左室肥大の誘導マウスにおける低侵襲の横大動脈狭窄のテクニック
Summary
このプロトコルの目的は、段階的に説明するマウスにおける低侵襲横大動脈狭窄 (TAC) の技術。挿管や一般的に使用される標準的な手順に必要な換気の除去、TAC の低侵襲手術を簡素化し、動物の負担を軽減します。
Abstract
マウスの横の大動脈狭窄 (TAC) は、心不全、心室の肥大 (LVH) とその進行を左オーバー ロードによる圧力の実験調査のため最もよく使用される手技のひとつです。報告された調査の大半は、この手順を実行して、挿管と厳しい、時間のかかるレンダリングし、動物に外科的負担に追加動物の換気。このプロトコルの目的は、挿管することがなく低侵襲の TAC の簡略化手法とマウスの換気を記述することです。技術の重要なステップは、死亡率は低い、LVH の誘導で高効率を達成するために強調されます。
男性の c57bl/6 マウス (10 週齢, 25-30 g, n = 60) ケタミン ・ キシラジンの混合物の腹腔内注射の麻酔をかけられました。自発的に呼吸動物 3-4 mm 上部部分の胸骨を次 6/0 絹糸結紮援助の目に通してのセグメントは大動脈弓の下を通過し、鈍化 27 ゲージ針を結んだ。動物の偽手術を受けた同じ手術の準備なく大動脈狭窄。LVH を誘導の手順の有効性は、心/体重比の大幅な増加によって立証されています。術後後 3、7、14、28 日でこの比率が得られた (n = 6-10 各グループと各時点)。私たちの技術を使用して、LVH は 28 日目から 7 日目から偽の動物と比較して TAC で観察されます。手術と後半 (28 日間) 死亡率がともに 1.7% で非常に低い。
結論としては、マウスにおける低侵襲の TAC の本のコスト効果の高い手法は非常に低い手術と術後の死亡率を運ぶ、LVH を誘導する効率が高い。それは手術の手順を簡素化し、動物の負担を軽減します。このプロトコルで説明する重要な手順に従うことによって簡単に実行できます。
Introduction
過去年にわたって心不全の研究で実施されている実行可能な動物モデル1。小動物モデル心不全の大動物モデルと比較して、多数の潜在的な利点があります。住宅とメンテナンス コストの削減の横にある小さな動物モデルはより少なく複雑な設備を必要な2のための多くの研究者にアクセス可能です。
マウスモデル心不全ラットのモデルと同じ利点の多くを提供しています。さらに減少住宅コスト3、マウス モデルの恩恵を関連するトランスジェニック、ノックアウト (KO) の系統の可用性。携帯型固有の誘導 KO や遺伝子組換え戦略の可能性はマウスに心不全の病態を研究し、新規化学療法3を識別しようとする非常に貴重なツールを確認します。
マウスの中の心不全モデルは現在4を使用、最初のロックマン5で記述された横大動脈狭窄 (TAC) は圧力の過負荷による左心室の肥大 (LVH)1を生成する推奨モデル,3。 このモデルの最大の利点は LVH2の階層を許可する能力、左室が TAC に対応改造が異なるマウス系統間で変数。特に、c57bl/6 マウスは他系統4,6,7では発生可能性があります TAC 後急速な左心室拡張を開発します。
TAC の原因で高血圧症の突然の発症を約 50% 量の増加 LV 2 週間以内に急速に変調 LVH4の開発を目指して、薬理学的または分子の介入のアクティビティを確認することができます。TAC によって重篤な高血圧症の急性の誘導は進歩的な左室肥大を再現して丁度と大動脈弁狭窄症または高血圧症の臨床で観察された改造します。それにもかかわらず、多くの研究者がこのモデルを使用して、識別し、心不全4における新たな治療標的を変更します。
マウスでタックを実行すると、LVH とその後心不全2を誘導するために使用される他の技術のために必要なより大きい外科の専門知識が必要です。ほとんどの著者は、挿、換気、動物2,8, この手順より厳しい、時間がかかるし、動物の手術の負担を追加してこの手順を実行します。いくつか捜査官だけは、手術9,10,11を簡単に参照を研究で低侵襲の TAC を使用しています。
このプロトコルの目的は、ステップバイ ステップを説明するプロシージャの重要な段階を強調表示、マウスにおける低侵襲横大動脈狭窄の簡易で使いやすいテクニックです。これらのキーの手順を実行このテクニックを簡単に実行できます 1 つ。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルの目的は、マウスにおける低侵襲の横方向の大動脈狭窄に対する手技の順を追って図を提示することです。マウスで横方向の大動脈狭窄の詳細な技術的な説明は、他の著者2,8によって報告されています。ただし、これらの調査官は、手術を行う次の挿管や動物の換気。挿管換気の追加手順の使用が増加の複雑さと全体のプロシージ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この仕事にしたスイスの心血管系財団の助成金 (N ° 32016) 支えられ
Materials
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
References
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