Hier presenteren we een betrouwbare en eenvoudige tweedimensionale (2D) coculture-systeem voor de studie van de interactie tussen tumorcellen en beenmerg adipocytes, die een dubbele effect van melanoom cel-afgeleide factoren op het beenmerg-adipocytes onthult differentiatie en vormt ook een klassieke methode voor de mechanistische studie van bot metastase.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Dual effecten van melanoom cel-afgeleide factoren op het beenmerg Adipocytes differentiatie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De Overspraak beenmerg adipocytes à tumorcellen kan spelen een cruciale rol in het proces van bot metastase. Een verscheidenheid van methoden zijn beschikbaar voor de studie van de significante Overspraak; een twee-dimensionale transwell systeem voor coculture blijft echter een klassiek, betrouwbaar, en gemakkelijke manier voor deze studie overspraak. Hier presenteren we een gedetailleerd protocol waarin de coculture van het beenmerg adipocytes en melanoom cellen. Echter zou zulk een coculture systeem niet alleen bijdragen tot de studie van cel signaal transductions van kankercellen geïnduceerd door het beenmerg adipocytes, maar ook naar de toekomst mechanistische studie van bot metastase, die nieuwe therapeutische streefcijfers voor bot kan onthullen metastase.
Inleiding
Botmetastasen zijn wijdverspreid onder Geavanceerde kankerpatiënten, maar een curatieve behandeling is nog steeds niet beschikbaar. Verder gespecialiseerd in energie op te slaan als vet, kan adipocytes ondersteunen tumorgroei en uitzaaiing in het beenmerg en andere organen1,2,3,4,5,6 Bovendien spelen adipocytes een essentiële rol bij het reguleren van kanker cel biologie7,8,9....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Opmerking: Alle cellen die worden gebruikt in dit protocol moeten worden gekweekt voor minstens drie generaties na het ontdooien van bevroren voorraad cellen.
1. de oogst van melanoom cel-afgeleide factoren
-
Voorbereidingen
- B16F10 cellen en een muis melanoom cellijn verkrijgen.
Opmerking: Voor dit protocol, een muis melanoom cellijn werd verkregen van de Bank van de cel van de stam van de Chinese Academie van Wetenschappen. - Maak een volledige medium voor de cultuur van de cel B16F10 (100 mL). Gebruik de Dulbecco bewerkt Eagle's medium (DMEM), aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS), 50 ....
- B16F10 cellen en een muis melanoom cellijn verkrijgen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
In het beenmerg, adipocytes kunnen worden weergegeven in de tumor communicatie1,13,33,34,35 in een vroeg stadium voor de ondersteuning van de tumor progressie door oplosbare factoren of het activeren van osteoclastogenesis6,12,36, met .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Cocultures met inzetstukken hebben wijd gebruikt om te studeren van cel naar cel interacties. Het 2D coculture-systeem is een effectieve manier om te observeren hoe de twee delen Overspraak in vitro, waaraan we hier twee verschillende kanker cel-gedreven effecten op het beenmerg adipocytes toonden. Veel laboratoria hebben gebruikt deze methode om te onderzoeken de Overspraak tussen adipocytes en kanker cellen6,12,27
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te verklaren.
Dankbetuigingen
Wij danken Dov Zipori (het Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israël) vriendelijk voor het verstrekken van ons de lymfkliertest beenmerg stromale cel 14F1.1 lijn. Deze studie werd ondersteund door subsidies van de Chinese National Natural Science Foundation (Nos. 81771729) en het Yongchuan ziekenhuis van Chongqing medische universiteit (Nos. YJQN201330; YJZQN201527).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000– 044 | |
| Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24-well plate | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
| Culture incubator | Thermo Scientific | ||
| 50 mL falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific | - | |
| Microscopy | Olympus | - | |
| 200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1,000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |
Referenties
- Wang, J., et al. Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow. Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).
- Trotter, T. N., et al. Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
