Okontrollerad blödning, en viktig orsak till dödlighet bland traumapatienter, kan modelleras med en standard leverlaceration i en murinmodell. Denna modell resulterar i konsekvent blodförlust, överlevnad och möjliggör testning av hemostatiska medel. Denna artikel ger steg för steg processen för att utföra denna värdefulla modell.
Okontrollerad blödning är en viktig orsak till förebyggande dödsfall bland traumapatienter. Vi har utvecklat en murin modell av okontrollerad blödning via en leverlaceration som resulterar i konsekvent blodförlust, hemodynamiska förändringar och överlevnad.
Möss genomgår en standardiserad resektion av leverns vänstra mittklob. De får blöda utan mekanisk ingrepp. Hemostatiska medel kan ges som förbehandling eller räddningsbehandling beroende på undersökarens intresse. Under blödningstiden utförs realtidshemodynamisk övervakning via en vänster femoral arteriell linje. Mössen offras sedan, blodförlust kvantifieras, blod samlas in för vidare analys och organ skördas för analys av skada. Experimentell design beskrivs för att möjliggöra samtidig testning av flera djur.
Leverblödning som modell för okontrollerad blödning finns iN litteraturen, främst i rått- och svinmodeller. Några av dessa modeller använder hemodynamisk övervakning eller kvantifierar blodförlust men saknar konsistens. Den nuvarande modellen innehåller kvantifiering av blodförlust, hemodynamisk övervakning i realtid i en murinmodell som erbjuder fördelen att använda transgena linjer och en hög genomströmningsmekanism för att ytterligare undersöka de patofysiologiska mekanismerna vid okontrollerad blödning.
Trauma är den främsta orsaken till dödsfall och handikapp bland ungdomar över hela världen. 1 Okontrollerad blödning är fortfarande en ledande orsak till dödlighet bland allvarligt skadade traumapatienter. 2 Hantering av hemorrhagande traumapatienter är dubbelt: kontroll av kirurgisk blödning och återupplivning och ersättning av förlorat blod.
Djurmodeller av hemorragisk chock har varit hörnstenen i traumavetenskap och kan användas vid utvärderingen av patofysiologin och behandling av traumatisk / hemorragisk chock. 3 , 4 Shock i djurmodeller kan uppnås i stort sett genom två metoder: kontrollerad blödning och okontrollerad blödning. 5 , 6 Kontrollerad blödning utförs genom avlägsnande av en fast volym blod eller genom blodavlägsnande för att uppnå ett visst blodtryck (fast tryck). MedanSe-modeller är användbara vid utvärderingen av mekanismerna och immunförändringar i hemorragisk chock, de är inte tillämpliga på test av hemostatiska medel och efterliknar inte det kliniska scenariot av blödning efter trauma. I denna grad försökte vi utveckla en modell av okontrollerad blödning som skulle göra det möjligt för oss att testa hemostatiska förändringar och prokoaguleringsmedel i en murinmodell. Levern är ett attraktivt alternativ för okontrollerad blödning delvis på grund av den dubbla blodtillförseln till levern och det är ett av de vanligaste skadade intrabdominala organen i både trubbigt och penetrerande trauma. Med tanke på den höga kliniska relevansen har levern använts som en modell för okontrollerad blödning, oftast hos råtta och svinmodeller, men också nyligen i primater. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 </suP> Murine-modeller har också införlivat leverskada, såsom en krossmodell eller trubbig trauma; Dessa modeller leder emellertid inte till hemorragisk chock som är sekundär för leverskadorna. 13 , 14
Rått- och svinmodellerna av okontrollerad leverblödning, samtidigt som de är värdefulla när man tittar på återupplivningspraxis och hemodynamisk övervakning, är mindre fördelaktiga än en murinmodell av olika skäl, såsom kostnad, antal använda djur och viktigare de relativa bristande transgena linjerna som är tillgängliga för analys Av specifik cellulär och molekylär signalering. Den föreliggande murinmodellen delar viktiga likheter med befintliga leverblödningsmodeller, inklusive standardiserad leverlaceration, kvantitativ blodförlust, hemodynamisk övervakning och förmågan att utföra överlevnadsanalys. Många existerande modeller innehåller bara några av dessa aspekter medan vår modell utvecklades för att mäta många av de fysiologiska variablernaBles samtidigt och i flera möss. Utveckling av en murinmodell öppnar också dörren till undersökningar utöver återupplivning och till större patofysiologimekanismer vid okontrollerad blödning med potentialen i en kostnadseffektiv, hög genomströmningsmodell med användning av avancerade molekylära tekniker.
Den här beskrivna murina leverlacerationsmodellen ger en pålitlig, konsekvent modell för okontrollerad blödning. Denna modell är enkel att utföra, men det finns viktiga steg som kräver noggrann övervägning. Den mest tekniskt utmanande delen av modellen är kanylering av femorala kärl för hemodynamisk övervakning och administrering av vätska / läkemedel. Försiktighet måste vidtas under dissektion av nerven och arteriotomi / venotomi. Det är viktigt att inte röra nerverna vid dissektion av kärlen för a…
The authors have nothing to disclose.
Arbetet i detta manuskript stöddes av finansiering till Dr Neal av Vascular Medicine Institute Pilot Project Programmet i hemostasis och kärlbiologi (P3HVB) och AAST Research Fellowship. Detta arbete stöds av amerikanska nationella institut för hälsobidrag 1 R35 GM119526-01 och UM1HL120877-01.
SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 |
surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 |
hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 |
microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 |
0.8mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 |
suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H |
gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
30G needle | can be purchased through any global vendor | |
23G needle | can be purchased through any global vendor | |
10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 |
straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 |
stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 |
male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
sterilization pouch 3"x8" | VWR | 24008 |
sterilization pouch 5"x10" | VWR | 24010 |
absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 |
7mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 |
1000 7mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 |
betadine (4oz) | can be purchased through any global vendor | |
sterile gloves | can be purchased through any global vendor | |
eppendorfs | can be purchased through any global vendor | |
1/2cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 |
small weigh boat | can be purchased through any global vendor | |
lactated ringers | can be purchased through any global vendor | |
hepranized saline solution (.1µ hep + 9.9µNaCl) | can be purchased through any global vendor | |
phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | |
pentobarbital | can be purchased through any global vendor | |
Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
Computer | Dell | |
microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 |
Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |