Summary
Cell-baserad analys är en allmänt använd metod för att upptäcka serum anti-akvaporin-4 immunglobulin G. Denna metod skulle kunna tillämpas på klinisk diagnos och vetenskapliga undersökningar av neuromyelitis optiska spektrum störningar.
Abstract
Anti-akvaporin-4 (AQP4) immunglobulin G (IgG) är den kärna diagnostisk biomarkören för neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). Cell-baserad analysen (CBA) är en allmänt använd metod för att upptäcka anti-AQP4 IgG i humant serum med hög känslighet och specificitet. Kort, serum IgG anti-AQP4 fångas av AQP4-transfekterade cell som är fast på biochip sedan upptäcks av en fluorescein-märkt sekundär antikropp. Fluorescensmikroskopi används för att visualisera fluorescensen och intensiteten av fluorescens bedöms av minst två erfarna kliniker. En slutlig diagnos av NMOSD kan göras utifrån kombinationen av anti-AQP4 IgG upptäckt resultat, kliniska manifestationer och neuroradiological fynd. Enligt tidigare studier, CBA är mer känslig och specifik än andra anti-AQP4 metoder för detektion av IgG, och det kan tillämpas på både klinisk diagnos och studier av NMOSD. Metoden har begränsningar; exempelvis saknas fortfarande internationellt att utvärdera serum anti-AQP4 IgG-titrar. Här beskrivs ett detaljerat protokoll för humant serum anti-AQP4 IgG detektering med CBA.
Introduction
Serum AQP4 IgG är en core diagnostisk biomarkör för neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD)1. Cell-baserad analysen (CBA) är en allmänt använd anti-AQP4 IgG detektionsmetod med hög känslighet och specificitet. Här, introduceras ett detaljerat protokoll för CBA.
AQP4, ett vatten kanal protein, har sex membran-spänner enheter och två spiralformade domäner kring en vattenlösning pore2. Anti-AQP4 IgG är involverade i patogenesen av NMOSD genom bindning till sitt mål AQP4, som ligger främst på endfeet av astrocyter3. Det har visat att anti-AQP4 IgG är positivt i ungefär två tredjedelar av NMOSD patienter4. I de senaste internationella diagnostiska kriterierna för NMOSD anses anti-AQP4 IgG vara en core diagnostisk biomarkör5. I detta sammanhang är det viktigt att upprätta ett pålitligt protokoll för att upptäcka humant serum IgG anti-AQP4 och underlätta klinisk diagnos av NMOSD.
Olika metoder för detektion av anti-AQP4 IgG för närvarande tillgängliga, såsom CBA, tissue-baserade assay, enzymkopplad immunadsorberande analys och flöde flödescytometri6,7. CBA sysselsätter EU90 celler, som är transfekterade med mänskliga AQP4, att fånga anti-AQP4 IgG. Fångade anti-AQP4 IgG upptäcks av fluorescerande sekundära antikroppar och därefter visualiseras av mikroskopi. Ackumulerande bevis har visat att CBA är mer känsliga och specifika än andra anti-AQP4 IgG upptäckt metoder6,7. Enligt en meta-analys, sensitivitet och specificitet av CBA visade sig vara 76% och 99%, vilket var högre än tissue-baserade och glykoproteinenzymkopplad immunadsorberande analyser6. Dessutom var en multicenter jämförelse av diagnostiska analyser av anti-AQP4 IgG bedrivs7. Totalt 193 studien ämnen från 15 europeiska diagnostiska centra var inskrivna7. Fyra olika metoder utnyttjades för att upptäcka serum anti-AQP4 IgG7. Det visades att CBA var mer känsliga och specifika än andra metoder7. Som AQP4 uttrycks som två viktigaste isoformerna (AQP4-M1 och AQP4-M23), är anti-AQP4 IgG fånga cell transfekterade med antingen AQP4-M1 eller AQP4-M23. Vilken typ av fånga cell är dock bättre förblir kontroversiell. En utredning har stött AQP4-M1 baserat CBA8, medan andra har visat att AQP4-M23 baserat CBA är bättre7,9,10. AQP4-M23-baserade CBA kan dock ge falskt positiva resultat på grund av ospecifika IgG bindande8. Jarius et al. 11 rapporterade att det fanns ingen signifikant skillnad i anti-AQP4 IgG upptäcktstakt mellan AQP4-M1 och AQP4-M23-baserade SFA.
I Sammanfattning, serum anti-AQP4 IgG är en core biomarkör för NMOSD. CBA har högre specificitet och känslighet än andra anti-AQP4 metoder för detektion av IgG. Det fortfarande kontroversiellt huruvida AQP4-M1 - eller AQP4-M23-baserade CBA är bättre. I den här artikeln beskrivs ett detaljerat protokoll för AQP4-M1-baserade CBA, som kan gälla klinisk diagnos och studier av NMOSD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Detta förfarande godkändes av den etiska kommittén vid första sjukhus i Jilin universitetet och utfördes på cirka 1 500 patienter.
1. patientens registrering och blod provsamling
- Applicera Laboratoriediagnostik av serum anti-AQP4 IgG till klinik patienter med de främsta klagomål och symtom som anges nedan. Utföra fysiska undersökningar samt.
Optikusneurit: patienter lider med visuella underskott, såsom förlusten av synfält och minskning av synskärpan.
Akut myelit: patienter kan uppvisa förlamning, sensoriska störningar och autonom dysfunktion.
Område postrema syndrom: patienter kan ha symtom av oförklarlig hicka, illamående eller kräkningar.
Akut hjärnstammen syndrom: hjärnstammen lesioner kan resultera i olika symtom och fysiska tecken beroende på placeringen av lesioner.
Symtomatisk narkolepsi eller akut diencephalic kliniska syndrom med NMOSD-typiska diencephalic MRI-lesioner.
Symtomatisk cerebralt syndrom med NMOSD-typiska hjärnskador.
Obs: Enligt internationell konsensus diagnostiska kriterier för NMOSD5en diagnos av NMOSD kan göras om patienten är serum anti-AQP4 IgG-positiva och har minst en av de kliniska egenskaperna som nämns ovan. Vi rekommenderar dock inte provning av anti-AQP4 IgG hos patienter med optikusneurit endast. -
Blod provsamling
Obs: patienter behöver inte vara fastande.- Dra 2-3 mL venöst blod på en 4 mL vakuum bloduppsamlingsrör.
- Låt serumet att koagulera i 30 min i rumstemperatur (RT).
Obs: Långvarig koagulering kan öka nivåerna i serum på grund av läckage från trombocyter. - Centrifugera vid 2100 x g för 5 min. överföra noggrant serumet till en ny tub.
- Analysera serum omedelbart eller alikvot och förvaras vid -20 eller -80 ° C.
Obs: Lagring vid-20 ° C är för lagring av månader, medan-80 ° C är för lagring av år.
2. anti-AQP4 påvisande av antikroppar
Varning: Patientprover och begagnade satsreagenser övervägas smittsamt. Natrium som innehåller natriumazid reagenser i kit är giftiga. Ett flödesschema i protokollet ges i figur 1.
-
Beredning
- Ta satsen till RT före användning.
Obs: Förvara satsen vid 2-8 ° C. - Förbereda minst 200 mL PBS tvättbuffert som innehåller 0,2% Tween-20. Häll 100 mL av tvättbuffert i en 500 mL-glasbägare.
- Utspädd serum prover 10 x med tvättlösning. Förbereda de positiva och negativa kontrollerna enligt anvisningarna från distributören.
- Ta satsen till RT före användning.
-
Prov inkubation
- Tillsätt 30 µL före utspädda proverna, positiv kontroll, eller negativ kontroll i fälten reaktion magasinets reagens (figur 2).
Obs: Undvika luftbubblor. - Ta bort skyddslocket på biochip bilderna.
Obs: Vid inte biochips för att undvika att den lossnar och kontaminering av fasta celler. Håll den bilden sida-vid-sidan innan du tar bort locket. - Gäller den biochip bilden reagens facket (figur 2). Starta en 30 min inkubation vid RT.
Obs: Varje prov bör en individuell droplet ansluten till den motsvarande biochip utan att blandas med andra droppar. - Skölj försiktigt biochip bilden en gång med tvättbuffert. Fördjupa den biochip bilden till en 500 mL-bägare fylld med 100 mL av tvättlösning i minst 5 min. plats bägaren på en shaker om möjligt.
- Ta ut biochip bilden från tvättbuffert. Torka försiktigt bort de resterande tvättbufferten utanför fälten reaktion med en pappershandduk. Utsätta den biochip bilden i öppen luft för 1-2 min att avdunsta de resterande tvättbufferten på fältet reaktion.
Obs: Torka inte ut fälten reaktion. Vid inte biochips med pappershandduk.
- Tillsätt 30 µL före utspädda proverna, positiv kontroll, eller negativ kontroll i fälten reaktion magasinets reagens (figur 2).
-
Sekundära antikroppar inkubation
- Bered den sekundära antikroppar enligt anvisningarna från distributören.
- Tillsätt 25 µL av fluorescerande sekundär antikropp till fälten reaktion en ren reagens bricka.
- Applicera i biochip bilden till reagens bricka laddad med sekundär antikropp. Inkubera i 30 min på RT.
-
Montering
- Häll ut begagnade tvättbufferten och tillsätt 100 mL av färska tvättlösning i bägaren. Upprepa tvättningen enligt beskrivningen i steg 2.2.4 och 2.2.5.
- Tillsätt försiktigt inbäddning medium till fälten reaktion på en biochip bild (en droppe per reaktion fält). Försegla biochip bilden med en bit av täckglaset. Undvika luftbubblor.
-
Fluorescens upptäckt
- Slå på lysröret mikroskopet och förvärmning för 15 min. Välj ett 488 nm filter.
- Öppna fotot programvara. Ta bilder från både transfekterade och untransfected områden i alla reaktion fält med olika förstoringar. Först, ta en bild med 4 x förstoring för en översikt, ta fler bilder med 10 x och 20 x förstoring.
Obs: Det detaljerade protokollet visas i tabell 1. Tolkning av resultaten diskuteras i avsnittet representativa resultat.
3. diagnos av patienter
- Om patienten är serum anti-AQP4 IgG-positiva och visar minst en core kliniska kännetecken av NMOSD (se diskussionsavsnittet), diagnostisera patienten med NMSOD5. Om patienten är anti-AQP4 kan dock ett IgG-negativ, en diagnos av NMOSD inte uteslutas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Genom att använda proceduren som beskrivs här, är specifika anti-AQP4 IgG i serum detekterbar. Under förfarandet, har pre utspädda prover, en positiv kontroll och en negativ kontroll lagts till fälten reaktion, som innehåller transfekterade och untransfected områden (figur 2). Fluorescens av den negativa kontrollen i en transfekterade område anges främst ospecifik bindning av sekundära antikroppar mot de transfekterade cellerna på biochips (figur 3). Homogeneously svag fluorescens var synlig (figur 3). När det gäller den positiva kontrollen lades anti-AQP4 antikropp till fältet reaktion. Stark fluorescens observerades i området transfekterade, som visade den specifika bindningen av anti-AQP4 IgG till AQP4-M1 i de transfekterade cellerna (figur 4). Fluorescens av den positiva kontrollen i ett untransfected område visade inslag av ospecifik bindning av anti-AQP4 IgG till fasta celler på biochips (figur 4). För 10 x utspädda prover, anti-AQP4 IgG-negativt serum visade ett fluorescerande mönster liknande till den negativa kontrollen, medan positiva serumet visade ett mönster liknar den positiva kontrollen (figur 5). Intensiteten av fluorescens var associerade med den anti-AQP4 IgG titern. Exempel på olika intensitet av fluorescens presenteras i figur 5. Figur 5 A och 5B var från anti-AQP4 IgG-negativa prover, medan figur 5C-H från anti-AQP4 IgG-positiva prover. Så länge heterogena och granulat fluorescens verkade i transfekterade områden, provet ansågs anti-AQP4 IgG-positiva, oavsett styrkan på fluorescensen. De diagnostiska kriterierna för NMOSD, som bygger på den serum anti-AQP4 IgG, vidare beskrivs i diskussionsavsnittet.
Endast ett litet antal celler var starkt färgade i transfekterade områden i några prover, och det var svårt att avgöra om serumet var anti-AQP4 IgG-positiva eller negativa (figur 6). I det här fallet kan ”sannolika positiva” rapporteras. I sällsynta fall var fluorescensen av ett prov i transfekterade områden homogent starkare än i untransfected områden (figur 7). I detta fall bör provet anses vara anti-AQP4 IgG-negativa. Hög intensiteten i bakgrunden fluorescens kan vara ospecifik. Skapa en tillförlitlig rapport, bör alla fotografier utvärderas blint av minst två kliniker. Klinikerna bör tränas innan utvärdering. I detta protokoll, de visades representativa fotografier av olika provtyper och var informerade om hur man utvärderar resultaten. Sedan utvärderas de fotografier tillsammans med en erfaren läkare. Slutligen de utbildade läkare arbetat självständigt. I en ideal situation, bör man alltid de samma kliniker som utvärderar resultaten.
Figur 1 : Flödesschema av anti-AQP4 IgG detection protocol. AQP4-M1-transfekterade eller untransfected EU 90 celler är fasta på biochips. När du lägger till serum biochips, fångas anti-AQP4 IgG i serum av fasta transfekterade cellerna. Sedan används fluorescein-märkt sekundär antikropp för att påvisa IgG anti-AQP4. Fluorescensen kan visualiseras genom mikroskopi med olika förstoringar. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Prova inkubation. (A) ovanifrån av reagens fack. Varje reagens fack innehåller fem individuella reaktion fält. Den positiva kontrollen, prover och negativ kontroll bör läggas till fälten separat reaktion. (B) ovanifrån av biochip bild. Varje biochip bild innehåller fem reaktion fält, som har två underavsnitt. Underavsnittet transfekterade innehåller fasta AQP4-M1-transfekterade celler, medan underavsnittet untransfected innehåller untransfected celler. (C) Front Visa av reagens fack och biochip slide. Reaktion fält i reagens fack och biochip bilden är ihopkopplade med varandra. Provet läggs till i reaktion fältet på reagens bricka ska anslutas till motsvarande reaktion fält i biochip bilden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Representativa siffror för negativ kontroll. (A) en översikt över den negativa kontrollen transfekterade området erhölls med 4 x förstoring mikroskopi. Homogeneously svag fluorescens observerades i hela området. (B, C) Mer detaljer observerades hos 10 x (B) och x (C) förstoring fotografier. Generellt, de Cellmembran och plasma var något målat och cellkärnan var ofärgade. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4 : Representativa siffror för positiv kontroll. (A, B) Transfekterade (A) och untransfected (B) områden positiva kontrollen visas. Homogeneously svag fluorescens observerades i untransfected områden, som visar ospecifik bindning av anti-AQP4 IgG till fasta celler. Omvänt, heterogena stark fluorescens observerades i transfekterade områden, som anger specifik bindning av anti-AQP4 IgG till AQP4-M1 uttryckt på fasta celler. (C-F) Mer detaljer transfekterade (C, E) och untransfected (D, F) områden observeras in med 10 x (C, D) eller 20 x (E, F) förstoring. Svag och även fluorescens dök upp i untransfected områden. En stor andel av celler i transfekterade områden visade dock intensiv fluorescens. I plasma av starkt färgade celler visade anti-AQP4 IgG smidig och granulat fluorescens. Cellkärnan var ofärgade eller något fläckade. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5 : Representativa siffror för anti-AQP4 antikroppar negativa eller positiva prover. Prover var 10 x utspädd, och alla siffror visas togs med en 10 x mål. (A, B) Negativa fluorescens prov: fluorescensen var homogent svag i både (A) transfekterade och (B) untransfected områden. (C, D) Svag fluorescens prov: jämfört med untransfected områden (D), en liten mängd celler (cirka 25% till 50%) transfekterade områden (C) visade intensivare fluorescens. (E, F) Måttlig fluorescens prov: i transfekterade områden (E), starkt granulat fluorescens observerades hos en medelstor mängd celler (cirka 50% till 75%). (G, H) Stark fluorescens prov: celler i untransfected områden (H) var svagt färgade. Dock medverkat transfekterade områden (G), granulat fluorescens med hög intensitet i ett stort antal celler (ungefärligt över 75%). Allmänhet, eftersom titern av anti-AQP4 IgG ökade, både fluorescensintensiteten och andelen starkt färgade celler förhöjda motsvarande. Fluorescensen i untransfected områden var alltid homogeneously svag. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6 : Representativa siffror för anti-AQP4 antikroppar ”sannolika positiva” prover. (A, B) Inga signifikanta skillnader i fluorescens mönster observerades mellan transfekterade (A) och untransfected (B) områden på 4 x förstoring. (C-E) Med 10 x (C, D) eller 20 x (E, F) förstoring, några celler i transfekterade områden (C, E) visade stark granulat fluorescens. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7 : Exempel på typiskt anti-AQP4 IgG-negativa provet. Både transfekterade (A) och untransfected (B) områden var homogent målat. Fluorescensen i transfekterade områden var dock starkare än i untransfected områden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Förstoringen | Transfekterade område | Untransfected område |
| 4 x | 1 bild | 1 bild |
| 10 x | 4 bilder | 1 bild |
| 20 x | 5 bilder | 1 bild |
Tabell 1: fluorescensmikroskopi. Det rekommenderas att använda 4 x, 10 x och 20 x mål för avbildning av transfekterade och untransfected områden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi har beskrivit en lättillgänglig metod för att upptäcka anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG är nära besläktad med NMOSD, och att upprätta en pålitlig anti-AQP4 metod för detektion av IgG är avgörande för klinisk diagnos av NMOSD. Första är anti-AQP4 IgG specifika för NMOSD. Multipel skleros är också en immunmedierad sjukdom i centrala nervsystemet och delar många likheter med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG är dock bara positivt i NMOSD13. Andra är anti-AQP4 IgG vanligt bland NMOSD patienter. Ungefär två tredjedelar av NMOSD patienter är serum anti-AQP4 IgG-positiva4. För det tredje, de senaste diagnos-kriterierna för NMOSD bygger på serum anti-AQP4 IgG test5. Sammantaget kan serum anti-AQP4 IgG upptäckt underlätta den kliniska diagnosen av NMOSD.
Bland olika anti-AQP4 IgG identifieringsmetoder, är CBA allmänt används för klinisk diagnos på grund av dess höga känslighet och specificitet6,7. Även om CBA är en snabb och enkel metod, bör tas upp några viktiga punkter. Först, praktiker bör vara försiktig när du arbetar med biochips, som AQP4-M1-transfekterade och untransfected celler är fasta på biochips. Under hela förfarandet, bör biochips inte berört för hand eller torkade ut. Dessutom bilder med biochips bör hanteras försiktigt, annars fasta cellerna på biochips kan falla eller blir smittade, vilket kan resultera i fluorescens defekta zoner eller en hög fluorescerande bakgrund. För det andra, när du lägger prover till fälten reaktion på reagens facket, forskare måste se till att droppar av prover inte blandas med varandra. Luftbubblor mellan prover och biochips bör undvikas.
Denna metod har begränsningar; till exempel när du använder CBA för att upptäcka anti-AQP4 IgG, är det svårt att kvantifiera fluorescensintensiteten och beskriva den anti-AQP4 IgG-titern i serum. För närvarande i våra diagnostiska centrum rapporteras intensiteten av fluorescens subjektivt av två kliniker efter jämföra fotografier av prover vs. kontroller. I de flesta fall är det inte svårt att avgöra om serumet är anti-AQP4 IgG-positiva eller negativa. Dock i sällsynta fall fluorescensen från prover kan verka endast något starkare än den negativa kontrollen, och provet anses vara ”sannolika positiva”. I det här fallet borde kliniker vara mer försiktig i att göra en diagnos. En annan möjlig lösning är att upprepa CBA. En mer korrekt metod för att kvantifiera intensiteten av fluorescens och en internationell definition av ”anti-AQP4 IgG-positiva” är motiverade. Särskilt positivt anti-AQP4 IgG i cerebrospinalvätska är mycket lägre än i serum och testning för anti-AQP4 IgG i cerebrospinalvätska är inte informativ14,15.
CBA kan tillämpas på både klinisk diagnos och vetenskapliga studier av NMOSD. Klinisk diagnos av NMOSD är gjord utifrån kombinationen av kliniska manifestationer, serum IgG anti-AQP4 och neuroradiological rön. Serum anti-AQP4 IgG-positiva patienter med minst en core kliniska kännetecken av NMOSD kan diagnostiseras med NMOSD5. men om patienten är anti-AQP4 IgG-negativ, en diagnos av NMOSD bör inte vara uteslutna5och kliniker bör ytterligare utvärdera den kliniska manifestationer och neuroradiological fynd5,16,17 . Serum myelin oligodendrocyte glykoprotein antikroppar kan påvisas för att hjälpa diagnos18,19,20. Noterbart även serum anti-AQP4 IgG titern kan ändras med rituximab behandling21, är det inte prediktivt för sjukdomsförloppet och svar på immunterapi22,23. CBA är också allmänt används för vetenskaplig forskning. Till exempel beskrev Yang et al.24 de kliniska särdragen i anti-AQP4 IgG-positiva NMOSD patienter. Dessutom analyseras Kitley et al.25 de prognostiska faktorerna för anti-AQP4 IgG-positiva NMOSD patienter25. Båda studierna används CBA för att upptäcka serum IgG anti-AQP4.
Sammanfattningsvis, CBA är en allmänt använd metod för att upptäcka anti-AQP4 IgG och kan tillämpas på klinisk diagnos och vetenskaplig forskning av NMOSD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Författarna är tacksam för stödet från bidrag från National Science Foundation Kina (nr. 31600820), The hälsa och familjeplanering kommissionen i Jilin-provinsen (nr 2016Q036), och The Science och teknik planering projektet i Jilin-provinsen (nr. 20180520110JH).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
| CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
| Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |
References
- Zekeridou, A., Lennon, V. A.
- Ho, J. D., et al. Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).
- Takeshita, Y., et al. Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro. in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311 (2016).
- Sato, D. K., et al. Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders. Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).
- Wingerchuk, D. M., et al. International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders. Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).
- Ruiz-Gaviria, R., et al. Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).
- Waters, P., et al. Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).
- Fryer, J. P., et al. AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11 (2014).
- Long, Y., et al. Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China. The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).
- Pisani, F., et al. Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity. PloS One. 8 (11), 79185 (2013).
- Jarius, S., et al. Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate. Journal of Neuroinflammation. 11, 129 (2014).
- Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).
- Chen, H., et al. Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders. Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).
- Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231 (2016).
- Jarius, S., et al. Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance. Journal of Neuroinflammation. 7, 52 (2010).
- Asgari, N., et al. Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343 (2017).
- Kim, H. J., et al. MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update. Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).
- Jarius, S., et al. MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134 (2018).
- Narayan, R., et al. MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).
- Ogawa, R., et al. MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322 (2017).
- Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study. Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317 (2016).
- Kessler, R. A., et al. Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).
- Mealy, M. A., et al. Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders. Multiple Sclerosis. , (2017).
- Yang, Y., et al. The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica. Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).
- Kitley, J., et al. Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan. Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).
