Summary
Zellbasierte Assays ist eine weit verbreitete Methode zur Erkennung von Serum Anti-Aquaporin-4 Immunglobulin G. Diese Methode könnte auf klinische Diagnose und wissenschaftlichen Forschungen der Neuromyelitis-optisches Spektrum-Störungen angewendet werden.
Abstract
Anti-Aquaporin-4 (AQP4) Immunglobulin G (IgG) ist der Kern diagnostischer Biomarker für Neuromyelitis Optica-Spektrum-Störungen (NMOSD). Zellbasierte Assays (CBA) ist eine weit verbreitete Methode, Anti-AQP4-IgG in humanem Serum mit hoher Sensitivität und Spezifität zu erkennen. Kurz, Serum Anti-AQP4 IgG wird von AQP4-transfizierten Zellen, die feste auf dem Biochip ist dann durch einen Fluorescein-gekennzeichnete sekundäre Antikörper erkannt gefangen genommen. Fluoreszenzmikroskopie wird genutzt, um die Fluoreszenz sichtbar zu machen, und die Intensität der Fluoreszenz wird durch mindestens zwei erfahrene Kliniker ausgewertet. Eine endgültige Diagnose des NMOSD kann basierend auf der Kombination von Anti-AQP4 IgG Detektionsergebnisse, klinischen Manifestationen und neuroradiologische Befunde erfolgen. Früheren Studien zufolge CBA ist empfindlicher und spezifischer als andere Anti-AQP4-IgG-Nachweisverfahren und klinische Diagnose und Studien des NMOSD aufgebracht werden. Die Methode hat Einschränkungen; zum Beispiel fehlt noch eine internationale Skala Serum Anti-AQP4-IgG-Titer bewertet. Hier wird ein detailliertes Protokoll für menschliches Serum Anti-AQP4 IgG Nachweis mit CBA beschrieben.
Introduction
Serum IgG AQP4 ist ein Kern diagnostischer Biomarker für Neuromyelitis Optica Spektrum Störungen (NMOSD)1. Zellbasierte Assays (CBA) ist eine weit verbreitete Anti-AQP4 IgG Methode mit hoher Sensitivität und Spezifität. Hier ist ein detailliertes Protokoll für CBA vorgestellt.
AQP4, ein Wasser-Kanal-Protein hat sechs Membran überspannt Einheiten und zwei spiralförmige Domains rund um eine wässrige pore2. Anti-AQP4 IgG in der Pathogenese der NMOSD durch Bindung an ihr Ziel AQP4, engagiert sich vor allem auf die Endfeet von Astrozyten3liegt. Es hat sich gezeigt, dass Anti-AQP4-IgG positiv in etwa zwei Drittel der NMOSD Patienten4ist. In der jüngsten internationalen Diagnosekriterien für NMOSD Anti-AQP4 IgG gilt eine Core-diagnostischer Biomarker-5. In dieser Hinsicht ist es entscheidend, ein zuverlässiges Protokoll zur Humanserum erkennen zu etablieren Anti-AQP4-IgG und klinische Diagnose der NMOSD zu erleichtern.
Derzeit sind verschiedene Anti-AQP4-IgG-Nachweismethoden zur Verfügung, wie z. B. CBA, Gewebe-basierten Tests und Enzym-linked Immunosorbentprobe Assay Flow Cytometry6,7. CBA beschäftigt EU90 Zellen, die mit menschlichen AQP4 Anti-AQP4 IgG erfassen transfiziert sind. Die erfassten Anti-AQP4-IgG ist von fluoreszierenden Sekundärantikörper erkannt und anschließend visualisiert durch Mikroskopie. Sammeln Beweise hat gezeigt, dass CBA empfindlicher und spezifischer als andere Anti-AQP4 IgG Erkennung Methoden6,7. Laut einer Meta-Analyse die Sensitivität und Spezifität der KNA erwiesen sich 76 % und 99 %, die höher als gewebebasierten waren und Enzym-linked Immunosorbentprobe assays6. Darüber hinaus wurde ein multizentrische Vergleich der diagnostischen Tests von Anti-AQP4 IgG durchgeführten7. Insgesamt 193 Studie waren Themen aus 15 europäischen Diagnosezentren eingeschrieben7. Vier verschiedene Methoden wurden verwendet, um Serum Anti-AQP4 IgG7erkennen. Es konnte gezeigt werden, dass CBA empfindlicher und spezifischer als die anderen Methoden7war. Wie AQP4 als zwei große Isoformen (AQP4-M1 und AQP4-M23) zum Ausdruck kommt, ist Anti-AQP4-IgG-Capture-Zelle mit AQP4-M1 oder AQP4-M23 transfiziert. Welche Art von Capture-Zelle ist jedoch besser bleibt umstritten. Eine Untersuchung hat AQP4-M1 Basis unterstützt CBA8, während andere schon angedeutet haben, dass AQP4-M23 CBA basierend ist besser7,9,10. AQP4-M23-basierte CBA kann jedoch falsch positive Ergebnisse durch unspezifische IgG Bindung8erzielen. Jarius Et Al. 11 berichtet, dass gab es keinen signifikanten Unterschied in Anti-AQP4-IgG-Erkennungsraten zwischen AQP4-M1 und AQP4-M23-basierte GAV.
In Zusammenfassung, Serum Anti-AQP4 IgG ist ein Kern-Biomarker für NMOSD. CBA hat höhere Spezifität und Sensitivität als andere Anti-AQP4-IgG-Nachweisverfahren. Es bleibt umstritten, ob AQP4-M1 - oder AQP4-M23-basierte CBA besser ist. In diesem Artikel wird ein detailliertes Protokoll für AQP4-M1-basierte CBA beschrieben, die für klinische Diagnose und Studien von NMOSD gelten kann.
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Protocol
Dieses Verfahren wurde von der Ethikkommission der ersten Krankenhaus der Jilin Universität zugelassen und wurde auf etwa 1.500 Probanden durchgeführt.
(1) Patienten und Blood Sample-Sammlung
- Gelten Sie die Labor-Nachweis von Serum Anti-AQP4 IgG Klinik Patienten mit dem chief Beschwerden und Symptome unten aufgeführten. Durchführen Sie sowie körperliche Untersuchungen.
Optikusneuritis: Patienten leiden mit visuellen Defiziten, wie Verlust des Gesichtsfeldes und Reduktion der Sehschärfe.
Akuter Myelitis: Patienten mit Lähmungen, sensorische Defizite und autonome Dysfunktion präsentieren können.
Area Postrema Syndrom: Patienten haben Symptome einer unerklärlichen Schluckauf, Übelkeit oder Erbrechen.
Akute Hirnstamm-Syndrom: Hirnstamm Läsionen führen verschiedene Symptome und körperlichen Zeichen je nach Lage der Läsionen.
Symptomatische Narkolepsie oder akute diencephalic klinisches Syndrom mit NMOSD-typische diencephalic MRT-Läsionen.
Symptomatische zerebrale Syndrom mit NMOSD-typische Hirnläsionen.
Hinweis: Nach den internationalen Konsens diagnostische Kriterien für NMOSD5, kann eine Diagnose der NMOSD gemacht werden, wenn der Patient Serum Anti-AQP4 ist IgG-positiven und hat mindestens eines der Kern klinische Merkmale wie oben beschrieben. Wir empfehlen jedoch nicht von Anti-AQP4-IgG bei Patienten mit Optikusneuritis nur testen. -
Blut-Musterkollektion
Hinweis: Patienten müssen nicht fasten.- 2-3 mL venöses Blut in ein Sammelrohr 4 mL Vakuum Blut zu zeichnen.
- Lassen Sie das Serum für 30 min bei Raumtemperatur (RT) gerinnen.
Hinweis: Verlängerten Blutgerinnung kann Serumspiegel wegen des Durchsickerns von Thrombozyten erhöhen. - Zentrifuge bei 2100 X g für 5 min. sorgfältig das Serum auf einen neuen Schlauch übertragen.
- Das Serum sofort oder Aliquote analysieren und Lagerung bei-20 oder-80 ° C.
Hinweis: Lagerung bei-20 ° C ist für die Lagerung von Monaten, während-80 ° C für die Lagerung von Jahren.
2. Anti-AQP4-Antikörpernachweis
Vorsicht: Patientenproben und gebrauchte Kit Reagenzien sind infektiöse Materialien anzusehen. Natrium-Azid-haltigen Reagenzien im Kit sind giftig. Ein Flussdiagramm des Protokolls ist in Abbildung 1zur Verfügung gestellt.
-
Vorbereitung
- Bringen Sie das Kit auf RT vor Gebrauch.
Hinweis: Bewahren Sie das Kit bei 2 bis 8 ° C. - Bereiten Sie mindestens 200 mL PBS Waschpuffer mit 0,2 % Tween 20. Gießen Sie 100 mL Waschpuffer in einen 500-mL-Becherglas.
- Das Serum Proben 10 X mit Waschpuffer verdünnt. Bereiten Sie die positiven und negativen Kontrollen gemäß den Anweisungen des Verteilers.
- Bringen Sie das Kit auf RT vor Gebrauch.
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Inkubation der Probe
- Die Reaktion Felder des Fachs Reagenz (Abbildung 2) 30 µL der vorverdünnt Proben, Positivkontrolle oder negative Kontrolle hinzufügen.
Hinweis: Vermeiden Sie Luftblasen. - Entfernen Sie die Schutzkappe auf den Folien Biochip.
Hinweis: Berühren Sie nicht die Biochips um das ablösen und Kontamination der fixen Zellen zu vermeiden. Halten Sie die Folie nebeneinander vor dem Entfernen der Abdeckung. - Gelten Sie die Biochip-Folie für das Reagenz Fach (Abbildung 2). Starten einer 30 min Inkubation bei RT
Hinweis: Jede Probe sollte ein einzelner Tropfen ohne Vermischung mit anderen Tropfen auf die entsprechenden Biochip verbunden sein. - Spülen Sie sanft die Biochip-Folie einmal mit Waschpuffer. Tauchen Sie die Biochip-Folie in der 500 mL-Becherglas mit 100 mL Waschpuffer für mindestens 5 min. Platz das Becherglas auf einen Shaker wenn möglich gefüllt.
- Nehmen Sie die Biochip-Folie von der Waschpuffer. Vorsichtig die restliche Waschpuffer außerhalb der Reaktion-Felder mit einem Papiertuch abwischen. Aussetzen der Biochip-Folie unter freiem Himmel für 1-2 min die verbleibende Waschpuffer im Feld Reaktion verdunsten.
Hinweis: Die Reaktion-Felder nicht austrocknen. Berühren Sie nicht die Biochips mit Küchenpapier trockentupfen.
- Die Reaktion Felder des Fachs Reagenz (Abbildung 2) 30 µL der vorverdünnt Proben, Positivkontrolle oder negative Kontrolle hinzufügen.
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Sekundärantikörper Inkubation
- Bereiten Sie die sekundäre Antikörper-Lösung gemäß den Anweisungen des Verteilers.
- Die Reaktion Felder eines sauberen Reagenz Tabletts 25 µL fluoreszierende Sekundärantikörper hinzufügen.
- Gelten Sie die Biochip-Folie für das Reagenz Tablett voller Sekundärantikörper. 30 min bei RT inkubieren
-
Montage
- Gießen Sie die gebrauchten Waschpuffer und 100 mL frische Waschpuffer in das Becherglas. Wiederholen Sie das Waschen, wie in den Schritten 2.2.4 und 2.2.5 beschrieben.
- Die Reaktion-Felder auf ein Biochip-Folie (ein Tropfen pro Reaktion Feld) sorgfältig einbetten Medium hinzufügen. Die Biochip-Folie mit einem Deckglas zu versiegeln. Vermeiden Sie Luftblasen.
-
Fluoreszenz-Detektion
- Die Leuchtstofflampe des Mikroskops und vorheizen für 15 min. Wählen Sie einen 488 nm-Filter aktivieren.
- Open Foto Software. Fotografieren von transfizierten und untransfected aus allen Bereichen der Reaktion mit verschiedenen Vergrößerungen. Zunächst nehmen Sie ein Bild mit 4 X Vergrößerung für eine Übersicht, dann mehr Bilder mit 10 X und 20 X Vergrößerungen.
Hinweis: Das ausführliche Protokoll wird in Tabelle 1dargestellt. Interpretation der Ergebnisse wird im Abschnitt repräsentative Ergebnisse diskutiert.
(3) die Diagnose des Patienten
- Wenn der Patient Serum Anti-AQP4 ist IgG-positiven und zeigt mindestens ein Kern klinische Merkmal der NMOSD (siehe Diskussion), Patienten mit NMSOD5zu diagnostizieren. Jedoch wenn der Patient Anti-AQP4 kann IgG-negativ, eine Diagnose der NMOSD nicht ausgeschlossen werden.
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Representative Results
Verwendung des beschriebenen Verfahrens hier, ist die spezifische Anti-AQP4-IgG im Serum nachweisbar. Während des Verfahrens waren vorverdünnt Proben, eine positiv-Kontrolle und eine negative Kontrolle der Reaktion Felder hinzugefügt, die transfizierte und untransfected Bereiche (Abbildung 2) enthalten. Fluoreszenz von der negativen Kontrolle in einem transfizierten Bereich angegeben vor allem die unspezifische Bindung des sekundären Antikörper zu den transfizierten Zellen auf Biochips (Abbildung 3). Homogen schwache Fluoreszenz war sichtbar (Abbildung 3). Für die Positivkontrolle wurde Anti-AQP4 Antikörper Reaktion Bereich hinzugefügt. Starke Fluoreszenz wurde im Bereich transfizierten beobachtet, die die spezifische Bindung von IgG Anti-AQP4 AQP4-M1 in den transfizierten Zellen (Abbildung 4) angegeben. Fluoreszenz der Positivkontrolle in einem untransfected Gebiet zeigte Noten von unspezifischen Bindung von IgG Anti-AQP4 zu festen Zellen auf Biochips (Abbildung 4). Für 10 x verdünnten Proben zeigte Anti-AQP4 IgG-negativen Serum eine fluoreszierende Muster ähnlich wie die negativ-Kontrolle, während die positive Serum eine Muster ähnlich der Positivkontrolle (Abbildung 5 zeigte). Die Intensität der Fluoreszenz war verbunden mit der Anti-AQP4-IgG-Titer. Beispiele unterschiedlicher Intensität der Fluoreszenz sind in Abbildung 5dargestellt. Abbildung 5 A und 5 b wurden von Anti-AQP4 IgG-Negative Proben, während Abbildung 5C-H von Anti-AQP4 IgG-positiven Proben waren. So lange, wie heterogen und granulare Fluoreszenz in transfizierten Bereichen erschien, galt die Probe Anti-AQP4 IgG-positiven, unabhängig von der Stärke der Fluoreszenz. Die diagnostischen Kriterien für NMOSD, basiert auf dem Serum Anti-AQP4 IgG, wird in die Diskussion Abschnitt näher beschrieben werden.
In ein paar Proben nur eine kleine Anzahl von Zellen war in transfizierten Bereichen stark gefärbt, und es war schwer zu beurteilen, ob das Serum Anti-AQP4 IgG-positiv oder negativ (Abbildung 6). In diesem Fall kann "wahrscheinlich positiv" gemeldet werden. In selteneren Fällen war die Fluoreszenz eines Samples in transfizierten Bereiche homogen stärker als in den untransfected Bereichen (Abbildung 7). In diesem Fall sollte die Probe als Anti-AQP4 IgG negativ betrachtet werden. Die hohe Intensität der Hintergrundfluoreszenz könnte unspezifisch sein. Um einen zuverlässigen Bericht zu erstellen, sollten alle Fotos blind von mindestens zwei Ärzten beurteilt werden. Die Ärzte sollten vor der Auswertung geschult werden. In diesem Protokoll sie repräsentative Fotografien von verschiedenen Probenarten gezeigt wurden und wurden darüber informiert, wie man die Ergebnisse zu bewerten. Dann bewertet sie Fotos zusammen mit einem erfahrenen Kliniker. Schließlich arbeitete die ausgebildete Ärzte selbständig. In einer idealen Situation sollte es immer die gleichen Ärzte, die Ergebnisse zu bewerten.
Abbildung 1 : Flussdiagramm des Anti-AQP4 IgG Erkennung Protokolls. AQP4-M1-transfizierten oder untransfected EU 90 Zellen werden auf die Biochips fixiert. Wenn Biochips Serum hinzugefügt werden, wird die Anti-AQP4-IgG im Serum durch die festen transfizierten Zellen erfasst. Dann wird Fluorescein radioaktiv markierten Sekundärantikörper aufgebracht, um Anti-AQP4 IgG zu erkennen. Die Fluoreszenz kann durch Mikroskopie mit verschiedenen Vergrößerungen visualisiert werden. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 : Probieren Sie Inkubation. (A) Draufsicht des Reagenz Tablett. Jedes Fach Reagenz enthält fünf individuelle Reaktion Felder. Die positive Kontrolle, Samples und Negativkontrolle sollte die eigene Reaktion Felder hinzugefügt werden. (B) Ansicht von oben Biochip-Folie. Alle Folien Biochip enthält fünf Felder, Reaktion, die zwei Unterabschnitte haben. Die transfizierte Unterabschnitt enthält feste AQP4-M1-transfizierten Zellen, während die untransfected Unterabschnitt untransfected Zellen enthält. (C) Vorderansicht des Reagenz Tablett und Biochip Folie. Reaktion auf das Reagenz Tablett und Biochip Dia Felder sind miteinander gekoppelt. Die Probe hinzugefügt zum Feld Reaktion auf Reagenz Tablett sollte auf das entsprechende Feld der Reaktion auf die Biochip-Folie verbunden sein. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 : Repräsentative Zahlen zur Negativkontrolle. (A) transfizierten Bereich der negativen Kontrolle im Überblick wurde durch 4 x Vergrößerung Mikroskopie erhalten. Homogen schwache Fluoreszenz wurde in der gesamten Region beobachtet. (B, C) Weitere Details wurden beobachtet, in 10 x (B) und x (C) Vergrößerung Fotos. In der Regel die Zellmembran und Plasma wurden leicht befleckt, und der Zellkern war ungefärbten. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 : Repräsentative Zahlen zur Positivkontrolle. (A, B) Transfizierten (A) und untransfected (B) Bereiche der Positivkontrolle werden angezeigt. In untransfected Bereichen zeigt unspezifische Bindung von IgG Anti-AQP4 zu festen Zellen homogen schwache Fluoreszenz beobachtet. Im Gegensatz dazu verzeichneten heterogene starke Fluoreszenz transfizierten Bereiche zeigt spezifische Bindung der Anti-AQP4-IgG, AQP4-M1 auf festen Zellen ausgedrückt. (C-F) Weitere Details der transfizierten (C, E) und untransfected (D, F) Bereiche werden beobachtet, mit 10 x (C, D) oder 20 x Vergrößerung (E, F). Schwach und sogar Fluoreszenz erschien in untransfected Bereichen. Ein großer Prozentsatz der Zellen in den transfizierten Bereichen ergab jedoch intensiver Fluoreszenz. Im Plasma stark gefärbten Zellen zeigten Anti-AQP4 IgG glatt und granulare Fluoreszenz. Der Zellkern war ungefärbt oder leicht gefärbt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 5 : Repräsentative Zahlen für Anti-AQP4-Antikörper-negativen oder positiven Proben. Proben wurden 10-fach verdünnt und alle gezeigten Figuren wurden mit einem 10 X-Objektiv. (A, B) Negative Fluoreszenz-Probe: die Fluoreszenz war homogen schwach in (A) transfiziert und (B) untransfected Bereiche. (C, D) Schwache Fluoreszenz Probe: im Vergleich zu untransfected Bereiche (D), eine kleine Menge von Zellen (etwa 25 % bis 50 %) in transfizierten Bereichen (C) zeigte intensiver Fluoreszenz. (E, F) Moderate Fluoreszenz Probe: starke granulare Fluoreszenz verzeichneten in transfizierten Bereichen (E), eine mittlere Menge von Zellen (ca. 50 % bis 75 %). (G, H) Starke Fluoreszenz Probe: Zellen in untransfected Bereichen (H) waren schwach gefärbt. Jedoch erschien granulare Fluoreszenz mit hoher Intensität in transfizierten Bereiche (G), eine große Anzahl von Zellen (etwa über 75 %). In der Regel mit zunehmender Titer von Anti-AQP4 IgG erhöht Fluoreszenzintensität und Anteil an stark gefärbten Zellen entsprechend. Die Fluoreszenz des untransfected Bereichen war immer homogen schwach. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 6 : Repräsentative Zahlen für Anti-AQP4 Antikörper "wahrscheinlich positiv" Proben. (A, B) Keine signifikanten Unterschiede in den Mustern der Fluoreszenz beobachtet zwischen transfizierten (A) und untransfected (B) bei 4 X Vergrößerung. (C-E) Mit 10 x (C, D) oder 20 x (E, F) Vergrößerung, ein paar Zellen in transfizierten Bereichen (C, E) zeigte starke granulare Fluoreszenz. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 7 : Beispiel für atypische Anti-AQP4 IgG-negatives Beispiel. Transfizierten (A) und untransfected (B) Bereiche wurden homogen gefärbt. Allerdings war die Fluoreszenz in transfizierten Gebieten stärker als in untransfected Bereichen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
| Vergrößerung | Transfizierten Bereich | Untransfected Bereich |
| 4 x | 1 Bild | 1 Bild |
| 10 x | 4 Bilder | 1 Bild |
| 20 x | 5 Bilder | 1 Bild |
Tabelle 1: Fluoreszenzmikroskopie. Es wird empfohlen, 4 X, 10 X und 20 X Ziele für die Darstellung von transfizierten und untransfected Bereichen zu verwenden.
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Discussion
Wir haben ein breit zugänglich Verfahren zur Erkennung von Anti-AQP4-IgG in humanem Serum beschrieben. Anti-AQP4 IgG ist eng verwandt mit NMOSD und Schaffung einer zuverlässigen Anti-AQP4 IgG Erkennungsmethode ist entscheidend für die klinische Diagnose der NMOSD. Anti-AQP4 IgG ist spezifisch für NMOSD. Multiple Sklerose ist auch eine immun-vermittelte Erkrankung des zentralen Nervensystems und teilt viele Ähnlichkeiten mit NMOSD12. Anti-AQP4 IgG ist jedoch nur positive NMOSD13. Zweitens ist Anti-AQP4 IgG häufig bei NMOSD Patienten. Etwa zwei Drittel der NMOSD Patienten sind Serum Anti-AQP4 IgG-positiven4. Drittens IgG für NMOSD beruht auf Serum Anti-AQP4 der jüngsten Diagnosekriterien Test5. Zusammengenommen könnte Serum Anti-AQP4-IgG-Nachweis die klinische Diagnose der NMOSD erleichtern.
Unter den verschiedenen Nachweismethoden der Anti-AQP4 IgG ist CBA für die klinische Diagnose aufgrund seiner hohen Sensitivität und Spezifität6,7verbreitet. Obwohl CBA eine schnelle und unkomplizierte Methode ist, sollten einige wichtige Punkte angesprochen werden. Erstens sollte Experimentatoren AQP4-M1-transfizierten und untransfected Zellen auf der Biochips fixiert sind vorsichtig bei der Arbeit mit Biochips, sein. Während des gesamten Verfahrens sollte Biochips nicht mit der hand berührt oder ausgetrocknet werden. Zusätzlich Folien mit Biochips sollte vorsichtig behandelt werden, ansonsten die festen Zellen auf der Biochips können herunterfallen oder kontaminiert werden, wodurch Fluoreszenz defekt Zonen oder einen hohen fluoreszierende Hintergrund entstehen. Zweitens müssen beim Hinzufügen von Proben auf die Reaktion Felder auf dem Tablett Reagenz Forscher dafür sorgen, dass die Tropfen von Proben nicht miteinander vermischt werden. Luftblasen zwischen den Proben und Biochips sollte vermieden werden.
Diese Methode hat Einschränkungen; zum Beispiel wenn CBA mit um Anti-AQP4 IgG zu erkennen, ist es schwer zu quantifizieren Fluoreszenzintensität und beschreiben Sie die Anti-AQP4-IgG-Titer im Serum. Derzeit wird in unserem Diagnose-Center, die Intensität der Fluoreszenz subjektiv von zwei Ärzten berichtet nach einem Vergleich Fotos von Proben Vs. -Steuerelemente. In den meisten Fällen ist es nicht schwer, festzustellen, ob das Serum Anti-AQP4 IgG-positiv oder negativ ist. Jedoch in seltenen Fällen die Fluoreszenz von Proben mag nur etwas stärker als die negativ-Kontrolle, und die Probe gilt als "wahrscheinlich positiv". In diesem Fall sollten Ärzte vorsichtiger für eine Diagnose sein. Eine andere mögliche Lösung wiederholt der CBA. Eine genauere Methode zur Quantifizierung der Intensität der Fluoreszenz und eine internationale Definition des "Anti-AQP4 IgG-positiven" gerechtfertigt. Insbesondere die positiven Anti-AQP4-IgG im Liquor cerebrospinalis ist viel niedriger als im Serum, und Tests für Anti-AQP4-IgG im Liquor cerebrospinalis ist nicht informativ14,15.
CBA kann auf klinische Diagnose und wissenschaftliche Studien von NMOSD angewendet werden. Klinische Diagnose der NMOSD erfolgt basierend auf der Kombination von klinischen Manifestationen, Serum Anti-AQP4-IgG und neuroradiologische Befunde. Serum Anti-AQP4 IgG-positiven Patienten mit mindestens einem Kern klinische Merkmal von NMOSD werden mit NMOSD5diagnostiziert; jedoch wenn der Patient Anti-AQP4 IgG-negativ, eine Diagnose der NMOSD sollte nicht ausgeschlossenen5und Kliniker sollten weiter bewerten, die klinischen Manifestationen und neuroradiologische Befunde5,16,17 . Serum Myelin Oligodendrozyt Glykoprotein Antikörper kann erkannt werden, um die Diagnose18,19,20zu unterstützen. Bemerkenswert ist, obwohl das Serum Anti-AQP4-IgG-Titer mit Rituximab Behandlung21geändert werden kann, ist es nicht prädiktiv für Krankheitsverlauf und Reaktion auf Immuntherapie22,23. CBA ist auch für die wissenschaftliche Forschung verbreitet. Yang Et Al.24 beschrieben beispielsweise die klinischen Merkmale der Anti-AQP4 NMOSD IgG-positiven Patienten. Darüber hinaus analysiert Kitley Et Al.25 die prognostischen Faktoren für Anti-AQP4 NMOSD IgG-positiven Patienten25. Beide Studien verwendet CBA Serum erkennen Anti-AQP4-IgG.
Zusammenfassend lässt sich sagen CBA ist eine weit verbreitete Methode, Anti-AQP4 IgG zu erkennen und auf klinische Diagnose und wissenschaftliche Forschung der NMOSD angewendet werden kann.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Die Autoren sind dankbar für die Unterstützung von Zuschüssen vom National Science Foundation of China (Nr. 31600820), die Gesundheit und Familienplanung Kommission der Provinz Jilin (Nein 2016Q036), und der Wissenschaft und Technik Planung Projekt der Provinz Jilin (Nr. 20180520110JH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
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