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Cancer Research

Avaliação do Risco e Prevalência de Câncer Colorretal por Detecção de Integridade do DNA das fezes

Published: June 8, 2020 doi: 10.3791/59426
Automatic Translation
1, 1, 2, 2, 1
1Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS, Meldola, Italy, 2Diatech Pharmacogenetics srl

ERRATUM NOTICE

Summary

O kit de DNA de DIAGNÓSTICO apresentado é um método de economia de tempo e fácil de usar para determinar a probabilidade confiável da presença de lesões de câncer colorretal.

Abstract

Hoje em dia, o DNA das fezes pode ser isolado e analisado por vários métodos. Os longos fragmentos de DNA nas fezes podem ser detectados por um ensaio qPCR, que fornece uma probabilidade confiável da presença de lesões colorretais pré-neoplásicas ou neoplásicas. Este método, chamado DNA longo fluorescência (FL-DNA), é um procedimento rápido e não invasivo que é uma melhoria no sistema de prevenção primário. Este método baseia-se na avaliação da integridade do DNA fecal por amplificação quantitativa de alvos específicos do DNA genômico. Em particular, a avaliação de fragmentos de DNA com mais de 200 bp permite a detecção de pacientes com lesões colorretais com especificidade muito alta. No entanto, este sistema e todos os testes de DNA de fezes disponíveis atualmente apresentam algumas questões gerais que precisam ser abordadas (por exemplo, a frequência em que os testes devem ser realizados e o número ideal de amostras de fezes coletadas em cada ponto de tempo para cada indivíduo). No entanto, a principal vantagem do FL-DNA é a possibilidade de usá-lo em associação com um teste atualmente utilizado no programa de triagem de CRC, conhecido como o exame de sangue oculto fecal à base imunoquímica (iFOBT). De fato, ambos os testes podem ser realizados na mesma amostra, reduzindo custos e obtendo uma melhor previsão da eventual presença de lesões colorretais.

Introduction

O câncer colorretal (CRC) deriva de um processo de várias etapas em que o epitélio saudável lentamente se desenvolve em adenomas ou pólipos, que progridem em carcinomas malignos ao longo do tempo1,,2. Apesar da alta taxa de incidência do CRC, observou-se tendência de queda no percentual de óbitos na última década3. De fato, as ferramentas de diagnóstico precoce adotadas em programas de triagem levaram à detecção e remoção precoce de adenomas pré-neoplásicos ou pólipos4. No entanto, devido aos diferentes limites técnicos, nenhum desses métodos é o ideal. De fato, para melhorar a sensibilidade e a especificidade, muitos testes de DNA de fezes foram propostos sozinhos ou em combinação com os testes de diagnóstico de rotina atuais5,6.

Tipicamente, a mucosa saudável se lança nos colonos apoptóticos do fluxo fecal, enquanto a mucosa doente esfolia colonos não apoptóticos. Fragmentos de 200 bp ou mais de comprimento caracterizam DNA não apoptótico. Este DNA é chamado de DNA longo (L-DNA) e tornou-se um biomarcador utilizado para o diagnóstico precoce do CRC. O L-DNA pode ser isolado da amostra de fezes e quantificado por qPCR usando um kit de DNA FL-DNA in vitrodiagnóstico 7,8,9,,10,,11,12.

O teste consiste em dois ensaios para a detecção de fragmentos de DNA FL variando de 138 bp a 339 bp. Cada ensaio permite a amplificação do FL-DNA (FAM) bem como o DNA de spike-in (HEX). Para garantir a amplificação ideal de todos os fragmentos, o teste foi dividido em dois ensaios (chamados "A" e "B"). O ensaio A detecta duas regiões do exon 14 do gene APC (NM_001127511) e um fragmento de exon 7 do gene TP53 (NM_001276760). O ensaio B detecta um fragmento de exon 14 do gene APC (NM_001127511) e duas regiões dos gônons 5 e 8 do gene TP53 (NM_001276760). Os ensaios não distinguem entre as regiões detectadas. O DNA de pico corresponde ao DNA do salmão Oncorhynchus keta e permite verificar que o procedimento foi feito corretamente e verifica a possível presença de inibidores, o que pode produzir resultados falsos negativos. A concentração fl-DNA é avaliada por quantificação absoluta usando o método de curva padrão e é expressa como ng/reação.

O método FL-DNA é um teste de DNA de fezes não invasivo e barato que, combinado com o exame de sangue oculto fecal à base imunoquímica (iFOBT), é atualmente usado em programas de triagem de CRC e permite melhores previsões de LESÕES de Adenomas de CRC e/ou de alto risco12.

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Protocol

Os pacientes foram recrutados no Istituto Scientifico Romagnolo por lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) de Meldola (FC, Itália) entre 2013 e 2015. Os pacientes inscritos estavam no protocolo IRSTB002, aprovado pelo Comitê de Ética do IRST - IRCCS AVR (25/10/2012, ver. 1). Todos os métodos foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos pertinentes. O consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pacientes.

1. Extração de DNA de fezes

  1. Use um kit para preparar amostras de fezes (ver Tabela de Materiais). Selecione e trate o material fecal realizando a extração de acordo com as instruções do fabricante. Amplie o DNA purificado diretamente ou armazene a -20 °C para análise posterior.

2. Preparação de controle positivo, padrões, DNA de pico e amostras clínicas

  1. Elaboração de normas e amostras
    1. Para preparar o controle positivo, padrões, DNA de pico e todas as amostras clínicas, centrífugue uma alíquota de controle positivo, padrões e DNA de pico, em seguida, resuspend cada reagente adicionando a quantidade correta de água fornecida (veja abaixo). Então, cuidadosamente vórtice o controle positivo, padrão, e pico-in DNA, em seguida, centrífuga para 10 s. Para obter uma ressuspensão completa dos reagentes secos, armazene os reagentes líquidos à temperatura ambiente (RT) por 30 minutos antes do uso.
      1. O controle positivo é o DNA humano em um formato seco. Resuspenque cada alíquota com 750 μL de água.
      2. O DNA de espigão é o DNA do salmão(Oncorhynchus keta),que é usado como um controle interno exógeno para verificar a possível presença de inibidores em amostras de DNA extraídas de fezes. Resuspenque cada alíquota com 100 μL de água.
    2. Para preparar a curva padrão, produza quatro diluições de 1:5 a partir da solução de estoque. Os pontos padrão devem ser 10 ng/reação, 2 ng/reação, 0,4 ng/reação e 0,08 ng/reação.
  2. Preparação do DNA de 1x
    1. Prepare o controle de DNA logo antes do uso.
    2. Prepare o controle de DNA de 1x spike-in misturando 5 μL de pico FL-DNa com 20 μL de água estéril. O número de amostras de controle de DNA de 1x será preparado de acordo com o número de amostras a serem analisadas, além do controle positivo.
  3. Preparação de amostras
    1. Misture 75 μL das amostras (amostras clínicas ou controle positivo) com 25 μL de DNA de 1x, produzindo um volume total de 100 μL.

3. Amplificação e determinação do valor FL-DNA utilizando qPCR Easy PGX

NOTA: Misturas completas de amplificação contendo primers e sondas específicas visando o DNA humano e o controle interno são fornecidas em formato liofilizado em 8 tiras de poço para FL-DNA Mix A e FL-DNA Mix B. Padrões, controles positivos e negativos, e as amostras devem ser amplificadas com ambas as misturas liofilizadas. As amostras clínicas só devem ser amplificadas em duplicata com ambas as misturas liofilizadas.

  1. Consulte a Tabela de Materiais para instrumentos e software operacional qPCR.
    1. Abra o software operacional e configure a placa e o perfil térmico:
      1. Configure a placa como mostrado na Tabela 1.
        1. Defina o tipo de poço para todas as oito posições na coluna 1 como Padrão.
        2. Defina o tipo de poço para os poços A2 e B2 como NTC.
        3. Defina o tipo de poço para C2 e D2 (os controles positivos) como Desconhecido.
        4. Defina o tipo de poço para todas as outras posições como Desconhecido.
        5. Selecione todas as 96 posições e adicione os Corantes FAM e HEX. Clique em Sincronizar placa.
      2. Defina o perfil térmico de acordo com a Tabela 2.
    2. Centrifugar o número necessário de tiras para 10 s para trazer o conteúdo para o fundo do tubo.
    3. Remova suavemente as vedações das tiras, prestando atenção para reter o conteúdo e adicione às respectivas tiras: controle negativo: 20 μL de água; amostra: 20 μL de DNA; curva padrão: 20 μL de padrão 1, 2, 3 ou 4; controle positivo: 20 μL de controle positivo.
    4. Feche cuidadosamente todas as tiras usando as tampas ópticas planas de 8 tiras e vórtice por alguns segundos.
    5. Centrifugar as tiras por 10 s e carregá-las no instrumento. Então, comece a corrida.

4. Análise de dados

NOTA: A análise dos dados pode ser realizada automaticamente ou manualmente, dependendo do software (ver Tabela de Materiais).

  1. No final da corrida, selecione as colunas A, C, E, G para "FAM: FL-DNA-A" e"HEX: IC", e colunas B, D, F, H para "FAM: FL-DNA-B" e"HEX: IC".
  2. Definir o seguinte para o Valor de Partida das Quantidades Padrão: 10 ng/reação para poços A1 e B1, 2 ng/reação para C1 e D1, 0,4 ng/reação para E1 e F1, e 0,08 ng/reação para G1 e H1.
  3. Definir valores de fluorescência limiar para 150 tanto para canais FAM (FL-DNA A e FL-DNA B) quanto HEX (IC).
  4. Na tabela de resultadosda caixa, clique em Opções de Coluna | Selecione Todos | Ok para obter os resultados em ambos os canais com seus respectivos valores Cq (⁄R) e R.
    NOTA: Esses valores são fornecidos pelo software de instrumento PCR em tempo real. ΔR corresponde ao valor de fluorescência normalizado ao último ciclo de amplificação.
  5. Na tabela de resultados da caixa, clique com o botão direito do mouse na tabela para abrir o menu de contexto e clique em Enviar para Excel para exportar os dados brutos.
  6. Verifique os valores das normas para verificar a adequação da curva padrão.
  7. Para cada mistura FL-DNA, verifique a coluna R2 ["R² (⁄R)" e eficiência ["Eficiência (%)" coluna] valores. Se estiverem em uma faixa aceitável, é possível prosseguir com a análise de acordo com as instruções do fabricante(Tabela 3).
  8. Se os resultados do canal FAM não estiverem na faixa esperada, omita um ponto da curva padrão e reanalise a corrida.
  9. Determinar os valores dos controles negativos e positivos com a seguinte fórmula, considerando os valores "No Cq" como zero:
    Equation 1
    Equation 2
  10. Compare os valores obtidos com os informados na Tabela 4.
  11. Se os controles de reação estiverem na faixa de valores esperados, proceda com a análise das amostras.
    NOTA: Verifique se os valores do Cq obtidos são gerados a partir de uma reação de amplificação real (curva de fluorescência sigmoidal) e não de um artefato (curva de fluorescência linear).
  12. Para analisar a adequação da amostra para cada mistura FL-DNA, compare os valores de Cq do canal HEX. Se o valor for ≥16, proceda com a análise das amostras. Se o valor for <16 ou não houver Cq, é provável que seja devido a um erro de dispensação do Pico DE DNA FL. Portanto, não é possível analisar as amostras.
  13. Calcule a média dos valores do Cq no canal "HEX" do controle positivo usando a seguinte fórmula:
    Equation 3
  14. Calcule a média dos valores do Cq no canal "HEX" da amostra replica-se usando a seguinte fórmula:
    Equation 4
  15. Calcule os valores de CqHEX de acordo com a seguinte fórmula:
    Equation 5
  16. Compare os valores de CqHEX das amostras com os relatados na Tabela 5.
  17. Para cada mix (Mix A e Mix B), compare os valores de Cq do canal FAM com os relatados na Tabela 6.
  18. Para determinar o valor FL-DNA de cada amostra adequada, utilize a seguinte fórmula, considerando os valores "No Cq" como zero:
    Equation 6
    Equation 2
    NOTA: O risco e prevalência de câncer colorretal é uma função das avaliações do iFOBT e fl-DNA de acordo com os resultados do nomograma fagan obtidos por Rengucci et al.12 (Tabela 7).

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Representative Results

O fluxo de trabalho deste protocolo é mostrado na Figura 1. O fluxo de trabalho fornece duas etapas de controle e ações diferentes de acordo com os resultados desta etapa. Em primeiro lugar, se uma amostra apresenta controles inadequados, a amplificação deve ser repetida. Em segundo lugar, se a amplificação for inibida, a amostra deve ser reprocessada desde o início ou classificada como não valiosa.

A Figura 2 mostra as curvas de fluorescência produzidas por amostras positivas e negativas. (A) Mostrado é um exemplo de uma amostra positiva adequada. O sinal de amostra no canal HEX está dentro do alcance aceitável. O sinal positivo está acima do limiar no canal FAM. (B) Mostrado é um exemplo de uma amostra negativa/não positiva adequada. O sinal de amostra está dentro do intervalo aceitável no canal HEX. O sinal de controle negativo está abaixo do limiar no canal FAM. (C) Mostrado é um exemplo de uma amostra não adequada. O sinal de amostra não está dentro do alcance aceitável no canal HEX; assim, uma inibição potencial pode ser assumida. Esta amostra deve ser repetida, a partir da extração.

Figure 1
Figura 1: Fluxo de trabalho para quantificação de DNA FL. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2: Curvas de fluorescência mostrando a amplificação dos genes de destino Mix A (ou Mix B) (FAM do canal) e controle interno (canal HEX). (A) Amostra positiva do DNA FL. (B) Amostra negativa do DNA FL. (C) Inibição da amplificação da amostra. Curva vermelha: controle positivo; curva verde: controle negativo; curva preta: amostra clínica. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 X
Um Padrão 1 Água DNA2 DNA4 DNA6 DNA8 DNA10 DNA12 DNA14 DNA16 DNA18 DNA20 1 FL-DNA Mix A
B Padrão 1 Água DNA2 DNA4 DNA6 DNA8 DNA10 DNA12 DNA14 DNA16 DNA18 DNA20 2 Mistura FL-DNA B
C Padrão 2 Pos DNA2 DNA4 DNA6 DNA8 DNA10 DNA12 DNA14 DNA16 DNA18 DNA20 3 FL-DNA Mix A
D Padrão 2 Pos DNA2 DNA4 DNA6 DNA8 DNA10 DNA12 DNA14 DNA16 DNA18 DNA20 4 Mistura FL-DNA B
E Padrão 3 DNA1 DNA3 DNA5 DNA7 DNA9 DNA11 DNA13 DNA15 DNA17 DNA19 DNA21 5 FL-DNA Mix A
F Padrão 3 DNA1 DNA3 DNA5 DNA7 DNA9 DNA11 DNA13 DNA15 DNA17 DNA19 DNA21 6 Mistura FL-DNA B
G Padrão 4 DNA1 DNA3 DNA5 DNA7 DNA9 DNA11 DNA13 DNA15 DNA17 DNA19 DNA21 7 FL-DNA Mix A
H Padrão 4 DNA1 DNA3 DNA5 DNA7 DNA9 DNA11 DNA13 DNA15 DNA17 DNA19 DNA21 8 Mistura FL-DNA B

Tabela 1: Placa de configuração com distribuição de controle, curva e amostras. A coluna X indica o número impresso na parte superior da tira.

Passo Temperatura e tempo
Início quente (1 ciclo) 95 °C por 5 min
Amplificação (40 ciclos) 95 °C para 15 s
54 °C para 15 s
60 °C para 45 s (Coleta de Dados)

Tabela 2: Perfil térmico para amplificação de DNA.

Table 3
Tabela 3: Gama de valores de canais HEX e FAM dos padrões para verificar a adequação da curva padrão.

Table 4
Tabela 4: Gama de valores de canais HEX e FAM de controles negativos e positivos para verificar a adequação da execução.

Table 5
Tabela 5: Intervalo de valores de canal HEX e FAM de amostras para verificar a adequação da análise da amostra.

Table 6
Tabela 6: Misture os valores de Cq A e Mix B do canal FAM para verificar a adequação da análise FL-DNA.

Table 7
Tabela 7: Avaliação do risco de câncer em função dos valores iFOBT e FL-DNA. De acordo com a relação entre os valores do iFOBT e do DNA fl-DNA, a tabela estima a probabilidade de lesões neoplásicas colorretais.

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Discussion

Estudos anteriores demonstraram que a análise da integridade do DNA das fezes extraídas por abordagens manuais e semiautomáticas pode representar uma ferramenta alternativa para a detecção precoce das lesões colorretais7,,8,,9,,10,,11,,12. Testes de triagem molecular e não invasivo foram desenvolvidos ao longo dos anos para a detecção de câncer colorretal, mas a difusão generalizada desses métodos é limitada devido a abordagens demoradas e baixo custo-efetividade em comparação com outros testes de triagem.

Esta abordagem é relativamente barata e não muito demorada. Também tem maior precisão na detecção de lesões colorretais devido a um novo procedimento que requer poucas etapas manuais. A abordagem descrita aqui é rápida com menos passos manuais, e é capaz de ser facilmente realizada em muitas amostras por semana. A extração de DNA não apresenta questões particulares e pode ser realizada através de etapas manuais fáceis ou uso de um instrumento automático. Neste último caso, é necessário determinar o instrumento automático de extração de DNA, permitindo os resultados mais reprodutíveis. O passo mais crítico da extração de DNA é a coleta de fezes e método de seu armazenamento antes da extração de DNA. É aconselhável manter as fezes congeladas e prosseguir com a extração o mais rápido possível.

Outra questão crítica é representada por possíveis inibidores das reações de amplificação. A extração fecal não é capaz de purificar o DNA genômico, pois as impurezas comprometem a reação correta de amplificação. Nesse sentido, o protocolo requer o uso de DNA de pico para verificar a presença/ausência de inibidores de reação.

Até recentemente, o exame de sangue oculto fecal é a principal abordagem utilizada para detectar lesões colorretais em programas de triagem; embora, ele apresenta alguns limites em termos de precisão. Uma estratégia alternativa para o diagnóstico do câncer colorretal baseia-se na análise do DNA de células esfoliadas excretadas nas fezes. Várias abordagens foram avaliadas no último ano, mas nenhuma está disponível para uso em programas de triagem.

O valor de integridade fl-DNA pode ser uma alternativa útil, que em combinação com o valor padrão do teste iFOBT de triagem, pode prever a presença de tumores e/ou adenomas de alto risco11,12 por uma abordagem Fagan Nomogram10 (Tabela 7). Esta abordagem estima a probabilidade combinada de teste de presença de lesão neoplásica, melhorando a precisão diagnóstica em comparação com a abordagem padrão utilizada isoladamente.

Essas informações podem ajudar os médicos no planejamento de exames diagnósticos, além de uma colonoscopia adequada e personalização de sua vigilância. De fato, o kit FL-DNA simplifica as etapas manuais e garante resultados estáveis e consistentes. No entanto, algumas questões permanecem a ser esclarecidas para melhorar a precisão diagnóstica do método. Por exemplo, a frequência em que os testes devem ser realizados e o número de amostras de fezes que precisam ser analisadas em momentos específicos para cada indivíduo devem ser cuidadosamente selecionados. Dado que este teste deve ser realizado simultaneamente com o iFOBT, um método que requer coleta a cada 2 anos, como é padrão em inúmeros protocolos de triagem, é necessário verificar a eficácia deste teste como uma substituição ou alternativa aos testes de triagem atuais.

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Disclosures

Maura Menghi é funcionária em tempo integral da Diatech Pharmacogenetics srl.

Acknowledgments

Os autores não têm reconhecimentos.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL and 2 mL polypropylene twist-lock tubes (DNase-, RNase-, DNA-, PCR inhibitor-free) Consumables required for DNA extraction and Real Time PCR
Absolute Ethanol (quality of analytical degree) Reagent required for DNA extraction
Benchtop centrifuge  Maximum speed of 20000 x g. Instrument required for DNA extraction
EasyPGX analysis software version 2.0.0 Diatech Pharmacogenetics RT800-SW Analysis software 
EasyPGX centrifuge/vortex 8-well strips Diatech Pharmacogenetics RT803 Instrument recommended for the Real Time PCR assay
EasyPGX qPCR instrument 96  Diatech Pharmacogenetics RT800-96 Instrument recommended for the Real Time PCR assay
EasyPGX ready FL-DNA Diatech Pharmacogenetics RT029 Kit required for the Real Time PCR assay
Micropipettes (volumes from 1 to 1.000 µL) Consumables required for DNA extraction and Real Time PCR
Powder-free disposable gloves Consumables required for DNA extraction and Real Time PCR
QIAamp Fast DNA Stool Qiagen 51604 Kit recommended for the DNA extraction and purification from stool
Sterile filter tips DNase-, RNase-free (volumes from 1 to 1.000 µL) Consumables required for DNA extraction and Real Time PCR
Thermal block e.g. EasyPGX dry block Diatech Pharmacogenetics RT801 Instrument required for DNA extraction
Vortex e.g. EasyPGX centrifuge/vortex 1.5 ml  Diatech Pharmacogenetics RT802 Instrument required for DNA extraction

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fearon, E. R. Molecular Genetics of Colorectal Cancer. Annual Review of Pathology. 6, 479-507 (2011).
  2. Sears, C. L., Garrett, W. S. Microbes, Microbiota, and Colon Cancer. Cell Host and Microbe. 15, 317-328 (2014).
  3. SEER Stat Fact Sheets: Colon and Rectum Cancer. National Cancer Institute. , Available from: http://seer.cancer.gov/statfacts/html/colorect.html (2019).
  4. Levin, B., et al. Screening and Surveillance for the Early Detection of Colorectal Cancer and Adenomatous Polyps, 2008: A Joint Guideline From the American Cancer Society, the US Multi-Society Task Force on Colorectal Cancer, and the American College of Radiology. Gastroenterology. 134, 1570-1595 (2008).
  5. Bosch, L. J., et al. Molecular tests for colorectal cancer screening. Clinical Colorectal Cancer. 10, 8-23 (2011).
  6. Ahlquist, D. A. Molecular detection of colorectal neoplasia. Gastroenterology. 138, 2127-2139 (2010).
  7. Calistri, D., et al. Fecal multiple molecular tests to detect colorectal cancer in stool. Clinical Gastroenterology and Hepatology. 1, 377-383 (2003).
  8. Calistri, D., et al. Detection of colorectal cancer by a quantitative fluorescence determination of DNA amplification in stool. Neoplasia. 6, 536-540 (2004).
  9. Calistri, D., et al. Quantitative fluorescence determination of long-fragment DNA in stool as a marker for the early detection of colorectal cancer. Cellular Oncology. 31, 11-17 (2009).
  10. Calistri, D., et al. Fecal DNA for noninvasive diagnosis of colorectal cancer in immunochemical fecal occult blood test-positive individuals. Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention. 19, 2647-2654 (2010).
  11. De Maio, G., et al. Circulating and stool nucleic acid analysis for colorectal cancer diagnosis. World Journal of Gastroenterology. 20, 957-967 (2014).
  12. Rengucci, C., et al. Improved stool DNA integrity method for early colorectal cancer diagnosis. Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention. 23, 2553-2560 (2014).

Tags

Pesquisa do Câncer Questão 160 integridade do DNA das fezes lesões de câncer colorretal adenomas colorretais de alto risco método de câncer colorretal diagnóstico qPCR FL-DNA iFOBT

Erratum

Formal Correction: Erratum: Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection
Posted by JoVE Editors on 09/28/2020. Citeable Link.

An erratum was issued for: Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection. An affiliation was updated.

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Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS, Meldola, Italy

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Rengucci, C., De Maio, G., Menghi,… More

Rengucci, C., De Maio, G., Menghi, M., Benzi, F., Calistri, D. Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection. J. Vis. Exp. (160), e59426, doi:10.3791/59426 (2020).

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