गंभीर रूप से बीमार रोगियों में पूरे रक्त एंडोटॉक्सिया की जांच के लिए एंडोटॉक्सिन गतिविधि परख
Summary
हम इसके द्वारा मानव पूरे रक्त के नमूनों के endotoxin गतिविधि बिस्तर पर मापने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं. Endotoxin गतिविधि परख प्रदर्शन करने के लिए एक सरल परीक्षण है और सेप्सिस के साथ गंभीर रूप से बीमार रोगियों में एक उपयोगी biomarker हो सकता है.
Abstract
लाइपोपॉलीसैकराइड, जिसे एंडोटॉक्सिन के रूप में भी जाना जाता है, ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया का एक मौलिक घटक है और सेप्सिस और सेप्टिक सदमे के विकास में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। एक संक्रामक प्रक्रिया है कि तेजी से एक गंभीर बीमारी के लिए विकसित हो रहा है की जल्दी पहचान एक तेज और अधिक गहन उपचार शीघ्र हो सकता है, जिससे संभावित बेहतर रोगी परिणामों के लिए अग्रणी. एंडोटॉक्सिन गतिविधि (EA) परख प्रणालीगत एंडोटॉक्सिया के एक विश्वसनीय बायोमार्कर के रूप में बिस्तर पर इस्तेमाल किया जा सकता है। ऊंचा endotoxin गतिविधि के स्तर का पता लगाने बार बार सेप्सिस और सेप्टिक सदमे के साथ रोगियों में एक वृद्धि की बीमारी की गंभीरता के साथ जुड़े दिखाया गया है. परख त्वरित और प्रदर्शन करने के लिए आसान है। संक्षेप में, नमूने के बाद, पूरे रक्त की एक alicot एक विरोधी endotoxin एंटीबॉडी के साथ और जोड़ा LPS के साथ मिलाया जाता है. एंडोटॉक्सिन गतिविधि को प्राइमेड न्यूट्रोफिल्स के सापेक्ष ऑक्सीडेटिव फट के रूप में मापा जाता है जैसा कि केमोल्युमिनेसीसेंस द्वारा पता लगाया गया है। परख के उत्पादन से एक पैमाने पर व्यक्त की है 0 (absent) करने के लिए 1 (अधिकतम) और के रूप में वर्गीकृत “कम” (और lt;0.4 इकाइयों), “मध्यस्थ” (0.4-0.59 इकाइयों), या “उच्च” ($0.6 इकाइयों). विस्तृत पद्धति और ईए परख के कार्यान्वयन के लिए तर्क इस पांडुलिपि में रिपोर्ट कर रहे हैं.
Introduction
Lipopolysaccharide (LPS), भी endotoxin के रूप में जाना जाता है, ग्राम-नकारात्मक (जीएन) बैक्टीरिया की झिल्ली संरचना का एक प्रमुख घटक है। यह कोशिका दीवार के बारे में 10% बनाता है, बाहरी झिल्ली अखंडता और homeostasis के लिए महत्वपूर्ण जा रहा है. इसके अलावा, यह मेजबान जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली 1,2का एक शक्तिशाली उत्प्रेरक है।
एलपीएस के लिए सहज प्रतिरक्षा प्रणाली कोशिकाओं के इनविट्रो जोखिम में कई जीनों की अभिव्यक्ति में परिवर्तन होताहै 3. स्वस्थ मानव स्वयंसेवकों में एलपीएस की बहुत कम मात्रा का प्रशासन तीव्र प्रणालीगत सूजन के झरना को ट्रिगर करता है, जबकि सेप्सिस और सेप्टिक सदमे उच्च एंडोटॉक्सिन सांद्रता4,5के साथ उत्पन्न हो सकते हैं .
सेपसिस एक जीवन-धमकी देने वाली स्थिति है, जिसे तुरंत मान्यता नहीं दी जाती है, तो बहु-अंग विफलता और मौत का कारण बन सकता है। सेप्टिक रोगियों को एक समय पर तरीके से इलाज किया जाना चाहिए, आक्रामक पुनर्जीवन, पर्याप्त एंटीबायोटिक थेरेपी, इष्टतम स्रोत नियंत्रण, और शीघ्र अंग समर्थन रणनीतियों के साथ। सेप्सिस के ईटियोलॉजी का निदान मुख्य रूप से नैदानिकमान्यता और संस्कृति आधारित रोगज़नक़ का पता लगाने 6 पर आधारित है। तथापि, माइक्रोबियल संस्कृतियों के परिणाम 48 एच तक लग सकते हैं और7मामलों के 30% तक अनिर्णीत हो सकते हैं। प्रारंभिक पहचान और हस्तक्षेप बेहतर रोगी परिणामों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. जिन रोगियों में सेप्सिस संदिग्ध है, उनमें अक्सर एंडोक्सिमिया के स्पष्ट संकेत के बिना शारीरिक और जैव रासायनिक मापदंडों के आधार पर निर्णय किए जाते हैं।
एंडोटॉक्सिन गतिविधि (EA) की माप पूरे रक्त में एक वाणिज्यिक परख के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है (सामग्री की तालिकादेखें)। यह रोग गंभीरता के प्रारंभिक स्तरीकरण के लिए प्रणालीगत एंडोक्रॉक्सेमिया के एक बायोमार्कर के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, विशेष रूप से सेप्टिक सदमे8के विकास के लिए जोखिम में रोगियों में. परख सेप्टिक सदमे9के साथ रोगियों में हाल ही में प्रकाशित डबल अंधा यादृच्छिक नियंत्रित नैदानिक परीक्षण में Polymyxin बी hemoperfusion चिकित्सा मार्गदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. गंभीर रूप से बीमार रोगियों में, चिकित्सा अध्ययन से पता चला कि कई अंग रोग, गहन देखभाल इकाई (आईसीयू) रहने की लंबाई, और मृत्यु दर10के साथ जुड़े होने के लिए बढ़ी हुई ईए के स्तर से जुड़ा हुआ है।
एंडोटॉक्सिन का पता लगाने के लिए विभिन्न परख विकसित की गई हैं। Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) परख, या तो एक जेल-क्लॉट, turbidimetric, या क्रोमोजेनिक परीक्षण के रूप में, अब तक सबसे अक्सर सीरम endotoxin के आकलन के लिए अपनाया गया है. यह घोड़े की नाल केकड़ा, लिमुलस पॉलीफिमसके हेमोलिम्फ के जमावकोश को प्रेरित करने के लिए एंडोटॉक्सिन की क्षमता पर आधारित है। हालांकि, इस परख विशिष्टता के मामले में कुछ सीमाएं हैं. विशेष रूप से, यह भी endotoxin के अलावा अन्य माइक्रोबियल उत्पादों द्वारा सक्रिय किया जा सकता है, इस तरह के कवक सेल दीवार के घटकों के रूप में, और यह विभिन्न मानव प्लाज्मा प्रोटीन11द्वारा बाधित किया जा सकता है।
पिछले दशक के दौरान ईए की माप विकसित किया गया है और endotoxemia घूम के एक biomarker के रूप में मान्य. LAL परीक्षण की तुलना में, ईए जल्दी और नैदानिक सेटिंग में लागू करने के लिए आसान है. इसके अलावा, यह वृद्धि की संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ, पूरे रक्त में LAL की तुलना में अधिक सटीक होना दिखाया गया है, दोनों इन विट्रो में और विवो12में.
सेप्सिस कारक एजेंटों के रूप में जीएन बैक्टीरिया की तेजी से पहचान के लिए एक प्रारंभिक नैदानिक उपकरण के रूप में अपने प्रारंभिक कार्यान्वयन के बावजूद, ईए स्तर भी रोग गंभीरता के एक biomarker के रूप में अध्ययन किया गया है. इस संदर्भ में, यह विशेष रूप से इस तरह के सेप्टिक सदमे या बाद हृदय गिरफ्तारी सिंड्रोम13के रूप में चल रही गंभीर बीमारी के कारण hypoperfusion राज्य का आकलन करने के लिए उपयोगी दिखाया गया है. हाल ही में, हेमोशुद्धि प्रणालियों के विकास के बाद से, एक सकारात्मक ईए परिणाम भी एक स्क्रीनिंग उपकरण के रूप में प्रस्तावित किया गया है ताकि इस तरह के चिकित्सा14के लिए संभावित उम्मीदवारों की सही पहचान की जा सके। हमने हाल ही में सेप्टिक शॉक वाले 107 रोगियों में ईए के प्रारंभिक उच्च स्तर के प्रसार और नैदानिक महत्व पर एक अवलोकन पूर्वव्यापी अध्ययन किया है। अन्य हाल के परिणामों के साथ लाइन में, हमने पाया कि ईए सेप्टिक सदमे15के साथ रोगियों में रोग की गंभीरता का एक आशाजनक मार्कर है।
वर्तमान पांडुलिपि का उद्देश्य ईए परख प्रदर्शन करने के लिए विधि का वर्णन करने के लिए है, या तो बिस्तर पर या प्रयोगशाला में, और सेप्टिक सदमे के एक प्रतिनिधि परिदृश्य में इसके संभावित उपयोग का वर्णन करने के लिए. इस तकनीक को एक एंटी-एंडोटॉक्सिन एंटीबॉडी और एलपीएस के परिसरों द्वारा उनके प्राइमिंग के बाद न्यूट्रोफिल में बढ़ाया ऑक्सीडेटिव फट को मापने के द्वारा एलपीएस गतिविधि का पता लगा सकते हैं। बढ़ी हुई श्वसन फट एक chemiluminometer द्वारा पता चला है और उत्सर्जित प्रकाश की मात्रा रक्त के नमूने में endotoxin की मात्रा के लिए आनुपातिक माना जाता है. परख कुछ अभिकर्मकों की आवश्यकता है, के बारे में 30 मिनट लगते हैं प्रदर्शन और पूरे रक्त12के रूप में कम से कम 40 डिग्री सेल्सियस का उपयोग करता है .
Protocol
Representative Results
Discussion
सेप्टिक सदमे आजभी भी 40% के रूप में उच्च के रूप में एक मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है, हालांकि यह दर माना रिपोर्ट16के अनुसार भिन्न होता है. उपन्यास और बेहतर biomarkers के लिए की जरूरत है क्रम में जल्दी निदान…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पाओलो Bragan और लिसा Mathiasen, पीएच.डी. परख प्रोटोकॉल पद्धति की उनकी समीक्षा के लिए धन्यवाद. Dario Winterton, एमडी अंग्रेजी भाषा प्रवीणता के लिए पांडुलिपि की समीक्षा करने में पर्याप्त मदद प्रदान की.
Materials
| EAA kit | Spectral Medical Inc. | EAAST-20 | Package with 20 tests + 1 quality control |
| Smart Line TL | Berthold | EAASL | Luminometer |
| Incubator shaker | GRANT | ES-20 | Mini-incubator shaker |
| Vortexer | VWR | 444-2790 | Vortex instrument |
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