Ukontrollert blødning, en viktig årsak til dødelighet blant traumapasienter, kan modelleres ved bruk av en standard leverlacerasjon i en murin modell. Denne modellen resulterer i konsekvent blodtap, overlevelse og muliggjør testing av hemostatiske midler. Denne artikkelen gir trinnvis prosess for å utføre denne verdifulle modellen.
Ukontrollert blødning er en viktig årsak til forebyggbare dødsfall blant traumapasienter. Vi har utviklet en murin modell av ukontrollert blødning via leverskade som resulterer i konsistent blodtap, hemodynamiske forandringer og overlevelse.
Mus gjennomgår en standard reseksjon av leverens venstre-midterste lobe. De får lov til å bløde uten mekanisk inngrep. Hemostatiske midler kan administreres som forbehandling eller redningsterapi, avhengig av etterforskerens interesse. Under blødningstiden utføres realtids hemodynamisk overvåking via en venstre femoral arteriell linje. Musene blir deretter ofret, blodtap kvantifiseres, blod samles inn for videre analyse, og organer høstes for analyse av skade. Eksperimentell design er beskrevet for å muliggjøre samtidig testing av flere dyr.
Leverblødning som modell for ukontrollert blødning finnes iN litteraturen, primært i rotte- og svinemodeller. Noen av disse modellene benytter hemodynamisk overvåking eller kvantifiserer blodtap, men mangler konsistens. Den foreliggende modellen inkorporerer kvantifisering av blodtap, sanntidshemodynamisk overvåkning i en murin modell som gir fordelen av å bruke transgene linjer og en høy gjennomstrømningsmekanisme for å undersøke de patofysiologiske mekanismer ved ukontrollert blødning.
Traumer er den ledende dødsårsaken og funksjonshemming blant unge mennesker over hele verden. 1 Ukontrollert blødning er fortsatt en ledende årsak til dødelighet blant alvorlig skadede traumapasienter. 2 Behandling av hemorrhaging trauma pasienten er to ganger: kontroll av kirurgisk blødning, og gjenopplivning og erstatning av fortapt blod.
Dyrmodeller av hemorragisk sjokk har vært hjørnesteinen i traumavirus og kan brukes i evalueringen av patofysiologien og behandling av traumatisk / hemorragisk sjokk. 3 , 4 Shock i dyremodeller kan oppnås i stor grad ved to metoder: kontrollert blødning og ukontrollert blødning. 5 , 6 Kontrollert blødning utføres ved fjerning av et fast volum blod eller ved blodfjerning for å oppnå et bestemt blodtrykk (fast trykk). MensSe modeller er nyttige i evalueringen i mekanismer og immunforandringer i hemoragisk sjokk, de er ikke anvendelige for testing av hemostatiske midler og etterligner ikke det kliniske scenariet for blødning etter traumer. I denne grad søkte vi å utvikle en modell for ukontrollert blødning som ville tillate oss å teste hemostatiske forandringer og prokoaguleringsmidler i en murin modell. Leveren er et attraktivt alternativ for ukontrollert blødning delvis på grunn av den doble blodtilførselen til leveren, og det er et av de mest skadede intrabdominale organene i både stump og gjennomtrengende traumer. Gitt den høye kliniske relevansen, har leveren blitt brukt som en modell for ukontrollert blødning, oftest hos rotte- og svinemodeller, men nylig i primater også. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 </suP> Murine-modeller har også innlemmet leverskade, for eksempel en knusemodell eller et stumt traume; Disse modellene resulterer imidlertid ikke i hemorragisk sjokk sekundært til leverskade. 13 , 14
Rotte- og svinemodellene av ukontrollert leverblødning, men verdifull i å se på gjenoppliving og hemodynamisk overvåking, er mindre fordelaktige enn en murinmodell av forskjellige årsaker som kostnad, antall dyr som benyttes, og viktigere er den relative mangelen av transgene linjer som er tilgjengelige for analyse Av spesifikk cellulær og molekylær signalering. Den nåværende murinmodellen deler viktige likheter med eksisterende leverblødningsmodeller, inkludert standardisert leverlakering, blodkvantifisering, hemodynamisk overvåking og evnen til å utføre overlevelsesanalyse. Mange eksisterende modeller inneholder bare noen av disse aspektene, mens modellen vår ble utviklet for å måle mange av de fysiologiske variableneBles samtidig og i flere mus. I tillegg åpner utviklingen av en murin modell døren til undersøkelser utover gjenopplivning og inn i større patofysiologiske mekanismer ved ukontrollert blødning med potensialet til en kostnadseffektiv, høy gjennomstrømningsmodell ved bruk av avanserte molekylære teknikker.
Den murine leveren laceration modell beskrevet her gir en pålitelig, konsekvent modell for ukontrollert blødning. Denne modellen er grei å utføre, men det er viktige skritt som krever grundig vurdering. Den mest teknisk utfordrende delen av modellen er kanylering av femorale karene for hemodynamisk overvåking og væske- / legemiddeladministrasjon. Det må tas forsiktighet under disseksjon av nerve og arteriotomi / venotomi. Det er viktig å ikke berøre nerven under disseksjonen av fartøyene for å unngå å forå…
The authors have nothing to disclose.
Arbeidet med dette manuskriptet ble støttet av finansiering til Dr. Neal av Vaskulærmedisininstituttets pilotprosjekt i hemostase og vaskulærbiologi (P3HVB) og AAST Research fellesskap. Dette arbeidet støttes av amerikanske National Institutes of Health-stipend 1 R35 GM119526-01 og UM1HL120877-01.
SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 |
surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 |
hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 |
microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 |
0.8mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 |
suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H |
gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
30G needle | can be purchased through any global vendor | |
23G needle | can be purchased through any global vendor | |
10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 |
straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 |
stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 |
male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
sterilization pouch 3"x8" | VWR | 24008 |
sterilization pouch 5"x10" | VWR | 24010 |
absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 |
7mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 |
1000 7mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 |
betadine (4oz) | can be purchased through any global vendor | |
sterile gloves | can be purchased through any global vendor | |
eppendorfs | can be purchased through any global vendor | |
1/2cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 |
small weigh boat | can be purchased through any global vendor | |
lactated ringers | can be purchased through any global vendor | |
hepranized saline solution (.1µ hep + 9.9µNaCl) | can be purchased through any global vendor | |
phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | |
pentobarbital | can be purchased through any global vendor | |
Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
Computer | Dell | |
microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 |
Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |