Summary
Dieses Protokoll beschreibt ein klinisch einsetzbaren Mittel zur Auflösung von hydrophober Verbindungen in einer wässrigen Umgebung unter Verwendung von Kombinationen der Peptide und Aminosäuren-Lösungen selbst zusammenstellen. Unsere Methode löst eine große Einschränkung hydrophobe Therapeutika, die sichere und effiziente Mittel zur Löslichkeit und Lieferung Methoden in klinischen Einrichtungen fehlen.
Abstract
Selbstorganisierende Peptide (SAPs) sind vielversprechende Fahrzeuge für die Lieferung von hydrophoben Therapeutika für klinische Anwendungen; Ihre amphipathische Eigenschaften erlauben ihnen, hydrophobe Verbindungen in der wässrigen Umgebung des menschlichen Körpers aufzulösen. Selbstorganisierende Peptid-Lösungen haben jedoch schlechte Durchblutung Kompatibilität (z.B. niedrige Osmolarität), deren klinische Anwendung durch intravenöse Verwaltungen zu behindern. Wir haben vor kurzem eine allgemeine Plattform für hydrophobe Drug-Delivery entwickelt, die SAPS mit Aminosäuren-Lösungen (SAP-AA verbindet) bis Wirkstofflöslichkeit erhöhen und Formulierung Osmolarität um die Voraussetzungen für klinische Anwendungen zu erreichen. Diese Formulierung-Strategie wurde im Rahmen der drei strukturell unterschiedlichen hydrophobe Verbindungen – PP2, Rottlerin und Curcumin – um seine Vielseitigkeit unter Beweis stellen gründlich getestet. Darüber hinaus haben wir untersucht Auswirkungen des Änderns Formulierungsbestandteilen durch 6 verschiedene Säfte, 20 natürlich vorhandenen Aminosäuren bei niedrigen und hohen Konzentrationen, und zwei verschiedene Zusatzlösungsmittel Dimethyl Sulfoxid (DMSO) und Ethanol zu analysieren. Unsere Strategie erwies sich als wirksam bei der Optimierung von Komponenten für einen gegebenen hydrophobe Drogen- und therapeutische Funktion des formulierten Inhibitors, PP2, wurde in Vitro und in Vivobeobachtet. Dieses Manuskript beschreibt unsere verallgemeinerte Formulierung-Methode unter Verwendung von SAP-AA-Kombinationen für hydrophobe Verbindungen und Analyse der Löslichkeit als ein erster Schritt zur möglichen Verwendung dieser Formulierungen in funktioneller Studien. Wir gehören repräsentative Löslichkeit Ergebnisse für die Formulierung von hydrophoben zusammengesetzte, Curcumin und besprechen, wie unsere Methodik dient als Plattform für biologische Zukunftsstudien und Krankheitsmodelle.
Introduction
Säfte sind eine Klasse von Biomaterialien, die weitgehend als 3D Gerüste in regenerative Medizin1,2,3,4untersucht wurden. Vor kurzem wurden jedoch sie als Vehikel für die Lieferung von Therapeutika aufgrund ihrer einzigartigen biologischen Eigenschaften5,6,7,8genutzt. SAPs montieren natürlich in stabilen Nanostrukturen9, wodurch ein Mittel zur Droge Kapselung und Schutz. Säfte sind amphipathische, bestehend aus einem bestimmten Muster der hydrophobe und hydrophile Aminosäure Wiederholungen, fahren ihre Self-assembly9,10 und sie dienen als Medium zwischen hydrophoben und hydrophilen Umgebungen. Infolgedessen für die klinische Abgabe von hydrophoben Medikamenten – die extrem geringe Bioverfügbarkeit und Absorption im Körper haben aufgrund mangelnden Löslichkeit in wässrigen Umgebungen11,12 – SAPs sind vielversprechend als eine Lieferung Fahrzeug. Ihre Reihenfolge Muster bedeutet darüber hinaus auch, dass SAPs können rational konzipiert und entwickelt, um maximale Kompatibilität mit jedem bestimmten Medikament oder compound (d. h.anhand der funktionellen Gruppen) und Löslichkeit weiterhelfen.
SAPs wurden als wirksames Medikament Lieferfahrzeuge in viele in Vitro und in Vivo Einstellungen13,14,15,16angewendet. Sie haben auch große Sicherheit und Biokompatibilität bewiesen. Durch niedrige Osmolarität von SAP-medikamentösen Präparaten können sie jedoch für intravenöse Injektionen wie in klinischen Umgebungen13verwendet werden. In Anbetracht dieser Zurückhaltung haben wir vor kurzem entwickelt eine Strategie, die SAPs mit Aminosäure-Lösungen zur Verringerung des Einsatzes von giftigen Co Lösungsmitteln und erhöhen die Formulierung Osmolarität kombiniert und daher klinische Relevanz. Wir wählten mit Aminosäuren sind die Bausteine des SAPs, sind bereits klinisch akzeptiert, und in Kombination mit SAPs, sie erhöhen hydrophobe Wirkstofflöslichkeit Verringerung der Menge an SAP17,18erforderlich.
Wir haben SAP-AA-Kombinationen als eine allgemeine Plattform für hydrophobe Wirkstofflöslichkeit und Nachlieferung geprüft, durch die Schaffung einer mehrstufigen Screening-Pipeline und der Src-Inhibitor, PP2 als Modell hydrophobe Verbindung zuweisen. In diesem Prozess haben wir untersucht die Wirkung der Bestandteile der Rezeptur verändert – letztlich Tests 6 verschiedene Säfte, alle 20 Aminosäuren in 2 verschiedenen Konzentrationen (niedrig und hoch, niedrig basierend auf Konzentrationen in bestehende klinische Anwendungen und hohe Konzentrationen wurden 2 X, 3 X oder 5 X die klinische Konzentration basiert auf der maximalen Löslichkeit der einzelnen Aminosäuren in Wasser), und 2 verschiedenen Co-Lösemittel – und ausgewählten Kombinationen, die für die weitere Analyse PP2 solubilisiert. Dieser Arzneistoff-Formulierung erwies sich als wirksam ist wie eine Droge Lieferfahrzeug in Zellkultur als auch in Vivo Modellen mit intratracheale und intravenös Verwaltungen. Ebenso unsere Arbeit auf die Vielseitigkeit der SAP-AA-Kombinationen in Gefäss-Multiple berührt strukturell unterschiedlichen hydrophobe Verbindungen in wässrigen Umgebungen; insbesondere die Medikamente Rottlerin und Curcumin18. Dieses Manuskript beschreibt die SAP-AA Formulierung Methode und Analyse von Curcumin Löslichkeit als Beispiel für die grundlegende Schritt in unserer Screening-Pipeline. Dieses Protokoll bietet eine einfache und reproduzierbare Möglichkeit zum Bildschirm für die optimale SAP-AA-Kombinationen, die eine gegebene hydrophobe Verbindung aufzulösen.
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Protocol
1. Vorbereitung der Aminosäure-Lösungen
- vorbereiten und Label zwei 50 mL konische Zentrifuge Rohre für jede Aminosäure (jeweils für beide " niedrigen " und " hohe " Konzentrationen).
- Bereiten eine große 2 L-Flasche mit gereinigtem Wasser (18,2 MΩ·cm bei 25 ° C).
- Berechnen Sie die Menge der einzelnen Aminosäuren (in Gramm), um die gewünschte Konzentration zu erreichen, und die entsprechende Menge der Aminosäure in ihre jeweiligen 50 mL Zentrifuge Röhren mit einem Spatel wiegen.
Hinweis: Für die " hohe " Konzentration der beiden negativ geladenen Aminosäuren, PBS statt Wasser verwendet wird. Ihre Konzentration durch ihre niedrige Wasserlöslichkeit und mit PBS statt Wasser hilft, den niedrigen pH-Wert beizubehalten konnten wir nicht erhöhen. Darüber hinaus wurden die Konzentrationsberechnungen mittels einem Endvolumen von 40 mL für jede Aminosäure-Lösung erhalten. Alle Aminosäuren-Konzentrationen sind in Tabelle 3 aufgeführt. Achten Sie darauf, den Spatel zwischen Aminosäuren zur Vermeidung von Kontaminationen zu spülen. Wir empfehlen eine Wasserspülung, gefolgt durch Abwischen mit 70 % igem Ethanol. - Fügen Sie 40 mL gereinigtes Wasser (oder PBS) in jeweils 50 mL-Tube mit einer serologischen Pipette. Kappe, Röhren und Vortex oder kräftig schütteln, bis aufgelöst. Wasser-Bad-Beschallung (Raumtemperatur, 130 W, 40 kHz) kann auch verwendet werden, in der Löslichkeit-Prozess zu unterstützen.
Hinweis: Die folgenden Aminosäure-Lösungen sind lichtempfindlich und sollte mit Aluminiumfolie abgedeckt werden: Cystein und Tyrosin (bestehen aus aromatischen ringartige Strukturen), Tryptophan und Phenylalanin, (reaktive - SH-Gruppe).
2. Vorbereitung der SAP-AA-Lösungen
- bereiten 20 mL funkeln Fläschchen für die selbst-Montage Peptide. Vorbereitung einer bestimmten selbstorganisierende Peptid, ein Fläschchen pro vorbereitete Aminosäurelösung (jede Kombination erfolgt in einer separaten Phiole).
- Mit einem Hochleistungs-Analysenwaage (mit einer besseren Lesbarkeit auf 0,1 mg oder weniger) wiegen etwa 1 ± 0,2 mg Peptid in den unteren Teil jedes Fläschchen. Kappe nach dem Wiegen und erfassen das exakte Gewicht des Peptids auf dem Cap
- Pipette das entsprechende Volumen der Aminosäurelösung (vorbereitet in Abschnitt 1) in jedem Fläschchen mit Peptid, um die gewünschte Konzentration von selbst zusammenbauen Peptid (0,1 mg/mL für lange Peptide mit einer Länge von 16 Aminosäuren oder 0,2 mg/mL zu erreichen kürzere Peptide mit einer Länge von 8 Aminosäuren).
- Sonicate für 10 min in ein Wasser Bad Sonikator (130 W, 40 kHz) bei Raumtemperatur sicherzustellen, die Lösungen in Fläschchen sind vollständig in das Wasserbad eingetaucht.
3. Vorbereitung der Droge-DMSO oder Droge-Ethanol Stock Solutions
- kombinieren 1 mg des Medikaments (in diesem Fall, Curcumin mit 100 % DMSO) und weitere 1 mg mit 100 % Ethanol erstelle ich zwei Stammlösungen.
Hinweis: Wir haben 200 µL DMSO und 400 µL Ethanol, DMSO-Curcumin und Ethanol-Curcumin-Aktien zu machen, die 5 mg/mL und 2,5 mg/mL, bzw. aufgrund unterschiedlicher Löslichkeit in jedem Lösungsmittel waren; Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass die Konzentration Lager je nach der hydrophoben Droge des Interesses eingestellt werden sollte. Faktoren wie Wirkstofflöslichkeit und wirksame biologische Konzentration sind wichtig bei der Ermittlung dieses Wertes. Auch, denken Sie daran, dass die Aktie 100fach und 50-fach in DMSO und Ethanol Formulierungen bzw. verdünnt werden wird (siehe Abschnitt 4) in Verbindung mit SAP-AA-Lösungen. Es kann bevorzugt werden, bereiten Sie eine größere Menge an Lager abhängig von der Anzahl der Formulierungen erforderlich – würde in diesem Fall mehr als 1 mg Droge verwendet werden. Die Lager kann bei-20 ° C gelagert werden. Tauwetter auf Eis und Wirbel vor dem Gebrauch. - Vortex Fläschchen für 15 s das Medikament vollständig auflösen.
4. Vorbereitung der Wirkstoff-Formulierungen
- Vorbereitung klar, 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen für jede Formulierung. Achten Sie darauf, Label-Röhren mit der beabsichtigten selbst zusammenbauen, Peptid, Aminosäure (und Konzentration) und Co.
- Fügen Sie 10 µL Droge-DMSO Aktie oder 20 µL Droge-Ethanol Lager zu entsprechenden Mikrozentrifugenröhrchen.
- Hinzufügen 990 µL des SAP-AA Säurelösungen an die entsprechenden beschriftet Mikrozentrifugenröhrchen, Droge-DMSO Lager und 980 µL für diejenigen mit Droge-Ethanol Lager enthalten. Dies führt zu 1 mL Wirkstoff-Formulierungen mit 1 % DMSO oder 2 % Ethanol.
Hinweis: Die Endkonzentration von allen Curcumin Formulierungen betrug 0,5 mg/mL nach dem Protokoll. Dies variiert wieder, wenn mit anderen hydrophoben Verbindungen und/oder beginnend mit einer unterschiedlichen Lager Konzentration (siehe Punkt 3.1) - Vortex kräftig für 30 s und Formulierungen für 30 min. ruhen lassen
5. Löslichkeit testen
- nach Ruhezeit, Wirbel wieder kräftig für 30 s.
- Zentrifugieren Sie die Formulierungen bei 14.220 x g für 1 min.
- Analysieren unten Mikrozentrifugenröhrchen für Niederschlag (Visualisierung).
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Representative Results
Für die hydrophoben Droge, Curcumin, produzierten wir Formulierungen mit allen 20 natürlich vorhandenen Aminosäuren in geringen Konzentrationen, in Kombination mit nur einer SAP, EAK16-II, als ein Proof-of-Principle. Wir testeten auch Formulierungen mit DMSO und Ethanol als Zusatzlösungsmittel. Insgesamt produziert das 40 Curcumin Formulierungen, jeweils verschiedene Komponenten enthalten. Es ist wichtig zu beachten, dass wir in unseren früheren Studien mit den Src-Inhibitor, PP2, mehr Optionen für SAP (insgesamt 6) und Aminosäure-Konzentration enthalten (klinische, sowie eine höhere Konzentration), die produzierte insgesamt 480 verschiedene Formulierungen. Bei der Auswahl der EAK16-II als SAP für diese Studie wurden die Trends aus dieser Arbeit berücksichtigt. Konzentrationen von verschiedenen Komponenten sind in Tabelle 1, Tabelle 2und Tabelle 3 als Referenz enthalten. Alle hydrophoben Wirkstoff-Formulierungen sind geschirmt für Wirkstofflöslichkeit durch Visualisierung und als lösliche, wenn die Lösung völlig frei von jedem Niederschlag nach Zentrifugation (Abbildung 1 ist). Wenn das Medikament an der Unterseite des Rohres ausfällt, dies gilt nicht löslich und nicht weitere Tests durchlaufen. Darüber hinaus wird die Löslichkeit in dreifacher Ausfertigung und von zwei verschiedenen Personen getestet; Wenn diese Ergebnisse nicht reproduzierbar sind, sind Formulierungen auch nicht als wirklich löslich sein.
Aus den 40 Formulierungen, die in dieser Studie getestet 7 Formulierungen erfolgreich aufgelöst Curcumin (Tabelle 4). Gruppieren von Formulierungen von Komponenten identifiziert zwei Trends: Ethanol scheint eine bessere Co Lösungsmittel für Curcumin auflösen und positiv geladenen Aminosäuren Lysin (K) und Arginin (R) scheinen auch optimalen Komponenten für die Auflösung von Curcumin (Tabelle 4). es ist interessant, zu merken die Farbänderung Formulierungen mit R und K, die offenbaren, Curcumin wird aufgelöst in der alkalischen Zustand (Abbildung 1). Es ist hilfreich, Gruppe Formulierungen durch die Eigenschaften der verschiedenen Komponenten, solche Beobachtungen machen.
Abbildung 1 : Beispiel für Niederschlag Analyse. Für diese Curcumin Formulierungen mit der EAK16-II-Peptid, Ethanol und geladenen Aminosäuren werden Niederschlag der Mikrozentrifugenröhrchen nach Zentrifugation deutlich. Formulierungen mit Lysin (K), Arginin (R) oder Asparaginsäure (D) lösen sich Curcumin (kein Niederschlag), während diejenigen mit Histidin (H) oder Glutaminsäure (E) nicht (Niederschlag, rot eingekreist). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
| Medikament | Formulierung-Konzentration (mg/mL) |
| PP2 | 0.05 |
| Curcumin | 0.05 |
| Rottlerin | 0.02 |
Tabelle 1: Konzentration der Drogen in Formulierungen verwendet. Medikament Formulierung Konzentrationen abweichen, da alle haben eine unterschiedliche bioaktive Konzentration und auch unterschiedliche Kapazitäten.
| Selbstorganisierende Peptid | Eigenschaften | Formulierung-Konzentration (mg/mL) |
| EAK16-ICH | EAK-Familie, lange | 0.1 |
| EAK16-II | EAK-Familie, lange | 0.1 |
| EAK16-IV | EAK-Familie, lange | 0.1 |
| EFK8-II | Modifizierte Kinzelbach, kurze | 0,2 |
| A6KE | Tensid-Like, kurze | 0,2 |
| P6KE | Tensid-Like, kurze | 0,2 |
Tabelle 2: Konzentration der Montage selbst Peptide in Formulierungen verwendet. Mit dem Zusatz von Aminosäuren nur geringe Konzentrationen von selbstorganisierenden Peptid sind erforderlich (0,1-0,2 mg/mL). Kürzere Peptide sind doppelt die Konzentration im Vergleich zu längeren Peptide wie sie die Hälfte die Sequenz Länge (8 Aminosäuren im Vergleich zu 16 Aminosäuren haben).
Tabelle 3: Konzentration der Aminosäure-Lösungen in Formulierungen verwendet. Niedrige Konzentrationen von Aminosäuren wurden basierend auf der vorhandenen klinischen Anwendungen von jedem gewählt. Hohe Konzentrationen sind 2 x, 3 X oder 5 x die klinische Konzentration und innerhalb der maximalen Löslichkeit der einzelnen Aminosäuren in Wasser. Diese Zahl wurde von Pacheco Et Al. modifiziert 18
Tabelle 4: Ergebnisse der repräsentativen Löslichkeit von Curcumin. Eine Übersicht über die SAP-AA-Kombinationen, die effektiv Curcumin nach Screening für Löslichkeit aufgelöst. Diese Zahl wurde von Pacheco Et Al. modifiziert 18
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Discussion
In der Formulierung-Prozedur gibt es verschiedene wichtige Schritte und Punkte, die bei der Problembehandlung. Zunächst, wie wir mit verschiedenen Komponenten und Konzentrationen arbeiten, mehrere Wirbel Schritte im gesamten Protokoll sicherstellen, dass alle Konzentrationen einheitlich und korrekt sind. Einige der hoch-Konzentration, hydrophobe Aminosäuren-Lösungen kann immer noch nicht vollständig aufgelöst werden nach dem aufschütteln und kann in diesem Fall kräftig geschüttelt werden, von Hand, in den Prozess zu unterstützen. Ebenso ist es wichtig, dass SAP-AA Lösungen unterziehen die Beschallung Schritt beschrieben im Schritt 2.4 SAPs natürlich tendenziell Aggregat und Beschallung unterstützen SAP-Cluster, wodurch sich eine einheitliche Lösung zu zersplittern. Zweitens sollte für ein bestimmtes hydrophobe Medikament, Lager und Endkonzentrationen innerhalb von SAP-AA Formulierungen die wirksame Konzentration, Verbindung in biologischen Einstellungen abhängen. Das Protokoll sollte entsprechend geändert werden, um diese aktive Konzentration zu reflektieren. Darüber hinaus ist die Droge, die Ladekapazität auch ein wichtiger Faktor zu betrachten; Es ist wahrscheinlich, dass jedes Medikament wird eine einzigartige Belastbarkeit mit dieser Strategie haben, und dass jede SAP-AA-Kombination eine unterschiedliche Menge an Wirkstoff unterstützen kann auf Kompatibilität basierend. Dies zeigt die Bedeutung des Screenings, die optimale SAP-AA-Kombination für eine bestimmte Verbindung zu finden.
Es gibt eine Reihe von Vorteile unserer Technik gegenüber anderen; genauer gesagt, gibt es großer Bedeutung gegenüber der konventionellen Methode der Verwendung von SAPs allein für die Kapselung und Potenzial Lieferung einer Verbindung. Wie bereits erwähnt, Aminosäuren sind bereits klinisch-angenommen und diese Lösungen auf SAP Formulierungen hinzufügen Osmolarität um hämolytische Aktivität zu verringern erhöht, so dass intravenöse Injektionen in klinischen Szenarien möglich sind. Wir haben auch festgestellt, dass sie stark hydrophobe zusammengesetzte Löslichkeit in Fällen erhöhen wo SAPs allein nicht ausreichend für Löslichkeit17,18 sind. Die mehrere verschiedenen Kombinationen von SAPs und Aminosäuren beteiligt ermöglicht eine Erweiterung in eine Hochdurchsatz-Methode zum Bildschirm für die hydrophoben Wirkstofflöslichkeit. Löslichkeit Daten können im Detail zeigen Trends analysiert werden; Wir haben festgestellt, dass die Sortierung der Ergebnisse nach Formulierung Komponente (SAP oder Aminosäuresequenzen) zeigt eine Muster wahrscheinlich für jedes hydrophobe Medikament eindeutig sein. Als Beispiel verbessern positiv geladenen Aminosäuren Löslichkeit von Curcumin (Abbildung 1), während unserer vorherigen Studien zeigten, dass die negativ geladenen Aminosäuren besser für PP218waren. Diese Trends können helfen, die Eignung von bestimmten Komponenten für auflösende Medikamente mit ähnlicher chemischer Struktur zu ermitteln. Darüber hinaus ist die Einfachheit unserer Löslichkeit Bildschirm ein Vorteil und eine Einschränkung; Obwohl es einfach durchzuführen ist, gibt es technische und genaue Möglichkeiten experimentell die Löslichkeit eines Stoffes in Lösung (z.B., Spektroskopie oder chromatographische Methoden) zu beurteilen. Allerdings ermöglicht der Screening Afrikastrategie dieses Protokoll für die schnelle und effiziente Auswahl von SAP-AA-Kombinationen, die die höchsten Wirkstofflöslichkeit und dementsprechend die höchste mögliche biologische Aktivität zur weiteren Analyse zur Folge. Da gibt es zahlreiche Formulierungen unterschiedliche Kombinationen von selbst zusammenbauen, Peptid, Aminosäure, Aminosäuren-Konzentration und Co Lösungsmittel (480 insgesamt in unserem vorherigen Manuskript18), ist dies ein notwendiger Schritt zur Eingrenzung, optimale zu finden Komponenten für ein bestimmtes Medikament. Nach der Feststellung löslichen Wirkstoff-Formulierungen, sie für Löslichkeit durch weitere technische Methoden beurteilt werden können und sollten in funktionelle Assays, die biologische Aktivität und Sicherheit bewerten weiter validiert werden. Diese funktionelle Assays sollte dem bestimmungsgemäßen Gebrauch der Droge formulierten, zugeschnitten sein, wie in unserer Handschrift Optimierung PP2 Formulierungen18beschrieben. Erweiterung unserer Plattform auf andere hydrophoben Verbindungen offenbaren weitere Trends und Mechanismen zur Steigerung der Löslichkeit und engineering neue SAPs für klinische Formulierung von spezifischen hydrophobe Verbindungen unterstützen.
Die Zukunft von unserer Methode liegt in der möglichen Pipeline für Medikament liefern, sowie seine Fähigkeit, automatisiert werden. Es gibt viele Schritte, die mit einem Gewicht von Pulvern und Dosieren von Flüssigkeiten, die Begrenzung der Zeit Hauptfaktoren in der Formulierung sind. Obwohl es ein langwieriges Verfahren im Labor Einstellungen durchführen dieser Schritte können leicht mit Roboter durchgeführt mag. Ebenso hat die Methode großes Potenzial, um in die kommerzielle Produktion mit dem Einsatz von automatisierten Waagen und Spender skaliert, um die Löslichkeit von vielen hydrophoben Medikamenten gleichzeitig zu testen. Die Formulierung und screening-Verfahren, gleichzeitiger Erhöhung der Genauigkeit und reduziert menschliches Versagen würde dies erheblich beschleunigen. So, unsere Droge Formulierung Methode bestehend aus SAP-AA-Kombinationen ist eine allgemeine Plattform für Löslichkeit und Lieferung von hydrophoben Verbindungen und von Hochdurchsatz-Technologien profitieren würde.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Diese Arbeit von Canadian Institutes of Health Research unterstützt wird, gewährt Betriebs-, MOP-42546 und MOP-119514.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EAK16-I | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AEAKAEAKAEAKAEAK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
| EAK16-II | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AEAEAKAKAEAEAKAK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
| EAK16-IV | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AEAEAEAEAKAKAKAK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
| EFK8-II | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: FEFEFKFK, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
| A6KE | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: AAAAAAKE, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
| P6KE | CanPeptide Inc. | Custom peptide | Sequence: PPPPPPPKE, N-terminus acetylation and C-terminus amidation, >95% pure by HPLC |
| Alanine | Sigma-Aldrich | A7469-100G | L-Alanine |
| Isoleucine | Sigma-Aldrich | I7403-100G | L-Isoleucine |
| Leucine | Sigma-Aldrich | L8912-100G | L-Leucine |
| Methionine | Sigma-Aldrich | M5308-100G | L-Methionine |
| Proline | Sigma-Aldrich | P5607-100G | L-Proline |
| Valine | Sigma-Aldrich | V0513-100G | L-Valine |
| Phenylalanine | Sigma-Aldrich | P5482-100G | L-Phenylalanine |
| Tryptophan | Sigma-Aldrich | T8941-100G | L-Tryptophan |
| Tyrosine | Sigma-Aldrich | T8566-100G | L-Tyrosine |
| Glycine | Sigma-Aldrich | G8790-100G | L-Glycine |
| Asparagine | Sigma-Aldrich | A4159-100G | L-Asparagine |
| Glutamine | Sigma-Aldrich | G8540-100G | L-Glutamine |
| Serine | Sigma-Aldrich | A7219-100G | L-Serine |
| Threonine | Sigma-Aldrich | T8441-100G | L-Threonine |
| Histidine | Sigma-Aldrich | H6034-100G | L-Histidine |
| Lysine | Sigma-Aldrich | L5501-100G | L-Lysine |
| Arginine | Sigma-Aldrich | A8094-100G | L-Arginine |
| Aspartic Acid | Sigma-Aldrich | A7219-100G | L-Aspartic Acid |
| Glutamic Acid | Sigma-Aldrich | G8415-100G | L-Glutamic Acid |
| Cysteine | Sigma-Aldrich | C7352-100G | L-Cysteine |
| Dimethyl Sulfoxide | Sigma-Aldrich | D4540-500ML | DMSO |
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 277649-100ML | Anhydrous |
| Curcumin | Sigma-Aldrich | 08511-10MG | Hydrophobic drug, curcumin |
| Rottlerin | EMD Millipore | 557370-10MG | Hydrophobic drug, rottlerin |
| PP2 | Enzo | BML-EI297-0001 | Hydrophobic drug, PP2 |
| Scintillation Vials | VWR | 2650-66022-081 | Borosilicate Glass, with Screw Cap, 20 mL. Vials for weighing peptide. |
| Falcon 50 mL Conical Centrifugation Tubes | VWR | 352070 | Polypropylene, Sterile, 50 mL. For amino acid solutions. |
References
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