Summary
تم تطوير طريقه السحق المبردة لمعالجه الكفوف murine باستخدام مطحنه النيتروجين السائل التجميد لتحسين الغلة وجوده الحمض الريبي النيبالي أو البروتين المستخرج من الانسجه وتمكين تحليل الملامح الجزيئية المرتبطة التهابات الاستجابات.
Abstract
تنميط التغيرات الجزيئية في الانسجه المحلية أمر حاسم لفهم اليه (ق) عمل المرشحين العلاجية في الجسم الحي. في مجال البحوث التهاب المفاصل ، وتركز العديد من الدراسات علي المفاصل الملتهبة التي تتكون من خليط معقد من العظام والغضاريف والعضلات والخلايا اللحمية والخلايا المناعية. هنا ، انشانا طريقه ميكانيكيه موثوقه وقويه لتعطيل الكفوف الماوس ملتهبة في عينات المسحوق متجانسة في بيئة تسيطر عليها الديتريوم. وتمت معالجه البروتينات والحمض الريبي النيبالي لتمكين نقاط النهاية البروتينية والمتحولة والتوصيف الجزيئي لمسارات الامراض ذات الصلة في الانسجه المحلية.
Introduction
التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض التهابي مزمن الجهازية مع التهاب الغدة الدرقية المتماثل المستمر في المفاصل ومشاركه مفصليه اضافيه من أجهزه مثل الجلد والقلب والرئتين ، والعينين1. علي الرغم من ان المظاهر الجهازية للاستجابة المناعية واضحة في المرضي البشريين ، واحده من السمات المميزة للامراض RA هو تسلل الخلايا المناعية في الانسجه الزليلي وانتشار الخلايا الليفية الزليلي2.
علي غرار RA الإنسان ، الكولاجين الماوس المستحثة التهاب المفاصل (CIA) نموذج يثير التهاب الانسجه القوية مع الاستجابات المناعية النشطة في الانسجه الزليلي والمقصورات الجهازية. الحساسية من سلالات الماوس مختلفه لارتباطات نموذج وكاله المخابرات الخاصة إلى مجمع التوافق الرئيسية (mhc) النمط والخلية المحددة antigen T و B التفاعلات الخلية3,4. الاضافه إلى ذلك ، فان العديد من المسارات المسببة للامراض في RA الإنسان ، بما في ذلك إنتاج الأجسام المضادة ، وترسب معقده المناعي ، وتنشيط الخلايا النخاعية ، ومظاهر متعددة المفصليات وتشكيل بانيوس مع تسلل المناعي الزليلي ، هي أيضا واضحة في هذا النموذج 5,6. وقد استخدم المحققون هذا النموذج الراسخ CIA للتحقيق في اثار العلاجات السايسيسين المضادة للالتهابات7. وقد تم العثور علي العديد من البيولوجية المعتمدة للامراض المناعية الذاتية أو التهابيه ، مثل المضادة لل tnfα والمضادة لل-6 ، ان تكون فعاله في نموذج8،9وكاله المخابرات العامة.
التنميط التفاعلات من الجهاز المناعي في الانسجه الزليلي أمر حاسم لتوضيح أليات الجزيئية المرتبطة بالتسبب في RA. في البيئة السريرية البشرية ، والممارسة الشائعة هي اجراء الخزعات الزليلي الابره تحت اشراف التصوير بالموجات فوق الصوتية. في الإعدادات الاكلينيكيه ، يجعل الهيكل الأصغر للمفاصل الmurine إجراءات الخزعة أكثر صعوبة ان لم يكن مستحيلا. في الاونه الاخيره ، أظهرنا استخدام نموذج murine CIA لتقييم مجموعات من الادويه للتاثير علي نقاط النهاية المتباينة وحل المرض في نهج التوافقية10. وقد استخدمت طريقه الطحن المبردة طاحونة القائم علي مطحنه لمعالجه الكفوف murine الملتهبة في مساحيق ناعمه متجانسة والعمليات التي أنشئت المصب لاستخراج الحمض الريبي النيبالي والبروتينات. هذه الطريقة تحمي الحمض الريبي النيبالي والبروتين من العمليات الانزيميه والكيميائية degrative وتمكننا من تطبيق أساليب تحليليه متعددة لمصدر عينه متجانس واحد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد أجريت جميع التجارب الحيوانية وفقا لسياسات اللجنة المؤسسية للعناية بالماشية واستخدامها التابعة لشركه Janssen R & D.
1. المبردة تجميد مطحنه القائم علي طريقه الطحن
- عند إنهاء دراسة وكاله المخابرات الخاصة ، والفئران التضحية مع 1.5 ٪ ايزوفلوراني تليها خلع عنق الرحم.
- في يوم معالجه الانسجه ، قبل البرد جميع الصكوك (ملاعق ، قوارير طحن ، الخ) علي الجليد الجاف لمده لا تقل عن 10 دقيقه. ارتداء قفازات الحرارية لتجنب تجميد الضرر.
- قطع الكفوف الخلفية مع مقص في خط الفراء كما هو مبين في الشكل 1ا.
- نقل كل مخلب في واحد 1.5 mL أنبوب الطرد المركزي الصغير ، والمفاجئة تجميد في النيتروجين السائل علي الفور ، وتخزين الكفوف المجمدة في-80 درجه مئوية. لا تبقي العينات المجمدة لأكثر من أسبوع واحد.
- ملء مطحنه الفريزر مع النيتروجين السائل كما هو مبين في الشكل 1ب والسماح لها تتوازن لمده 10 دقيقه علي الأقل.
- حافظ علي العينة غير المجهزة علي الثلج الجاف وتجنب دورات التجمد والذوبان.
- نقل واحده مخلب الخلفية إلى ما قبل المبردة البولي الكبير طحن قارورة مع المكونات الصلب السفلي ، وادراج الفاعل الصلب قبل المبردة وإغلاق قارورة طحن البولي مع المكونات الصلب قبل المبردة الأعلى (الشكل 1ج).
- نقل قوارير كبيره البولي طحن مع عينات في مطحنه الفريزر قبل مملوءة بالسائل وإغلاق الغطاء مع المشبك المطاطي وجدت في المقدمة من الصك.
- اسمحوا عينات بارده في النيتروجين السائل لمده 1 دقيقه.
- تعيين مطحنه الفريزر إلى برنامج 1 دقيقه مع 10 دورات في الثانية الواحدة واضغط علي زر البداية. انتظر مطحنه الفريزر لإكمال دوره.
ملاحظه: الجهاز يجعل صوت الطبول كما يتحرك الاندفاع الصلب ذهابا وإيابا. استخدم مقابس الاذن لتجنب فقدان السمع. - فتح غطاء مطحنه التجميد ، وإخراج قارورة كبيره البولي طحن ووضعها في مستخرج كما هو مبين في الشكل 1د. أزاله المكونات الصلب العلوي من خلال وضع الضغط الهبوطي علي مقبض اسود حتى المكونات الصلب الشرائح من أنبوب البولي.
- انقل قارورة البولي كربونات الكبيرة المفتوحة إلى الثلج الجاف. أزاله الفاعل الصلب مع ملقط قبل المبردة.
- نقل مسحوق المجمدة إلى ما قبل المبردة 50 mL أنبوب مخروطي.
- الوزن 30-50 ملغ من مسحوق المجمدة في tared المجمدة 1.5 mL أنبوب ميكروالطرد المركزي لاستخراج RNA و 100-200 ملغ من مسحوق المجمدة لاستخراج البروتين.
ملاحظه: يجب ان تبدو مسحوق المجمدة مثل الرمال البيضاء أو الخفيفة الوردي الناعم كما هو مبين في الشكل 1ه. - تخزين عينات المسحوق في-80 درجه مئوية والمضي قدما إلى الحمض الريبي النيبالي والعزلة البروتين في غضون 24 ساعة.
2. استخراج RNA
- أضافه 10 μL من β-mercaptoethanol (β-ME) لكل 1 مل من العازلة RLT.
- حساب حجم العازلة RLT المقابلة لنسبه 23.3 mL/mg من الانسجه وأضافه الحجم المناسب من العازلة RLT مع β-ME إلى أنبوب مع مسحوق المجمدة. تم تحديد هذه النسبة تجريبيا لتكون مثاليه لكفوف الفار.
- دوامه العينة في 3,000 RPM لمده 10 ليالي.
- اخلطي جيدا بواسطة الأنابيب لاعلي ولأسفل 10 مرات بقوة مع 1 مل pipettor.
- دوامه العينة مره أخرى في 3,000 RPM لمده 20 ثانيه.
- الطرد المركزي أنبوب في 13,000 x g لمده 2 دقيقه.
- نقل 700 μL من supernatants إلى أنبوب جديد وأضافه 700 μL من الايثانول 70 ٪.
ملاحظه: إذا كان < 700 μL في الأنبوب ، فمن المقبول المضي قدما ، لا يزال أضافه حجم مكافئ من 70 ٪ الايثانول. - تحميل 700 μL من العينة علي عمود تنقيه RNA.
- الطرد المركزي أنبوب في ≥ 10,000 x g لمده 30 ثانيه.
- تجاهل التدفق وتحميل الجزء المتبقي من العينة إلى العمود RNeasy.
- الطرد المركزي أنبوب في ≥ 10,000 x g لمده 30 ثانيه.
- تجاهل تدفق من خلال وغسل العمود عن طريق أضافه 700 μL من المخزن المؤقت RW1 مع طرد من ≥ 10,000 x g ل 30 s. إذا كان أداء الخيار الهضم DNASE ، 350 μL من RW1 يضاف قبل العلاج DNASE. ويضاف 350 μL اضافيه من RW1 بعد العلاج DNASE.
- اختياري) تنفيذ خطوه الهضم DNase اتباع تعليمات الشركة المصنعة.
- غسل الأنبوب مرتين عن طريق أضافه 500 μL من المخزن المؤقت RPE تليها طرد في ≥ 10,000 x g ل 30 s. تجاهل تدفق من خلال كل مره.
- تجفيف العمود بواسطة طرد في ≥ 10,000 x g لمده 2 دقيقه.
- Elute RNA عن طريق أضافه 50 μL المياه مع طرد في ≥ 10,000 x g لمده 2 دقيقه جمع تدفق من خلال ونقل إلى أنبوب 1.5 mL جديده.
- تحديد كميه الحمض الريبي النيبالي باستخدام طريقه الباحث الاختيار وتخزين في-80 درجه مئوية قبل مزيد من التحليل.
3. استخراج البروتين
- تمييع 10x الخلية تحلل حل الأسهم في 1x الخلية تحلل حل الأسهم باستخدام المياه الصف ثقافة الخلية.
- أعاده تشكيل مجموعه مثبطات البروتياز كوكتيل انا مع 1 مل من الماء لجعل المخزون مثبطات الانزيم البروتيني 100x.
- أضافه 100 μL من مثبطات الانزيم البروتيني إلى 9.9 مل من 1x خليه تحلل لجعل 1x حل الأسهم النهائية.
- أضافه 4 μL من الجليد الباردة 1x خليه تحلل العازلة لكل مسحوق الانسجه ملغ (علي سبيل المثال ، 800 μL من تحلل العازلة إلى 200 ملغ من مسحوق الانسجه).
- أضافه واحده 5 مم الفولاذ المقاوم للصدا حبه إلى أنبوب.
- دوامه الأنبوب في 3,000 دوره في الدقيقة ل 60 s. نقل الأنبوب إلى الجليد الرطب والاستمرار في العينة القادمة.
- وضع جميع أنابيب عينه في مربع ويهز مربع الطرد المركزي علي الروك في 1,000 RPM ، 4 درجه مئوية لمده 1 ساعة.
ملاحظه: قد يجد الباحثون ان وضع مربع العمودي يمكن ان تسهل خلط أفضل مع حبه. - الطرد المركزي أنابيب في 10,000 x g و 4 درجه مئوية لمده 15 دقيقه.
- نقل supernatants إلى أنبوب جديد وتجنب طبقه الدهون في الأعلى.
- تحديد تركيز البروتين الكلي. 10 إلى 30 اضعاف المخففات من محلله البروتين مثاليه لاختبار bca.
- Aliquot العينة إلى 1.5 mL أنابيب الطرد المركزي الصغير وتخزين في-80 درجه مئوية قبل مزيد من التحليل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
هنا ، ونحن نظهر ممثل التصور الصورة هلام من الجيش النيبالي الريبي المستخرجة من الكفوف الاماميه من الفئران CIA في الشكل 2ا. RRNA 28S و rRNA 18S الفرقة تشير إلى جميع العينات لديها كميه كافيه من الحمض الريبي النيبالي سليمه. المقبل ، ونحن تظهر مؤامرة مبعثر ممثل من مجموع تركيزات البروتين علي أساس تحليل BCA البروتين في الشكل 2ب. مجموع تركيزات البروتين من الفئران الساذجة ، والفئران CIA أو الفئران CIA تحت مختلف العلاجات قابله للمقارنة عبر المجموعات. لتحديد تركيزات السايتوكينات التهابيه والكيميائية في مستخلص البروتين ، أجريت تحاليل لولومينكس. نعرض رسما مبعثرا تمثيليا لتركيزات السايتوكينات الطبيعية والكيميائية (pg/mg البروتين الكلي) في الشكل 2ج. بالمقارنة مع الفئران الساذجة ، فان العديد من السايتوكينات مرتفعه في الفئران وكاله المخابرات العامة والعلاج مع الأجسام المضادة لIL17A يمنع بشكل كبير إنتاج العديد من السايتوكينات. لتقييم التغييرات الناسخة في وكاله المخابرات العامة والآثار المتعلقة بالعلاج ، تم اجراء تحليل ميكروصفيف. نعرض مخططا لخريطة الحرارة الجينية للجينات التي زادت بشكل ملحوظ في فئران السي اي إيه مقارنه بالفئران الساذجة في الشكل 2د.
الشكل 1: المعدات اللازمة لسحق الكفوف الmurine. (ا) الكفوف الملتهبة أو غير الملتهبة من السي اي إيه أو الفئران الساذجة. (ب) النيتروجين السائل ديوار تستخدم لملء حمام الفولاذ المقاوم للصدا من مطحنه الفريزر. (C) تجميعها مطحنه التجميد أنبوب مجموعه. (د) فتاحة أنبوب مطحنه التجميد. (ه) الانسجه المسحوقة من الكفوف murine. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: بيانات تمثيليه عن تحليل البروتين والحمض الريبي النيبالي من الكفوف murine المسحوقة. (ا) تصور الصورة الهلامية لسلامه الحمض الريبي النيبالي. (ب) مجموع تركيزات البروتين من مجموعات مختلفه. (C) chemokine والتعبير السايتوكين (لومينكس) من مجموعات مختلفه. (د) التقسيم الهرمي لخريطة التبريد لتحليل المصفوفة المجهرية من مجموعات المعالجة المختلفة. يرجى النقر هنا لعرض نسخه أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
علي الرغم من ان هناك مبرر علمي قوي لتقييم المسارات الجزيئية في الانسجه الزليلي ، وركزت العديد من التقارير علي التنميط المناعي للنموذج murine CIA علي الدم المحيطي ، في حين ان البروتين وبيانات تحليل RNA من الكفوف الملتهبة محدوده نوعا ما. هناك العديد من الأسباب المحتملة لهذا التحيز: المفاصل الكاحل murine ليست أكبر من ~ 2 سم; المناطق المتضررة تتكون من الجلد والعظام والانسجه الضامة التي غالبا ما تكون صعبه التجانس باستخدام الأساليب التقليدية مثل المطاحن الانسجه ، مدقه وهاون ، وتعطيل حبه السيليكا ، تريلوريشن أو الهضم الانزيمي. هذه الأساليب عاده ما تؤدي إلى تجانس غير مكتملة ، وانخفاض البروتين أو العائد RNA ، أو نوعيه غير متناسقة بسبب التحلل البروتيني والحمض النووي. وتوفر الطريقة القوية الموصوفة هنا اجراء مفصلا لتوليد بودرة مسحوقه مجمده متجانسة لتمكين جهود التنميط البروتينية والتحويلية لتحديد التواقيع الجزيئية للمرض من عينه موحده واحده مصدر.
يجب مراعاه العديد من الخطوات الهامه عند تنفيذ هذه الطريقة. أولا ، يجب قطع الكفوف murine في خط الفراء خلال حصاد الانسجه وينبغي تجنب كميات كبيره من الشعر. الشعر الزائد يمكن ان تسد الاعمده اثناء استخراج RNA وتتداخل مع استخراج البروتين. ثانيا ، يجب الاحتفاظ بالأنابيب والملقط والملاعق علي الثلج الجاف طوال العملية لان درجه الحرارة المرتفعة في مساحيق الانسجه ستحول المادة بسرعة إلى "طين" غير متبلور سيتم المساس بسلامه البروتين والحمض الريبي النيبالي. ثالثا ، يجب ان يكون كميه مسحوق الانسجه المستخدمة لاستخراج البروتين أو RNA الأمثل بعناية. المزيد من مسحوق الانسجه قد لا توفر دائما اعلي الغلة ولكن يمكن ان يسبب مشاكل اضافيه في معالجه المصب بما في ذلك انسداد أعمده العزل RNA ، وتغيير نسبه DNase/الحمض النووي (إذا تم استخدام هذه الخطوة) لمنع تدهور الحمض النووي الكامل. وأخيرا ، ينبغي ان يكون تطبيع البروتين وإدخال RNA جزءا لا يتجزا من سير العمل وتحليل البيانات. يمكن للتغير في حمل الانسجه ان يخفي بشكل ملحوظ التغيرات في البروتين النسبي ومستويات RNA. بالاضافه إلى البروتين الكلي أو الحمض الريبي الإجمالي الكلي ، يمكن أيضا اعتبار التعبير عن جينات التدبير المنزلي كمراسي للتطبيع.
من خلال التجربة الواسعة وعمليه الخطا ، قمنا بتحديد بعض المشكلات المتكررة المحتملة لمستخدمي هذه الطريقة لأول مره. يمكن ان يكون هناك عائد منخفض من RNA. هذا هو في كثير من الأحيان نتيجة لاثقال العمود مع الكثير من استخراج الانسجه. كميه الانسجه لكل عمود ونسبه RLT/مسحوق حاسمه لعزل الحمض الريبي النيبالي كفاءه. لقد وجدنا ان بعض التجارية 96 مجموعات استخراج جيدا قد لا تعمل لهذه العملية لان العينات لن تدور من خلال العمود بمعدل مكافئ ، التالي المساومة علي هذه العينات في المصب الغسيل والخطوات التملص. يمكن ان يكون هناك تباين كبير في تركيز البروتين في تحليل BCA وتركيزات السايسيسين في تحليل لومينكس. إذا لم يكن هناك مشاكل مع BCA أو عمليه لولومينكس ، وعاده ما يكون سببها الدهون أو غيرها من الملوثات في استخراج البروتين. من المهم تجنب طبقه الدهون في الجزء العلوي أو غير قابله للذوبان في الجزء السفلي من أنابيب الطرد المركزي عند حصاد لاستخراج البروتين. إذا لزم الأمر ، كرر تدور وجمع supernatants للتحليل المصب.
وبما ان هذه الطريقة تشمل مطحنه تبريد مبرده متخصصة وكميات كبيره من الجليد الجاف والنيتروجين السائل ، ينبغي النظر في اتخاذ تدابير اضافيه للسلامة. وينبغي دائما ان ترتدي معدات الحماية الشخصية المناسبة بما في ذلك نظارات السلامة ومعاطف المختبر والقفازات المبردة لمنع الحروق المحتملة والاصابه بسبب الانفجار. وينبغي أيضا تقليل توليد الهباء الجوي إلى الحد الأدنى وينصح باستخدام حاويات الرصيد التنفيس. وأخيرا ، علي غرار اي بروتوكولات أخرى تعالج الانسجه الحيوانية ، ينبغي الحرص علي التخلص بشكل صحيح من جميع عينات الانسجه غير المستخدمة ، بينما تحتاج الأنابيب القابلة لأعاده الاستخدام إلى تطهيرها قبل التنظيف.
في حين ان الأسلوب له العديد من المزايا علي الطرق التقليدية ، فانه لا يزال المرافئ بعض القيود. الملف الشخصي الناسخ من مخلب كله murine تتداخل بشكل كبير مع الملف الشخصي الناسخ من خزعة الإنسان الزليلي (البيانات لا تظهر). ويمكن لل mRNA اضافيه من العضلات والجلد ونخاع العظم تمييع الإشارات من الانسجه الزليلي. والحل البديل هو جمع الانسجه السائلة الزليلي من خلال التشريح المجهري الليزر ، والتي يمكن أداؤها علي المفاصل الماوس جزءا لا يتجزا من OCT. ومع ذلك ، انخفاض الانتاجيه وكميه صغيره نسبيا من الانسجه يحد من تطبيق واسعه لتشريح الليزر المجهري. بالاضافه إلى ذلك ، حتى مع أتمته كبيره ، وهذا الأسلوب لا يزال العمل المكثف جدا. يستغرق ما لا يقل عن 8 ح لمعالجه عينات 30-60 بمساعده 3-4 المحققين. وأخيرا ، يتطلب هذا الأسلوب كميات كبيره من النيتروجين السائل (~ 10-15 لتر لمعالجه العينات 30-60).
وفي وصف الأسلوب السابق ، تم التدليل علي تقييم تحليلات النقطة النهائية البروتينية والمتحولة. ومع ذلك ، نقطه نهاية اضافيه ، مثل الدهون ، الأيض والتنميط الصغيرة RNA يمكن ان تكون ذات فائده لمجتمع البحوث التهاب المفاصل علي نطاق أوسع.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
المؤلفين BJ ، SH ، ML ، RM ، ML ، إلى والخدمات المالية هي موظفي Janssen البحوث & شركه التنمية وهي المساهمين في الشركة الام ، جونسون & جونسون ، وشركه.
Acknowledgments
ويود المؤلفون ان يشكروا اديث جانسين علي المراجعة النقدية لمخطوطه نافين راو وجنيفر تاون لدعمهما لنشر هذه المخطوطة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5 mm stainless steel bead | Qiagen | 69989 | |
| beta-mercaptoethanol | Sigma | M6250 | Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes |
| Bioanalyzer Kit | Agilent | 5067-1511 | RNA qualification kit |
| b-mercaptoethanol | Sigma | M6250 | |
| Cell Culture Grade Water | Corning | 25-055-CI | Water |
| Cell lysis stock solution | Cell Signaling | 9803 | |
| Eppendorf Tube | Eppendorf | 22363204 | Microfuge tubes |
| Eppendorf tube centrifuge box | Nalgene | 5055 | Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement |
| Everlast 247 Variable Speed Rocker | Benchmark Scientific | BR5000 | |
| Freezer Mill | Spex Sample Prep | 6875 | Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder |
| Grinding Vial | Spex Sample Prep | 6801 | Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder |
| Pierce BCA kit | Pierce | 23225 | Kit for Total Protein Quantification |
| Protease Inhibitor Cocktail set 1 | Calbiochem | 539131 | Protease Inhibitors |
| Protein BCA Kit | Pierce | 23225 | |
| Quantigene Kit | Thermofisher | QP1013 | bDNA analysis Kit |
| Refrigerated microcentrifuge | Eppendorf | 5417R | Centrifugation |
| RLT Buffer | Qiagen | 79216 | RNA extraction buffer |
| RNeasy mini kit | Qiagen | 74104 | including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer |
| Shaker | Benchmark Scientific | BR5000 | Rocker/Shaker |
| Spatula | VWR | 10806-412 | Spatula for powder transfer |
| Stainless Steel Bead | Qiagen | 69989 | Bead for mixing during protein extraction |
| Tube Extractor | Spex Sample Prep | 6884 | Extractor for removing the top of grinding vial |
| Vortexer | VWR | 10153-838 | Sample mixing |
References
- Firestein, G. S. Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis. Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).
- McInnes, I. B., Schett, G. The pathogenesis of rheumatoid arthritis. New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).
- Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis. Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).
- David, C. S., Taneja, V. Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis. American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).
- Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. Rheumatoid factors in mice. Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).
- Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma. Journal of Interferon & Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).
- Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra. Arthritis & Rheumatology. 39, 797-809 (1996).
- Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. Animal models of rheumatoid arthritis. European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).
- Williams, R. O. Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis. Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).
- Shen, F., et al. Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice. Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).
