Summary
Dit protocol beschrijft een methode voor de waarneming van de embryogenese Arabidopsis via zaadknop goedkeuring, gevolgd door de inspectie van embryo patroonformatie onder een microscoop.
Abstract
Gezien het zeer voorspelbare karakter van hun ontwikkeling, zijn Arabidopsis embryo's gebruikt als een model voor studies van genuitdrukking in planten. Echter vroeg stadium plant embryo's zijn klein en bevatten weinig cellen, waardoor ze moeilijk te observeren en te analyseren. Een methode is hier beschreven voor het karakteriseren van patroonformatie in plant embryo's onder een microscoop met behulp van de model-organisme Arabidopsis. Na de goedkeuring van de verse zaadknoppen met behulp van Hoyer de oplossing, het mobiele nummer in en morfologie van embryo's kon worden waargenomen en hun ontwikkelingsstadium door differentiële interferentie contrast microscopie met behulp van een 100 X olie-immersie objectief kan worden vastgesteld. Bovendien was de expressie van specifieke marker eiwitten gelabeld met Green Fluorescent Protein (GFP) gecontroleerd om te annoteren cel identiteit specificatie tijdens embryo patronen door confocale laser scanning microscopie. Dus, deze methode kan worden gebruikt om te observeren patroonformatie in wild-type plant embryo's de cellulaire en moleculaire niveau, en te karakteriseren van de rol van specifieke genen in embryonale patronen door het vergelijken van patroonformatie in embryo's van wild-type planten en embryo-dodelijke mutanten. Daarom kan de methode worden gebruikt om te karakteriseren embryogenese Arabidopsis.
Introduction
Embryogenese is de vroegste gebeurtenis in de ontwikkeling van hogere planten. Een volwassen embryo vormt van een zygote door celdeling- en differentiatie onder strenge controle van de genetische1,2. Arabidopsis embryo's zijn een nuttig model voor de controle op de voedselproductie studeren omdat de volgorde van de celdelingen tijdens de embryogenese een verwachte patroon3,4 volgt. Een embryo van Arabidopsis met één tot meerdere cellen is echter te klein om te worden waargenomen en geanalyseerd. Bovendien kan de mutatie van bepaalde genen embryo letaliteit5, met vermelding van de sleutelrol van die genen in embryogenese veroorzaken. De karakterisering van patroonformatie in de embryo-dodelijke mutanten biedt een basis voor het begrijpen van het moleculaire mechanisme waarbij essentiële genen embryo-ontwikkeling reguleren.
Een gedetailleerde methode wordt hier beschreven voor de karakterisatie van embryo patroonformatie in de model plant Arabidopsis met directe microscopische observatie. Bij deze methode wordt de zaadknop goedkeuring, gevolgd door de microscopische observatie van een embryo. De karakterisering van een embryo-dodelijke mutant wordt ook beschreven.
De morfologie van de embryo's op verschillende ontwikkelingsstadia kan direct door microscopie met behulp van de zaadknoppen die zijn gewist met7-Hoyer van oplossing6,worden bepaald. Dergelijke zaadknoppen vertonen een hoge brekingsindex; Deze zaadknop clearing methode is dus vooral voordelig voor specimens die moeten worden nageleefd door differentiële interferentie contrast (DIC) microscopie.
Daarnaast is de genen die worden uitgedrukt in een bepaalde cel of een beperkt aantal cellen tijdens de embryogenese inzetbaar als markeringen te identificeren van de cellen in het embryo. Daarom kan de cel identiteit specificatie tijdens de embryogenese geannoteerde worden door het toezicht op de expressie van marker GFP-gelabelde proteïnen met behulp van confocale laser scanning microscopie. Omgekeerd, observeren het expressiepatroon van een onbekende functioneel gen -GFP fusion tijdens de embryogenese kan beschikken over een koppeling tussen embryo patronen en de uitdrukking van dit gen, en vergemakkelijken de identificatie van nieuwe genen die vereist voor embryogenese Arabidopsis zijn.
De hier beschreven methode kan ook worden gebruikt om karakteriseren het fenotype van een embryo-dodelijke mutant, te bepalen en het effect van het betrokken gen op embryogenese op cellulair niveau. Bovendien kan de methode in combinatie met een vergelijking van het expressiepatroon van markers tijdens de embryogenese tussen wild-type en mutant planten, aanwijzingen over de moleculaire mechanismen en signaalroutes betrokken bij embryogenese8,9opleveren. Inderdaad, de methode werd toegepast op naa10 planten, en het bleek dat de abnormale verdeling van de hypophysis in de mutant kan worden veroorzaakt door een wijziging in de verdeling van de auxine tijdens de embryogenese5.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Opmerking: Dit protocol bestaat uit drie delen: 1) observeren de patroonformatie in wild-type Arabidopsis embryo's met behulp van DIC microscopie; 2) karakteriseren de embryo patroon vorming via de waarneming van marker eiwit expressie met behulp van confocale laser scanning microscopie; en 3) bepaling van de rol van een specifiek gen in embryogenese (met behulp van de mutant naa10 als voorbeeld).
1. ovule Clearing
- Plant materiaal voorbereiding
Opmerking: Het protocol beschreven hier is een voorbeeld over hoe om te groeien van gezonde planten; andere manieren om gezonde planten groeien ook werken.- Voegt toe 100 zaden tot een 1,5 mL koker, en vervolgens 1 mL van 1,5% natriumhypochloriet (mix 15 mL 10% chloor met 85 mL water) om te steriliseren de zaden voor 5 min. omkeren de buis meerdere malen om ervoor te zorgen dat de zaden en de oplossing goed gemengd aan de oppervlakte zaden volledig te steriliseren.
- De zaden omzetten in de onderkant van de buis door centrifugeren voor 30 s bij 1.200 x g, verwijder het supernatant en de zaden met steriel water viermaal wassen bij een bank te verwijderen van de resterende natriumhypochloriet.
- 4.4 g van Murashige en Skoog (MS) basale zout mengsel en 10 g van sacharose aan 1 L ultrazuiver water toevoegen. Roer het mengsel te ontbinden en de zouten en sacharose. 3 g Geleermiddel, zoals Phytagel, de oplossing voor pH 5,8 met 1 M KOH, aanpassen toevoegen aan de MS-sacharoseoplossing en steriliseren van de oplossing bij 121 ° C gedurende 15 minuten staan om MS medium.
- Giet 30 mL van de MS-medium in een schotel 12 cm cultuur voor het genereren van MS middellange platen.
- Plaats de gesteriliseerde zaden op de MS-plaat. De plaat overbrengen in een kamer van de groei en het houden van de plaat onder de voorwaarden van de lange dagen (22 ° C gedurende 16 uur in het licht en 18 ° C voor 8u in het donker) na zaad stratificatie (3 dagen bij 4 ° C in het donker).
- Na 8 dagen van de groei, de planten overbrengen naar bodem (mix voedselrijke bodem en vermiculiet bij een verhouding van 1:1) in een lade, het dienblad met een wit, transparant deksel voor 5 dagen om te voorkomen dat het waterverlies te dekken, en laat een gat om te voorkomen dat verglazing van de planten.
- Neem het deksel uit de lade en het kweken van de planten in een walk-in kamer onder de voorwaarden van de lange-dag (zie 1.1.5). Zet het licht op 6:00 am en off om 10:00 uur. Na ongeveer 20 dagen van de groei in de walk-in zaal, hebben de planten gebloeid en siliques geproduceerd.
- Mark de bloemknoppen met een draad op de positie van het zaad stengels in de bloeiwijze om 8:00 pm (gebruik niet de eerste naar de derde bloemknoppen; de siliques gegenereerd op basis van deze bloemknoppen meestal een paar afgebroken zaden ontwikkelen, en dit kan het aandeel van normaal tot abnormale zaadknoppen wijzigen). Definieert het begin van de bestuiving van de zaadknop als wanneer de gemarkeerde kiem opent tot bloem bij 8:00 am de volgende ochtend.
- Bereiding van de Hoyer-oplossing
- Voeg 24 g Chloraalhydraat voor een tube van 50 mL en wikkel de buis volledig met aluminiumfolie (oplossingen van Chloraalhydraat zijn niet stabiel onder licht).
- Vervolgens 9 mL ultrazuiver water en 3 mL glycerol toevoegen aan de bovenstaande oplossing en schudden van de buis te ontbinden de Chloraalhydraat. Hoyer van om oplossing te maken, laat de buis rusten bij kamertemperatuur te elimineren alle bubbels.
- Zaadknop scheiding en ruimen van bouwterreinen
- Bevestig een stuk dubbelzijdige plakband aan een Microscoop glasplaatje. Plaats een Hauw gekweekt voor het gewenste aantal dagen na bestuiving (DAP) op de dia met de pseudoseptum die loodrecht op het oppervlak; Dit maakt het gemakkelijk te splitsen van de carpellen (figuren 1A en 1B).
- Splitsen van de carpellen aan beide zijden van de pseudoseptum met een spuit-naald en bevestig de twee ontleed carpellen aan de dia zodat de zaadknoppen in de Hauw zichtbaar onder een stereoscoop (cijfers 1 c en 1 D zijn).
- Afzien van 70 µL van Hoyer de oplossing op het glasplaatje en Bevochtig dan het puntje van een paar schone-tipped pincet met Hoyer de oplossing door dompelen. Met behulp van de stereoscoop, gaan de zaadknoppen van de Hoyer-oplossing op de dia met de pincet te reinigen van de embryo's. Breng een dekglaasje aan naar de dia voorzichtig om te voorkomen dat het genereren van alle bubbels.
- Zet de voltooide dia in een doos in een donkere kamer voor 2 tot 12 h (de meer volwassen een zaadknop is, hoe meer tijd nodig zal zijn) bij kamertemperatuur. Embryo's in de 2/4-cel stadium (1-2 DAP) kunnen worden waargenomen microscopisch na 2U, terwijl embryo's tussen de octant en bolvormige beginfase (3 DAP) kunnen worden waargenomen na 4 uur. Rijpere embryo's (4-8 DAP) kunnen worden waargenomen na 12 h.
- Onderzoeken de gewiste zaadknoppen DIC de functie van een microscoop. Zoek de embryo's onder een spaarstand veld (10 X) en vervolgens omzetten in een high-power veld (100 X olie onderdompeling lens) te observeren het cellulaire patroon in de ontwikkelde embryo's.
- Het onderzoeken van de embryo's op verschillende ontwikkelingsstadia.
2. karakterisering van Embryo patronen en cel identiteit via de waarneming van Marker eiwit expressie
- Voorbereiding van plantaardig materiaal
- Kloon van de promotor en de codering van de opeenvolging van de marker-gen of hormoon respons-element en vervolgens zekering het met een fluorescente proteïne (zoals GFP); Steek vervolgens de constructie in de binaire vector (zoals pCambia1300). Hier, de auxine respons-element DR5 wordt gepresenteerd als een voorbeeld10.
- De resulterende DR5-GFP plasmide introduceren in het wild-type planten door Agrobacterium tumefaciens-gemedieerde transformatie11. Selecteer de T1-planten met behulp van MS middellange platen met hygromycin (moeder drank, 50 mg/mL verdund 1:1, 000). De transgene planten zal vertonen lange wortels en twee rozet bladeren na 8 dagen van de groei onder de voorwaarden beschreven in 1.1.5 te genereren.
- Breng de transgene planten voor de bodem en kweken zoals aangegeven in 1.1.6 en 1.1.7.
- De T2 zaden verzamelen van de onafhankelijke T1-lijnen. Zaaien op MS-hygromycin platen, selecteer de planten uitvoering van één exemplaar van de DR5-GFP -invoeging (de verhouding van resistente planten gevoelige planten zullen ongeveer 3:1) en deze overbrengen naar de bodem.
- De T2 planten cultiveren zoals aangegeven in 1.1.6 en 1.1.7.
- De T3 zaden van de T2 planten verzamelen. Zaaien op MS-hygromycin platen, selecteer de homozygoot transgene planten (alle van de planten uit een enkele lijn zal vertonen hygromycin weerstand) en deze overbrengen naar de bodem.
- Mark de bloemknoppen van de homozygoot T3 planten zoals aangegeven in 1.1.8.
- GFP signaal observatie
- Meng 3 mL van glycerol met 47 mL ultrazuiver water voor het genereren van een 6% glycerol-oplossing.
- Bevestig een stuk dubbelzijdige plakband aan een glasplaatje Microscoop en monteren van een Hauw, zoals aangegeven in punt 1.3.1.
- Splitsen van de carpellen aan beide zijden van de pseudoseptum met een spuit-naald en bevestig de twee ontleed carpellen aan de dia onder een stereoscoop zoals aangegeven in 1.3.2.
- Afzien van 30 µL 6% glycerol op het glasplaatje en alle van de zaadknoppen uit de ontleed carpellen plaatsen in de oplossing met behulp van fine-tipped pincet. Plaats een dekglaasje aan op de dia voorzichtig.
- Als het zaad jas en endosperm in elke zaadknop voorkomen de waarneming van GFP signalen in het embryo dat kunnen, pak het embryo uit de zaadknop. Tik op de dia snel en zachtjes te extruderen van het embryo van de zaadknop (de meer volwassen een zaadknop is, de minder kracht moet worden toegepast op de dia).
- Onderzoeken van de dia voor GFP fluorescentie met behulp van confocale laser scanning microscopie. De geïsoleerde embryo's vinden onder een spaarstand veld (10 X) en hun locatie opnemen, dan overstappen op een high-power veld (100 X olie onderdompeling lens) te observeren van DR5-GFP expressie in de embryo's door de excitatie-lichtbron op 488 nm voor de detectie van het GFP-signaal.
- Bemerk de GFP-expressie in de embryo's om te kiezen van de geschikte T3 lijn voor verdere analyse.
3. karakterisering van Embryo patroonformatie in een Embryo-dodelijke Mutant via Ovule mijnen en Marker eiwit observatie: Naa10 als voorbeeld
- Embryo patronen in naa10 mutant planten
- Bereid het plantaardig materiaal zoals aangegeven in 1.1.1-1.1.7.
- Identificeren van de naa10+/ − planten door PCR met behulp van gen-specifieke primers5, en dan merk de bloemknoppen van de naa10+/ − planten zoals aangegeven in 1.1.8.
- Uitvoeren van de zaadknop mijnen en het microscopisch onderzoek van naa10+/ − embryo's zoals aangegeven in de 1.2 en 1.3.
- Marker eiwit analyse met behulp van naa10 embryo 's
- Verkrijgen van geschikte DR5-GFP transgene lijnen met behulp van de procedure die wordt beschreven in de 2.1-2.2.
- Een homozygoot transgene DR5-GFP -lijn met een naa10 Kruis+/ − plant te verkrijgen naa10+/ − planten die homozygoot voor het GFP fluorescentie markeerteken op de F2-generatie (geïdentificeerd door gen-specifieke PCR zijn) te karakteriseren naa10+/ −5 en observeren van het GFP-signaal onder een microscoop met behulp van een homozygoot DR5-GFP -lijn.
- Mark van de bloemknoppen van naa10+/ − planten die homozygoot voor DR5-GFP zijn zoals aangegeven in 2.1.7.
- Zoeken naar het GFP-signaal in naa10 embryo's die homozygoot voor DR5-GFP zijn zoals aangegeven in punt 2.2.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De methode in dit artikel wordt beschreven kan worden gebruikt om te observeren embryogenese direct onder een Microscoop, de cel identiteit specificatie tijdens de embryogenese annoteren met specifieke markers en karakteriseren van de rol van een bepaald gen tijdens de embryogenese.
Representatieve resultaten van de analyse van embryo patronen (vanaf de fase van verlengde zygote naar de volwassen walking-stick-fase) in het wild-type Arabidopsis zijn afgebeeld in Figuur 2. Na de zaadknop van mijnen, zich de embryo's op verschillende ontwikkelingsstadia kunnen onderscheiden door DIC microscopie (Figuur 2). Het expressiepatroon van DR5-GFP werd opgenomen tijdens de embryogenese onder confocale laser scanning microscopie (Figuur 3) om te bepalen van de verdeling van auxine in het embryo en de potentiële rol van auxine onderzoeken tijdens de embryogenese Arabidopsis.
Dit protocol kan ook worden gebruikt voor het karakteriseren van de rol van specifieke genen tijdens de embryogenese. Hier, werd de rol van Naa10 tijdens de embryogenese Arabidopsis onderzocht als voorbeeld. Abnormale verdeling van de hypophysis werd waargenomen (scheef en verticale verdeling van de hypophysis in Naa10 in vergelijking met dwarse asymmetrische verdeling van de hypophysis in wild-achtige planten, Figuur 4). De verdeling van auxine bolvormige stadium was bijna uniform in de embryo's meeste Naa10 en behouden van een bredere signaal in de hypophysis, in vergelijking met de wild type embryo's (Figuur 5). Deze resultaten wijzen erop dat Naa10 is vereist voor embryogenese en dat het kan worden betrokken bij de embryogenese via de signalering van het synthesetraject Arabidopsisauxine.
Figuur 1: Schematisch Diagram van de dissectie van Arabidopsis Hauw. (A) de Hauw aangesloten op het glasplaatje werd geplakt met een stuk dubbelzijdige plakband. (B) het vergrote beeld van het vak in A. De twee denkbeeldige lijnen vertegenwoordigd de locatie moet worden verdeeld. (C) het vergrote beeld van de Hauw van split in het vak in (D) het beeld van de split Hauw overleden. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2: Onderzoek van embryogenese Wild-type (Col-0) Arabidopsis door DIC microscopie. (A) Elongated zygote. (B) een 1-cel fase embryo op 1 DAP. (C) A 2/4-cel fase embryo op 2 DAP. (D) een octant fase embryo op 3 DAP. (E) A dermatogen fase embryo op 3 DAP. (F) een vroege bolvormige fase embryo op 4 DAP. (G) A late bolvormige fase embryo op 5 DAP. (H) A hart fase embryo op 6 DAP. (ik) een torpedo fase embryo op 7 DAP. (J) een walking-stick fase embryo op 8 DAP. Schaal bars = 10 µm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3: Het expressiepatroon van DR5 in Wild-type (Col-0) Arabidopsis embryo's. (een - d) GFP signalen. (A-D) Samengevoegde afbeeldingen met heldere veld beelden. DR5 kwam tot uitdrukking in de pool van de wortel van de wild-type bolvormige fase (een en A, 4 DAP) en hart fase (b en B, 6 DAP) embryo's. DR5 kwam ook tot uitdrukking in de embryonale zaadlob uiteinden (c en C, 7 DAP) en de therapieën van volwassen wild-type embryo's (d en D, 8 DAP). Schaal bars = 50 µm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 4: Karakterisering van de rol van Naa10 tijdens de embryogenese Arabidopsis. Normale verdeling van de hypophysis in een plant wild-type (A). Abnormale verdeling van de hypophysis in Naa10 mutant planten is gemarkeerd met een witte lijn in (B) (askew afdeling van de hypophysis) en (C) (verticale verdeling van de hypophysis). Schaal bars = 10 µm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 5: De DR5 -expressiepatroon in bolvormige fase wild-type (Col-0) Arabidopsis en Naa10 embryo's. (a en b) GFP signalen. (A en B) Samengevoegde afbeeldingen met heldere veld beelden. DR5 kwam tot uitdrukking in de pool van de wortel van een wild-type bolvormige fase embryo (een en A). DR5 was bijna gelijkmatig uitgedrukt in een bolvormige fase Naa10 embryo en behouden van het bredere signaal in hypophysis in vergelijking met de wild-type (b en B). Schaal bars = 50 µm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Zaadknop klaring is een handige methode voor het opsporen van de celdeling en morfologie beoordelen tijdens de embryogenese Arabidopsis; met behulp van deze techniek, kunnen direct onder DIC microscopie5,12embryo's worden waargenomen. De kritieke stap voor zaadknop goedkeuring is stap 1.3.4. De tijd die nodig is voor de zaadknop mijnen in stap 1.3.4 is variabel. Embryo's in het stadium van 2/4-cel duidelijk waarneembaar na 2U in van de Hoyer oplossing, terwijl ze onduidelijk na 12 h kijken. De meer volwassen een zaadknop is dus, hoe langer de tijd die nodig is voor goedkeuring.
In stap 2.2.5, isoleren van een embryo van een zaadknop, is de hoeveelheid kracht toegepast op de dia van cruciaal belang. Embryo's kunnen worden verpletterd als teveel kracht is uitgeoefend; een embryo niet kan echter worden geëxtrudeerd uit de zaadknop, als te weinig kracht wordt gebruikt. In onze ervaring, de meer volwassen een zaadknop is, de minder kracht nodig is. Torpedo fase en volwassen embryo's kunnen worden geïsoleerd rechtstreeks door peeling open een zaadknop met behulp van een naald van de spuit. Zoals sommige van suspensor cellen vernietigd zouden worden in het geïsoleerde embryo tijdens het isolement, mogelijk het signaal van de fluorescentie van de suspensor verloren of onvolledig zijn. Een andere beperking van deze methode is dat de embryo's voor de 4-cel podium moeilijk waren te vinden vanaf de geëxtrudeerde embryo's zoals ze te klein en afgeschermd door zaadknop fragment zijn.
Het ontwikkelingsstadium en de morfologie van een embryo kunnen worden beïnvloed door de mutatie van bepaalde genen; dergelijke effecten kunnen worden aangetoond door microscopie na goedkeuring van de zaadknop. Deze aanpak zal de steun in het begrip van het moleculaire mechanisme door welke specifieke genen bemiddelen embryogenese5. Het expressiepatroon van een onbekende functioneel gen -GFP fusion tijdens de embryogenese observeren kan beschikken over een koppeling tussen de patronen van het embryo en de uitdrukking van dit gen, en vergemakkelijken de identificatie van nieuwe genen die vereist voor embryogenese in Arabidopsis13 zijn. Het protocol hier beschreven biedt dus een basismethode voor de karakterisatie van embryogenese Arabidopsis.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Wij danken Dr. Jessica Habashi voor het kritisch lezen van het manuscript. Wij danken Dr. Xianyong Sheng van het Imaging Center, College van de biowetenschappen, hoofdstad Normal University (Peking, China), voor het uitvoeren van de lokalisatie van DR5-GFP assay. Dit werk werd gesteund door subsidies van de Beijing Municipal regering Science Foundation (CIT & TCD20150102) en van de nationale Natural Science Foundation van China (31600248).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chloral Hydrate | Sigma | 15307 | |
| Murashige and Skoog Basal Medium | Sigma | M5519 | |
| Phytagel | Sigma | P8169 | |
| Hygromycin | Roche | 10843555001 | |
| Growth chamber | Percival | CU36L5 | |
| Fluorescence microscope | Zeiss Oberkochen | Zeiss Image M2 | camera: AxioCam 506 color |
| Confocal Laser Scanning Microscopy | Zeiss Oberkochen | Zeiss LSM 5 | filters: BP 495 - 555 nm |
| Stereoscope | Zeiss Oberkochen | Axio Zoom V16 | camera: AxioCam MRc5 |
| nutrient-rich soil | KLASMANN, Germany | ||
| 50-mL tube | Corning Inc. | ||
| 1.5-mL tube | Corning Inc. | ||
| 10% sodium hypochlorite solution | Domestic analytical reagent | ||
| sucrose | Domestic analytical reagent | ||
| KOH | Domestic analytical reagent | ||
| glycerol | Domestic analytical reagent | ||
| culture dish | Domestic supplies | ||
| vermiculite | Domestic supplies | ||
| glass slide | Domestic supplies | ||
| syringe needle | Domestic supplies | ||
| fine-tipped tweezers | Domestic supplies | ||
| super clean bench | Domestic equipment |
References
- Jenik, P. D., Gillmor, C. S., Lukowitz, W.
- Lau, S., Slane, D., Herud, O., Kong, J., Jurgens, G. Early embryogenesis in flowering plants: setting up the basic body pattern. Annu Rev Plant Biol. 63, 483-506 (2012).
- Wendrich, J. R., Weijers, D. The Arabidopsis embryo as a miniature morphogenesis model. New Phytol. 199 (1), 14-25 (2013).
- ten Hove, C. A., Lu, K. J., Weijers, D. Building a plant: cell fate specification in the early Arabidopsis embryo. Development. 142 (3), 420-430 (2015).
- Feng, J., et al. Protein N-terminal acetylation is required for embryogenesis in Arabidopsis. J Exp Bot. 67 (15), 4779-4789 (2016).
- Berleth, T., Jurgens, G. The role of the monopteros gene in organising the basal body region of the Arabidopsis embryo. Development. 118, 575-587 (1993).
- Luo, Y., et al. D-myo-inositol-3-phosphate affects phosphatidylinositol-mediated endomembrane function in Arabidopsis and is essential for auxin-regulated embryogenesis. Plant Cell. 23 (4), 1352-1372 (2011).
- Nodine, M. D., Yadegari, R., Tax, F. E. RPK1 and TOAD2 are two receptor-like kinases redundantly required for Arabidopsis embryonic pattern formation. Dev Cell. 12 (6), 943-956 (2007).
- Ulmasov, T., Murfett, J., Hagen, G., Guilfoyle, T. J. Aux/IAA proteins repress expression of reporter genes containing natural and highly active synthetic auxin response elements. Plant Cell. 9 (11), 1963-1971 (1997).
- Friml, J., et al. Efflux-dependent auxin gradients establish the apical-basal axis of Arabidopsis. Nature. 426 (6963), 147-153 (2003).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (16), 735-743 (1998).
- Fiume, E., Fletcher, J. C. Regulation of Arabidopsis embryo and endosperm development by the polypeptide signaling molecule CLE8. Plant Cell. 24 (3), 1000-1012 (2012).
- Jurkuta, R. J., Kaplinsky, N. J., Spindel, J. E., Barton, M. K. Partitioning the apical domain of the Arabidopsis embryo requires the BOBBER1 NudC domain protein. Plant Cell. 21 (21), 1957-1971 (2009).
