह में जांचना चाहिए। उपन्यास ऑब्जेक्ट मान्यता का मूल्यांकन करते समय परीक्षण वस्तु के लिए अत्यधिक आकर्षक या प्रतिकारक वस्तु का उपयोग नहीं किया जा सकता है। आदर्श रूप से सभी ऑब्जेक्ट्स जिन्हें टेस्ट में नियोजित किया जाएगा, जब एक क्षेत्र में रखा जाएगा, चूहों के एक भोले समूह से समान अन्वेषण समय निकाल देगा। अपर्याप्त परीक्षण और वस्तुओं का अनुकूलन, उपन्यास वस्तु पहचान की शक्ति को काफी कम कर सकता है।
संशोधन और समस्या निवारण
कई कारक हैं जो कि वृद्धि कर सकते हैंयहाँ वर्णित संज्ञानात्मक परीक्षणों में स्पष्ट परिवर्तनशीलता। ई। के कई माउस मॉडल हाइपरडिएगिक लॉकमोशन 3 प्रदर्शित करता है जो संज्ञानात्मक समापन बिंदु के रूप में मापा गया व्यवहार को बदल सकता है या बदल सकता है। इसके अलावा, यह प्रमाण बढ़ रहा है कि सेक्स 24 , 25 , 26 और यहां तक कि मातृ जीनटाइप 27 भी एडी माउस मॉडल में न्यूरोपैथोलॉजी और संज्ञानात्मक फेनोटाइप के विकास और प्रगति को प्रभावित कर सकते हैं। अनपेक्षित परिवर्तनशीलता या व्यवहार क्रिया को लागू करने में विफलता इन कारकों में से किसी के कारण हो सकती है। जब किसी विशेष व्यवहार परीक्षण को पहले कार्यान्वित किया जाता है, तो परिणाम लिंग, आयु और लागू होने पर, मातृ जन्योटाइप के आधार पर हमेशा से ही स्तरीकृत होना चाहिए। इसके अलावा, इस प्रक्रिया में उल्लिखित गुणवत्ता जांच को यह सुनिश्चित करने के लिए हमेशा किया जाना चाहिए कि संवेदनात्मक समापन बिंदुओं की मात्रा का ठहराव के साथ सक्रियता या अन्य रूढ़िवादी व्यवहार हस्तक्षेप नहीं कर रहे हैं।
envविडंबना भी कृन्तकों के सहज खोजपूर्ण व्यवहार को प्रभावित कर सकती है। स्कैन्ट्स या आवाज़ जो शोधकर्ताओं के लिए undetectable हैं चूहों को आकर्षित कर सकते हैं या उन्हें पीछे कर सकते हैं, ऐसे संज्ञानात्मक परीक्षणों के परिणाम स्कुइंग कर सकते हैं जो सहज व्यवहार पर भरोसा करते हैं। जब शुरू में वाई-भूलभुलैया या उपन्यास वस्तु की पहचान, नियंत्रण उपायों का प्रदर्शन, यह सुनिश्चित करने के लिए कि वस्तुओं और / या पर्यावरण की खोज में कोई स्थाई पूर्वाग्रह नहीं है, स्थापित करना आवश्यक है यदि स्थाई पूर्वाग्रहों को देखा जाता है तो जांचकर्ताओं को पर्यावरण की अच्छी तरह से जांच करनी चाहिए और सुविधा में प्रकाश व्यवस्था, क्षेत्र प्लेसमेंट, अन्य कमरों के लिए परीक्षण कक्ष के स्थान को समायोजित करना चाहिए ( यानी , एक उच्च तस्करी क्षेत्र या भारी उपकरण के निकट नहीं) और क्षेत्र की सफाई प्रक्रियाओं।
परीक्षण पर्यावरण के लिए अवधारणा उपन्यास ऑब्जेक्ट मान्यता परीक्षण में इष्टतम प्रदर्शन को प्राप्त करने की कुंजी है। उदाहरण के लिए, कम कुल अन्वेषण समय अपर्याप्त आदत के कारण हो सकता है। Proc के विकल्प के रूप मेंहैंडलिंग (धारा 2) और क्षेत्र (धारा 4.2) के आदी होने के लिए यहां दिए गए परिधान, हैंडलिंग के लिए आदत और परीक्षण पर्यावरण 3 दिनों के रूप में किया जा सकता है, 5 मिनट सत्र लगातार दो दिनों के लिए।
तकनीक की सीमाएं
किसी भी प्रक्रिया के साथ, इन व्यवहार परीक्षणों में सीमाएं हैं। इन प्रक्रियाओं को नियोजित किया गया है क्योंकि वे विभिन्न कॉर्टिकल क्षेत्रों और हिप्पोकैम्पस का परीक्षण करते हैं। यदि माउस मॉडल इन परीक्षणों द्वारा जांच किए जाने वाले मस्तिष्क क्षेत्रों में कार्यात्मक घाटे का प्रदर्शन नहीं करता है, तो इन तकनीकों का उपयोग उपयोगी नहीं होगा। इसके अलावा, हमने संज्ञानात्मक परीक्षणों को चुना है जो अल्पकालिक स्मृति की जांच करते हैं। अगर पूर्व-क्लिनिक आकलन के तहत परिसर की कार्रवाई का तंत्र अल्पकालिक स्मृति को प्रभावित करने की उम्मीद नहीं है तो इन प्रक्रियाओं को तदनुसार संशोधित किया जाना चाहिए ( यानी , दीर्घकालिक स्मृति परीक्षण करने के लिए नमूना-परीक्षण चरण अंतराल में वृद्धि) अंत में, ये परीक्षण अनमोटिव व्यवहारों का उपयोग करते हैं इसलिए, यदि एक माउस मॉडल exces हैसजीव हाइपरएक्टिव या पर्यावरण के अन्वेषण को रोकते हुए अन्य टकसाली व्यवहार दिखाता है तो ये प्रक्रियाएं इष्टतम नहीं हो सकतीं। एक विकल्प के रूप में, टीजी 2576 या अन्य बीटा-एमीलाइडिस माउस मॉडल के लिए ड्रे कंडीशनिंग या आरटीजी 4510 या टाऊपैथी 3 के अन्य माउस मॉडल के लिए स्थानिक पानी की भूलभुलैया का इस्तेमाल किया जा सकता है।
भविष्य के अनुप्रयोग
प्रयोगशाला में इन प्रक्रियाओं को सफलतापूर्वक अपनाया जाने के बाद, अतिरिक्त संज्ञानात्मक और कार्यात्मक मोटर उपायों का आकलन करने के लिए कई संशोधनों या एक्सटेंशन किए जा सकते हैं। उदाहरण के लिए, निर्धारित करने के लिए उपन्यास ऑब्जेक्ट मान्यता कार्य को बदलना है कि कोई माउस ऑब्जेक्ट 13 के प्लेसमेंट में परिवर्तन को पहचान सकता है। वैकल्पिक रूप से, वस्तुओं का उपयोग करने के बजाय, कोई अन्य चूहों का इस्तेमाल कर सकता है और सामाजिक मान्यता की परीक्षा को लागू कर सकता है। अंग clasping और मोटर समारोह के संबंध में, एक वायर हेग और / या पकड़ ताकत परीक्षण के साथ कि परीक्षण पूरक सकता है। परीक्षणइस पद्धति में विस्तृत रूप से एडी के लिए ट्रांसजनल माउस मॉडल में विवो प्रभावकारिता में मौजूद यौगिकों के लिए स्क्रीन को एक ठोस आधार बनाते हैं, और इन्हें कई मायनों में अनुकूलन या संशोधित किया जा सकता है ताकि किसी विशेष माउस मॉडल की पूछताछ हो सके या एक अनूठे ड्रग डिस्कवरी प्रोग्राम की जरूरतों को पूरा किया जा सके। ।
Disclosures
जेएम लेवेन्सन को प्रोस्लार बायोसाइंसेज, इंक। सी। मिडेल, जे। पैटन, ए। मिईडेल और ई। मिडेल द्वारा उपयोग किया जाता है।
Acknowledgments
लेखकों के पास कोई स्वीकार नहीं है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Topscan Lite-High Throughput | Cleversys | Automated behavioral analysis. Includes cameras and video acquisition system, laptop. | |
| ObjectScan | Cleversys | Software module for accurate object exploration quantification | |
| Open field for mouse | Cleversys | CSI-OF-M | Arena for novel object recognition |
| Y-maze for mouse | Custom | Arms: 30 cm long, 10 cm wide, 20 cm high walls, placed 120 deg apart. | |
| Camera mount for open field | Custom | Custom | 76 cm tall, 115 cm wide, cameras mounted @ 30 cm in from either side. Two mounts, each covers two boxes. |
| Camera mount for Y-maze | Custom | Custom | 76 cm tall, 115 cm wide, cameras mounted @ 30cm in from either side. One mount covers two mazes. |
| Marbles | Inperial Toy | 8565 | Standard (15.5 mm Dia) glass marbles. |
| Dice | Cardinal Industries | 770 | Standard (0.650 inch) white dice with black dots. |
| LOCTITE Fun-Tak | Henkel | B018A3AG0W | Standard blue sticky tak |
| EtOH | Nexeo Solutions | 82452 | 100% Ethanol Diluted to 70% using distilled Water |
| dH2O | Tulpenhocken Spring Water Co. | - | PA D.E.P. #31, NJ D.O.H. #0049, NYSHD Cert. #320 |
| Paper towels | Procter & Gamble | B019DM86LA | Bounty, White |
| Handheld video camera | Apple, Inc. | MKV92LL/A | Acquisition of Limb clasping video, Iphone 6S Plus (or functional equivalent). |
| Gloves | SafePOINT, L.L.C. | GL640-2 | Standard, Powder free Latex Gloves, Medium |
| Light meter | Dr. Meter | LX1330B | Lighting @ the bottom of Open Field= 35 LUX, Lighting @ bottom of Y-Maze= 32 LUX |
| Bleach germicidal wipes | Clorox | Sterilization of equipment during & after use |
References
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