Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

החזרה של שוחרת סמים בעכברים באמצעות הפרדיגמה העדפה המקום ממוזגים

Published: June 7, 2018 doi: 10.3791/56983
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Unidad de Investigación Psicobiología de las Drogodependencias, Departamento de Psicobiología, Facultad de Psicología, Universitat de València

Summary

פרוטוקול זה מתאר את העדפה המקום ממוזגים (CPP) כמודל של relapse. הליך זה מאפשר את המדידה של relapse בחיות מעבדה, שקילת ההשפעה של התרופה-הקשורים רמזים סביבתיים כמו התשוקה והוא relapse בשנת מכורים נמנעים כרגע המוקד של תוכניות טיפול שימוש בסמים.

Abstract

בפרוטוקול הנוכחי מתאר את העדפה המקום ממוזגים (CPP) כמודל של relapse התמכרות לסמים. במודל זה, חיות מאומנים תחילה לרכוש העדפה ממוזגים מקום בתא סמים-זוגי, שאחרי הבדיקה שלאחר מיזוג, הם מבצעים מספר מפגשים לכבות את ההעדפה הוקמה. CPP מאפשר הערכת ההשפעות מתגמלת ממוזגים של רמזים הקשורים סביבתיים סמים. לאחר מכן, CPP הכבוי יכול להיות robustly מוצב על ידי הממשל ללא נציגות של מנה לקרקע של הסם, ועל ידי חשיפה לגירויים מלחיצים. שתי השיטות יוסברו כאן. כאשר החיה reinitiates התגובה ההתנהגותית, מינוי של הפרס ממוזגים נחשב במקום.

היתרונות העיקריים של פרוטוקול זה הן כי זה לא פולשנית, זולה, פשוטה עם תוקף טוב קריטריונים. בנוסף, היא מאפשרת לימוד מניפולציות סביבתיים שונים, כגון מתח או דיאטה, אשר יכול לווסת relapse התרופה המבקשים התנהגויות. עם זאת, מגבלה אחת היא כי אם החוקר שמטרתו לחקור את המוטיבציה ואת ההשפעות חיזוק הראשי של התרופה, זה יש השלמה עם שגרות ניהול עצמי, כפי הם כרוכים תגובות operant של בעלי חיים.

Introduction

הפרדיגמה העדפה המקום ממוזגים (CPP) מציע דרך פשוטה להעריך את הפרס ממוזגים המושרה על ידי גירויים מגוונים1,2, ושימש בהרחבה כדי לחקור את ההשפעות מתגמלת ממוזגים של סמים ממכרים3 . הוא מבוסס על מיזוג מוזגת, הערכת הערך מוטיבציה של סמים-הקשורים רמזים סביבתיים לשמירה על התנהגות ממכר4. במודל זה, רמזים סביבתיים לרכוש התיאבון משני מאפיינים (תופעות מתגמלת ממוזגים) כאשר יחד עם ראשי reinforcer3. לדוגמה, מקום נייטרלי בתחילה (כמו הצבע של תא אחד בכלוב CPP) מזווג עם ההשפעה הספציפית של תרופה של התעללות במהלך מיזוג הפעלות5, ואילו חלקה אחרת קשורה עם ההזרקה של רכב. בעקבות מיזוג, אם החיה מבלה יותר זמן בתא קשורים בעבר עם התרופה, ההנחה היא כי CPP פיתחה3. הקמת ההעדפה מושגת כאשר החיה נותן ערך חיובי לאותות סביבתיים הקשור לסם, המהווה reinforcer הראשית. כתוצאה מכך, בעלי חיים יבצע תגובות התנהגותיות מכור לסמים, בתגובה אלה רמזים הקשריים6. המודל CPP מתיר את ההערכה של מאפייני מינונים subthreshold של הסם, מציג אם חיות תנאי ספציפי (למשל, נתקל סבלה תבוסה חברתית בעבר) הם יותר פגיע ורגיש למינונים שהם מתגמלת לא יעיל בתמים חיות7.

המודל CPP גם שימש כדי להעריך הכחדה/השבה כמו במודל חיה ללמוד relapse3, וזו מטרת הפרוטוקול הנוכחי. ישנם שלושה שלבים שונים: רכישה, הכחדה, השבה (איור 1). במודל השבה CPP, חיות קודם לרכוש את CPP עבור תא סמים-זוגי, ולאחר מכן הם לבצע מספר מפגשים הכחדה. אנו מגדירים הכחדה מהרגע שבו החיה מפחית שלה תגובות התנהגותיות של קירוב לגירוי מתגמלת ממוזגים כי כבר הוסר (למשל, התרופה)8. במהלך המפגשים הכחדה, חיות לחקור התאים בהיעדרו של התרופה, כך ההעדפה נרכש בהדרגה הקלוש9. נושא חשוב שיש לקחת בחשבון זה השינוי ההתנהגותי החיה המוצגים במהלך הכחדה (הירידה מתקדמת הזמן בילה בתא לזווג הסמים) עלולה להיות בשל תהליכי למידה חדשות שמתחרות המלומד התגובה הקודמת, . או עקב ירידה ברמת המדינה מוטיבציה פנימית של נושא3. לבסוף, מיסוד מחדש של העדפת של המקום דרך הותאם הקשר או סמים יהיה המודל שלנו של השבה1.

ניהול זריקה לקרקע של הסם המשויך שאוכל להחזיר את ההעדפה, אשר נחשב מיסוד של מחדש של קירוב רמזים הקשריים. סמים לקרקע השבה מתרחשת עקב זיכרון מתמיד של השפעת התרופה, אשר המושרה השתוקקות מניע חיות לחפש את רמזים סביבתיים הקשורים גמול מענג.

חלק מהיתרונות של המודל השבה CPP הם כי הנוהל אינו פולשני (לעומת ניהול עצמי, אשר דורש ניתוח), זול ופשוט. בנוסף, מודל זה יש תוקף של קריטריון טוב, כפי שהוא מחקה טוב מה מתרחש בני10,11, גרימת השבה עם שנוצרים זירוז נסיגה, כגון re-חשיפה12,סמים13 או להדגיש14.

ישנן טכניקות טיפול נוספות הכחדה – השבה מודל של ניהול עצמי תוך ורידי. כאן, חיות הקש על הידית כדי באופן עצמאי את התרופה, מה שמקנה את ההערכה של התגובה operant של בעלי חיים, compulsivity, מוטיבציה14,15,16. היתרון המרכזי CPP מעל שגרות ניהול עצמי הוא כי השבה CPP נחשב כדי לשקף שהפעלה של הערך תמריץ-מוטיבציה של הגירויים ההקשר לזווג עם התרופה, המורכב המחודשת של הגישה התנהגות בהקשר17. יתר על כן, גירויים לא תרופתיים, כגון מתח, יכול גם לגרום השבה18,19. לדוגמה, מחקר ניהול עצמי אחד תיאר ללא תופעות על החזרה של הרואין צריכת בחולדות לאחר הרגל הלם או איפוק של מתח20. מחברים דנו שזה היה לא מוצלח בגלל לחצים אלה נבדקו מחוץ לחדר ניהול עצמי בהקשר אחר. לעומת זאת, בעת שימוש הדגם CPP של השבה, הייתה הקמתה מחדש ברורה של מורפיום-induced CPP לאחר שימוש של לחצים אותו, וחלים עליהם בהקשר אחר של CPP, במועדים שונים (0 ו- 15 דקות לאחר להדגיש חשיפה)18 .

מספר מחקרים בספרות הראו דרכים שונות של סמים, מפגינות השבה. מצד אחד, השבה שיכרון דווחה אצל חולדות ועכברים באמצעות מורפיום5,21,22,23, קוקאין24,25, אמפטמין26, 27, אתנול28,29ו- 3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA)30. מצד שני, החשיפה ללחץ עשוי להיות גורם הקובע פגיעות להתמכרות לסמים. הלחץ ידוע כדי להגביר את השפעת סמים7,31,32 מתגמלת והוא התפקיד שמילאו relapse וותיקה33,34. לדוגמה, תבוסה באינטראקציה חברתית עם conspecific מפעילה מורפיום וקוקאין CPP18,19. בנוסף, בעלי חיים חשופים חזר על התבוסה חברתית פגיעים יותר להשפעות מתגמלת ממוזגים של מינונים subthreshold של קוקאין, ולהשיב את ההעדפה עם מינון נמוך מאוד של קוקאין7.

היישום של המודל השבה CPP היא דרך שימושית ורגיש כדי להעריך את הפגיעות שמפסיק בבעלי חיים, מתיר את ההערכה של שונה מניפולציות סביבתיות עדין, אשר הם הגורמים המפעילים העיקריים המאיימים על נסיגה אנושי, כגון השבה או מתח-תחת השפעת סמים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

בכל ההליכים הכרוכים עכברים והטיפול תאמו הלאומית, אזורי ומקומי, חוקים ותקנות, אשר על פי הוראה 2010/63/האיחוד האירופי של הפרלמנט האירופי והמועצה של 22 ספטמבר 2010 בנושא ההגנה על בעלי חיים משמש מטרות מדעיות. שימוש חיה ו טיפול הוועדה של אוניברסיטת ולנסיה אישרה בפרוטוקול הנוכחי.

1. חומרים והתקנה עבור המקום ממוזגים העדפה:

  1. להתמודד עם עכברים 3 ימים לפני בדיקה עבור כל 1-2 דקות. בבסיס הזנב צריך ניתן לתפיסה. הגוף צריך להיות נתמך במידת האפשר. הדבר נעשה כדי למזער את הכאב ואת המצוקה בעת טיפול בעל חיים וכדי למנוע מפריעות משתנים, כגון מתח.
    הערה: של עכברים זכר 1 60 ימים הישן (צעירים) במשקל של 35-40 g הועסקו בניסויים הנוכחי. ניתן לבצע השבה שיכרון בעכברים משני המינים. עם זאת, בנוגע מפגינות השבה, הפרדיגמה תבוסה חברתית זו מיועדת רק עבור מכרסמים זכר, כמו נקבות לא זירוז תשובה אגרסיבי בעכברים תושב.
  2. לשימוש במקום מיזוג, קופסאות זהה עם שני תאים זהים (30.7 ס"מ × רב 31.5 ס מ רחב × 34.5 ס מ) מופרדים על-ידי תחום אפור מרכזי קטן יותר (13.8 × רב 31.5 ס מ רחב × 34.5 גבוהה).
    הערה: תאים יש רצפה שונים מרקמים וצבעים קיר (רצפה חלקה בתא שחור, רצפה קשה בבית הלבן). כל תא של תיבת CPP מכיל ארבעה קרני אור אינפרא אדום שש שבחלל המרכזי. דבר זה מאפשר ההקלטה של המעברים בין התאים ואת המיקום של החיה.
  3. הגדר למעלה את האורות בחדר (כבוי או הוריד) בכל יום. השתמש אורות אדומים (מומלץ), בעלי חיים לא רואים את זה ואת זה הוא הקלוש עבור הנסיין (כ 40 לאקס נמדדת בגובה 1 מ' מעל פני הרצפה).
  4. להגדיר את התוכנית כדי לרשום 15 דקות עבור מיזוג מראש, שלאחר בדיקה (ראה את הטבלה של חומרים עבור תוכנה) (איור 2)
  5. להכין את הפתרון קוקאין הדרושים עבור הניסוי כולו. להמיס קוקאין הידרוכלוריד ב- 0.9% NaCl (saline) באמצעי אחסון של 0.1 מ"ל/10 גרם משקל. מערבולת תערובת וחנות ב 4 ° C בסוף היום.
    הערה: קוקאין ריכוזים עשוי להשתנות בהתאם למטרה של המחקר. אם המטרה היא להעריך את המנות subthreshold של קוקאין, ריכוז 1 מ"ג/ק"ג יכול לשמש, אשר אינו יעיל בבעלי השליטה, כפי שניתן לראות מחקרים קודמים24,35. אם המינון היעיל הוא המטרה, ריכוז 6 מ"ג/ק"ג יכול להיות הנבחר, אשר יעיל אך לא לעודד השבה24, או ריכוז 25 מ"ג/ק"ג, אשר יעילה ומשרה החזרה של העדפה19.
  6. בדוק החיות במהלך השלב כהה שלהם ולהשתמש באותה תיבת עבור כל חיה לאורך ימים.
  7. להביא את החיות כל יום לחדר הבדיקה בכלובים שלהם הביתה ולהשאיר אותם ללא הפרעה במשך 15 דקות כפי תקופה habituation וכל הקשור מבחן הרעשים.

2. מבחן

  1. רכישה
    הערה: ההליך של המקום מיזוג, לא משוחד מבחינת העדפה ספונטנית הראשונית, מורכב משלושה שלבים: טרום מיזוג, מיזוג, שלאחר מיזוג (איור 1).
    1. מיזוג מראש (Pre-C) (3 ימים) (2 איור, איור 3, איור 4)
      הערה: כאן, הערך נייטרלי של התאים בתיבת CPP מוערך. למדוד את הזמן המושקע של כל תא, מאוחר יותר להשוות את זה עם זה בילה בתא אותו במבחן שלאחר מיזוג.
      1. להביא את החיות לחדר הבדיקה ולהשאיר אותם בלתי למשך 15 דקות.
      2. בדוק כי גיליוטינה הוחזר יוסרו מן הכלוב.
      3. להגדיר את המחשב ואת התוכנית. הזן חיה מזהי ולחץ על הפקודה "משפט" ו- "התחל" (איור 2).
      4. הנח את העכבר בעדינות אל החדר האמצעי (תא אפור) ולהשאיר מחדר הבדיקות עם רעש מינימלי.
      5. להחזיר את כל החיות לתוך הכלובים הביתה ולשמור את הנתונים לאחר סיום משפטו.
      6. לאפשר עכברים לגשת בשני תאי המנגנון למשך 15 דקות (900 s) ליום 3 ימים רצופים.
      7. יום 3, לרשום את הזמן המושקע של כל תא. ךורא s 900 ולשמור אותו עבור ההקצאה של תאים בשלב הבא (איור 3).
      8. הקצה את בעלי החיים בכל קבוצה כדי לקבל את התרופה או רכב באזור אחד (למשל, שחור), ואת החצי השני בתוך התא אחרים (למשל, לבן) (איור 4).
        הערה: התפלגות הסופי של החיות עליך לוודא כי מחצית החיות מוקצים התא בתחילה המועדף ואת החצי השני כדי תא לא מועדפת. בנוסף, חצי מבעלי החיים קיבל את התרופה תא אחד (לדוגמה, אחד שחור) ובחצי השני השני (במקרה זה, הלבן).
      9. איזון ציונים בקבוצה בתוך התאים שניכם, כמו גם על פני קבוצות (הבדיקה השונות קבוצה ניתוח השונות (ANOVA)). הדרכה משוער, ערכי להיות סביב 360-370 s בבדיקת טרום-C (איור 4). הערה: אין הבדלים משמעותיים שיזוהו בין הזמן המושקע של התאים סמים-זוגי, הרכב-זוגי במהלך הבחינה טרום-C.
      10. אל תכלול בעלי חיים כי התערוכה של סלידה חזקה או העדפה עבור כל תא. שקול סלידה כמו לבלות פחות זמן מאשר 33% בתוך התא, ולשקול העדפה כאשר החיה במשך יותר מ- 67% של הזמן הכולל באזור זה.
    2. מיזוג (4 ימים) (איור 5)
      1. שוקל החיות ומשתמשים משקולות אלה מנות קוקאין במהלך מיזוג.
      2. הכנת מזרקים עם קוקאין או תמיסת מלח מבוסס על משקל הגוף.
      3. להזריק עכבר אחד בכל פעם intraperitoneally (ip) והכנס אותו מיד בעדינות לתוך תא שחור או לבן שהוקצה שלהם בתיבה.
      4. לאחר מרווח זמן של 4 שעות, להזריק את מינון התרופה מיד לפני העכבר מוגבל תא סמים-זוגי למשך 30 דקות (איור 5).
      5. לסירוגין הליך זה כל יום, החל מקוקאין בימים 1 ו- 3, מלוחים בימים 2 ו- 4.
      6. בדוק כי כליאה מתבצעת בשני המקרים על ידי סגירת הדלת גיליוטינה שמפריד בין שני תאים, הפיכת האזור המרכזי לא נגיש.
        הערה: בשלב זה, יש צורך להגדיר את התוכנית במחשב.
    3. מיזוג פוסט (Post-C) (יום 1)
      1. להביא את החיות לחדר הבדיקה ולהשאיר אותם בלתי למשך 15 דקות.
      2. הסר את הדלת גיליוטינה המפריד בין שני תאים.
      3. להגדיר את המחשב ואת התוכנית. הכנס חיים מזהי והקש את הפקודה "התחל".
      4. רשום את הזמן המושקע על ידי העכברים ללא טיפול בתא כל במהלך תקופה של התבוננות s 900.
      5. לאחר סיום המשפט, להחזיר את כל החיות לתוך הכלובים הביתה ולשמור את הנתונים.
      6. קח בחשבון כי התרופה יש המושרה העדפה המקום אם הזמן בילה בתא סמים-זוגי במהלך Post-C גדול באופן משמעותי מאשר בבדיקת טרום-C. אם ההיפך מתרחש, שקול סלידה עבור תא סמים-זוגי.
  2. הכחדה
    1. לנהל מפגש שבועי הכחדה כל קבוצות/חיות שהתפתח העדפה תא סמים-זוגי.
    2. מקם את החיה את המנגנון (ללא guillotines) למשך 15 דקות (כמו הבדיקות הקדם ו פוסט-C) (איור 1).
      הערה: אם המינון מועסק ב CPP הוא גבוה (25 מ"ג/ק"ג), לבצע הפעלה 1 הכחדה בשבוע. אם מנה subthreshold משומשים (1 מ"ג/ק"ג), לאחר מכן לבצע 2 הכחדה פגישות שבועיות (למשל בימי שני וחמישי).
    3. שקול את ההעדפה דעכה כאשר נתוני הבדיקה הכחדה אינם מראים הבדלים ביחס הבדיקה טרום-C, אך הם מראים הבדלים ביחס הבדיקה פוסט-C.
    4. חזור על מבחן 24 שעות מאוחר יותר על מנת לאשר הכחדה.
  3. החזרה של CPP
    1. החזרה לקרקע-induced
      1. להעריך את ההשפעות של מנה לקרקע של קוקאין 24 שעות לאחר הכחדה אושרה.
        הערה: לקרקע במינונים נמוכים מחצית הכמות הקודמת כי החיה קיבלה במהלך מיזוג. הבדיקה השבה עובר באותו הפרוטוקול כמו טרום-C ובדיקות פוסט-C, חוץ מזה חיות לקבל את המינון של קוקאין ללא נציגות-מקום 15 דקות לפני הבחינה. היעילות של התרופה לקרקע תוך גרימת השבה יכול להיות מוגברת לאחר הכחדה חוזרות/השבה חוויות23, למרות שסדר המנות נראה לא לשחק תפקיד בתוצאות שהושגו36.
      2. להביא את החיות לחדר אחר מן מחדר הבדיקות (מקום שאינו מותנה) (איור 6).
      3. סגניה מחצית הכמות הקודמת של קוקאין (למשל, אם בעלי החיים היו ממוזגים עם 25 מ"ג/ק"ג קוקאין, מנה לקרקע יהיה 12.5 מ"ג/ק"ג).
      4. נביא אותם שלהם ביבר למשך 15 דקות.
      5. לקחת אותם לחדר הבדיקה ולמקם את החיות במנגנון מיד (ללא הדלתות גיליוטינה הפרדת התאים) למשך 15 דקות (כמו טרום ובדיקות פוסט-C).
      6. שקול את ההפרש תוך שניות בין הזמן בילה בתא סמים-זוגי במהלך הדיון האחרון הכחדה, הבדיקה השבה כאמצעי של מידת החזרה של ההעדפה המושרה על ידי התרופה.
      7. חזור על הפעולות הכחדה-השבה בכל פעם עם הפחתת מינונים עד שהוא ייוודא יהיו אפקטיביים.
        הערה: פקד הזרקת מלוחים יכול לשמש כדי לקבוע את הקיבולת של קוקאין לקרקע (ולא של הזריקה עצמה) כדי לעודד השבה.
    2. מפגינות השבה
      1. להעריך את ההשפעות של מינוי מפגינות 24 שעות לאחר הכחדה אושרה
        הערה: בדיקות השבה הם זהים לאלה ביצעו ב פוסט-C (ambulation חינם למשך 15 דקות), פרט לכך בעלי חיים נבדקים 15 דקות לאחר התבוסה חברתי בתוך היתה ללא-חת המפגש (איור 6)
      2. לקחת את החיות חדר אחר מן החדר CPP.
      3. הנח את העכבר ניסיוני בסקס יריב תוקפני מתאימים של שווה גיל ומשקל הגוף בכלוב פלסטיק (איור 6).
        הערה: המפגש היתה ללא-חת מורכב מבחן 10 דקות בכלוב נייטרלי שקופה מפלסטיק (23x13.5x13cm) עם תוצאה מפלה העכבר ניסיוני. כדי להכין את היריב אגרסיבי, לראשונה לבודד בעלי חיים שונים התואמים משקל גיל וגוף כמו עכברים ניסיוני למשך 3 שבועות. הרכבת אותם כדי לרכוש ניסיון קרבי, לבדוק אותם יש רמות גבוהות של התנהגות טריטוריאלית תוקפנית. כדי להשיג את בני מינו אגרסיבי, עכברים חייב להיות מבודדים למשך לפחות 3 שבועות, ואז ברפואת אגרסיבי ולתקוף התנהגויות. חיות מאומנים בסביבה נייטרלית, מול אותם בזוגות. ניתן להם לנשוך את היריב 2 או 3 הפעמים ולגרום להם הכלוב, תמיד נגמרים האימונים לפני אחד שני העכברים מראה ההגשה, כך החוויה של המפגש מחזקת את ההתנהגות התוקפנית. לאחר סבל תוקפנות (איום ולתקוף מכל conspecific אגרסיבי), עכברים ניסיוני צריך להציג לברוח/הימנעות והתנהגות הגנתי/כנוע. הקריטריון היא לאמץ יציבה ספציפי של תבוסה, המאופיינת על ידי נשימות כנוע, צליעה forepaws, upwardly זווית הראש, ואת מההצעה האוזניים (איור 6). לדברי בורק. et al., 2016, אנחנו מחשיבים את המפגש החברתי הסתיים מוקדם יותר אם הפולש מוצגים שהתנוחה פרקדן כנועים עבור > 8 s או אם 13 עקיצות ההתקפה אירעה. אפשרות נוספת לבעלי מסך ללא הסיכון של נזק משמעותי יכול להיות לצעוד החיה במארז רשת עם חור, לא גדול מספיק כדי גם חיה לעבור.  תוקפנות יכולה להתגלות בלי העמדת חיות לכוון התנהגות תוקפנית.  אם חיים ומקיימת פציעה עם פצע 1 ס מ קוטר ו/או חשיפה ישירה של שריר, הוא אינו נכלל מן המחקר, צריך להיות מורדמים.
      4. לאחר 10 דקות של המפגש היתה ללא-חת, קחו את העכברים לחדר הבדיקה ולמקם חיות המנגנון CPP מיד (ללא הדלתות גיליוטינה הפרדת התאים) למשך 15 דקות (כמו טרום ובדיקות פוסט-C).

3. ניתוח סטטיסטי

הערה: גודל המדגם אידיאלי צריך להיות מינימום של 15 חיות לכל קבוצה.

  1. לנתח את הזמן הממוצע בילה בתא סמים-זוגי של הקבוצה על-ידי אנובה מעורב עם אחד בין משתנה, טיפול, עם שתי רמות (קבוצת הביקורת, הקבוצה הניסיונית, דוגמה של שתי הקבוצות היא איור 7c), ואחד בתוך משתנה – ימים, עם 2 רמות (Pre-C ו- Post-C).
    הערה: בקבוצת הביקורת, בעלי החיים מקבלים את התרופה אבל יש אין מניפולציות סביבתיות. מצד שני, בתוך קבוצת הניסוי בעלי חיים חשופים לתנאים סביבתיים שונים. להשוות את הזמן בילה בתא סמים-זוגי ביום פוסט-C בכבוד טרום-C לבדוק אם קיימים הבדלים משמעותיים כל רגישות לתרופה.
  2. בנוסף, ביצוע ניתוחים פוסט-הוק Bonferroni לבדוק מהם התוצאות משמעותיות.
  3. לנתח נתונים הקשורים הכחדה וערכי השבה בקבוצות העדפה שפותחו על-ידי Student´s t-בדיקות כדי להמשיך ההליך הכחדה-השבה במהלך הניסוי, אבל ברגע האחרון, לנתח אותם עם אנובה עם בתוך משתנה (ימים) עם מספר רמות בהתאם לכל קבוצה.
    הערה: כאשר גדל מספר השוואות, מספר אלה תהיה משמעותית במקרה גם עלה. בתור שכזה, כדי להימנע מקבלת שווא-תוצאות חיוביות (סוג 1 שגיאות) אנחנו 'תקן' ערך p ובכך את המבחן יותר שמרני עם התיקון Bonferroni t-בדיקות מרובות. עם זאת, עבור הבדיקה השבה, ההשוואה צריכה להיעשות בין הבדיקה השבה הבדיקה האחרונה הכחדה. לכן, יש צורך תיקון.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ראשית, נציג נובע השבה לקרקע - ו מפגינות מוצגים באיור 7 שימוש בעכברים זכרים בוגרים OF1.

הנתונים איור 7-b מייצג את הזמן בילה compartment(s) הסמים-זוגי ב- קדם, בדיקת Post-C נותחו באמצעים חוזרות ANOVA עם ימים משתנה בתוך נושאים (השוואת טרום-ג ' ו פוסט-C). התוצאות הראו השפעה משמעותית של הימים משתנה [F(1,34) = 51.179; p < 0.001], כמו כל החיות פיתח העדפה בזמנו פוסט-C בהשוואה ל- Pre-ג כל בעלי החיים היו ממוזגים עם 25 מ"ג/ק"ג קוקאין, כאשר הכחדה הושגה, קבוצה אחת קיבלה מנה לקרקע של 12.5 מ"ג/ק"ג קוקאין לבחון השבה (איור 7 א), השני היה נתון של אינטראקציה חברתית שבה ניסיוני חיה הובס על ידי יריב תוקפני, (איור 7 ב). 15 דקות לאחר שני האירועים, בעלי חיים נבדקו בתיבה CPP המתאימים שלהם.

השבה לקרקע-induced (איור 7 א) היה נתון עד שלאחר מכן הפחתת מינונים לקרקע (חצי הקודם אחד) עד מנה לקרקע הוא אישר יהיו אפקטיביים. המנות היו: 12.5, 6.25, 3.125 ו 1.56 מ"ג/ק"ג קוקאין. מבחן t Student´s חשף השפעה משמעותית על 12.5 מ"ג/ק"ג קוקאין השבה לגבי הפעלת הכחדה (הסטטיסטי t (t) = 20.589, דרגות חופש (df.) = 17; p < 0.001), מנות עוקבות (6.25 מ"ג/ק"ג: t = 18.356; 3.125 מ"ג/ק"ג: t = 14.260; 1.56 מ"ג/ק"ג: t = 16.934 בתעתיק לעברית = 17; p < 0.001). לקרקע עם 0.78 מ"ג/ק"ג לא לגרום השבה.

בדבר השבה מפגינות (ראה איור 7 ב), להיות חשוף חיה תוקפנית, הביס 15 דקות לפני הבדיקה שמוביל החזרתו של ההעדפה הכבוי בעבר (t = 26.810; בתעתיק לעברית = 15; p < 0.001)19 .

מניפולציות סביבתיים אחרים, כגון סבל חוזרות חברתית מפלה לפני ההליך CPP, לשנות את השפעת מינונים subthreshold של קוקאין (איור 7c) מתגמלת. א מעורב ANOVA עם בין המשתנה "מתח" את תוך משתנה בוצעה "ימים", ושם היתה השפעה משמעותית של אינטראקציה מתח x ימים [F(1,29) = 4.144; p < 0.05]. רק חיות חברתית מובס הפגינו העדפה תא סמים-לזווג את מנה subthreshold של הקוקאין, אשר הוכח להיות יעיל בחיות סטנדרטי7. בנוסף, לאחר הכחדה של ההעדפה, חיות חברתית מובס לתפקידו העדפתן עם היחידה 0.5 מ"ג/ק"ג קוקאין לקרקע (t = 25.484 בתעתיק לעברית = 17; p < 0.001).

שנית, כתוצאה מכך שליליים, אנו יכולים לראות כיצד ניתן למנוע השבה על ידי אינטראקציה חברתית חיובית עם conspecific כוחניות (איור 8a). לכן, חשוב להעריך חיות מובסים או לא אחרי חברתי להיתקל37.

דוגמה נוספת של תוצאות שליליות למנוע השבה ניתן מניפולציות תזונתיות, כגון צריכת תזונה עתירת שומן טעים. ראשית, ניתוח ANOVA גילה אפקט של הימים משתנה [F(1,26) = 21.527; p <.0.001], כמו שתי הקבוצות פיתחו העדפה תא סמים-זוגי (p < 0.01) (איור 8 ב'). לאחר הכחדה, התוצאות שלנו להראות כי חיות החליף לדיאטה עתירת שומן, לאחר הבדיקה פוסט-C ירד את רגישותם השבה המושרה סמים-לקרקע, כפי שהם לא להחזיר את ההעדפה בקוקאין 6.25 מ"ג/ק"ג מנה38.

Figure 1
איור 1: התהליך הניסיוני של ההעדפה המקום ממוזגים. זה מורכב משלושה שלבים: טרום מיזוג, מיזוג ומיזוג פוסט. ישנם 4 ימים מיזוג שבו ההליך הוא לסירוגין בכל יום, מתחילה עם קוקאין בימים 1 ו- 3 ועם הרכב בימים 2 ו- 4. לאחר מכן, הכחדה, השבה מפגשים טיפוליים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2: התוכנה הפעלות השימוש לבדיקות טרום-ג ' ו פוסט-C שבו הזמן בילה בתא כל והקליט מספר הערכים הוא. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3: נתונים לאחר ילדי טרום-ג ' ו פוסט-C . הנה, להקליט את הנתונים שהתקבלו במהלך הבדיקה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4: הקצאה לא משוחדת של חיות התאים לקראת השלב הבא של מיזוג. לקחת את הנתונים של היום האחרון של בדיקה טרום-C התאים הלבנים והשחורים. חצי מהחיות מוקצים לקבל את התרופה או הרכב בתא אחד (שחור או לבן), ואת החצי השני בתא אחר. אל תכלול בעלי חיים המראים סלידה חזקה או העדפה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5: המשימה הסופית של הרכב וקוקאין לזווג הפעלות. איור זה מציג חילוף הסדר זיווגים. בימים 1 ו- 3, חיים (למשל, 1.1) הוא נחשף לראשונה תא קוקאין-זוגי (אחד לבן), לאחר 4 שעות, הוא חשוף תא הרכב-זוגי (אחד שחור). בימים 2 ו- 4, הסדר של זיווגים היא הפוכה, החיה היא נחשפה לראשונה לתא (שחור) הרכב-זוגי, ואחרי ארבע שעות, התא (לבן) קוקאין-זוגי. ההליך זה לא משוחד, הפעלות ולאזנה ובו-זמניים מיזוג יכול להתבצע עם שתי חיות באמצעות שני תאים של תיבת זהה (למשל, חיות 1.1 ו- 2.4, 3.1 ו- 1.3), אשר מאפשר לנו כדי לצמצם את הזמן המוקדש ניתוח ניסיוני. שימו לב כי אלה זוגות של חיות לעקוב אחר סדר הפוך של זיווגים באמצעות שלב מיזוג. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 6
איור 6: שני מודלים של השבה. החזרה לקרקע-induced () ו- (b) מפגינות השבה. לקבל הזרקת סמים בחדר ללא נציגות וחיות () הביא את ביבר; 15 דקות מאוחר יותר שהם נבדקים בתיבת CPP. בעלי חיים (b) הם הביסו במפגש היתה ללא-חת בחדר ללא נציגות למשך 10 דקות, לאחר מכן, הם נבדקים בתיבת CPP. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 7
איור 7: תוצאות חיוביות נציג. לקרקע (), מפגינות (b) השבה לאחר 25 מ"ג/ק"ג קוקאין CPP. (ג) ההשפעות של תבוסה חברתית על ההשפעות מתגמל של מינונים subthreshold של קוקאין (1 מ ג/ק ג). העמודות מייצגות זמן ממוצע (± SEM) תוך שניות בילה בתא סמים-זוגי במהלך טרום מיזוג (לבן), שלאחר מיזוג (שחור), האחרון הכחדה ההפעלה (אפור בהיר), ושם השבה (אפור כהה). הבדיקה השבה הוערך 15 דקות לאחר מנה לקרקע של מחצית הכמות קודמות שהתקבלו. * p < 0.05; * * p < 0.01; p < 0.001 הבדל משמעותי לעומת טרום-C (ANOVA בנושאים תוך-ימים משתנה (השוואת טרום-ג ' ו פוסט-C) או בהפעלה הקודמת הכחדה (מבחן t של סטודנט). הדמויות שונו מ- 7,19. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 8
איור 8: נציג תוצאות שליליות. אפקטים של מניפולציות סביבתיים מגן מתגמלת השפעות של קוקאין. () השפעות אינטראקציה חברתית חיובית לפני השבה מבחן. (b) ההשפעות של תזונה עתירת שומן במהלך תקופת הכחדה כל השבה. קבוצת הביקורת היה נמאס עם דיאטה רגילה (13% של קק ל מ- fat, קק ל 67% מפחמימות, ו- 20% קק ל מחלבון; סה כ 2.9 קק ל/g), קבוצת תזונה עתירת שומן (קק ל 45% שומן, קק ל-36% מפחמימות, קק ל 19% מחלבון; 4.6 סה כ קלוריות/גרם). העמודות מייצגות זמן ממוצע (± SEM) תוך שניות בילה בתא סמים-זוגי במהלך טרום מיזוג (לבן), שלאחר מיזוג (שחור), האחרון הכחדה ההפעלה (אפור בהיר), ושם השבה (אפור כהה). הבדיקה השבה הוערך 15 דקות לאחר מנה לקרקע של מחצית הכמות שהתקבלה הקודם. * p < 0.05; * * p < 0.01; הבדל משמעותי לעומת טרום-C (ANOVA בנושאים תוך-ימים משתנה (השוואת טרום-ג ' ו פוסט-C) או בהפעלה הקודמת הכחדה (מבחן t של סטודנט). הדמויות שונו מ 37,38. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

נקודת המפתח לחקר ההתמכרות לסמים היא ההתפתחות של טיפולים לצמצם את התשוקה, כתוצאה מכך, להפחית את הפגיעות אם כל חטאת. בזכות המודל השבה של הפרדיגמה CPP, זה אפשרי ללמוד את השפעת גורמים פרוצדורלי וסביבתיים שונים זה לווסת נסיגה, אשר עדיפות למחקר עתידי. ישנם כמה נקודות חשובות שיש לקחת בחשבון, הפרדיגמה CPP היא מבחן רגיש לגורמים סביבתיים.

שינויים ופתרון: הגירסה CPP של המודל השבה צריך לשנות בהתאם התרופה עניין. ישנם גורמים שונים, שעשוי להשפיע על היקף ההעדפה ממוזגים, כגון משך ומספר הפעלות מיזוג. מספר שיוכי של נע בדרך כלל בין אחד עד שש, עם ארבע להיות הנפוצה ביותר. משך הזמן של הבדיקות מיזוג נקבעת לפי מאפייני התרופה, פרמקוקינטיקה שלה.

מחקרים CPP כרוך בדרך כלל ניסויים רבים, אז זה שימושי להשתמש בפרוטוקולים להפחית את משך הזמן הנדרש. דרך אחת להשיג זאת היא כדי להפחית את מספר הנסיונות, דרך נוספת היא לבצע שני מפגשים של מיזוג ליום, כפי שמוצג בפרוטוקול הנוכחי. במקרה זה, יש צורך להבטיח כי ההשפעות של התרופה מן בהפעלה הקודמת לא גרור אל הזה השני הפעלה39, ולכן מרווח הזמן של 4 שעות בין הקוקאין - מושב הרכב נבחר. לדוגמה, העיתוי של הזיווג במקרה של קוקאין במהלך שלב מיזוג צריך להיות בכל 24 שעות במשך 4 ימים עם משך שיוך של 30 דקות. להפך, מהלך הזמן של ההליך מיזוג של אתנול צריך להיות כל 48 שעות, סך של 8 ימים, 1 מיזוג הפעלה ליום, ואת לסירוגין רכב, EtOH, סוף סוף יש בסך הכל 4 EtOH זיווגים. אתנול זיווג צריך זמן קצר, כגון 5 דקות, כמו עוד פעם יכול לייצר aversive הברית. מינונים יעילים נע בין 1-2 g/kg, מנות subthreshold הם 0.75 g/kg40. החזרה לקרקע-induced צריך להיות חצי מינון קודמות שהתקבלו, המנגנון צריכה להיות זהה.

עם זאת, בחירה לעשות 1 או 2 הפעלות יום יכול להשפיע על תוצאות כמה תרופות מיוחדות של התעללות. לדוגמה, במקרה של MDMA-induced CPL עם פרוטוקול 2-הפעלה, ההעדפה ממוזגים במיזוג פוסט-הוא לא ציין, ואילו זו יכולה להיות מושגת על ידי ביצוע אגודה אחת כל יום30, כך גם צריך להיות מנוהל MDMA כל 48 שעות, אך משך הפעלת מיזוג צריך להיות 30 דקות.

קיימות שתי שיטות עיקריות להכחדה יכול לפעול לאחר הקמת CPP, או זריקות יומיות של הרכב באמצעות כליאת בעל החיים בעבר סמים והן רכב ממוזגים תאים41,42, 43, או על-ידי חזרה על הבדיקה CPP, נותנת חיות לחקור את שלושת התאים ללא הגיליוטינה עד העדפה לא נצפית עוד7,18,30,38. בפרוטוקול הנוכחי, אנחנו מועסקים האחרון, כי זה סוג של הכחדה ספונטנית ללא כל פעולה תרופתי או התנהגותיים הקשורים להתניה (דומה יותר את היווצרותן של מכורים אנושי), אבל שתי השיטות המקובלות, תקף, כמתואר בספרות יש במשך שנים.

מגבלות של הטכניקה: המגבלה החשוב ביותר של הפרדיגמה CPP ודגם השבה היא שהם מאוד רגישים לכל שינוי סביבתי. לכן, חדר ותנאי ביבר צריך להישאר קבועה ויציבה במהלך כל התהליך. להקפיד מיוחד להיבטים כגון המתגוררים באותו החדר עם חברים מהמין השני, כלובים עם חפצים כמו מכונית עושה רעש מסוים וקבוע, או לתנאי אור. בנוסף לשליטה משתנים אלה, תפקידו של החוקר הוא גם ביקורתי, כפי שהם יכולים לגרום לעלייה ברמות סטרס של בעלי החיים להפריע התוצאות.

משמעות לגבי שיטות קיימות: לגבי שיטות אחרות, בגירסה CPP של המודל השבה, החוקר הוא האחד אשר מנהלת את התרופה לבעל-החיים, בניגוד פרדיגמות ניהול עצמי להעריך את המוטיבציה animal´s לקחת את התרופה. חשוב לנו לקחת את זה בחשבון. משמעות הדבר היא כי אנחנו לא נמצאים הערכת מוטיבציה באמצעות מענה operant ולא את ההשפעות חיזוק הראשי של התרופה. כפי שהזכרנו, CPP הוא מודל שימושי כדי להעריך את תפקיד קריטי רמזים סביבתיים לשחק על נסיגה בהפרעות התמכרות, אשר היוו הגורמים העיקריים לווסת relapse בבני אדם.

יישומים העתיד: יישומים עתידיים של המודל השבה CPP צריך להיות מונחה על הדגירה כביכול של תשוקה, אשר מורכב של עלייה פרוגרסיבית ב cue תגובתיות לאחר התנזרות של תרופות, מחקה את התשוקה אצל בני אדם. כיום, מעט מאוד ידוע על זה בבית הדפוס CPP. לפני כמה שנים, מחקר אחד בלבד הציע CPP גם יכול למדוד את תקופת הדגירה44. לאחרונה, זה נאמד בין אם רמזים סביבתיים לזווג למורפין ב CPP יכול להגביר את התגובה ההתנהגותית על תקופת גמילה45ובין אם לאו. במחקר זה נמצא כי המספר של ערכי התאים CPP היו הגדלת לאורך זמן, המשקף הדגירה של השתוקקות, רומז כי הפרס הזיכרונות, התשוקה סמים יכול להבחין ב CPP הפרדיגמה.

השלבים הקריטיים: קיימים מספר שלבים קריטיים בפרוטוקול. על מנת לאשר כי חיות להחזיר את העדפותיהם, לשקף נתונים הכחדה של הכחדה האמיתי העדפה, יאושר לפני הבחינה השבה. נתוני הבדיקה הכחדה לא צריך להראות הבדלים ביחס הבדיקה טרום-C אבל הבדיקה פוסט-C.

לגבי הגירסה השבה שמושפעת מלחץ חברתי, אנחנו צריכים אישרו כי החיה הובסה למעשה, מאז מפגש חברתי חיובי זה אינו מסתיים בתבוסה מציגה את ההשפעות המגנות חסימת השבה של המקום העדפה של קוקאין. אם חיות ניסוי יש כבר לא מובסים, הם ייכללו מן המחקר. אנו ממליצים הקלטה של הערכת המפגש היתה ללא-חת, מדידת ההשהיה של ההתנהגות התוקפנית או התנהגות ההגשה, את מספר ההתקפות הזמן בילה כל ההתנהגויות האלה. אנו רואים כי החיה ניסיוני הוא מובס כאשר מקבל מינימום של 2 פיגועים (ביסים), מראה סימנים של ההגשה (כמופיע באיור6). בכל המקרים, המפגש נמשכת 10 דקות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

Generalitat Valenciana, PROMETEOII / 2014/063; משרד הבריאות, הרווחה ושוויון. משלחת של הממשלה על התוכנית הארצית על סמים, מחקרים על תלות בסמים, 2014I007; משרד הכלכלה ואת התחרותיות (MINECO), הבריאות מכון Carlos III, רשת ממכר RD12 הפרעות (RTA) / 0028/0005, RD16 / 0017/0007, האיחוד האירופי, פדר קרנות "una בדרך זו דה ש Europa" ו PSI2014-51847-R.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
MONPRE 2Z software CIBERTEC S.A., Spain N/A
Identical Plexiglas boxes with two equal sized compartments separated by a grey central area. CIBERTEC S.A., Spain N/A The compartments have different colored walls (black vs white) and distinct floor textures (fine grid in the black compartment and wide grid in the white one). All boxes are equipped with four infrared light beams in each compartment of the box and six in the central area which allow the recording of the position of the animal and its crossings from one compartment to the other.
Cocaine hydrochloride Laboratorios Alcaliber S.A., Madrid, Spain N/A
Animals: mice of the OF1 outbred strain Charles River, Barcelona Spain N/A Male mice who arrive to the laboratory on PND 42 and on PND 60 perform the CPP test. These animals are specially indicated for social defeat and aggression models.
Standard Diet- Teklad Global Diet 2014 Supplied by Harlan Laboratories Models, S. L. (Barcelona, Spain) 13 kcal % fat, 67 kcal % carbohydrates and 20% kcal protein; 2.9 kcal/g
High fat diet TD.06415 45 kcal % fat, 36 kcal % carbohydrates and 19% kcal protein; 4.6 kcal/g

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bardo, M., Bevins, R. Conditioned place preference: what does it add to our preclinical understanding of drug reward? Psychopharmacology. 153, 31 (2000).
  2. Tzschentke, T. M. Review on CPP: Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade. Addiction biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).
  3. Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Neurobiological mechanisms of the reinstatement of drug-conditioned place preference. Brain research reviews. 59 (2), 253-277 (2009).
  4. García-Pardo, M. P., Roger-Sánchez, C., De la Rubia Ortí, J. E., Aguilar, M. A. Animal models of drug addiction. Adicciones. 12 (0), 823 (2017).
  5. Manzanedo, C., Aguilar, M. A., Rodrı́guez-Arias, M., Miñarro, J. Effects of dopamine antagonists with different receptor blockade profiles on morphine-induced place preference in male mice. Behavioural brain research. 121 (1), 189-197 (2001).
  6. Robbins, T. W. The acquisition of responding with conditioned reinforcement: effects of pipradrol, methylphenidate, d-amphetamine, and nomifensine. Psychopharmacology. 58 (1), 79-87 (1978).
  7. Montagud-Romero, S., Nuñez, C., Blanco-Gandia, M. C., Martínez-Laorden, E., Aguilar, M. A., Navarro-Zaragoza, J., et al. Repeated social defeat and the rewarding effects of cocaine in adult and adolescent mice: dopamine transcription factors, proBDNF signaling pathways, and the TrkB receptor in the mesolimbic system. Psychopharmacology. , (2017).
  8. Pavlov, I. P. Conditioned Reflexes. , Oxford University Press. Oxford. (1927).
  9. Yahyavi-Firouz-Abadi, N., See, R. E. Anti-relapse medications: preclinical models for drug addiction treatment. Pharmacology & therapeutics. 124 (2), 235-247 (2009).
  10. Epstein, D. H., Preston, K. L., Stewart, J., Shaham, Y. Toward a model of drug relapse: an assessment of the validity of the reinstatement procedure. Psychopharmacology. 189 (1), 1-16 (2006).
  11. Geyer, M. A., Markou, A. Animal models of psychiatric disorders. Psychopharmacology: the Fourth Generation of Progress. Bloom, F. E., Kupfer, D. J. , Raven. New York. 787-798 (1995).
  12. De Wit, H. Priming effects with drugs and other reinforcers. Experimental and Clinical Psychopharmacology. 4 (1), 5 (1996).
  13. Wang, B., Luo, F., Zhang, W. T., Han, J. S. Stress or drug priming induces reinstatement of extinguished conditioned place preference. Neuroreport. 11 (12), 2781-2784 (2000).
  14. Shalev, U., Erb, S., Shaham, Y. Role of CRF and other neuropeptides in stress-induced reinstatement of drug seeking. Brain research. 1314, 15-28 (2010).
  15. Bossert, J. M., Marchant, N. J., Calu, D. J., Shaham, Y. The reinstatement model of drug relapse: recent neurobiological findings, emerging research topics, and translational research. Psychopharmacology. 229 (3), 453 (2013).
  16. Weiss, F. Neurobiology of craving, conditioned reward and relapse. Current opinion in pharmacology. 5 (1), 9-19 (2005).
  17. Mueller, D., Stewart, J. Cocaine-induced conditioned place preference: reinstatement by priming injections of cocaine after extinction. Behavioural brain research. 115 (1), 39-47 (2000).
  18. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Armario, A., Miñarro, J. Social stress is as effective as physical stress in reinstating morphine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 185 (4), 459-470 (2006).
  19. Titomanlio, F., Manzanedo, C., Rodríguez-Arias, M., Mattioli, L., Perfumi, M., Miñarro, J., Aguilar, M. A. Rhodiola rosea impairs acquisition and expression of conditioned place preference induced by cocaine. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. , (2013).
  20. Shalev, U., Highfield, D., Yap, J., Shaham, Y. Stress and relapse to drug seeking in rats: studies on the generality of the effect. Psychopharmacology. 150 (3), 337-346 (2000).
  21. Lu, L., Ceng, X., Huang, M. Corticotropin-releasing factor receptor type 1 mediates stress-induced relapse to opiate dependence in rats. Neuroreport. 11 (11), 2373-2378 (2000).
  22. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Manzanedo, C., Rodriguez-Arias, M., Miñarro, J. Reinstatement of morphine-induced conditioned place preference in mice by priming injections. Neural Plast. 10, 279-290 (2003).
  23. Do Couto, B. R., Aguilar, M. A., Rodriguez-Arias, M., Miñarro, J. Long-lasting rewarding effects of morphine induced by drug primings. Brain research. 1050 (1), 53-63 (2005).
  24. Maldonado, C., Rodriguez-Arias, M., Castillo, A., Aguilar, M. A., Miñarro, J. Gamma-hydroxybutyric acid affects the acquisition and reinstatement of cocaine-induced conditioned place preference in mice. Behav. Pharmacol. 17, 119-131 (2006).
  25. Maldonado, C., Rodriguez-Arias, M., Castillo, A., Aguilar, M. A., Miñarro, J. Effect of memantine and CNQX in the acquisition, expression and reinstatement of cocaine-induced conditioned place preference. Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 31, 932-939 (2007).
  26. Cruz, F. C., Marin, M. T., Planeta, C. S. The reinstatement of amphetamine-induced place preference is long-lasting and related to decreased expression of AMPA receptors in the nucleus accumbens. Neuroscience. 151, 313-319 (2008).
  27. Li, S. M., Ren, Y. H., Zheng, J. W. Effect of 7-nitroindazole on drug-priming reinstatement of D-methamphetamine-induced conditioned place preference. Eur. J. Pharmacol. 443, 205-206 (2002).
  28. Font, L., Miquel, M., Aragon, C. M. Involvement of brain catalase activity in the acquisition of ethanol-induced conditioned place preference. Physiol. Behav. 93, 733-741 (2008).
  29. Roger-Sánchez, C., Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Aragon, C. M., Miñarro, J. Age-and sex-related differences in the acquisition and reinstatement of ethanol CPP in mice. Neurotoxicology and teratology. 34 (1), 108-115 (2012).
  30. Daza-Losada, M., Do Couto, B. R., Manzanedo, C., Aguilar, M. A., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Rewarding effects and reinstatement of MDMA-induced CPP in adolescent mice. Neuropsychopharmacology. 32 (8), 1750-1759 (2007).
  31. Will, M. J., Watkins, L. R., Maier, S. F. Uncontrollable stress potentiates morphine's rewarding properties. Pharmacol. Biochem. Behav. 60, 655-664 (1998).
  32. Der-Avakian, A., Will, M. J., Bland, S. T., Deak, T., Nguyen, D. T., Schmid, M. J., Spencer, R. L., Watkins, L. R., Maier, S. F. Surgical and pharmacological suppression of glucocorticoids prevents the enhancement of morphine conditioned place preference by uncontrollable stress in rats. Psychopharmacology. 179, 409-417 (2005).
  33. Sinha, R. How does stress increase risk of drug abuse and relapse? Psychopharmacology. 158, 343-359 (2001).
  34. Lu, L., Shepard, J. D., Hall, F. S., Shaham, Y. Effect of environmental stressors on opiate and psychostimulant reinforcement, reinstatement and discrimination in rats: a review. Neurosci. Biobehav. Rev. 27, 457-491 (2003).
  35. Vidal-Infer, A., Arenas, M. C., Daza-Losada, M., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. High novelty-seeking predicts greater sensitivity to the conditioned rewarding effects of cocaine. Pharmacol Biochem Behav. 102, 124-132 (2012).
  36. Reguilón, M. D., Montagud-Romero, S., Ferrer-Perez, C., Roger-Sánchez, C., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Dopamine D2 receptors mediate the increase in reinstatement of the conditioned rewarding effects of cocaine induced by acute social defeat. European Journal of Pharmacology. 799, 48-57 (2017).
  37. Ribeiro Do Couto, B., Aguilar, M. A., Lluch, J., Rodríguez-Arias, M., Miñarro, J. Social experiences affect reinstatement of cocaine-induced place preference in mice. Psychopharmacology. 207 (3), 485-498 (2009).
  38. Blanco-Gandía, M. C., Aracil-Fernández, A., Montagud-Romero, S., Aguilar, M. A., Manzanares, J., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Changes in gene expression and sensitivity of cocaine reward produced by a continuous fat diet. Psychopharmacology. 234 (15), 2337-2352 (2017).
  39. Tzschentke, T. M. Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues. Progress in neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).
  40. Blanco-Gandía, M. C., Ledesma, J. C., Aracil-Fernández, A., Navarrete, F., Montagud-Romero, S., Aguilar, M. A., Manzanares, J., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. The rewarding effects of ethanol are modulated by binge eating of a high-fat diet during adolescence. Neuropharmacology. 121, 219-230 (2017).
  41. Itzhak, Y., Martin, J. L. Cocaine-induced conditioned place preference in mice: induction, extinction and reinstatement by related psychostimulants. Neuropsychopharmacology. 26 (1), 130-134 (2002).
  42. Kreibich, A. S., Blendy, J. A. cAMP response element-binding protein is required for stress but not cocaine-induced reinstatement. Journal of Neuroscience. 24 (30), 6686-6692 (2004).
  43. Zavala, A. R., Weber, S. M., Rice, H. J., Alleweireldt, A. T., Neisewander, J. L. Role of the prelimbic subregion of the medial prefrontal cortex in acquisition, extinction, and reinstatement of cocaine-conditioned place preference. Brain research. 990 (1), 157-164 (2003).
  44. Orsini, C., Bonito-Oliva, A., Conversi, D., Cabib, S. Genetic liability increases propensity to prime-induced reinstatement of conditioned place preference in mice exposed to low cocaine. Psychopharmacology. 198 (2), 287-296 (2008).
  45. Sun, Y., Pan, Z., Ma, Y. Increased entrances to side compartments indicate incubation of craving in morphine-induced rat and tree shrew CPP models. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 159, 62-68 (2017).

Tags

מותנה בהתנהגות גיליון 136 מקום העדפה קוקאין השבה מתח עכברים מכור לסמים
החזרה של שוחרת סמים בעכברים באמצעות הפרדיגמה העדפה המקום ממוזגים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Blanco-Gandía, M. C., Aguilar,… More

Blanco-Gandía, M. C., Aguilar, M. A., Miñarro, J., Rodríguez-Arias, M. Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm. J. Vis. Exp. (136), e56983, doi:10.3791/56983 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter