Summary

Hydrolysats d'un complexe Ni-base de Schiff Conditions Utilisation Convient pour le maintien de groupes protecteurs d'acide labile

Published: April 06, 2017
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Summary

Ici, nous présentons une hydrolyse efficace et une protection Fmoc ultérieure d'un acide aminé isolé à partir d'un complexe à base de Ni-Schiff. Les conditions d'hydrolyse présentées ici sont appropriés pour une utilisation lors de la rétention des groupes protecteurs de chaîne latérale d'acide-labile est nécessaire. Cette technique peut être adaptée à une variété de substrats d'acides aminés non naturels.

Abstract

acides aminés non naturels, des acides aminés contenant des fonctionnalités de chaîne latérale non couramment observés dans la nature, sont de plus en plus trouvent dans des séquences de peptides synthétiques. Synthèse de certains acides aminés non naturels comprennent souvent l'utilisation d'un précurseur constitué d'une base de Schiff stabilisée par un cation de nickel. Unnatural chaînes latérales peuvent être installés sur un acide aminé squelette retrouvé dans cette base de Schiff complexe. L'acide aminé non naturel qui en résulte peut alors être isolé à partir de ce complexe en utilisant l'hydrolyse de la base de Schiff, typiquement en utilisant un reflux dans une solution fortement acide. Ces conditions fortement acides peuvent éliminer les groupes protecteurs de chaîne latérale labile acide nécessaire pour les acides aminés non naturels à utiliser dans la synthèse des peptides en phase solide assistée par micro-ondes. Dans ce travail, nous présentons une hydrolyse efficace et une protection Fmoc ultérieure d'un acide aminé isolé à partir d'un complexe à base de Ni-Schiff. Les conditions d'hydrolyse présentées dans ce travail sont adaptés à la rétention de l'acide s-labilesles groupes protecteurs de chaîne ide et peuvent être adaptable à une variété de substrats d'acides aminés non naturels.

Introduction

Les acides aminés non naturels de chaînes latérales d'appui (SAU) de variant de celles des vingt acides aminés naturels trouvés dans la nature ont trouvé une utilité dans une large gamme d'applications. peut être difficile cependant, la synthèse de ces années SAU, en fonction de la structure des chaînes latérales et la stéréochimie du squelette d'acide aminé. Activation de la liaison CH de glycine dans le contexte d'un complexe de nickel-base de Schiff a été utilisé pour produire une variété de dérivés d'acides aminés , y compris α, des acides ß-diamino 1 et le palier de SAU fluoré 2 ou hétérocycliques chaînes latérales. 3

Après addition de chaînes latérales non naturelles, fonctionnalisés SAU de sont typiquement éliminés du complexe de base de Schiff par reflux dans de l' acide chlorhydrique 4 et sont ensuite isolés en utilisant une Chromatographie par échange d'ions. Bien que généralement efficace, ce protocole génère unmino acides qui peuvent être inappropriés pour une utilisation dans la synthèse de peptides en phase solide (SPPS). La nature de SPPS nécessite la présence de groupes protecteurs de chaîne latérale labile en milieu acide et de la nature fortement acide de conditions typiques de décomposition Ni-base de Schiff empêche l'isolement de la SAU de ces groupes protecteurs intacts. À notre connaissance, seul un procédé de décomposition de remplacement a été rapporté: utilisation de l' acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) et de l' hydrazine à des températures élevées, 5 des conditions qui eux – mêmes peuvent ne pas convenir à certains groupes protecteurs de chaîne latérale comme phtalimides.

Figure 1
Figure 1: Synthèse de Ni-PBP-Gly parmi Ni 2+, PBP, et Glycine (Gly). S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre. </a>

Ici, nous rapportons un procédé pour l' hydrolyse d'un complexe à base de Ni-Schiff, Ni-PBP-Gly (Figure 1). Ce complexe, dérivé de Ni 2+, de la glycine et la pyridine-2-carboxylique (2-benzoyl-phényl) -amide (PBP), 6 a été démontrée comme étant une plate – forme utile pour la synthèse d'une variété de de SAU et est facilement accessible en utilisant une voie de synthèse en deux étapes. 7 Synthèse de ce complexe est la littérature avec un rendement élevé nombreux précédents. 6 Les résultats décrits ci – dessous démontrent l'applicabilité des conditions d'hydrolyse en utilisant de l' EDTA à modérément acide à des conditions de pH neutres appropriés pour être utilisés avec des groupes protecteurs à chaîne latérale d'acide-labile de palier SAU. Après l' hydrolyse, la solution aqueuse résultante peut être isolée et soumise immédiatement à des conditions de protection Fmoc standard pour permettre un acide aminé protégé par Fmoc (figure 2).

<p class="jove_content" fo: keep-together.within page = "1"> Figure 2
Figure 2: Hydrolyse et Fmoc-protection d'un acide aminé isolé à partir de Ni-PBP-Gly. Conditions de réaction: i. EDTA (12 équiv), pH 4,5; ii. acétate d'éthyle lavage et ajustement à un pH de 7; iii. Fmoc-OSu (1 équiv), NaHCO 3 (2 équiv). S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.

Protocol

1. L'hydrolyse du complexe Ni-base de Schiff Dissoudre 1 mmol du complexe à base de Ni-PBP-Schiff dans 40 ml de N, N – diméthylformamide (DMF) sous agitation dans un ballon à fond rond de 250 ml à la température ambiante. Ajouter 60 ml de 0,2 M de solution aqueuse d'EDTA, pH 4,5. L'utilisation d'un barreau d'agitation magnétique et de la plaque sous agitation, agitation pendant une nuit la solution combinée. Comme le complexe base de Schiff est …

Representative Results

Nous émettons l' hypothèse que le retrait du Ni 2+ du complexe Ni-PBP-Gly pourrait permettre à une hydrolyse aqueuse efficace de la base de Schiff , sans la nécessité de conditions de pH difficiles. Comme EDTA est un agent chélatant peu coûteux et bien étudié, 10 nous avons supposé que l' addition d'EDTA à une solution de Ni-PBP-Gly faciliterait la chélation des ions Ni 2+, favorisant ainsi l' hydrolyse du complexe…

Discussion

Le protocole décrit ci-dessus est utile pour sa capacité à faciliter l'isolement d'un squelette d'acides aminés à partir d'un complexe Ni-base de Schiff dans des conditions de pH doux et protection Fmoc subséquente de cet acide aminé isolé par deux étapes essentielles. La première étape consiste à agiter une solution de DMF / eau contenant de l'EDTA pour faciliter la libération de l'acide aminé à partir du complexe. Des sous-produits résiduels complexes ou organiques peuvent être…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Le financement fourni par Slippery Rock University. Nous tenons à remercier T. Boron III (Slippery Rock University) et C. Haney (Université de Pennsylvanie) pour leurs idées.

Materials

Ni-PBP-Gly Synthesized from published protocol
DMF Fisher D119-4
EDTA Fisher S311-100
Dichloromethane Acros AC610050040
Sodium Bicarbonate Fisher S233-500
Fmoc-OSu Chem-Impex "00147"
Dioxane Fisher D111-500
Hydrochloric Acid Fisher A144-500
Ethyl Acetate Acros AC610060040
Magnesium Sulfate Fisher M65-500
ZEOPrep 60ECO Silica Gel ZEOChem
Hexanes Fisher 3200250.650.443
Chromatography Column
pH Test Strips
Rotary Evaporator
250 mL Separatory Funnel
250 mL Round Bottom Flask
Stir Bar
Stir Plate

References

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Cite This Article
Bontrager, C. A., Geibel, T. J., Lengyel, G. A. Hydrolysis of a Ni-Schiff-Base Complex Using Conditions Suitable for Retention of Acid-labile Protecting Groups. J. Vis. Exp. (122), e55677, doi:10.3791/55677 (2017).

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