Summary
このプロトコルは、レーザーカット神経血管インプラントを用いた血液接触装置の包括的な血溶性評価について説明する。新鮮なヘパリン化されたヒト血液を有するフローループモデルは、血流を模倣するために適用される。灌流後、種々の血液学的マーカーを分析し、試験された装置の血相適合性評価のために採血後に直接得られた値と比較する。
Abstract
体内の循環系に残る一時的または永続的な目的のために医療機器(例えば、血管移植片、ステント、心臓カテーテル)の使用が増えている場合、これらの装置によって引き起こされる可能性のある血液学的合併症(すなわち、血液成分の活性化および破壊)を評価する信頼性の高いマルチパラメトリックアプローチが必要である。血液接触インプラントの包括的なインビトロヘモ適合性試験は、生体内での実装に成功するための第一歩です。したがって、国際標準化機構10993-4(ISO 10993-4)による広範な分析は、臨床応用前に必須です。提示されたフローループは、ステント(この場合は神経血管)の止血性能を分析し、悪影響を明らかにする敏感なモデルを記述する。新鮮な人間の全血と穏やかな血液サンプリングの使用は、血液の事前活性化を避けるために不可欠です。血液は、試験検体を含むヘパリンチューブを通して、37°Cで150 mL/minの速度で60分間の蠕動ポンプを使用して浸透する。灌流の前後、血液学的マーカー(すなわち、 血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット、および血漿マーカー)は、白血球(多形核[PMN]エラスターゼ)、血小板(β-トロンボグロブリン[β-TG])、凝固系(トンビンアンチトロンビンIII[TAT])、および補体カスケード(SC5b-9)の活性化を示す。結論として、我々は臨床応用前にステントおよび他の血と接触装置の広範なヘモ適合性テストのための必須で信頼できるモデルを提示する。
Introduction
ヒトの血液と相互作用するインプラントや生体材料の生体内応用には、止血システムの様々なマーカーの調査に焦点を当てた強力な前臨床試験が必要です。国際標準化機構10993-4(ISO 10993-4)は、血液接触装置(すなわち、ステントおよび血管移植片)の評価の中心原則を規定し、デバイス設計、臨床有用性、および必要な材料を考慮する。
ヒト血液は、白血球(白血球[BPC])、赤血球(赤血球[RBC])、血小板など、さまざまな形質タンパク質や細胞を含む流体であり、人体2において複雑な機能を行う。血液との異物の直接接触は、炎症または血栓性合併症および移植後の深刻な問題を引き起こす可能性がある免疫または凝固系の活性化などの副作用を引き起こす可能性があります3,4,5.したがって、in vitroのヘモ適合性検証は、移植前に、異物表面6との血液の接触時に誘発される可能性のある血液学的合併症を検出および排除する機会を提供する。
提示されたフローループモデルは、脳の流れ条件と動脈径を模倣するためにチューブ(直径3.2mmの直径)に150 mL/minの流量を適用することによって神経血管ステントおよび類似の装置の血溶性を評価するために確立された2,7。最適なin vitroモデルの必要性に加えて、血液源は生体材料のヘモ適合性を分析する際に信頼性の高い、不変の結果を得るための重要な要因である8。採取した血液は、長期保存によって生じる変化を防ぐために、サンプリング直後に使用する必要があります。一般に、血液の採取中に血小板および凝固カスケードの事前活性化を最小限に抑えるために、21G針を使用して、スタシスのない血液の穏やかな収集を行う必要があります。さらに、ドナー排除基準には、喫煙、妊娠、健康状態が悪い、または過去14日間に経口避妊薬または鎮痛剤を服用した人が含まれる。
本研究では、フロー条件下でのステントインプラントの広範なヘモ適合性試験のためのインビトロモデルについて説明する。非コーティングとフィブリンヘパリンコーティングステントを比較した場合、包括的なヘモ適合性試験の結果は、フィブリンヘパリンコーティングステント9のヘモ適合性の改善を反映している。対照的に、コーティングされていないステントは、凝固カスケードの活性化を誘導し、トンビンアンチトロンビンIII(TAT)濃度の増加およびステント表面への血小板数の接着による血小板数の損失によって示される。全体的に、この血友適合モデルを前臨床試験として統合することは、装置によって引き起こされる止血システムに対するあらゆる悪影響を検出するために推奨される。
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Protocol
血液採取手順は、火ビンゲン大学の医学部の倫理委員会によって承認されました (プロジェクト識別コード: 270/2010BO1).すべての被験者は、参加前に包含のための書面によるインフォームド・コンセントを提供しました。
1. ヘパリンを積んだモノベットの準備
- 希釈されていないヘパリン(5,000 IU/mL)と塩化ナトリウム(NaCl、0.9%)を混ぜる15 IU/mLのヘパリンの結果濃度の溶液を調製した。
- 各中性モノベット(9 mL)に希釈ヘパリン溶液900μLを加えて、血液サンプリング後に1.5 IU/mLの最終ヘパリン濃度を得る。ドナー1人につき3個のモノベットと3枚のリザーブモノベットを用意し、ヘパリンを積んだモノベットを4°Cで血液サンプリングまで保存します。
2. 血液サンプリング
- 血液サンプリングの30分前に冷蔵庫からヘパリンを積んだモノベットを取り出します。
- フローループの静脈穿刺により、各健常ドナー(n=5)から27mLの血液サンプルを採取する。血小板と血液凝固カスケードの早期活性化を避けるために滑らかな止血帯のみを適用します。
- ヘパリン溶液(1.5 IU/mL)900 μLを含む3つのモノベットで血液サンプルを採取し、3つのモノベットをすべて1つのプラスチック容器にプールして、すべての成分が均等に分配されるようにします。
- プールされたヘパリン化された血液を、EDTA(1.2 mL)、クエン酸(1.4mL)、クエン酸、テオフィリン、アデノシン、ジピリダモレ(CTAD、2.7 mL)のいずれかを含む3つの異なるモノベットに直接移し、ベースライン値を収集する。セクション 5-8 で説明されているように、サンプルを続行します。
注:影響を受けていない凝固行動を保証するために、ドナーは、過去14日以内に止止め薬(例えば、アセチルサリチル酸、ナプロキセン、カルベニシリン)の摂取、経口避妊薬および喫煙を避けるべきである。
3. フローループの準備
- ヘパリンコーティングポリ塩化ビニルチューブを3本カットし、長さ75cm、内径3.2mmで、フィブリンヘパリンコーティングの有無にかかわらず、神経血管レーザーカットインプラントでチューブをロードします。1 つの浴槽をコントロールとしてアンロードしたままにすることを忘れないでください。
- チューブの一方の端を0.9%NaClで満たされた貯水池に置き、チューブをポンプヘッドに接続し、もう一方の端を測定シリンダーに挿入します。
- 測定シリンダーの充填レベルを確認しながらタイマーを使用して、150 mL/minの流量を達成するために蠕動ポンプの設定を調整します。
4. ヘモ互換性テストの性能
- 血液でチューブを充填するために12 mLの注射器を使用してください。6 mLの血流をサンプルまたはアンロードされたコントロールを含む各チューブにスムーズに流れ込ませます。
- 回路を形成し、シリコン接続チューブの長さ0.5cmを使用してチューブをしっかりと閉じます。37°Cの水浴にチューブを入れ、60分間の灌流を開始します。
5. 全血数分析
- サンプリング後(ベースライン)またはEDTAを含むモノベットに灌流した後に1.2mLの血液を入れ、チューブ5xを慎重に反転させます。
- モノベットを血液分析装置に挿入し、すべてのサンプルの血球数分析を行います。次に、セクション7に記載されているように、さらに分析するために、血数測定後15〜60分間氷上のモノベットをインキュベートします。
6. クエン酸プラズマの収集
- クエン酸を含むモノベットを1.4mLの血液(新鮮な血液または循環後)で満たし、慎重に5倍を反転させます。
- 室温(RT)で1,800 x gで18分間チューブを遠心分離します。アリコート 3 つのプラズマ分率の 250 μL サンプルを 1.5 mL 反応チューブに入れ、プラズマサンプルを液体窒素で凍結します。分析まで-20°Cで保管してください。
7. EDTAプラズマの収集
- 血数測定後15~60分間、氷上のモノベットをインキュベートします。次いで、チューブを2,500xg及び4°Cで20分間遠心する。
- 遠心分離後の1.5 mL反応管にプラズマ分率の3つの250 μLサンプルをアリコートし、液体窒素中のチューブを凍結します。分析まで-80°Cで保管してください。
8. CTADプラズマの収集
- CTAD混合物を含むモノベットを2.7mLの血液(新たにまたはインキュベーション後)で満たし、慎重に5倍を反転させます。その後、氷上のモノベットを15~60分間インキュベートします。次いで、チューブを2,500xg及び4°Cで20分間遠心する。
- 中血漿分率700μLを1.5mL反応管に移し、充填された反応管を2,500 x gおよび4°Cで20分間遠心分離します。
- 遠心分離後の1.5 mL反応管に中画の2つの100 μLサンプルをアリコートし、液体窒素でチューブを凍結します。分析まで-20°Cで保管してください。
注:EDTAプラズマとCTADプラズマの収集は、動作条件が同じであるため、一緒に行うことができます。
9. クエン酸プラズマからのヒトTATの測定
- 37°Cの水浴でクエン酸プラズマを解凍します。
- メーカーの指示に従って、TAT酵素結合免疫吸着測定(ELISA)キットをご使用ください。血漿規格を再構築し、洗浄液、抗ヒトTATペルオキシダーゼ(POD)共役抗体、およびクロモゲン溶液を希釈して、洗浄液を制御します。テストを開始する前に、すべての試薬とマイクロタイタープレートをRT(15-25°C)に30分間放置してください。
- サンプルバッファーの 50 μL をマイクロタイタープレートの各ウェルにパイプし、サンプルバッファー (ブランク)、プラズマ標準、プラズマ制御、および希釈されていないプラズマサンプルをウェルプレートに 50 μL 追加します。プレートを密封し、37°Cで15分間、穏やかな揺れでインキュベートします。その後、300μLの洗浄液でプレート3xを洗浄する。
- POD結合抗ヒトTAT抗体を100μLずつ添加します。プレートを密封し、37°Cで15分間、穏やかな揺れでインキュベートします。その後、300μLの洗浄液でプレート3xを洗浄する。
- 作りたてのクロモージェン溶液を100μLずつ加えます。プレートを密封し、RTで30分間インキュベートします。
- シールフィルムを取り外し、各ウェルに100 μLのストップ溶液を追加します。光密度(OD)を490-500 nmのフォトメーターで読み込みます。標準曲線データをトレンドラインとして適合させ、サンプルの濃度を計算します。
10. クエン酸プラズマからのPMN-エラスターゼの測定
- 水浴中のクエン酸プラズマを37°Cで解凍します。
- メーカーの指示に従って多形核(PMN)-エラスターゼELISAキットを使用してください:PMN-エラスターゼコントロールとPMNエラスターゼ標準を再構築し、キットの希釈バッファーを使用して標準曲線を作成します。
- メーカーの説明に従って洗浄液を希釈します。テストを開始する前に、すべての試薬とマイクロタイタープレートをRTに30分間放置してください。クエン酸プラズマサンプルを希釈バッファーで 1:100 に希釈します。
- サンプルバッファー(ブランク)、PMN-エラスターゼ標準曲線(15.6-1,000 ng/mL)、PMN-エラスターゼコントロール(高濃度および低濃度)、希釈された血漿サンプルをウェルプレートに加えます。プレートを密封し、RTで60分間穏やかな揺れでインキュベートします。その後、300 μLの洗浄液でプレート4xを洗浄します。
- 酵素共役抗体を各ウェルに150 μL添加します。プレートを密封し、RTで60分間穏やかな揺れでインキュベートします。その後、300 μLの洗浄液でプレート4xを洗浄します。
- 3,3',5,5'-テトラメチルベンジジン(TMB)基板溶液を各ウェルに200 μL添加します。プレートを密封し、暗闇の中で20分間RTでインキュベートします。次にシールフィルムを取り外し、各ウェルに50μLの停止溶液を加えます。
- 630 nmで参照読み取り値を持つ450 nmのフォトメーターでODを読み取ります。標準曲線データをトレンドラインとして適合させ、サンプルの濃度を計算します。
11. EDTAプラズマからの端子補体複合体(TCC)の測定
- 37°Cの水浴中のEDTAプラズマを解凍し、解凍後に氷の上に保管します。
- 補数カスケード SC5b-9 ELISA キットをメーカーの指示に従って使用します: メーカーのプロトコルに記載されているように洗浄液を希釈します。テストを開始する前に、すべての試薬とマイクロタイタープレートをRTに30分間放置してください。EDTAプラズマサンプルを、キットの希釈バッファーで1:10まで希釈します。
- 300 μLの洗浄液を各ウェルに加えて、2分後に表面を水分補給し、吸引します。
- プレートを密封し、RTで60分間インキュベートします。次に、300 μLの洗浄液でプレート5倍洗います。
- 酵素共役抗体を各ウェルに50μL加えます。プレートを密封し、RTで30分間インキュベートします。その後、プレート5xを300μLの洗浄液で洗浄する。
- TMB基板ソリューションの100 μLを各ウェルに追加します。プレートを密封し、暗闇の中で15分間RTでインキュベートします。
- シールフィルムを取り外し、各ウェルに100 μLの停止溶液を追加します。450 nmで光度計でODを読み取ります。標準曲線データをトレンドラインとして適合させ、サンプルの濃度を計算します。
12. CTADプラズマからのβ-トロンボグロブリンの測定
- CTADプラズマを水浴中で37°Cで解凍します。
- メーカーの指示に従ってβ-トロンボグロブリン(β-TG)ELISAキットを使用してください:β-TGコントロールとβ-TG標準を再構築し、蒸留されたH2Oを使用して洗浄液を希釈し、提供されたリン酸バッファーを使用してPOD共役抗体を再構築します。テストを開始する前に、すべての試薬とマイクロタイタープレートをRTに30分間放置してください。
- 標準曲線と制御は、提供されたリン酸バッファーを使用してメーカーの指示に従って準備します。CTADプラズマサンプルを1:21に希釈します。
- 200 μL のリン酸バッファー(ブランク)、β-TG 標準、β-TG コントロール(高濃度および低濃度)、希釈された血漿サンプルをウェルプレートに重複させます。プレートを密封し、RTで60分間インキュベートし、その後、300 μLの洗浄液でプレートを5倍洗います。
- 各ウェルに酵素共役抗体を200μL加えます。プレートを密封し、RTで60分間インキュベートし、その後、300 μLの洗浄液でプレートを5倍洗います。
- TMB基板ソリューションの200 μLを各ウェルに追加します。プレートを密封し、暗闇の中で5分間RTでインキュベートします。シールフィルムを取り外し、各ウェルに1M硫酸(H2SO4)の50μLを加えて反応を停止します。
- プレートを15~60分間放置し、450 nmのフォトメーターでODを読み取ります。標準曲線データをトレンドラインとして適合させ、サンプルの濃度を計算します。
13. 走査型電子顕微鏡のサンプル調製
- 鉗子を使用してチューブからインプラントを取り出し、インプラントを0.9%NaCl溶液3xに浸して短時間すすいで下さい。
- グルタルアルデヒド溶液(リン酸緩衝生理食塩水中2%グルタルアルデヒド[CA2+/Mg2+なしのPBS緩衝液]を4°Cで一晩保存する。
- 次に、10分間PBSバッファーにインプラントをインキュベートし、それぞれ10分間の濃度を上げるとエタノール中でインキュベートしてサンプルを脱水します:40%、50%、60%、70%、80%、90%、96%、および100%。脱水サンプルを100%エタノールに保存して、さらに分析します。
- 走査型電子顕微鏡(SEM)の直前に乾燥装置または文献10の指示に従って臨界点乾燥を行う。
14. 走査型電子顕微鏡
- 乾燥したインプラントを走査顕微鏡用のサンプルキャリアに取り付け、サンプルを金色のパラジウムでスパッタします。
- スパッタリングされたインプラントをサンプルチャンバーに導入します。代表的な表面と細胞接着を持つ領域の100、500-、1,000倍、2,500倍の倍率で写真を撮ります。
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Representative Results
簡単に要約すると、ヒト全血をヘパリンを積んだモノベットで採取し、細胞数のベースラインレベルと血漿血漿血化適合マーカーを評価するために使用した。
続いて、神経血管インプラント試料を含むチューブを充填し、蠕動ポンプを用いて150mL/minで60分間、37°Cで血液を透過させた。再び、細胞数を全群で分析し、ELISA分析用に血漿サンプルを調製した(図1)。血液細胞および血液パラメータの定量は、ヘモグロビンおよびヘマトクリットなどの、全てのサンプルタイプおよび対照のためのフローループモデルに灌流した後だけでなく、採血後に直接行った。WBCの数(図2A)、RBCs(図2B)、またはヘマトクリット値(図2C)に関する変更は検出されなかった。しかし、フローループ系における血液の灌流による血の灌流に起因するベースライン値と比較した場合、フローループモデルにおける血液のインキュベーション後にヘモグロビン濃度の低下が検出された(図2D)。また、血中灌流による血小板数の減少も認められた。さらに、この効果は、チューブ内に未コーティングステントが存在したときに増加し、生体材料への血小板の接着を示す。それにもかかわらず、フィブリンヘパリンコーティングステントとは対照的に、未コーティングステントを血液でインキュベートした場合、血小板の損失が有意に高いことが明らかに証明された(図2E)。
血液血漿マーカーの潜在的な変化は、灌流後の試験群でも調べ、新たに採られた血液のベースライン値と比較した。凝固系の活性化状態を反映したTAT複合体濃度は、血液灌流のために軽度に増加した(図3A)。しかし、ベアメタルステントグループでは、TATの有意な増加が検出され、凝固系の深い活性化を示す。フィブリンヘパリンコーティングステントは、TATの増加が決定されなかったため、凝固系の活性化を妨げた。
この灌流は、補体カスケードの活性化を増加させ、これはSC5b-9を測定することによって決定した(図3B)。しかしながら、未コーティングまたはフィブリンヘパリンコーティングステントでのインキュベーションは、SC5b−9濃度をさらに増加させなかった。PMN-エラスターゼ濃度の定量を通じて好中球顆粒球の活性化を解析した場合も同様の結果が得られた(図3C)。
ステント表面の可視化は、SEMを用いて行った。未コーティングステントの表面には、血液細胞とタンパク質の密なネットワークが存在する一方で、フィブリンヘパリンコーティングステントの表面にタンパク質や細胞の接着は検出されなかった(図4)。
図1:ステントのヘモ適合性評価の概略的な概要を、十分に確立されたフローループモデルで行った。新鮮な人間の全血は、抗凝固のためのヘパリンを含む血液管中の健康なドナーから収集されます。各ドナーに対して、空のチューブとサンプル材料をプリロードしたチューブは、その後新鮮な血液で満たされ、37°Cで150mL/minの速度でフローループ内で60分間インキュベートされ、さらに、血漿サンプルは、各ドナーのベースライン値を得るために、37°Cで150 mL/minの速度で調製される。インキュベーション後、試験チューブからのプラズマサンプルを、サンプル材料の有無にかかわらず、特定のELISAを用いて調製および分析する。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図2:フローループモデルにおける異なるステントインプラントのインキュベーション前後の異なる細胞型および血液パラメータの分析。白血球(A)、赤血球(B)、ヘマトクリット(C)、ヘモグロビン(D)および血小板(E)の判定を行った。データは平均値 ± SEM (n = 5、p* < 0.5、 p*** < 0.001) として表示されます。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図3:神経血管インプラントによるインキュベーション前後の血小板または免疫系活性化マーカーの決定。血液凝固(TAT)の(A)活性化のためのマーカー、(B)補体系(SC5b-9)、および(C)好中球(PMN-エラスターゼ)をELISAを用いて定量した。分析は、フローループモデルで異なるステントで採取した新しい血液または血液をインキュベートした血漿サンプルに対して行った。データは平均値 ± SEM (n = 5、p* < 0.5) として表示されます。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
図4:血液によるインキュベーション後のステントの走査電子顕微鏡分析未コーティングステント材料上の血漿タンパク質および血小板の凝集が観察された。これに対し、フィブリンヘパリンコーティングを施したステント材料は、表面上の細胞やその他の血液成分の接着(500倍、1,000倍、2,500倍)の接着を示さなかった。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
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Discussion
提示された議定書は人間の血流を模倣するせん断流モデルのISO 10993-4に従って血通しのインプラントのヘモ適合性テストのための包括的で信頼できる方法を記述する。この研究は、レーザーカット神経血管インプラントのテストに基づいていますが、様々なサンプルで行うことができます。この方法により、血球数、いくつかの血性適合マーカーの有病率、および血球接触後のデバイス表面の顕微鏡的可視化などの様々なパラメータの広範な分析が可能であることを実証した。このプロトコルを使用すると、異なるデバイスのヘモ互換性に関する潜在的な違いを検出できます。
in vitroヘモ適合性評価の代替は、生体内動物実験の選択肢であり、組織損傷の圧倒的な短期的効果によるデバイス関連の影響の変動性および歪みが高いなど、いくつかの欠点に関連する6。
インビトロ血体適合性試験では、(1)静的血液インキュベーションモデル、(2)撹拌血液インキュベーションモデル、(3)せん断流モデルの3種類のモデルが利用可能です。静的モデルは、血液で直接装置をインキュベートすることによって血栓形成性を決定する簡単かつ迅速な方法を提供するが、それは血適合性11に関する初歩的な結果をもたらすだけである。静的モデルの主な欠点(すなわち、血液細胞および大きな空気接触面の沈殿)を克服するために、攪拌血液インキュベーションモデルを用いてもよい、インプラントを含む試験室が血液で満たされ、揺動プラットフォーム12上でインキュベートされる。ただし、これらのモデル タイプは、ここで示すフロー ループなどの既存のせん断フロー モデルに比べて劣っています。これらのモデルの真髄は、血管系のヒト血流が模倣され得るということです。したがって、インプラントと血液細胞との間の実際の相互作用の密接な描写は13を表示することができる。フローループモデルに加えて、チャンドラーループや複数のパーフューズドフローチャンバなどのモデルは14、15、16に存在します。
チャンドラーループは、部分的に空気で満たされ、回転装置にクランプされた閉じたチューブシステムであり、チューブ17を通して血液循環をもたらす。本フローループシステムでは、チューブは完全に血液で満たされ、流れは蠕動ポンプを使用して強制されます。チャンドラーループモデルを使用する場合、オペレータはテストチューブに空気を含めるという要件のために2つの大きな欠点に直面します。第1に、血液と空気の一定の相互作用が、白血球および血小板の凝集を引き起こすとともに、タンパク質変性18,19を引き起こすことが知られている。第二に、空気は常にループ20の最高点にとどまるので、血液循環率は限られている。
フローループシステムを使用する場合、これらの欠点を克服できます。システムには空気と液体の界面がないため、血小板活性化は起こりません。したがって、このモデルは血栓性事象の背景が低いため、低濃度の抗凝固剤(通常は1IU/mLまたは1.5 IU/mLのヘパリン)は、高い流量が適用される場合でも凝固を防ぐのに十分である。調節可能なポンプ調節された血流速度および自由に選択可能な管直径は、オペレータが検査されるインプラントに対応する静脈または動脈の生理学的状態を模倣することを可能にし、関連する試験結果21を達成する。しかし、この利点は、同時に制限であり、ポンプを介して血液に与える機械的ストレス、および赤血球の破壊(すなわち、血化)2が起こり得る。この生じる固有の血液損傷は、方法の感受性を低下させ、血液21への長期暴露を妨げる。それにもかかわらず、いくつかの研究は、ヘモ適合性評価22、23、24のためのフローループモデルの有効な使用を実証している。
しかし、すべてのインビトロモデルとin vivoメカニズムの間の主なギャップには、サイトカイン、抗血栓成分、および接着分子を発現する欠けている内皮が含まれる。したがって、このコンポーネントは、インプラントと循環血液25の相互作用において重要な役割を果たす。結論として、フローループモデルは、臨床使用前にインプラントのヘモ適合性を評価するために、調整可能、効率的、信頼性、費用対効果が高い。
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Disclosures
著者らは開示するものは何もない。
Acknowledgments
走査型電子顕微鏡の性能については、大学病院テュービンゲンの医学材料科学技術部門のエルンスト・シュヴァイツァーに感謝します。研究は、国家持続可能性プログラムII(プロジェクトBIOCEV-FAR LQ1604)内のCRの教育・青少年・スポーツ省とチェコ科学財団プロジェクト第18-01163Sによって支援されました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| aqua ad iniectabilia | Fresenius-Kabi, Bad-Homburg, Germany | 1088813 | |
| beta-TG ELISA | Diagnostica Stago, Duesseldorf, Germany | 00950 | |
| Centrifuge Rotana 460 R | Andreas Hettich, Tuttlingen, Germany | - | |
| Citrat monovettes (1.4 mL) | Sarstedt, Nümbrecht, Germany | 6,16,68,001 | |
| CTAD monovettes (2.7 mL) | BD Biosciences, Heidelberg, Germany | 367562 | |
| EDTA monovettes (1.2 mL) | Sarstedt, Nümbrecht, Germany | 6,16,62,001 | |
| Ethanol p.A. (1000 mL) | AppliChem, Darmstadt, Germany | 1,31,08,61,611 | |
| Glutaraldehyde (25 % in water) | SERVA Electrophoresis, Heidelberg, Germany | 23114.01 | |
| Heparin coating for tubes | Ension, Pittsburgh, USA | - | |
| Heparin-Natrium (25.000 IE/ 5 mL) | LEO Pharma, Neu-Isenburg, Germany | PZN 15261203 | |
| Multiplate Reader Mithras LB 940 | Berthold, Bad Wildbad, Germany | - | |
| NaCl 0,9% | Fresenius-Kabi, Bad-Homburg, Germany | 1312813 | |
| Neutral monovettes (9 mL) | Sarstedt, Nümbrecht, Germany | 2,10,63,001 | |
| PBS buffer (w/o Ca2+/Mg2+) | Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany | 70011044 | |
| Peristaltic pump ISM444B | Cole Parmer, Wertheim, Germany | 3475 | |
| Pipette (100 µL) | Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Germany | 3124000075 | |
| Pipette (1000 µL) | Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Germany | 3123000063 | |
| Plastic container (100 mL) | Sarstedt, Nümbrecht, Germany | 7,55,62,300 | |
| PMN-Elastase ELISA | Demeditec Diagnostics, Kiel Germany | DEH3311 | |
| Polyvinyl chloride tube | Saint-Gobain Performance Plastics Inc., Courbevoie France | - | |
| Reaction Tubes (1.5 mL) | Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Germany | 30123328 | |
| neurovascular laser-cut implants | Acandis GmbH, Pforzheim | 01-0011x | |
| SC5b-9 ELISA | TECOmedical, Buende, Germany | A029 | |
| Scanning electron microscope | Cambridge Instruments, Cambridge, UK | - | |
| Sealing tape (96 well plate) | Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Germany | 15036 | |
| Syringe 10/12 mL Norm-Ject | Henke-Sass-Wolf, Tuttlingen, Germany | 10080010 | |
| TAT micro kit | Siemens Healthcare, Marburg, Germany | OWMG15 | |
| Waterbath Type 1083 | Gesellschaft für Labortechnik, Burgwedel, Germany | - |
References
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