שומות hydatidiform הם הריונות אנושיים חריגים עם aetiologies הטרוגנית שניתן סיווג על פי תכונות מורפולוגיות שלהם תרומת הורים הגנום הטוחנת. כאן, פרוטוקולים של הננו-DNA מיקרולוווין של דנ א וזרימה cy, הרקמה הקבועה של formalin-מוטבע הרקמות הטוחנת מתוארים בפרוטרוט, יחד עם התוצאות ‘ פרשנות ואינטגרציה.
Hydatidiform שומה (HM) הוא הריון אנושי נורמלי מאופיין התפשטות trophoblastic מוגזמת ופיתוח עובריים חריגים. ישנם שני סוגים של HM מבוסס על הערכה מורפולוגית מיקרוסקופית, להשלים HM (CHM) חלקי HM (PHM). אלה יכולים להיות מחולקת עוד יותר על בסיס תרומת הורים הגנום הטוחנת. אפיון כזה של HM, לפי מורפולוגיה וניתוחי גנוטיפ, הוא חיוני לניהול המטופלים ולהבנה הבסיסית של הפתולוגיה הזאת מעניינת. זה מתועד היטב כי ניתוח מורפולוגית של HM הוא כפוף השונות הבינמתבונן רחב והוא לא מספיק על עצמו כדי לסווג במדויק HM לתוך CHM ו PHM ולהבדיל אותם מפני הפלות הלא טוחנת הידרופית. ניתוח הקלדה מבוצע בעיקר ב-DNA ורקמות מ-formalin קבוע פרפין-מוטבע (FFPE) מוצרים של תפיסה, אשר יש פחות מאשר איכות אופטימלית ולכן עלול להוביל למסקנות שגויות. במאמר זה, פרוטוקולים מפורטים עבור מולטיטפלקס והזרמת cy, ניתוח הרקמות הטוחנת של FFPE מסופקים, יחד עם הפרשנות של תוצאות שיטות אלה, פתרון בעיות שלהם, אינטגרציה עם הערכה מורפולוגית , p57KIP2 אימונוהיסטוכימיה, ו זריחה באתרו היברידיזציה (דג) כדי להגיע לאבחנה נכונה ואיתנה. כאן, המחברים חולקים את השיטות והלקחים שנלמדו במהלך 10 השנים האחרונות מהניתוח של כ 400 מוצרים של ההתעברות.
שומה מולה (HM) הוא הריון אנושי נורמלי המאופיינת התפתחות עובריים חריגים, היפרהפצה של trophoblast פיצוץ, ו הידרוpic ניוון של villi כוריוני (CV). מבחינה היסטורית, HM היה מחולק לשני סוגים, להשלים HM (CHM) חלקי HM (PHM) מבוסס רק על הערכה מורפולוגית1. עם זאת, הוכח כי הערכה מורפולוגית לבד אינה מספיקה כדי לסווג HM לתוך שני סוגי המשנה (CHM ו-phm) ולהבדיל אותם מפני הפלות לא-טוחנת2,3,4.
בגלל CHM ו PHM יש נטיות שונים כדי ממאירות, ולכן חשוב לקבוע במדויק את סוג גנוטיפ של HM כדי לספק מעקב מתאים וניהול לחולים. כתוצאה מכך, בעשורים האחרונים פותחו מספר מתודולוגיות והתפתחו לצורך זיהוי התרומה הורית לרקמות הטוחנת ולהשגת סיווג נכון של HM. אלה כוללים ניתוח קריוטיפ, פולימורפיזם פסים כרומוזומלית, אנטיגן לוקיציט אנושי (hla) סרולוגית הקלדה, מגבלת אורך קטע ההגבלה, מספר משתנה של הטנדם חוזר, גנוטיפ מיקרולוווין, הזרמת cy, ו p57 KIP2 אימונוהיסטוכימיה. זה איפשר חלוקה מדויקת של התפיסות HM מבוסס על תרומת הורים כדי genomes שלהם, כדלקמן: CHM, אשר דיפלואידי דמוי מונוספרמיק או דיפלואידי אנדרוגנטי, ו phm, אשר הם triploid, מפזרים ב 99% ו מונוספרמיק ב 1% מהמקרים5,6,7,8. יתר על כן, יש עוד סוג של גנוטיפ של HM אשר התפתחה בשני העשורים האחרונים, אשר הוא דיפלואידי biparental ורים. האחרון הוא בעיקר וחוזר ועלול להשפיע על בן משפחה בודד (במקרים משפחתיים) או לפחות שני בני משפחה. אלה דיפלואידי הורים שומות נגרמות בעיקר על ידי מוטציות רצסיבי ב NLRP7 או KHDC3L בחולים9,10,11,12. Diploid ביורית HM בחולים עם מוטציות רצוניות ב NLRP7 ניתן לאבחן כמו CHM או phm על ידי ניתוח מורפולוגית וזה נראה קשור לחומרת המוטציות בחולים13,14. בנוסף לסיווג של HM על פי הגנוטיפים שלהם, המבוא והשימוש של מספר שיטות גנוסטי מותר את ההבחנה של ישויות טוחנת שונות מפני הפלות שאינן מולרי, כגון תפיסות הורים ו תפיסות מסוגים אחרים5,15. תפיסות כאלה אולי יש כמה התפשטות trophoblast פיצוץ ומורפולוגיה villous חריגים המחקים, במידה מסוימת, כמה תכונות מורפולוגיות של HM.
המטרה של מאמר זה היא לספק פרוטוקולים מפורטים עבור מולטיפלקס וזרימה cy, לזרום עם הרקמה הקבועה של הפרפין-מוטבע (FFPE) רקמות, וניתוחים מקיפים של תוצאות שיטות אלה ושילובם עם שיטות אחרות עבור אבחנה נכונה וחותכת של רקמות טוחנת.
HM הם הריונות אנושיים חריגים עם חבלות הטרוגנית יש סוגים שונים היסטולוגית ו-genotypic, מה שהופך סיווג מדויק שלהם ואבחון מאתגרת. הערכה מורפולוגית היפואוולוגית הוכחה לעתים קרובות מדויק, ולכן לא אמין על עצמו לסווג HM לתוך CHM ו PHM ולהבדיל אותם מפני שאינם טוחנת הפלות. לכן, אבחנה מדויקת של HM דורש שימוש בש…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מודים סופי Patrier מריאן Parésy עבור שיתוף את הפרוטוקול המקורי cy, לנסות הפרוטוקולים, פרונגה ו Qiagen לספק אספקה וריאגנטים. עבודה זו נתמכת על ידי הרבייה והמכון הקנדי לחקר בריאות (מגב-130364) לR.S.
BD FACS Canto II | BD BioSciences | 338960 | |
Capillary electrophoresis instrument: Genomes Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer | Applied biosystems | 313001R | Service offered by the Centre for Applied Genomics (http://www.tcag.ca) |
Citric acid | Sigma | 251275 | |
Cytoseal 60, histopathology mounting medium | Fisher | 23244257 | |
Eosin Y stock solution (1%) | Fisher | SE23-500D | |
FCSalyzer – flow cytometry analysis software | SourceForge | – | https://sourceforge.net/projects/fcsalyzer/ |
FFPE Qiagen kit | Qiagen | 80234 | |
Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | For sectioning and for the cleaning process |
Glacial Acetic Acid (Concentrated) | Sigma | A6283-500mL | |
Glass coverslips: Cover Glass | Fisher | 12-541a | |
Hematoxylin | Fisher | CS401-1D | |
Highly deionized formamide: Hi-Di Formamide | Thermofisher | 4311320 | |
IHC platform: Benchmark Ultra | Roche | – | |
Kimwipes | Ultident | 30-34120 | |
Microtome | Leica | RM2135 | |
Microtome blades | Fisher | 12-634-1C | |
Nitex filtering mesh, 48 microns | Filmar | 74011 | http://www.filmar.qc.ca/index.php?filet=produits&id=51&lang=en ; any other filter is suitable, but this is an inexpensive and effective option from a non-research company |
p57 antibody | Cell Marque | 457M | |
Pasteur pipette | VWR | 53499-632 | |
PCR machine | Perkin Elmer, Applied Biosystems | GeneAmp PCR System 9700 | |
PeakScanner 1.0 | Applied Biosystems | 4381867 | Software for genotyping analysis. |
Pepsin from porcine gastric mucosa | Sigma | P7012 | |
Polystyrene round-bottom tubes | BD Falcon | 352058 | |
Positively charged slides: Superfrost Plus 25x75mm | Fisher | 1255015 | |
PowerPlex 16 HS System | Promega Corporation | DC2102 | |
Propidium Iodide | Sigma | P4864 | |
Ribonuclease A from bovine pancreas | Sigma | R4875 | |
Separation matrix: POP-7 Polymer | Thermofisher | 4352759 | |
UltraPure Agarose | Fisher | 16500-500 | |
Xylene | Fisher | X3P1GAL |