אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

Dominic Thomas; Ting  Yu Wu; Merylin Cottagiri; Maeva Nyandjo; Dolores B. Njoku

doi:10.3791/59174

הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אינדוקציה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות בעכברי BALB/c לחקר המנגנונים הפתוגניים שלה

2.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/59174

⸱

29 במאי 2020

Dominic Thomas¹ , Ting Yu Wu¹ , Merylin Cottagiri¹ , Maeva Nyandjo¹ , Dolores B. Njoku¹^,²

¹Department of Anesthesiology and Critical Care Medicine, Johns Hopkins University, ²Department of Pediatrics and Pathology, Johns Hopkins University

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים מודל הפטיטיס חיסון in vivo בעכברי BALB/c שניתן להשתמש בו כדי לחקור את הפתוגנזה של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות, כולל הבדלי מין שנראו במחלה זו. נתאר כיצד מודל זה מדגים ניתוחים הניתנים לשחזור באמצעות טכניקות ניסיוניות in vivo ו- in vitro.

תקציר

הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות (DIH) היא תהליך הרגישות היתר הנפוץ ביותר המושרה על ידי תרופות נגד הכבד שנצפה בכ-9 עד 12% מהחולים עם הפטיטיס אוטואימונית. הרוב המכריע של החולים עם DIH הן נשים. המנגנונים הבסיסיים של הבדלי מין אלה בשכיחות אינם ברורים בגלל מיעוט המודלים של בעלי חיים המחקים מחלות אנושיות. עם זאת, מנגנונים בסיסיים נחשבים בעיני רבים כקשורים להפלוטיפים של אנטיגן לויקוציטים אנושי ולהורמוני מין. לעומת זאת, באמצעות מודל של עכבר DIH, גילינו כי IL-4 יזם תאי CD4+ T המכוונים נגד אפיטופ של ציטוכרום P450 2E1 גורם לזרימה של נויטרופילים, מקרופאגים ותאי פיטום לתוך הכבדים של נקבות עכברי BALB/c. באמצעות מודל זה, הראינו גם שתאי T רגולטוריים של FoxP3+המושרים על ידי IL-33 מעניקים הגנה מפני DIH בעכברים נקביים וזכריים. מודל DIH זה מושרה על ידי חיסון עכברים עם אפיטופ של CYP2E1 אשר השתנה באופן קוולנטי עם מטבוליט של תרופה שנקשרה ל- DIH. אפיטופ זה מוכר על ידי חולים עם DIH. השיטה שלנו גורמת להפטיטיס חזקה וניתנה לשחזור ולנוגדנים עצמיים שניתן להשתמש בהם כדי לחקור את הפתוגנזה של DIH. בעוד שמחקרי in vivo יכולים לגרום לכאב ומצוקה מיותרים בעכברים כאשר הם נעשים בצורה לא נכונה, היתרון של מודל in vivo הוא היכולת להעריך את הפתוגנזה של המחלה במספר רב של עכברים. בנוסף, ניתן לחקור את ההשפעות הביולוגיות של חלבוני הכבד שהשתנו באמצעות הליכים פולשניים. הוספת מחקרי מבחנה לתכנון הניסויי מאפשרת חזרה מהירה וניתוח מכניסטי ברמה התאית. לפיכך, נדגים את פרוטוקול המודל שלנו וכיצד ניתן להשתמש בו כדי לחקור מנגנוני in vivo ו- in vitro של DIH.

מבוא

מטרת שיטה זו היא לתאר מודל עכברי של הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות המתפתחת in vivo ולהדגים כיצד ניתן להשתמש בה כדי לחקור את הבסיס המולקולרי, האימונולוגי והגנטי של מחלה זו. המטרה ארוכת הטווח של המחקרים שלנו היא לחשוף מנגנונים האחראים להתפתחות דלקת כרונית בכבד ופציעה על ידי מחקר DIH בחולים רגישים. מחלת כבד ושחמת הכבד מהוות את סיבת המוות השישית בשכיחותה בקרב מבוגרים בין הגילאים 25 ל -64. DILI אידיוסינקרטי, המכונה לעתים הפטיטיס אוטואימונית הנגרמת על ידי תרופות (DIH) הוא הגורם השלישי בשכיחותו לאי ספיקת כבד חריפה בארצות הברית. DIH הוא תהליך הרגישות היתר הנפוץ ביותר המושרה על ידי תרופות בכבד שנצפה בכ-9 עד 12% מהחולים עם הפטיטיס אוטואימונית¹.....