Summary
Her præsenterer vi en pålidelig og enkel todimensionale (2D) coculture system til at studere samspillet mellem tumorceller og knoglemarv adipocytter, hvilket afslører en dobbelt effekt af melanom celle-afledte faktorer på knoglemarv adipocytter differentiering og udgør også en klassisk metode for mekanistiske studier af knogle metastaser.
Abstract
Krydstale mellem knoglemarv adipocytter og tumorceller kan spille en kritisk rolle i knogle metastaser. En række forskellige metoder er tilgængelige til at studere den betydelige krydstale; en to-dimensional transwell system for coculture er imidlertid fortsat en klassisk, pålidelig og let måde for denne krydstale undersøgelse. Vi præsenterer her, en detaljeret protokol, der viser coculture af knoglemarven adipocytter og melanom celler. Men sådan et coculture system kunne ikke kun bidrage til studie af celle signal transductions af kræftceller induceret af knoglemarven adipocytter, men også til fremtidens mekanistisk undersøgelse af knogle metastaser, der kan afsløre nye terapeutiske mål for knogle metastaser.
Introduction
Knoglemetastaser er udbredt blandt fremskreden kræftpatienter, men en kurativ behandling er stadig ikke tilgængelig. Ud over med speciale i lagre energi som fedt, kan adipocytter støtte tumorvækst og metastase i knoglemarven og andre organer1,2,3,4,5,6. Derudover spiller adipocytter en vigtig rolle i reguleringen af kræft celle biologi7,8,9,10 og metabolisme4,11,12 ,13,14,15,16, som godt som i knogle metastaser1,4,12. I knoglemarven niche, kan adipocytter også påvirke den biologiske opførsel af kræft celler4,6,17. Samspillet mellem knoglemarv adipocytter og kræftceller med osteotropism er væsentlig for forståelsen af knogle metastaser. Dog er lidt kendt.
Baseret på de aktuelle undersøgelser, der forskellige metoder anvendes på adipocytter, herunder to - eller tre - dimensionelle (2/3D) og ex vivo kulturer17,18,19,20,21. For nylig, Herroon et al. designet en ny 3D-kultur tilgang til at studere samspillet mellem knoglemarv adipocytter med kræft celler22. Selv om den 3D coculture er optimal for efterligne fysiologiske interaktioner mellem adipocytter og kræft celler, i vivo, det lider af dårlig reproducerbarhed22,23. Sammenlignet med en 2D coculture system, kan en 3D coculture system give forskellige cellulære fænotyper, såsom celle morfologi21,22,24,25,26. Desuden kan ex vivo kultur af isolerede spongiosa væv fragmenter føre til en robust udvækst af adipocytter fra kulturperler knoglemarv celler17.
I modsætning til disse tidligere modeller, men stadig 2D celle kultur model en klassisk, pålidelig og let teknik til hurtigt scanning kandidat molekyler og fænotyper ændres i enten adipocytter eller kræft celler in vitro-1, 4,6,12,15,27. For bedre at forstå krydstale mellem knoglemarv adipocytter og melanom celler, giver vi en detaljeret protokol for en 2D coculture system af knoglemarven adipocytter med melanom celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bemærk: Alle celler, der bruges i denne protokol skal være dyrket i mindst tre generationer efter optøning af frosne stock celler.
1. høst melanom celle-afledte faktorer
-
Præparater
- Få B16F10 celler og en mus melanom cell line.
Bemærk: Til denne protokol, en mus melanom cell line blev indhentet fra stamcelle Bank af kinesiske Academy of Sciences. - Gøre en komplet medium for B16F10 cellekultur (100 mL). Bruge Dulbeccos modificerede Eagle medium (DMEM) suppleret med 10% føtal bovint serum (FBS), 50 U/mL af penicillin og 50 µg/mL af streptomycin.
- Gøre et serumfrit medium for udsultning af B16F10 celler (50 mL). Bruge DMEM medium uden FBS, 50 U/mL af penicillin og 50 µg/mL af streptomycin.
- Få B16F10 celler og en mus melanom cell line.
-
Forberede melanom-aircondition medium (CM)
- Frø 2.0 x 105 B16F10 celler i en 100 mm fad med 10 mL 10% FBS DMEM. Derefter inkuberes celler i et 37 ° C inkubator i en atmosfære med 5% CO2 i 24 timer.
- Når cellerne kommer til omkring 80% af sammenløb, fjerne næringssubstratet, cellerne vaskes to gange med 5 mL af fosfatbufferet saltopløsning (PBS) (1 x, pH 7,4) og erstatte mediet med 10 mL serumfrit medium for udsultning.
- Returnere cellerne til rugemaskine for 18-24 h.
- Efter sult, indsamle konditioneret medium (CM) med en pipette og overføre det til en frisk 50 mL-centrifugerør.
Bemærk: Konditioneret mediet er supernatanten af B16F10 cellekulturer. Kontroller B16F10 cellerne er i god stand før indsamling i CM. - Centrifugeres CM i 5 min på 1.000 x g ved 4 ° C.
- Afpipetteres supernatanten og overføre det til en frisk sterile rør eller flaske.
Bemærk: Undgå pipettering off pellet i bunden af røret. - Hvis du vil fjerne celle debris, filtrere CM ved, at det gennem en sprøjte-tilsluttet 0,45 µm filter oven på en steril flaske eller tube.
Bemærk: 0,22 µm filtre er optimal til filtrering i CM. - Gemme den filtrerede supernatanten ved-20 ° C indtil brug.
Bemærk: Det er bedst ikke at gemme supernatanten ved-20 ° C i mere end en måned. Alternativt, gemme CM ved-80 ° C i mere længere perioder af tid til adipocyt differentiering.
2. induktion af knoglemarven adipocytter af melanom celle-afledte faktorer
-
Præparater
- Fyldes 100 mL adipogenic induktion medium28. Bruge et komplet DMEM suppleret med 5 µg/mL af insulin, 0,5 mM 3-isobutylacetophenon-1-Methylxanthin og 1 µM dexamethason. Gemme det op til to uger ved 4 ° C.
- Forberede 100 mL adipogenic vedligeholdelse medium. Bruge en komplet DMEM eller blandet med 50% melanom CM suppleret med 5 µg/mL af insulin.
- Gøre en olie røde O stamopløsning. Opløs 30 mg olie røde O pulver i 10 mL isopropanol (≥ 99,5%) og bland dem godt af vortex.
Bemærk: Opbevar den til 1 år ved 4 ° C. - Gøre en olie røde O brugsopløsning. I stinkskab, fortynde olien røde O stamopløsningen (fra trin 2.1.3) med deioniseret vand i forholdet 3:2. Inkuber blanding i 15 min. ved stuetemperatur og filtreres gennem et 0,22 µm filter før brug.
Bemærk: Kun bruge de friske brugsopløsning inden for 2 h.
-
Adipocyt differentiering
- Kultur en stromale celle linje 14F1.1 fra mus knoglemarv29 i et 60 mm parabol med en komplet DMEM på 80% confluency i et 37 ° C inkubator i en atmosfære med 5% CO2.
Bemærk: Alternativt kan du erstatte 14F1.1 med primære knoglemarv-afledte mesenchymale celler30. - Trypsinize celler med 1,5 mL af en 0,25% trypsin løsningen i en rugemaskine for 1-2 min.
- Der tilsættes 5 mL 10% FBS medium til cellerne og tælle celle tal med et glas hemocytometer; derefter justere celle tæthed til omkring 1-2 x 105/mL.
- Frø 5 x 104 af 14F1.1 celler pr. brønd i en 24-godt plade med 0,5 mL af adipogenic induktion medium. Efter to dages inkubation nå cellerne omkring 90% af sammenløb.
Bemærk: Dette trin er meget kritisk. Knoglemarven stromale celler kan ikke blive tilskyndet til at adipocytter uden en adipogenic induktion medium. - Fjerne induktion medium og cellerne vaskes to gange med 1 mL PBS hver gang.
- Skift til 1 mL af adipogenic vedligeholdelse medium og fortsætte til kultur cellerne indtil adipocyt modning.
Bemærk: Under et mikroskop, adipocytter ligne små eller store sæbe bobler og er meget let at genkende. Normalt, er modne adipocytter til stede på de 6th eller 8th dag. - Plette de modne adipocytter med olie røde O eller indsamle adipocytter for en kvantitativ polymerase kæde reaktion (qPCR) analyse.
- Kultur en stromale celle linje 14F1.1 fra mus knoglemarv29 i et 60 mm parabol med en komplet DMEM på 80% confluency i et 37 ° C inkubator i en atmosfære med 5% CO2.
-
Adipocyt farvning
- Vask den differentierede 14F1.1-celler 2 x med PBS og ordne dem i 3,7% formaldehyd for 1 h.
- Skyl cellerne i 60% isopropanol og lade dem tørre fuldstændigt.
- Tilsættes 0,2 mL brugsopløsning olie røde O brønde og Inkuber ved stuetemperatur til 0,5 til 2 h.
- Cellerne vaskes med vand for at fjerne de ubundne farvestoffer.
- Foto af farvet adipocytter under et lysmikroskop.
3. coculture af knoglemarven adipocytter med melanom celler
-
Præparater
- Forberede modne knogle marv adipocytter: fremkalde 14F1.1 cellerne i modne BM adipocytter i 24-godt plader med adipogenic induktion medium for 2 dage, og derefter fastholde dem i adipogenic vedligeholdelse medium for yderligere 6-8 dage.
- Forberede B16F10 celler: kultur B16F10 cellerne i 60 mm retter med 5 mL af DMEM medium.
- Fugte membran Indsæt (f.eks. transwell): Tilføj 150 µL af FBS-fri DMEM medium til 0,4 µm pore-størrelse membran skær og Fordyb dem på wells af 24-godt plader fyldt med 500 µL af FBS-fri DMEM medium.
-
Coculture indstilling
- Langsomt pipette off hver Indsæt medium.
Bemærk: Må ikke ødelægge membranen, når du fjerner mediet. - Seed B16F10 celler (0/103/105/106) i 0,4 µm pore indsætter fra trin 3.2.1.
- Udskift adipogenic vedligeholdelse medium i brøndene med modne knoglemarv adipocytter fra trin 3.1.1. med 600 µL af komplet DMEM medium.
- Overføre indsætter fyldt med B16F10 celler (fra trin 3.2.2) ved brøndene med modne knoglemarv adipocytter (fra trin 3.2.3) for coculture eksperimenterne.
- Inkubér cocultures ved 37 ° C og 5% CO2 i 2 dage.
- Efter 48 h inkubation, fjerne skær af coculture og derefter vaske adipocytter 2 x med 500 µL 1 x PBS.
Bemærk: Indsamle eventuelt B16F10 cellerne i skær til analyse, hvis nødvendigt. - Pletten adipocytter med olie røde O brugsopløsning eller indsamle adipocytter qPCR analyse.
Bemærk: Se proceduren farvning i trin 2.3. - Foto af farvet adipocytter under et lysmikroskop.
- Langsomt pipette off hver Indsæt medium.
4. qPCR analyse af adipocyt-specifikke genet Signature
- Tilføje 0,5 mL af klar-til-brug RNA isolering reagens pr. brønd i en 24-godt plade i hvilke modne adipocyt er klar til at opdage.
- Følg en standardprotokol til RNA udvinding og cDNA syntese31.
- Brug primeren til 18S og GAPDH som kontrol, og CEBPα/β, PPARγ, FABP4, leptin, PRÆF-1 eller adiponectin til adipocyt-specifikke gen underskrift (tabel 1).
- Kør følgende reaktion i en termisk cycler: 95 ° C til 20 s, efterfulgt af 40 cyklusser af 95 ° C for 1 s og 60 ° C i 20 s.
- Brug metoden 2-ΔΔCt til at beregne folden ændrer32.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I knoglemarven, adipocytter kan vises i tumor mikromiljø1,13,33,34,35 på et tidligt tidspunkt for at støtte tumor progression gennem opløselige faktorer eller aktivering osteoclastogenesis6,12,36, især i forbindelse med fedme6,12 og/eller aldring37. Vores tidligere undersøgelser1 har bemærket, at antallet af knoglemarven adipocyt ændres dramatisk i den tidlige fase af melanom metastaser til knogle1. Faktisk beløb af adipocytter ophobes i området tumor og støtte tumorceller vækst i knoglemarven, når mus fodret med en høj-fedt kost6, tyder på, at knoglemarven adipocytter kan spille en væsentlig rolle i metastatisk knoglen marv niche37. Men den dynamiske krydstale af tumorceller og knoglemarv adipocyt uklart. Derfor var vi dedikeret til at tackle dette problem af ordningen 2D coculture af knoglemarven adipocyt og melanom celler.
Tumor-afledte faktorer fremmer differentiering af knoglemarven adipocytter:
Figur 1 en repræsenterer et typisk workflow for inducerende knoglemarv adipocytter med tumor-aircondition medium (TCM). En repræsentativ eksperiment viser 14F1.1 celler, forgyldt som enkelt celler med en tæthed på 5 x 104 celler pr. brønd i tilstedeværelse af en adipogenic induktion medium i de første 2 dage, og derefter holdt inden for adipogenic vedligeholdelse medium (med eller uden TCM) i 6-8 dage. Modne adipocyt indeholder lipid dråber; Derfor, de differentierede adipocytter kan let identificeres af olie røde O farvning (figur 1b) og kvantificeres ved qPCR med en adipocyt-specifikke gen signatur (figur 1c).
Overbelastning af melanom celler inducerer nedtrapning differentiering i knoglemarven adipocytter:
Tumorceller kan ændre miljøet at overleve, især under hypoksiske betingelser1,4,6. For at efterligne en tumor-byrder sekundær effekt på en knoglemarv adipocyt, udførte vi 2D coculture system med en fortsat stigning i melanom cell antal i de øverste skær (figur 2en). Figur 2b viser at lipid opbevaring i adipocytter er berøvet i højere grad på den højeste tæthed af melanom-celler (106 celler/brønd) sammenlignet med afsavn på den laveste frekvens af melanom-celler (103 celler / godt). Figur 2 c præsenterer et gen profilering af disse adipocytter i adipocytter i coculture. Sammenlignet med coculture med de laveste tæthed af melanom-celler, PRÆF-1 steg klart, og udtryk for Leptin, adiponectin, FABP4, CEBPβ og PPARγ var faldt, hvilket tyder på, at tumor-byrder sekundær effekt kan tilskrives afrimnings differentiering proces i adipocytter. Desuden kunne en overbelastning af tumorceller fremkalde nekrose i adipocytter38.
I Resumé konstaterede vi en modsatte melanom cell-drevet virkning på knoglemarv adipocytter af opløselige faktorer. Den modsatte virkning på knoglemarv adipocytter er af stor interesse, antyder, at knoglemarven adipocytter er dynamisk regulatorer af tumor celle metastaserer til knoglemarven.
Figur 1 : Tumor-afledte faktorer fremmer en adipocyt differentiering. (en) dette panel viser en skematisk oversigt over den eksperimentelle indstilling, som bruger 14F1.1 cellelinjer og en melanom-afledte konditioneret medium. (b) dette panel viser billeddannelse af en differentieret knoglemarv adipocyt. (c) dette panel viser analysen af en adipocyt-specifikke gen underskrift af qPCR. TCM = tumor-aircondition medium. qPCR: kvantitative polymerase kædereaktion. Skalalinjen = 50 µm. Dette tal er blevet ændret fra Wang et al. 1. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Tumor-byrde effekter på adipocyt. (en) dette panel viser en skematisk oversigt over den eksperimentelle indstilling: en coculture af 14F1.1 cellelinjer og melanom celler. (b) dette panel viser billeddannelse af en knoglemarv adipocyt i coculture systemet. (c) dette panel viser et gen profilering af adipocytter af qPCR. qPCR: kvantitative polymerase kædereaktion. Skalalinjen = 50 µm. Dette tal er blevet ændret fra Wang et al. 1. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Primere | ||
| Gen navn | Videresende sekvens (5' til 3') | Omvendt rækkefølge (5' til 3') |
| PPARΓ | CTGATGCACTGCCTATGAGC | GGGTCAGCTCTTGTGAATGG |
| CEBPΑ | AAG AGC CGC GAC AAG GC | GTC AGC TCC AGC ACC TTG TG |
| CEBPΒ | CAACCTGGAGACGCAGCACAAG | GCTTGAACAAGTTCCGCAGGGT |
| FABP4 | TGAAATCACCGCAGACGACAGG | GCTTGTCACCATCTCGTTTTCTC |
| Leptin | ATC TGA AGC AAG CCA TCA GC | CCA GTC ACC AGA GGT CAA GC |
| PRÆF-1 | GACACTCGAAGCTCACCTGG | GGAAGGCTGGGACGGGAAAT |
| Adiponectin | GCG ATA KAT ATA AGC GGC TTC T | GCA GGC ATC CCA GGA KAT C |
Tabel 1: Oversigt over primere bruges til qPCR.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cocultures med skær har været udbredt at studere celle-til-celle interaktioner. 2D coculture system er en effektiv måde at iagttage, hvordan de to dele krydstale in vitro-, som vi her viste to forskellige kræft celle-drevet effekter på knoglemarv adipocytter. Mange laboratorier har udnyttet denne metode til at undersøge krydstale mellem adipocytter og kræft celler6,12,27,39.
I almindelighed, derfor, er en 2D coculture den bedste ligetil tilgang til celle til celle krydstale undersøgelse. Men når det kommer til at forberede en udifferentierede cellelinje for yderligere forskning, der er nogle unikke udfordringer. I protokollen beskrevet her, er sundhed og funktionelle status af knoglemarven stromale celler meget kritisk for adipocytter differentiering. Protokollen kan ændres for at erstatte 14F1.1 cellerne med primære knoglemarv mesenkymale stamceller. Desuden er præ-inkubation af 14F1.1 cellerne i adipogenic induktion medium i flere dage en anden afgørende skridt. Uden denne præ-inkubation, knoglemarv stromale celler vil undlade at differentiere i adipocytter, som er blevet opdaget i vores og andres undersøgelser40. Disse fænomener også forklare, hvorfor nogle lignende protokoller kan resultere i forskellige eller endda overfor effekter og fremhæve betydningen af sådan en nem, repeterbare og detaljeret protokol for krydstale undersøgelsen af tumorceller og knoglemarv adipocytter.
Selvom 2D coculture kan miste nogle kritiske oplysninger i forhold til 3D eller ex vivo kulturer, er det stadig let at standardiseret, overvåges, og til sidst manipuleret for yderligere brug20,21,41. En fremtidig anvendelse af teknikken kan beslutte, hvordan en osteoblastdannelse ændres, når det er cocultured med kræftceller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at erklære.
Acknowledgments
Vi takker Dov Zipori (The Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israel) venligst for at give os murine knoglemarv stromale celle linje 14F1.1. Denne undersøgelse blev støttet af tilskud fra den kinesiske National Natural Science Foundation (nr. 81771729) og det Yongchuan Hospital i Chongqing medicinske universitet (nr. YJQN201330; YJZQN201527).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
| Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24-well plate | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
| Culture incubator | Thermo Scientific | ||
| 50 mL falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific | - | |
| Microscopy | Olympus | - | |
| 200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1,000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |
References
- Wang, J., et al. Adipogenic niches for melanoma cell colonization and growth in bone marrow. Laboratory Investigation. 97 (6), 737-745 (2017).
- Trotter, T. N., et al. Adipocyte-Lineage Cells Support Growth and Dissemination of Multiple Myeloma in Bone. The American Journal of Pathology. 186 (11), 3054-3063 (2016).
- Morris, E. V., Edwards, C. M. The role of bone marrow adipocytes in bone metastasis. Journal of Bone Oncology. 5 (3), 121-123 (2016).
- Diedrich, J. D., et al. Bone marrow adipocytes promote the Warburg phenotype in metastatic prostate tumors via HIF-1alpha activation. Oncotarget. 7 (40), 64854-64877 (2016).
- Chkourko Gusky, H., Diedrich, J., MacDougald, O. A., Podgorski, I. Omentum and bone marrow: how adipocyte-rich organs create tumour microenvironments conducive for metastatic progression. Obesity Reviews. 17 (11), 1015-1029 (2016).
- Chen, G. L., et al. High fat diet increases melanoma cell growth in the bone marrow by inducing osteopontin and interleukin 6. Oncotarget. 7 (18), 26653-26669 (2016).
- Balaban, S., et al. Adipocyte lipolysis links obesity to breast cancer growth: adipocyte-derived fatty acids drive breast cancer cell proliferation and migration. Cancer & Metabolism. 5, 1 (2017).
- Huang, C. K., et al. Adipocytes promote malignant growth of breast tumours with monocarboxylate transporter 2 expression via beta-hydroxybutyrate. Nature Communications. 8, 14706 (2017).
- Wang, Y. Y., et al. Mammary adipocytes stimulate breast cancer invasion through metabolic remodeling of tumor cells. JCI Insight. 2 (4), 87489 (2017).
- Wang, C., Gao, C., Meng, K., Qiao, H., Wang, Y. Human adipocytes stimulate invasion of breast cancer MCF-7 cells by secreting IGFBP-2. PLoS One. 10 (3), 0119348 (2015).
- Nieman, K. M., et al. Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth. Nature Medicine. 17 (11), 1498-1503 (2011).
- Herroon, M. K., et al. Bone marrow adipocytes promote tumor growth in bone via FABP4-dependent mechanisms. Oncotarget. 4 (11), 2108-2123 (2013).
- Tabe, Y., et al. Bone Marrow Adipocytes Facilitate Fatty Acid Oxidation Activating AMPK and a Transcriptional Network Supporting Survival of Acute Monocytic Leukemia Cells. Cancer Research. 77 (6), 1453-1464 (2017).
- Wen, Y. A., et al. Adipocytes activate mitochondrial fatty acid oxidation and autophagy to promote tumor growth in colon cancer. Cell Death & Differentiation. 8 (2), 2593 (2017).
- Liu, Z., et al. Mature adipocytes in bone marrow protect myeloma cells against chemotherapy through autophagy activation. Oncotarget. 6 (33), 34329-34341 (2015).
- Ye, H., et al. Leukemic Stem Cells Evade Chemotherapy by Metabolic Adaptation to an Adipose Tissue Niche. Cell Stem Cell. 19 (1), 23-37 (2016).
- Templeton, Z. S., et al. Breast Cancer Cell Colonization of the Human Bone Marrow Adipose Tissue Niche. Neoplasia. 17 (12), 849-861 (2015).
- Daquinag, A. C., Souza, G. R., Kolonin, M. G. Adipose tissue engineering in three-dimensional levitation tissue culture system based on magnetic nanoparticles. Tissue Engineering Part C: Methods. 19 (5), 336-344 (2013).
- Emont, M. P., et al. Using a 3D Culture System to Differentiate Visceral Adipocytes In Vitro. Endocrinology. 156 (12), 4761-4768 (2015).
- Katt, M. E., Placone, A. L., Wong, A. D., Xu, Z. S., Searson, P. C. In Vitro Tumor Models: Advantages, Disadvantages, Variables, and Selecting the Right Platform. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 4, 12 (2016).
- Edmondson, R., Broglie, J. J., Adcock, A. F., Yang, L. Three-dimensional cell culture systems and their applications in drug discovery and cell-based biosensors. ASSAY and Drug Development Technologies. 12 (4), 207-218 (2014).
- Herroon, M. K., Diedrich, J. D., Podgorski, I. New 3D-Culture Approaches to Study Interactions of Bone Marrow Adipocytes with Metastatic Prostate Cancer Cells. Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 7, 84 (2016).
- Lee, J. M., et al. A three-dimensional microenvironment alters protein expression and chemosensitivity of epithelial ovarian cancer cells in vitro. Laboratory Investigation. 93 (5), 528-542 (2013).
- Imamura, Y., et al. Comparison of 2D- and 3D-culture models as drug-testing platforms in breast cancer. Oncology Reports. 33 (4), 1837-1843 (2015).
- Birgersdotter, A., Sandberg, R., Ernberg, I. Gene expression perturbation in vitro--a growing case for three-dimensional (3D) culture systems. Seminars in Cancer Biology. 15 (5), 405-412 (2005).
- Wang, W., et al. 3D spheroid culture system on micropatterned substrates for improved differentiation efficiency of multipotent mesenchymal stem cells. Biomaterials. 30 (14), 2705-2715 (2009).
- Dirat, B., et al. Cancer-associated adipocytes exhibit an activated phenotype and contribute to breast cancer invasion. Cancer Research. 71 (7), 2455-2465 (2011).
- Scott, M. A., Nguyen, V. T., Levi, B., James, A. W. Current methods of adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Stem Cells and Development. 20 (10), 1793-1804 (2011).
- Zipori, D., Toledo, J., von der Mark, K. Phenotypic heterogeneity among stromal cell lines from mouse bone marrow disclosed in their extracellular matrix composition and interactions with normal and leukemic cells. Blood. 66 (2), 447-455 (1985).
- Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. Isolation, Culture, and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells and Osteoclast Progenitors from Mice. Journal of Visualized Experiments. (131), e56750 (2018).
- Iguchi, T., Niino, N., Tamai, S., Sakurai, K., Mori, K. Absolute Quantification of Plasma MicroRNA Levels in Cynomolgus Monkeys, Using Quantitative Real-time Reverse Transcription PCR. Journal of Visualized Experiments. (132), e56850 (2018).
- Bozec, A., Hannemann, N. Mechanism of Regulation of Adipocyte Numbers in Adult Organisms Through Differentiation and Apoptosis Homeostasis. Journal of Visualized Experiments. (112), e53822 (2016).
- Shafat, M. S., et al. Leukemic blasts program bone marrow adipocytes to generate a protumoral microenvironment. Blood. 129 (10), 1320-1332 (2017).
- Gazi, E., et al. Direct evidence of lipid translocation between adipocytes and prostate cancer cells with imaging FTIR microspectroscopy. The Journal of Lipid Research. 48 (8), 1846-1856 (2007).
- Brown, M. D., et al. Influence of omega-6 PUFA arachidonic acid and bone marrow adipocytes on metastatic spread from prostate cancer. British Journal of Cancer. 102 (2), 403-413 (2010).
- Hardaway, A. L., Herroon, M. K., Rajagurubandara, E., Podgorski, I. Marrow adipocyte-derived CXCL1 and CXCL2 contribute to osteolysis in metastatic prostate cancer. Clinical & Experimental Metastasis. 32 (4), 353-368 (2015).
- Aebi, M. Spinal metastasis in the elderly. European Spine Journal. 12, Suppl 2 202-213 (2003).
- Wagner, M., Bjerkvig, R., Wiig, H., Dudley, A. C. Loss of adipocyte specification and necrosis augment tumor-associated inflammation. Adipocyte. 2 (3), 176-183 (2013).
- Bochet, L., et al. Cancer-associated adipocytes promotes breast tumor radioresistance. Biochemical and Biophysical Research Communications. 411 (1), 102-106 (2011).
- Hirano, T., et al. Enhancement of adipogenesis induction by conditioned media obtained from cancer cells. Cancer Letters. 268 (2), 286-294 (2008).
- Gordeev, A. A., Chetverina, H. V., Chetverin, A. B. Planar arrangement of eukaryotic cells in merged hydrogels combines the advantages of 3-D and 2-D cultures. Biotechniques. 52 (5), 325-331 (2012).
