Summary
本作品描述了磁性纳米粒子制备的协议，其涂层与SiO2，其次是其胺功能与（3-氨基丙酮）三氧西烷（APTES）及其与递延莫沙胺的结合使用苏基尼莫西作为链接器。还详细介绍了对所有中间纳米粒子和最终偶联物使用Y.肠菌学的深层结构表征描述和捕获细菌测定。
Abstract
在目前的工作中，用SiO2合成磁性纳米粒子，其胺功能化（3-氨基丙酮）三氧西烷（APTES），并结合延高胺，这是Yersinia肠科利质识别的侧发，使用成功素菌作为链接器。
磁铁矿的磁性纳米粒子（Fe3O4）采用溶质法制备，并使用Stüre工艺涂覆SiO 2（MNP@SiO2），然后使用APTES（MNP@SiO2@NH2）进行功能化。22 22然后，用卡博迪米德联轴器将费氧胺与MNP@SiO2@NH2并联，使2MNP@SiO2@NH2@Fa。2通过八种不同的方法，包括粉末X射线衍射（XRD）、傅立叶变换红外光谱（FT-IR）、拉曼光谱学、X射线光电子光谱（XPS）、传输电子显微镜（TEM）和能量分散X射线（EDX）映射等八种不同方法，对偶联和中间体的形态和特性进行了研究。这种详尽的描述证实了结合的形成。最后，为了评估纳米粒子的容量和特异性，他们使用耶尔西尼亚肠科利塔在捕获细菌测定中进行了测试。
Introduction
使用MNP的细菌检测方法基于致病菌1结合MNP的抗体、分枝剂、生物蛋白、碳水化合物的分子识别。考虑到侧肢被细菌外膜上的特定受体识别，它们也可以与MNP相关，以增加它们的特异性2。侧肢是小有机分子参与Fe3+ 被细菌3，44的获取。副体和MNP之间的结合物的制备，以及它们对细菌捕获和分离的评估，尚未报告。
将磁性纳米粒子与小分子结合合成的关键步骤之一是选择它们之间的键或相互作用类型，以确保小分子附着在MNP表面。因此，在磁性纳米粒子和费洛沙胺（Yersinia肠原体识别的侧发）之间制备结合的过程集中在MNP可修改表面的生成上，以便通过carbodiimide化学将其与侧光体均匀地连接。为了获得均匀的磁铁矿纳米粒子（MNP），并改进核化和尺寸控制，用苯基醇进行溶酶反应，在不晃动5的情况下在热块中进行。然后，用Stüber方法生成了二氧化硅涂层，以提供保护，提高水介质6中纳米粒子悬浮液的稳定性。考虑到铁氧胺的结构，引入胺组是产生合适的纳米粒子（MNP@SiO2@NH2）与侧磷结合所必需的。2这是通过冷凝（3-氨基丙基）三氧西烷（APTES）与酒精组存在于硅改性纳米粒子的表面（MNP@SiO2）使用sol-凝胶方法7。
同时，铁氧西胺铁（III）复合物是通过在水溶液中用乙酰乙酰醋酸铁进行商业上可用的递延胺复式制备的。NN-succinylferoxamine，轴承的苏基尼组，将起到链接，是通过铁氧胺与琥珀性氢化物的反应获得的。
MNP@SiO2@NH2和N-succinylferoxamine的结合，使 MNP@SiO2@NH–Fa 通过作为耦合试剂苯甲酸酮-1-yl-oxy-tris-（di） 的 carbodiimide 化学进行 磷酸二氟磷酸（BOP）和1-羟基苯甲酸酯（HOBt）在软的基本介质中激活N-苏基苯甲胺8中的终端酸组。
一旦MNPs被定性，我们评估了裸露和功能化磁性纳米粒子捕获野生类型（WC-A）和缺乏铁氧西胺受体FoxA（FoxA WC-A 12-8）的突变体的能力。普通议员、功能化的MN和2@NH和FaMNP@SiO允许与每个Y.肠胆菌菌株相互作用。细菌结合骨料通过磁场的应用从细菌悬浮液中分离出来。分离的骨料用磷酸盐缓冲盐水（PBS）冲洗两次，重新悬浮在PBS中准备连续稀释，然后镀上聚落计数。该协议演示了MNP@SiO2@NH@Fa合成的每一个步骤，所有中间体和偶联物的结构特征，以及细菌捕获测定法，作为评估偶联物相对于中间体的特异性的简便方法。9
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Protocol
注：对于在惰性大气条件下进行的反应，所有玻璃器皿以前在烤箱中干燥65°C，用橡胶隔膜密封，用气处理三次清洗。
1. 与铁氧胺结合的磁性纳米粒子的合成
- 铁3O4磁性纳米粒子（MNPs）的合成
- 在20 mL玻璃瓶中加入0.5克Fe（acac）3，然后与10 mL的苯基酒精混合。3
- 将这种混合物声波2分钟，然后转移到加热块，并在180°C加热72小时。
- 反应完成后，让小瓶冷却，用96%乙醇冲洗纳米颗粒，在4000 x g下用离心机冲洗30分钟。重复离心至少两次。
- 使用钛（NdFeB）磁铁通过磁吸引将纳米粒子与上清器分离，并丢弃残留溶剂。
- 用 96% 乙醇重复步骤 1.1.4 冲洗。在 40 kHz 的浴缸中丢弃超清液与声波交替 1 分钟，直到溶剂看起来清晰。
- 磁性纳米粒子 SiO2涂层 （MNP@SiO2）
- 在80 mL异丙醇中制备2克MNP的悬浮液，然后在带有磁性搅拌棒的圆形底部烧瓶中加入4 mL的21%氨、7.5mL蒸馏水和0.56 mL的四乙酰正交硅酸盐（按此顺序）。
- 在40°C下加热混合物2小时，连续搅拌，然后声波1小时。
- 用磁铁分离MNP，丢弃上清液，并将其分散在30 mL的异丙醇中。
- 重复步骤 1.2.1。和1.2.2。
- 用96%乙醇取出并清洗磁搅拌棒，以回收所有材料。
- 使用磁铁通过磁吸引将纳米粒子与上光体分离。
- 丢弃上清液，用96%乙醇冲洗纳米颗粒三次与声波交替。
- 在室温下真空下干燥纳米颗粒 12 小时。
- MNP@SiO2的功能化（3-氨基丙酮）三氧西烷 （APTES）
- 在惰性环境中用N，N-二甲基酰胺（DMF）冲洗500毫克的MNP@SiO2，然后在40 kHz下声波1分钟。然后，丢弃上清液并重复此过程三次。
- 用磁性搅拌棒重新悬浮在圆形底部烧瓶中的颗粒，然后加入 9 mL 的 APTES。
- 在 60°C 下搅拌混合物 12 小时。
- 丢弃上清液，用96%乙醇冲洗纳米颗粒三次与声波交替。
- 铁氧西胺的合成
- 溶解100毫克（0.15 mmol）的顺氧胺美化盐和53.0毫克（0.15mmol）的Fe（acac）3在35 mL蒸馏水中，并在室温下搅拌混合物过夜。
- 在分离漏斗中用 20 mL EtOAc 清洗结果产品三次，然后使用旋转蒸发器在真空下去除有机溶剂。
- 冷冻干燥水相，以承受铁氧胺作为红色固体。
- N-苏基尼费洛沙胺的合成
- 在惰性气氛下50mL的圆形底瓶中，在50mL的血脂素中加入350毫克（3.50 mmol）的琥珀化氢化物溶液中，溶液中100毫克（0.17毫摩尔）的铁氧西胺。
- 在室温下搅拌产生的混合物 16 小时。之后，在旋转蒸发器中去除减压下多余的丙丁，以产生深红色固体。
- 将反应原油溶解在3 mL甲醇中。
- 将甲醇溶液转移到 Sephadex 柱中（20 厘米的 Sephadex，直径为 20 mm 柱），以 0.5 mL/min 的速度进行洗脱。
- 收集红色馏分，并使用旋转蒸发器在真空下去除甲醇。
- 共聚物综合MNP@SiO2@NH@Fa
- 用 DMF 冲洗 30 毫克干MNP@SiO2@NH2两次，并在 100 mL Erlenmeyer 烧瓶中声波纳米颗粒 30 分钟， 在惰性环境中。
- 制备N-苏基尼费洛沙胺（200毫克，0.30毫克），苯甲酸酮-1-yl-oxy-tris-（二甲基氨基）-磷六氟磷酸磷（BOP， 173毫克，0.45毫摩尔），1-羟基苯甲酸酯醇（HOBt，46毫克，0.39毫摩尔）和N，N-二糖丙胺（DIPEA，128.8毫克，1.21毫摩尔）在10 mL的DMF（Mix A）在50mL圆形底部瓶下惰性气氛。 N
- 使用气态气体大气 （Mix B） 在无氧条件下干燥下，暂停先前冲洗MNP@SiO2@NH2在 3 mL DMF 的蒸馏下。
- 添加混合 A 以按滴下混合 B。
- 在室温下，使用轨道振动器摇动最终混合物过夜。
- 使用磁铁将产生的偶联（MNP@SiO2@NH@Fa）与悬架分开。
- 冲洗所得固体，然后用10mL乙醇将其声波5次。
- 在真空下干燥固体 24 小时。
2. 用Y.肠杆菌菌株进行细菌测定，以量化用纳米颗粒捕获致病菌
- 在无菌2 mL管中，以1mg/mL的速度制备所有中间纳米颗粒的悬浮液和PBS中最后的结合物。
- 在Luria Bertani （LB） 肉汤的 5 mL 中制备Y. 肠科利质培养，在 37 °C 下通宵孵育。
- 通过加入50 μL的10 mM 2，2°-双皮质，制备5 mL缺铁锥性大豆汤（TSB）。
- 用50μL的Y.肠科利质通宵培养剂对5 mL缺铁TSB进行接种，然后用搅拌在37°C孵育，直到达到OD600 = 0.5\u20120.8。
- 取100 μL的培养在步骤2.4中获得，并稀释在含有900μLPBS的2.0 mL管中，以获得第一次1/10稀释。然后，使用相同的程序从第一次稀释中制备1/100稀释，使细菌细胞浓度在1 x 106殖民地形成单位（CFU）/mL左右。
- 在2.0 mL管中加入100 μL的纳米颗粒悬浮液，在1mg/mL至1/100稀释细菌悬浮液的1/100mL中加入，并与涡旋均匀化。
- 在20°C下孵育培养1小时。
- 使用磁铁分离 MNP/细菌聚合，并小心地丢弃上清液。
- 使用旋涡使用 1 mL PBS 冲洗分离的纳米粒子两次。
- 将纳米粒子悬浮在 1 mL PBS 中，以计数 CFU/mL 中的细菌捕获量。
- 准备四个连续的1/10稀释从以前的暂停，直到1 x 10-4稀释达到。
- 板 10 μL 的每个稀释剂到 TS agar 板上，并在 37 °C 下孵育过夜。
- 在分白模式下用凝胶数字化器拍摄板。使用适当的软件处理图像以放大点以计数单个殖民地的数量。
注：每个MNP中间体的特点是跟踪合成的进度。首先，XRD研究了裸奔，以检查晶体结构。然后，运行每个中间体的FT-IR频谱，以检查相应反应中发生的变化。还对每种中间体进行了拉曼光谱分析，以确认从FT-IR光谱中推断出的结论。TGA分析使我们能够估计其结构中带有有机材料的中间体的损耗重量。TEM研究了每种中间体的形态和大小。最后，XPS分析对于确定每个MNP中间表面的原子氧化状态和确认偶聚MNP@SiO2@NH@Fa中的共价键形成至关重要。
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Representative Results
进行了详尽的结构表征，以确定每个中间体和最终共聚体的形态和性质。为此，使用XRD、FT-IR、拉曼光谱、TGA、TEM、EDX映射和XPS技术来演示结合的形成。X射线光电子光谱（XPS）获得的纳米粒子表面原子的氧化状态是确认纳米粒子与侧视之间共价键形成的最相关数据。与这些结果一致，此协议是可重现的。
裸MNP、功能化的MN和结合体与PBS溶液中每个Y.肠科利质菌株混合。细菌-MNPs 聚合体使用磁铁从悬浮液中分离出来。使用 PBS 对聚合进行两次稀释后，它们被重新悬浮在 PBS 中，以准备用于聚落计数的序列稀释。
使用此协议制备的中间体和最终结合物被提交给几种技术，以显示合成每个步骤中发生的更改。红外光谱和拉曼光谱是监测合成每个步骤的一种简单快捷的方法。与Si-O、C-Si-C、Fe-O、O+C中层振动、FT-IR和拉曼（见下文）光谱中的O_C-N羟基酸振动相对应的特征带的存在是合成每一步中磁性纳米粒子表面发生的化学变化的第一个指标。
XRD衍射图
图 1显示了与 JCPDS 文件 00-003-0863 相比，用于确认磁铁矿合成磁性纳米粒子 （MNP） 的组成和晶体结构的 XRD 分析。
TEM 分析
图2C显示与（111）、（220）、（311）、（400）、（422）、（511）和（440）磁石的衍射平面相对应的磁石衍射平面的亮点，分别对应4.9、2.9、2.4、2.0、1.7、1.6和1.4°。另一方面，图2D和图4E显示了MNP@SiO2@NH2@Fa的TEM2图像，对应于嵌入在无定形无机有机材料中的分散的MNP颗粒（±10 nm）。涂层厚度超过±10 nm。
EDX 分析
EDX 贴图显示曲面上元素 Fe、O、Si 和 C 的分布。图3A清楚地显示了si在MNP@SiO2表面的存在。在胺功能化和与铁氧西胺结合后，图3B中显示了MNP@SiO2@NH@Fa纳米粒子表面C的增量，作为成功结合的证据。
红外分析
图4显示了裸MNP的FTIR光谱，MNP@SiO2，MNP@SiO2@NH2和MNP@SiO2@NH@Fa。22所有 FTIR 光谱均显示与 Fe+O 振动相关的 600 厘米-1分析光谱范围内波段的开头。在MNP@SiO2、MNP@SiO2@NH2和 MNP@SiO @NH@Fa2的 FTIR 光谱中，1050 厘米-1的宽带（归因于 Si-O-Si 拉伸振动）的宽带证实了二氧化硅涂层。
FTIR 频谱MNP@SiO2 （图 4） 显示 830 和 1275 cm-1 （Si-O 键）之间的宽带;它在FTIR频谱的APTESMNP@SiO2@NH2的化功能化后变得更加强烈，这可能是2由于Si-C键（预计在1175至1250厘米-1之间）。最后，在FTIR光谱中观察到的2995厘米-1（C-H拉伸键）、1640厘米-1（O+C-NH内部II振动）和1577厘米-1（O+C-N羟基酸振动）的带子MNP@SiO2@NH@Fa证实了铁氧胺与纳米粒子10的结合。-1
热重力分析
热重力测量数据如图5所示，它显示了有机物质和水的加入造成的体重减轻。
拉曼分析
裸MNP的二氧化硅涂层和功能化也通过拉曼分析每个中间和MNP@SiO2@NH@Fa（图6）。所有拉曼光谱显示峰值为305.8，537.2和665.6厘米-1，对应于Fe-O振动（图6A）11，和一个肩膀在峰值在713.5厘米11-1，与Si-O-Si振动（图6B）12。12APTES功能化后，拉曼光谱MNP@SiO2@NH2显示21001.5和1027.4厘米-1的密集峰值，对应于SiO2的存在，在1578.6和1597.9厘米-1，确认形成Si-C债券。此外，峰值肩部在703.0厘米-1的存在也证实了APTES的存在（图6C）13，14。13,14最后，1490至1700cm-1之间的宽峰（中心位于 +1581 cm-1），对应于MNP@SiO2@NH@Fa拉曼光谱中的 Si-C 键和内层组，与共聚（图 6D）1414的形成一致。
XPS 分析
通过XPS分析对表面原子氧化状态的研究，证实了结构中的键形成。图 7显示了裸露和不同功能化的 MN 的 XPS 光谱。对于 MNP，C1 中的窄峰可能是由于合成过程中处理样品时的杂质造成的。在MNP@SiO2@NH2和MNP@SiO2@NH@Fa光谱中，碳的引入被观察为C-C和C-H键。2N1光谱中399 eV的峰值分析及其在2@NH@FaMNP@SiO观测到的衰减证实了MNP@SiO2@NH2和费氧西胺之间的中间层键的形成。2此外，羟基环比的N-O键的存在与402 eV的峰值存在一致。在所有中间体中，Si2p窄光谱中102 eV的峰值与硅氧烷组15、16,16的结合能量一致。
Z 电位
Z 势值显示在表 1中。结果分别为负数-25.21和-29.35 mV，分别为MNP和MNP@SiO2。APTES 功能化，使 MNP@SiO2@NH2将表面电荷从负变为正数。这一事实归因于胺类，MNP@SiO2@NH@Fa的表面电荷仍为正数。正表面Z电位可以解释细菌（其表面为负）和偶联17，18，1918,19之间的相互作用。17
细菌捕获测定
使用MNP中间体和MNP@SiO2@NH@Fa捕获的Y.肠菌WC-A和FoxA WC-A12-8细胞数量在分离和容易可视化的稀释中进行了量化。裸MNP@SiO2和 MNP@SiO 2 @NH22捕获的单元格数显示它们之间没有显著差异（图 8）。MNP@SiO2@NH2中的释放胺群引起的静电力，以及细菌2中铁氧西胺膜受体的低浓度，可能证明缺乏预期的结合特异性是合理的。
该协议可应用于不同类型的偶联物的合成，主要是使用卡博迪米德化学的。它用途广泛，可以引入修改，以便获得更好的结果。所有中间体的完全表征和最终结合，使用所述技术，允许一个人遵循合成的每一步，并确认欲望键的形成。细菌捕获测定中的菌落计数，使用 10 μL 滴，允许一个人在一个板中同时测试所有样品，从而更容易在不同条件下进行复制和执行测定。
图1：MNP（Fe3O4）（紫色）和磁铁矿图案（黑色）衍射图的比较。
这个数字是从马丁内斯-马塔莫罗斯等人修改的。请点击此处查看此图形的较大版本。
图2：裸MNP（A、B和C）和MNP@SiO2@NH@Fa（D、E和F）的明亮2场TEM和电子衍射图像。
图像处于中分辨率和高分辨率。这个数字是从马丁内斯-马塔莫罗斯等人修改的。请点击此处查看此图形的较大版本。
图3：MNP@SiO2的EDX2地图：HAADF图像和相应的Fe、Si、O和C映射的A.MNP@SiO22和B.MNP@SiO2@NH@Fa。2
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图4：裸铁氧化物的FT-IR光谱（Fe3O4）MNP，MNP@SiO2，MNP@SiO2@NH22和2MNP@SiO2@NH@Fa（4）。2
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图5：MNP的热重力分析，MNP@SiO2@NH2，MNP@SiO2@NH@Fa。222
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图6：裸铁氧化物的拉曼光谱（Fe3O4） MNP （A）、MNP@SiO2 （B）、MNP@SiO2@NH2 （C） 和 MNP@SiO2@NH@Fa （D）。
(*)APTES，（*）其他氧化铁相，可能是由激光功率转化磁铁矿而形成的。这个数字是从马丁内斯-马塔莫罗斯等人修改的。请点击此处查看此图形的较大版本。
图 7：MNP 的 XPS 窄光谱，MNP@SiO2@NH2和 MNP@SiO2@NH@Fa。这个数字是从马丁内斯-马塔莫罗斯等人修改的。请点击此处查看此图形的较大版本。
图8：每100微克磁性纳米粒子捕获的Y.肠大肠杆菌的CFU：裸露，MNP@SiO2，MNP@SiO2@NH2，MNP@SiO2@NH@Fa。2222
（A） WC-A （野生类型）（B）FoxA WC-A 12-8 （突变缺乏铁氧胺受体 FoxA） 和 SEM 图像MNP@SiO2@NH@Fa与Y. 肠内侧相互作用.这个数字是从马丁内斯-马塔莫罗斯等人修改的。请点击此处查看此图形的较大版本。
| 样品 | Z 电位 |
| MNP | -25.21 |
| MNP@SiO2 | -29.35 |
| MNP@SiO2@NH2 | 17.03 |
| MNP@SiO2@NH@Fa | 22.14 |
| MNP@SiO2@NHBoc@Fa | 19.16 |
| MNP@SiO2@NHCOOH@Fa | 10.96 |
表 1：Z 电位测量。这张表格是从马丁内斯-马塔莫罗斯等人那里获得的。
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Discussion
该协议描述了通过共价粘合合成磁性纳米粒子和侧磷铁氧胺的偶联。磁石的合成是使用Pinna等人5号报告的协议，然后是二氧化硅涂层，以保护水系统中腐蚀的磁芯，尽量减少聚集，并为功能化提供合适的表面。对二氧化硅涂层工艺进行了修改。而不是执行三个涂层，如李等人6报告，MNPs在这种方法中涂有两层二氧化硅层（图2D），这足以继续APTES7的功能化步骤。
递诺多胺与铁 （III） 复合，因为它在室温下几个小时内容易降解。获得铁复合物的最佳方法是使用乙酰醋酸铁，因为它通过液体萃取纯化非常简单，并且铁氧西胺在定量产量中得到。费洛沙胺是稳定的，可以修改，使N-succinylferoxamine使用琥珀酸化剂添加终端酸性组作为链接剂。 N通过大小排除色谱法纯化允许从N-succinylferoxa胺中去除多余的琥珀N化剂和琥珀酸。
胺纳米复合材料用于将N-succinylferoxamine均匀地连接在表面上。 N由于氧化铁的顺磁行为，核磁共振（NMR）不能用于产品的结构阐明。因此，每个反应步骤都由FT-IR监控，然后由拉曼光谱仪确认。峰值的去卷和拟合是使用方便的软件，考虑到拉曼光谱包括10个测量300s，总测量时间为3000s。 形态和大小由TEM观察同质大小分布为10nm的伪球形磁铁矿（图2A，B）测量。B偶联涂层厚度测量值显示 10 nm 均质层（图 2D，E）。
由于纳米粒子的磁性和聚集倾向，因此很难获得一个可以单独观测的TEM场。EDX 映射用于获取有关曲面上每个元素的组成的信息（图 3A）。与中间MNP@SiO2相比，在偶联MNP@SiO2@NH+Fa（图3B）中碳密度明显增加。@
细菌捕获测定是为了测试结合体通过铁氧辛胺外膜蛋白受体捕获细菌的能力而设计的。耶尔西尼亚肠内科蒂卡WC-A菌株被选中，因为它表示FoxA铁氧西胺受体，并且易于生长。此过程的关键步骤是去除未捕获的细菌。这是通过用无菌PBS进行两次的排干和涡旋来实现的，然后用磁铁回收细菌结合骨料。用作对照的MNP中间体和2@NH@Fa的MNP@SiO结合体所捕获的细胞数量是由稀释方法的聚体计数决定的。与传统的斑块计数菌落方法相比，使用10 μL滴有助于实验过程，并允许处理4个以上样品，在时间和材料方面降低测试成本。
MNP@SiO2@NH@Fa结合合成的最重要限制是，不可能通过NMR确认粘结形成。虽然MNP@SiO2@NH@Fa的准备似乎很简单，但使用结构表征技术对于通过共价键确认侧毛和MNP之间的联系至关重要。
按照本协议，可以使用卡博迪米德化学产生偶联。为了实现这一目标，有必要在MNPs表面存在氨基酸组，并在感兴趣的化合物中具有碳水化合物功能。测试不同的链接器，并与其他功能组一起涂覆MNPs表面，以避免对它产生正电荷，可以改善细菌捕获歧视。
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Disclosures
我们没有什么可透露的。
Acknowledgments
作者感激地感谢克劳斯·汉特克教授（德国蒂宾根大学）为这项工作中使用的叶尔西尼亚肠内侧菌株提供友好供应。这项工作得到了西班牙国家研究局（AEI）提供的AGL2015-63740-C2-1/2-R和RTI2018-093634-B-C21/C22（欧盟AEI/FEDER）的资助，由欧洲联盟的FEDER方案共同资助。圣地亚哥大学、科鲁尼亚大学的工作也得到了来自恩塔-德加利西亚的GRC2018/018、GRC2018/039和ED431E 2018/03（CICA-INIBIC战略小组）的资助。最后，我们要感谢努里亚卡尔沃为她所做的出色的合作，做了这个视频协议的语音关闭。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1-Hydroxybenzotriazole hydrate HOBT |
Acros | 300561000 | |
| 2,2′-Bipyridyl | Sigma Aldrich | D216305 | |
| 3-Aminopropyltriethoxysilane 99% | Acros | 151081000 | |
| Ammonium hydroxide solution 28% NH3 | Sigma Aldrich | 338818 | |
| Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)-phosphonium hexafluorophosphate BOP Reagent | Acros | 209800050 | |
| Benzyl alcohol | Sigma Aldrich | 822259 | |
| Deferoxamine mesylate salt >92,5% (TLC) | Sigma Aldrich | D9533 | |
| Ethanol, anhydrous, 96% | Panreac | 131085 | |
| Ethyl Acetate, Extra Pure, SLR, Fisher Chemical | |||
| Iron(III) acetylacetonate 97% | Sigma Aldrich | F300 | |
| LB Broth (Lennox) | Sigma Aldrich | L3022 | |
| N,N-Diisopropylethylamine, 99.5+%, AcroSeal | Acros | 459591000 | |
| N,N-Dimethylformamide, 99.8%, Extra Dry, AcroSeal | Acros | 326871000 | |
| Pyridine, 99.5%, Extra Dry, AcroSeal | Acros | 339421000 | |
| Sephadex LH-20 | Sigma Aldrich | LH20100 | |
| Succinic anhydride >99% | Sigma Aldrich | 239690 | |
| Tetraethyl orthosolicate >99,0% | Sigma Aldrich | 86578 |
References
- Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2912-2942 (2012).
- Zheng, T., Nolan, E. M. Siderophore-based detection of Fe(III) and microbial pathogens. Metallomics. 4, 866-880 (2012).
- Hider, R. C., Kong, X. Chemistry and biology of siderophores. Natural Product Reports. 27 (5), 637-657 (2010).
- Sandy, M., Butler, A. Microbial Iron Acquisition: Marine and Terrestrial Siderophores. Chemical Reviews. 109 (10), 4580-4595 (2010).
- Pinna, N., Grancharov, S., Beato, P., Bonville, P., Antonietti, M., Niederberger, M. Magnetite Nanocrystals : Nonaqueous Synthesis, Characterization. Chemistry of Materials. 17 (15), 3044-3049 (2005).
- Li, Y. S., Church, J. S., Woodhead, A. L., Moussa, F. Preparation and characterization of silica coated iron oxide magnetic nano-particles. Spectrochimica Acta - Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. 76 (5), 484-489 (2010).
- Chen, J. P., Yang, P. C., Ma, Y. H., Tu, S. J., Lu, Y. J. Targeted delivery of tissue plasminogen activator by binding to silica-coated magnetic nanoparticle. International Journal of Nanomedicine. 7, 5137-5149 (2012).
- El-Boubbou, K., Gruden, C., Huang, X. Magnetic glyco-nanoparticles: a unique tool for rapid pathogen detection, decontamination, and strain differentiation. Journal of the American Chemical Society. 129 (44), 13392-13393 (2007).
- Martínez-Matamoros, D., et al. Preparation of functionalized magnetic nanoparticles conjugated with feroxamine and their evaluation for pathogen detection. RSC Advances. 9 (24), 13533-13542 (2019).
- Cozar, O., et al. Raman and surface-enhanced Raman study of desferrioxamine B and its Fe(III) complex, ferrioxamine B. Journal of Molecular Structure. 788 (1-3), 1-6 (2006).
- Shebanova, O. N., Lazor, P. Characterisation of a-C:H and oxygen-containing Si:C:H films by Raman spectroscopy and XPS. Journal of Solid State Chemistry. 174 (4), 424-430 (2003).
- González, P., Serra, J., Liste, S., Chiussi, S., León, B., Pérez-Amor, M. Raman spectroscopic study of bioactive silica based glasses. Journal of Non-Crystalline Solids. 320 (12), 92-99 (2003).
- Veres, M., et al. Characterisation of a-C:H and oxygen-containing Si:C:H films by Raman spectroscopy and XPS. Diamond and Related Materials. 14 (3-7), 1051-1056 (2005).
- You, Y., et al. Visualization and investigation of Si-C covalent bonding of single carbon nanotube grown on silicon substrate. Applied Physics Letters. 93 (10), 103111-103113 (2008).
- Graf, N., et al. XPS and NEXAFS studies of aliphatic and aromatic amine species on functionalized surfaces. Surface Science. 603 (18), 2849-2860 (2009).
- Michaeli, W., Blomfield, C. J., Short, R. D., Jones, F. R., Alexander, M. R. A study of HMDSO/O2 plasma deposits using a high-sensitivity and -energy resolution XPS instrument: curve fitting of the Si 2p core level. Applied Surface Science. 137 (1-4), 179-183 (2002).
- Liana, A. E., Marquis, C. P., Gunawan, C., Gooding, J. J., Amal, R. T4 bacteriophage conjugated magnetic particles for E. coli capturing: Influence of bacteriophage loading, temperature and tryptone. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 151, 47-57 (2017).
- Fang, W., Han, C., Zhang, H., Wei, W., Liu, R., Shen, Y. Preparation of amino-functionalized magnetic nanoparticles for enhancement of bacterial capture efficiency. RSC Advances. 6, 67875-67882 (2016).
- Zhan, S., et al. Efficient removal of pathogenic bacteria and viruses by multifunctional amine-modified magnetic nanoparticles. Journal of Hazardous Materials. 274, 115-123 (2014).
