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Neuroscience

एक चूहे के मॉडल में प्रायोगिक सबरैक्नॉइड रक्तस्राव को प्रेरित करने के लिए ऑटोलॉगस रक्त का प्री-चियास्मेटिक, एकल इंजेक्शन

Published: June 18, 2021 doi: 10.3791/62567
Automatic Translation
1,2, 2, 2,4, 1,3,5, 2
1Department of Neurosurgery, Rigshospitalet, 2Department of Clinical Experimental Research, Glostrup Research Institute, Rigshospitalet, 3Department of Clinical Medicine, University of Copenhagen, 4Department of Clinical Sciences, Division of Experimental Vascular Research, Lund University, 5Department of Clinical Neuroscience, Karolinska Institutet

Summary

सबरैक्नॉइड रक्तस्राव मनुष्य में मृत्यु दर और रुग्णता का एक उच्च बोझ उठाता रहता है। स्थिति और इसके पैथोफिज़ियोलॉजी में आगे के शोध की सुविधा के लिए, एक पूर्व-चियास्मेटिक, एकल इंजेक्शन मॉडल प्रस्तुत किया गया है।

Abstract

पिछले दशकों में उपचार में प्रगति के बावजूद, सबरैक्नॉइड हेमरेज (एसएएच) रुग्णता और मृत्यु दर का एक उच्च बोझ उठाता है, जो बड़े पैमाने पर काफी युवा आबादी को प्रभावित करता है। एसएएच के पीछे पैथोफिजियोलॉजिकल तंत्र की जांच करने और औषधीय हस्तक्षेप का परीक्षण करने के लिए एसएएच के कई पशु मॉडल विकसित किए गए हैं। इस लेख में प्रस्तुत चूहे में पूर्व-चियास्मेटिक, एकल इंजेक्शन मॉडल एक पूर्व निर्धारित रक्त की मात्रा के साथ एसएएच का एक प्रयोगात्मक मॉडल है। संक्षेप में, जानवर को एनेस्थेटाइज किया जाता है, इंट्यूबेटेड किया जाता है, और यांत्रिक वेंटिलेशन के तहत रखा जाता है। तापमान को हीटिंग पैड के साथ नियंत्रित किया जाता है। पूंछ की धमनी में एक कैथेटर रखा जाता है, जिससे निरंतर रक्तचाप माप के साथ-साथ रक्त का नमूना भी लिया जा सकता है। एटलांटोसीसीपिटल झिल्ली को इंजेक्ट किया जाता है और इंट्रासेरेब्रल दबाव माप को सक्षम करने के लिए सिस्टर्ना मैग्ना में दबाव रिकॉर्डिंग के लिए एक कैथेटर रखा जाता है। इस कैथेटर का उपयोग इंट्राथेकल चिकित्सीय हस्तक्षेप के लिए भी किया जा सकता है। चूहे को एक स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम में रखा जाता है, एक छेद को ब्रेग्मा के पूर्व में ड्रिल किया जाता है, और एक कैथेटर को छेद के माध्यम से डाला जाता है और ऑप्टिक चियासम के ठीक पहले रखा जाता है। ऑटोलॉगस रक्त (0.3 एमएल) को पूंछ कैथेटर से वापस ले लिया जाता है और मैन्युअल रूप से इंजेक्ट किया जाता है। इसके परिणामस्वरूप इंट्रासेरेब्रल दबाव में वृद्धि और सेरेब्रल रक्त प्रवाह में कमी आती है। जानवर को 30 मिनट के लिए बेहोश रखा जाता है और चमड़े के नीचे खारा और एनाल्जेसिक दिया जाता है। जानवर को बाहर निकाला जाता है और उसके पिंजरे में वापस कर दिया जाता है। पूर्व-चियास्मेटिक मॉडल में उच्च प्रजनन दर और पूर्व-निर्धारित रक्त की मात्रा के कारण जानवरों के बीच सीमित भिन्नता है। यह मनुष्यों में एसएएच की नकल करता है जो इसे एसएएच अनुसंधान के लिए एक प्रासंगिक मॉडल बनाता है।

Introduction

गैर-दर्दनाक सबरैक्नॉइड रक्तस्राव (एसएएच) स्ट्रोक का एक रूप है, जो सभी मामलों के लगभग 5% का प्रतिनिधित्व करता है। गैर-दर्दनाक एसएएच का सबसे आम कारण एक एन्यूरिज्म (एएसएएच) का अचानक टूटना है, जो एसएएच के 85% के लिए जिम्मेदार है। अन्य कारणों में एक धमनी-शिरापरक विकृति का टूटना, कोगुलोपैथिस और पेरिमेसेन्सेफेलिक रक्तस्राव1 में नसों का टूटना शामिल है। घटना दर प्रति 100,000 व्यक्ति-वर्ष 9 है, जिसमें मृत्यु दर तीन में से एक के आसपास है और एसएएच 2,3 के बाद एक अन्य तिहाई को दैनिक जीवन के समर्थन की आवश्यकता होती है।

प्रारंभिक स्थिरीकरण और निदान की पुष्टि के बाद, उपचार रक्तस्राव की गंभीरता पर निर्भर करता है। सबसे गंभीर रूप से पीड़ित रोगियों को इंट्रासेरेब्रल दबाव (आईसीपी) को कम करने के लिए वेंट्रिकल्स में एक अतिरिक्त-वेंट्रिकुलर नाली डाली जाएगी और न्यूरोइंटेंसिव केयर यूनिट में भर्ती कराया जाएगा, जहां उनकी बारीकी से निगरानी की जाती है। रोगियों को (संभावित) एन्यूरिज्म की पहचान करने के लिए एंजियोग्राफी से गुजरना होगा और बाद में पुन: रक्तस्राव को रोकने के लिए एन्यूरिज्म को कुंडलित या दबा दियाजाएगा। औषधीय उपचारों के कई परीक्षणों के बावजूद, केवल निमोडिपाइन, एक कैल्शियम-चैनल विरोधी,ने परिणामों में सुधार दिखाया है। वर्तमान में कई नैदानिक परीक्षण चल रहे हैं। कृपया एक व्यापक सूची6 के लिए Daou और सहयोगियों द्वारा समीक्षा देखें।

एन्यूरिज्म के टूटने को अब तक के सबसे खराब सिरदर्द या थंडरक्लैप सिरदर्द की अचानक शुरुआत के रूप में वर्णित किया गया है। टूटने के परिणामस्वरूप आईसीपी में भारी वृद्धि होती है जिसके बाद सेरेब्रल रक्त प्रवाह (सीबीएफ) में कमी आती है। इस कमी के परिणामस्वरूप मस्तिष्क की वैश्विक इस्किमिया होती है, जिसके परिणामस्वरूप चेतना का नुकसान हो सकता है। यह अधिक यांत्रिक मार्ग, रक्त के अतिरिक्त तत्वों के शुरुआती टूटने के साथ, साइटोकिन रिलीज और जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली की सक्रियता को जन्म देता है जिसके परिणामस्वरूप बाँझ न्यूरोइन्फ्लेमेशन होता है। इसके अलावा, रक्त-मस्तिष्क बाधा का टूटना, जिसके परिणामस्वरूप सेरेब्रल एडिमा और आयन होमियोस्टैसिस में गड़बड़ी होती है, अक्सर देखी जाती है। ये सभी परिवर्तन और अधिक, प्रारंभिक मस्तिष्क की चोट (ईबीआई) पहले कुछ दिनों के भीतर होते हैं और इसके परिणामस्वरूप न्यूरोनल हानि और एपोप्टोसिस7 होता है।

एएसएएच से पीड़ित लगभग 1/3 रोगियों में 4-14 दिन के बीच विलंबित सेरेब्रल इस्किमिया (डीसीआई) विकसितहोगा। डीसीआई को या तो फोकल, न्यूरोलॉजिकल हानि की शुरुआत या ग्लासगो कोमा पैमाने पर न्यूनतम 1 घंटे तक चलने वाले न्यूनतम दो अंकों की गिरावट के रूप में परिभाषित किया गया है, जब दौरे और पुन: रक्तस्राव सहित अन्य कारणों को बाहर रखा जाता है। डीसीआई एएसएएच9 के बाद मृत्यु के बढ़ते जोखिम और कार्यात्मक परिणाम में कमी के साथ जुड़ा हुआ है। सेरेब्रल वासोस्पाज्म (सीवीएस), सेरेब्रल धमनियों का संकुचित होना, दशकों से डीसीआई से जुड़ा हुआ है और पहले डीसीआई का एकमात्र कारण माना जाता था। तब से यह दिखाया गया है कि सीवीएस डीसीआई के विकास के बिना हो सकता है और माइक्रोवस्कुलर थ्रोम्बोसिस और कसना, कॉर्टिकल फैलने वाले अवसाद और ईबीआई की भड़काऊ प्रतिक्रिया सहित अधिक कारकोंकी पहचान की गई है।

रोग के पाठ्यक्रम पर ईबीआई और डीसीआई के बड़े प्रभाव और पीड़ित रोगियों के परिणाम के कारण, पशु मॉडल को अभी भी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य होने के दौरान सबसे बड़ी डिग्री तक इनकी नकल करने की आवश्यकता है। शोधकर्ताओं ने एएसएएच को आजमाने और अनुकरण करने के लिए चूहों से लेकर गैर-मानव प्राइमेट्स तक विभिन्न जानवरों में विभिन्न मॉडलों की एक विस्तृत श्रृंखला को नियोजित किया है। स्प्राग-डॉवले और विस्टार वाइल्डटाइप चूहे वर्तमान में सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले प्रयोगशाला जानवर हैं, और सबसे आम मॉडल एंडोवास्कुलर वेध मॉडल, सिस्टर्ना-मैग्ना डबल इंजेक्शन मॉडल और अंत में प्री-चियास्मेटिक सिंगल इंजेक्शन मॉडल हैं, जिन्हें इस लेख13 में वर्णित किया जाएगा।

प्री-चियास्मेटिक, एकल इंजेक्शन मॉडल मूल रूप से प्रूनेल और सहयोगियों द्वारा अन्य प्रयोगात्मक मॉडल14 की कुछ कमियों का मुकाबला करने के लिए विकसित किया गया था। सर्जरी, जब महारत हासिल की जाती है, तो अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य होती है और जानवरों के बीच भिन्नता को कम करती है। मॉडल कई बिंदुओं पर मनुष्यों में एसएएच की नकल करता है, जिसमें रक्त के इंजेक्शन के बाद आईसीपी में अचानक वृद्धि शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप सीबीएफ15,16 में गिरावट के कारण क्षणिक वैश्विक इस्किमिया होता है। यह पूर्वकाल परिसंचरण को प्रभावित करता है, जहां मनुष्यों में अधिकांश एएसएएच17 होते हैं। अध्ययन और14,18 इंजेक्शन वाले रक्त की मात्रा के आधार पर मृत्यु दर 10% -33% तक होती है। विलंबित कोशिका मृत्यु और न्यूरोइन्फ्लेमेशन का पता 2 और 7 दिन पर लगाया जा सकता है, जिससे ईबीआई और डीसीआई19,20 के परिणामों का अध्ययन करने के लिए चर प्रदान किए जा सकते हैं।

अध्ययन चूहे में प्री-चियास्मेटिक एकल इंजेक्शन मॉडल का एक अद्यतन विवरण प्रस्तुत करता है, साथ ही यह विवरण भी देता है कि आईसीपी-जांच को फार्मास्यूटिक्स के इंट्राथेकल प्रशासन के लिए एक बंदरगाह के रूप में कैसे उपयोग किया जाए।

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Protocol

यह प्रक्रिया वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए उपयोग किए जाने वाले जानवरों की सुरक्षा के संबंध में यूरोपीय संघ के निर्देश 2010/63 / यूरोपीय संघ के अनुसार की जाती है और डेनिश पशु प्रयोग निरीक्षणालय (लाइसेंस संख्या 2016-15-0201-00940) द्वारा अनुमोदित है। सर्जरी एसेप्टिक तकनीक का उपयोग करके यथासंभव व्यापक सीमा तक की जाती है, जिसमें बाँझ उपकरण, दस्ताने, कैथेटर और सीवन शामिल हैं। अध्ययन में 230-350 ग्राम वजन वाले नर और मादा स्प्राग-डॉवले चूहों का उपयोग किया गया, समूह को 12-घंटे के प्रकाश / अंधेरे चक्र में रखा गया, जिसमें 22 डिग्री सेल्सियस (± 2 डिग्री सेल्सियस) का निरंतर तापमान और 55% (± 10%) की आर्द्रता थी। जानवरों को मानक चाउ और पानी एड लिबिटम प्रदान किया जाता है। सर्जरी के बाद जानवरों को एकल पिंजरों में रखा जाता है, लेकिन आईसीपी-जांच को हटा दिए जाने पर समूह पिंजरे में वापस लाया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में एनेस्थेटिक आइसोफ्लुरेन गैस है, लेकिन केटामाइन (100 मिलीग्राम / एमएल) और ज़ाइलेज़िन (20 मिलीग्राम / एमएल) के 3: 2 इंट्रापरिटोनियल मिश्रण का 1.5 एमएल / किलोग्राम भी प्रभावीहै।

1. तैयारी

  1. इंटुबैशन के लिए 16 ग्राम परिधीय नस कैथेटर को संशोधित करें। संशोधित करने के लिए, सुई को 1 सेमी छोटा करें और शेष डिस्टल 1 सेमी को इंजेक्शन वाल्व की ओर 30 डिग्री तक मोड़ें। कैथेटर पंखों को हटा दें (कई उपयोग)।
  2. आईसीपी जांच बनाने के लिए, पॉलीथीन ट्यूबिंग का 20 मिमी टुकड़ा (आंतरिक व्यास (आईडी): 0.58 मिमी, बाहरी व्यास (ओडी): 0.96 मिमी) काटें और एक खुला लुमेन रखते हुए एक गोलाकार प्लेट बनाने के लिए एक छोर को जलाएं। पॉलीथीन ट्यूबिंग के अंत में 10 मिमी सिलिकॉन ट्यूबिंग (आईडी: 0.76 मिमी, ओडी: 2.4 मिमी) को जोड़ने से पहले 1 मिमी सिलिकॉन ट्यूबिंग (आईडी: 1.0 मिमी, ओडी: 3.0 मिमी) के साथ पॉलीथीन ट्यूबिंग को दरकिनार करें।
  3. लैपटॉप पर पावर दें और डेटा अधिग्रहण सॉफ्टवेयर खोलें। निर्माता के निर्देशों के अनुसार रक्तचाप (बीपी) और इंट्रा सेरेब्रल प्रेशर (आईसीपी) ट्रांसड्यूसर और लेजर-डॉपलर को कैलिब्रेट करें।
  4. रक्त गैस विश्लेषक उपकरण तैयार करें।
    सावधानी: सुनिश्चित करें कि वेपोराइज़र में पर्याप्त आइसोफ्लुरेन है।
  5. ओ2 और वायुमंडलीय वायु प्रवाह चालू करें। O2 के प्रवाह को 30% और वायुमंडलीय वायु को 70% पर सेट करें।
  6. हीटिंग पैड रखें और तापमान को 37 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें।

2. एनेस्थीसिया

  1. चूहे को संज्ञाहरण कक्ष में ओ2 के 30% और वायुमंडलीय हवा के 70% प्रवाह के साथ रखें। कक्ष में आइसोफ्लुरेन गैस का 5% प्रशासित करें। पर्याप्त संज्ञाहरण में लगभग 4 मिनट लगेंगे। श्वास पर सावधानी पूर्वक नियंत्रण रखें।
  2. जब एनेस्थेटाइज्ड किया जाता है, तो चूहे को रबर बैंड द्वारा दरकिनार की गई भारी प्लेट पर लापरवाह स्थिति में रखें। रबर बैंड के नीचे चूहे के सामने के दांत रखें।
  3. घुमावदार बल के साथ जीभ को सावधानी से बाहर खींचें। कॉटन टिप से स्वरयंत्र को साफ करें। मुखर डोरियों की कल्पना करने के लिए गले की मध्य रेखा में एक बाहरी प्रकाश रखें।
  4. संशोधित 16 ग्राम परिधीय शिरा कैथेटर का उपयोग करके प्रेरणा के दौरान इंटुबेट। जब सही ढंग से डाला जाता है, तो स्टिलेटो को हटा दें। कैथेटर को वेंटिलेटर से कनेक्ट करें।
    नोट: ट्यूब के सही प्लेसमेंट की पुष्टि श्वसन दर के साथ तालमेल में छाती के आंदोलनों द्वारा की जाती है। यदि पेट की हरकतें दिखाई देती हैं, तो चूहे को एनेस्थीसिया बेल में बाहर निकालें और फिर से पेश करें। वायुमार्ग को नुकसान पहुंचाने के जोखिम के कारण प्रक्रिया को तीन बार से अधिक न दोहराएं।
  5. जब इंजेक्शन लगाया जाता है, तो जानवर को 30% ओ2 और 70% वायुमंडलीय हवा के साथ कृत्रिम श्वसन पर रखें। एनेस्थीसिया को आइसोफ्लुरेन के 1.5% -3% पर बनाए रखें। रक्तचाप को 80-100 मिमीएचजी के बीच रखने के लिए आइसोफ्लुरेन को समायोजित करें।
  6. श्वासयंत्र की अंतःस्रावी मात्रा 3 मिलीलीटर और आवृत्ति 40-45 प्रेरणा / मिनट पर रखें। रक्त गैस विश्लेषण के अनुसार इंस्पिरेटरी वॉल्यूम को समायोजित करें।
  7. गाल के आंतरिक नरम ऊतक के माध्यम से 2-0 सीवन के साथ एक सिलाई बनाएं। कैथेटर को बांधने के लिए इंजेक्शन ट्यूब और परिधीय नस कैथेटर के इंजेक्शन वाल्व के चारों ओर सीवन बांधें।
  8. चूहे को ऑपरेटिंग क्षेत्र में ले जाएं और इसे सर्जन की ओर पूंछ के साथ लापरवाह स्थिति में रखें।
  9. सूखी आंखों का मुकाबला करने के लिए आवश्यक होने पर आंखों के जेल लागू करें।
  10. संज्ञाहरण की पर्याप्त गहराई की पुष्टि करने के लिए पैर की अंगुली की चुटकी करें। सर्जरी के दौरान संज्ञाहरण की गहराई का आकलन और रखरखाव करें।

3. टेल कैथेटर

  1. क्लोरहेक्सिडाइन इथेनॉल के 0.5% के साथ पूंछ के समीपस्थ 3-4 सेमी को कीटाणुरहित करें।
    नोट: अब से, सर्जन के विवेक पर सर्जिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करें।
  2. उदर पक्ष पर पूंछ के समीपस्थ छोर में 15-20 मिमी त्वचा चीरा लगाएं। सावधान रहें कि धमनी को संक्रमित न करें।
  3. घुमावदार बल का उपयोग करके अंतर्निहित संयोजी ऊतक से त्वचा को ढीला करें।
  4. धमनी को उजागर करने वाली प्रावरणी में सावधानी पूर्वक प्रवेश करें।
  5. घुमावदार बल का उपयोग करके अंतर्निहित ऊतक से पूंछ धमनी को सावधानीपूर्वक छोड़ दें।
  6. बर्तन के नीचे तीन काले रेशम के धागे फिसलें। एक धागे को यथासंभव बाहर रखें और धमनी के चारों ओर कसकर एक सर्जिकल गाँठ बांधें। धागे के ढीले सिरों को हेमोस्टैट से पकड़ें।
  7. शेष दो धागों को धमनी के चारों ओर शिथिल रूप से बांधें।
  8. समीपस्थ धागे को यथासंभव समीपस्थ रूप से धक्का दें। समीपस्थ धागे के सिरों को पकड़ने के लिए हेमोस्टैट लागू करें। हेमोस्टैट को हल्के से खींचें, लेकिन रक्त प्रवाह को प्रतिबंधित और अवरुद्ध करने के लिए पर्याप्त है। हेमोस्टैट को पेट पर रखें।
  9. कैथेटर की नोक को 45 ° कोण पर काटें। धमनी दीवार प्रवेश को रोकने के लिए तेज बिंदु को काटें।
  10. एक वन्नास कैंची का उपयोग करके, धमनी के व्यास का 1/3 हिस्सा 30 डिग्री कोण पर, डिस्टल गाँठ से 3-5 मिमी दूर एक धमनी चीरा लगाएं।
  11. कैथेटर को दो सीधे बल का उपयोग करके धमनी में डालें। कैथेटर को पकड़ने के लिए एक बल का उपयोग करें और दूसरे को कैथेटर के ऊपर धमनी को सावधानीपूर्वक खींचने के लिए।
  12. कैथेटर को पोत को समीपस्थ गाँठ में डालें और हेमोस्टेट से गाँठ को ढीला करें। कैथेटर में रक्त प्रवाह की कल्पना करें। बीच के धागे को कैथेटर से ढीले से बांध लें।
  13. सम्मिलन जारी रखें, और यदि संभव हो, तो उससे परे, उस बिंदु से परे जहां धमनी को प्रावरणी द्वारा फिर से कवर किया जाता है।
  14. खारा के साथ फ्लश करके कैथेटर प्लेसमेंट और संभावित रिसाव को नियंत्रित करें।
  15. सर्जिकल गांठों का उपयोग करके दो समीपस्थ धागे को बांधें।
    नोट: रक्तचाप माप को स्पंदन होना चाहिए; यदि नहीं, तो कैथेटर ठीक से नहीं रखा गया है।
  16. डिस्टल थ्रेड का उपयोग करके सर्जिकल गाँठ बांधकर चीरे के अंत में कैथेटर को बांधें।
  17. त्वचा के चीरे को दो गैर-पुनर्जीवित मोनोफिलामेंट 4-0 सीवन के साथ शिथिल रूप से सिल लें। कैथेटर में प्रवेश न करने के लिए सावधान रहें।
    नोट: सर्जरी के दौरान स्पंदन के आयाम से अवगत रहें। यदि यह कम है, तो कैथेटर को नमकीन के साथ फ्लश करें।
  18. रक्त गैस के नमूने के लिए रक्त प्रवाह की अनुमति देने के लिए दबाव ट्रांसड्यूसर से धमनी कैथेटर को ढीला करें। कैथेटर के अंत में एक माइक्रो केशिका ट्यूब रखें। रक्त को ट्यूब में प्रवाहित होने दें। रक्त संग्रह के बाद ट्रांसड्यूसर में कैथेटर को फिर से संलग्न करें और कैथेटर को फ्लश करें।
  19. रक्त गैस विश्लेषक में केशिका ट्यूब डालें। pH, pCO2, और pO2 को मापें और उन्हें नोट करें।
    नोट: रक्त गैस और रक्तचाप मूल्यों के आधार पर, वेंटिलेशन दर बदलें। यदि औसत धमनी दबाव (एमएपी) बहुत कम है, तो आइसोफ्लुरेन की प्रवाह दर को कम करने का प्रयास करें। संज्ञाहरण की उचित गहराई सुनिश्चित करने के लिए सजगता का परीक्षण करें।

4. आईसीपी जांच

  1. चूहे को स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम में रखें। चूहे को सममित रूप से स्थिति में रखना महत्वपूर्ण है।
  2. गर्दन के पूर्ववर्ती फ्लेक्सन बनाने के लिए स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम के नीचे एक बेलनाकार तकिया रखें।
  3. चूहे की खोपड़ी, गर्दन और कान के पीछे के क्षेत्र को शेव करें। अनावश्यक बालों को हटा दें।
  4. क्लोरहेक्सिडाइन इथेनॉल के 0.5% के साथ क्षेत्र को कीटाणुरहित करें।
  5. एड्रेनालाईन के साथ 10 मिलीग्राम / 5 μg / mL लिडोकेन के 0.7 मिलीलीटर के साथ स्थानीय रूप से एनेस्थेटाइज करें, सुई को मध्य रेखा में खोपड़ी के पुच्छल छोर पर डालें। गर्दन की मांसपेशियों में 0.3-0.4 एमएल के साथ इंजेक्ट करें। बाकी को ब्रेग्मा के चारों ओर और पूर्वकाल में चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें।
  6. मध्य रेखा में सुई पंचर ~ 8 मिमी पुच्छल से त्वचा चीरा लगाएं।
  7. एटलांटोसीसीपिटल झिल्ली (मध्य रेखा में खोपड़ी के लिए संगमरमर के रंग का त्रिकोण) की पहचान करने के लिए सभी मांसपेशियों को परतों में स्पष्ट रूप से विच्छेदित करें।
  8. गर्दन की मांसपेशियों को नियंत्रित करने के लिए एल्म रिकॉलर का उपयोग करें। यदि आवश्यक हो तो आयामी प्रत्यावर्ती को पुच्छल रूप से रखें।
  9. जांचें कि बाँझ आईसीपी-जांच आईसीपी ट्रांसड्यूसर से जुड़ा हुआ है या नहीं। आईसीपी प्रोब को सेलाइन से फ्लश करें। सुनिश्चित करें कि आईसीपी जांच में कोई हवा के बुलबुले मौजूद नहीं हैं।
  10. 23 ग्राम सुई का उपयोग करके एटलेंटोओसीसीपिटल झिल्ली को इंजकरें। झिल्ली के माध्यम से आईसीपी जांच को खींचने के लिए एक छेद बनाएं।
  11. जांच को अटलांटोओसीसीपिटल झिल्ली के माध्यम से धीरे से खींचें। प्रोब को हल्के से खींचें और सुनिश्चित करें कि यह 0-5 मिमीएचजी के बीच एक स्पंदित वक्र दिखाता है। यदि नहीं, तो जांच को हटा दें, ट्रांसड्यूसर से कनेक्शन की जांच करें, और लुमेन के माध्यम से प्रवाह की पुष्टि करें।
  12. ऊतक गोंद की दो बूंदें लागू करें। 1 मिमी सिलिकॉन ट्यूबिंग को झिल्ली के आगे ले जाएं और आईसीपी-जांच विस्थापन के जोखिम को कम करने के लिए अतिरिक्त गोंद लागू करें।
  13. प्रत्यावर्ती (ओं) को हटा दें।
  14. चीरे के सेफेलिक छोर तक एक क्षैतिज गद्दे की सीवन बनाएं और एक गैर-पुनर्जीवित मोनोफिलामेंट 4-0 सीवन का उपयोग करके पुच्छल छोर पर एक साधारण बाधित सीवन बनाएं।

5. सुई और लेजर-डॉप्लर जांच का प्लेसमेंट

  1. आंखों के ठीक पहले मध्य रेखा में एक चीरा लगाएं, 15 मिमी पुच्छल रूप से।
  2. संयोजी ऊतक और मांसपेशियों को बल के साथ हटा दें। एक बाँझ कपास के फाहे के अंत का उपयोग एक रूगिन के रूप में करें जिससे ब्रेग्मा और कोरोनल सीवन की पहचान करना संभव हो सके।
  3. एल्म रिकॉलर रखें।
  4. स्टीरियोटेक्सिक फ्रेम में 25 ग्राम रीढ़ की हड्डी की सुई रखें। सुई को बिल्कुल ब्रेग्मा पर रखें और स्थिति को नोट करें।
    नोट: स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम के मध्य रेखा जोड़ को ऊर्ध्वाधर विमान में जानवर की ओर 30 ° पर रखें।
  5. ब्रेग्मा से सुई निकालें, फ्रेम को 65 मिमी पूर्वकाल में स्थानांतरित करें और फिर ड्रिलिंग की साइट को चिह्नित करने के लिए मध्य रेखा में सुई को बदलें।
  6. तब तक ड्रिल करें जब तक कि हड्डी के नीचे ड्यूरा मैटर की पहचान न हो जाए। धीरे से सीधे बल का उपयोग करके हड्डी के टुकड़ों को हटा दें और हड्डी के मोम के साथ गुहा को भरें।
  7. ब्रेग्मा के दाईं ओर 3-4 मिमी पार्श्व और लेजर-डॉपलर के लिए कोरोनल सीवन के ठीक पहले एक और छेद ड्रिल करें। हड्डी के माध्यम से सभी तरह से ड्रिल करना आवश्यक नहीं है। सावधान रहें कि ड्यूरा मैटर में प्रवेश न करें।
  8. उन वाहिकाओं की तलाश करें जहां लेजर-डॉप्लर रक्त प्रवाह को माप सकता है। लेजर-डॉपलर रखें और मूल्यों की जांच करें। 100 एफयू का न्यूनतम मान आवश्यक है। माइक्रोस्कोप (कृत्रिम प्रकाश) को हटा दें।
  9. यदि मान अभी भी स्वीकार्य हैं, तो जांच को ठीक करने के लिए गोंद की एक बूंद जोड़ें।
  10. यह पुष्टि करने के लिए पुन: जाँचें कि मान 80 FU से ऊपर है या नहीं. यदि मान 80 एफयू से नीचे है, तो 80 एफयू से ऊपर के मान तक पहुंचने के लिए जांच को हटा दें और पुनर्स्थापित करें।
    नोट: मूल्य, एफयू, सेरेब्रल रक्त प्रवाह (सीबीएफ) दिखाने वाली एक मनमानी इकाई है।

6. एसएएच का प्रेरण

  1. खोपड़ी के माध्यम से धीरे से सुई को गोलार्धों के बीच मध्य रेखा में डालें जब तक कि खोपड़ी के आधार का प्रतिरोध महसूस न हो। ऑप्टिक चियास्म के ठीक पहले सही प्लेसमेंट सुनिश्चित करने के लिए सुई को 1 मिमी से पीछे हटा दें।
  2. सुई को 90 डिग्री घड़ी की दिशा में घुमाएं ताकि सुई की नोक रक्त को इंजेक्ट करते समय सबसे समरूप परिणाम सुनिश्चित करने के लिए दाईं ओर इंगित करे। स्टिलेटो को हटा दें (चित्रा 3)।
  3. 15 मिनट के लिए समतुल्य करें और 80-100 मिमीएचजी की सीमा में औसत धमनी रक्तचाप प्राप्त करने के लिए संज्ञाहरण के स्तर को समायोजित करें।
  4. रक्त गैस विश्लेषण करें। तदनुसार संज्ञाहरण के स्तर को समायोजित करें।
  5. कुंद 23 ग्राम सुई के साथ 1 एमएल सिरिंज का उपयोग करके पूंछ कैथेटर से 500 μL रक्त निकालें।
  6. हवा के इंजेक्शन से बचने के लिए रीढ़ की हड्डी की सुई कक्ष के मृत स्थान को रक्त से भरें। रक्त से भरे सिरिंज से 23 ग्राम सुई निकालें और पुष्टि करें कि सिरिंज में 300 μL रक्त है।
  7. सिरिंज को रीढ़ की हड्डी की सुई से कनेक्ट करें। एमएपी को पार करने के लिए दृढ़ता से पकड़ें और रक्त को मैन्युअल रूप से इंजेक्ट करें।
  8. लैपटॉप पर आईसीपी में भारी वृद्धि और सीबीएफ में भारी गिरावट देखें।
    नोट: सर्जरी सफल होने के लिए कम से कम 5 मिनट के लिए बेसलाइन स्कोर की तुलना में सीबीएफ 50% या उससे कम होना चाहिए, चित्रा 4 देखें। शाम चूहे चरण 6.1-6.7 से नहीं गुजरते हैं, जिससे रीढ़ की हड्डी की सुई को सेरेब्रम में पेश नहीं किया जाता है, संभावित सहज रक्तस्राव और आयनोजेनिक मस्तिष्क क्षति को कम किया जाता है।

7. वसूली और जागृति

  1. 0.1 एमएल/100 ग्राम पशु वजन 5.0 मिलीग्राम/एमएल कारप्रोफेन और 1 एमएल/100 ग्राम पशु वजन आइसोटोनिक खारा के चमड़े के नीचे प्रशासित करें। सुनिश्चित करें कि प्रशासन से पहले तरल पदार्थ कम से कम कमरे के तापमान पर हैं।
  2. इसके बाद एसएएच के बाद चूहे को 30 मिनट के लिए एनेस्थीसिया के तहत रखें।
  3. सुई, लेजर डॉपलर जांच को हटा दें, और फिर गुहाओं को हड्डी मोम से भरें। गैर-पुनर्जीवित मोनोफिलामेंट 4-0 सीवन के साथ दो क्षैतिज गद्दे सीवन का उपयोग करके चीरा बंद करें।
  4. सिस्टर्ना मैग्ना में इंजेक्शन के लिए आईसीपी जांच का उपयोग करने के लिए, सिलिकॉन ट्यूबिंग को हटा दें और पॉलीथीन टयूबिंग में एक पिनपॉइंट एडाप्टर डालें।
  5. यदि कोई हस्तक्षेप की योजना नहीं है, तो सरल, बाधित सीवन को काट दें। कैंची का उपयोग करके आईसीपी जांच को जितना संभव हो उतना छोटा करें और फिर मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) के रिसाव को रोकने के लिए अंत को गोंद दें। चीरे को गैर-अवशोषक मोनोफिलामेंट 4-0 सीवन के साथ बंद करें।
  6. स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम से चूहे को निकालें और लापरवाह स्थिति में रखें। पूंछ के चीरे से ढीले सीवन हटा दें।
  7. धमनी कैथेटर के समीपस्थ और गहरे एक एकल सीवन रखें। रक्तस्राव को रोकने के लिए कैथेटर को हटा दें और सीवन को बांध दें। पूंछ-चीरा को एक गैर-अवशोषक मोनोफिलामेंट 4-0 सीवन के साथ सीवन करें।
  8. आइसोफ्लुरेन बंद कर दें।
  9. जितना हो सके चूहे और उसके फर को साफ करें।
  10. जब पेडल विदड्रॉल रिफ्लेक्स वापस आ जाता है और वेंटिलेटर से अलग होने पर चूहे को सहज श्वसन होता है, तो इसे बाहर निकालें।
  11. चूहे को भोजन और पानी के साथ एक पिंजरे में रखें। पिंजरे के आधे हिस्से को हीटिंग प्लेट के नीचे रखें और चूहे को पिंजरे के इस क्षेत्र में रखें।
  12. पिनपोर्ट इंजेक्टर को एक सटीक सिरिंज के अनुकूल बनाकर इंट्राथेकल प्रशासन करें और पिनपोर्ट एडाप्टर के माध्यम से उपचार का प्रशासन करें। यह हस्तक्षेप उन जानवरों में संभव है जो जाग रहे हैं। चित्र 5 देखें।

8. आईसीपी-जांच हटाने (यदि सर्जरी के दौरान नहीं हटाया जाता है)

नोट: सर्जन के विवेक पर एक सर्जिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करें।

  1. चूहे को एनेस्थीसिया कक्ष में रखें जैसा कि पहले वर्णित है।
  2. एनेस्थेटाइज्ड होने पर, चूहे को हीटिंग पैड के साथ ऑपरेशन क्षेत्र में लापरवाह स्थिति में रखें।
  3. नाक को एनेस्थीसिया मास्क में रखें। ओ 2 से 30%, वायुमंडलीय हवा को 70%, और आइसोफ्लुरेन के स्तर को2 % तक सेट करें।
  4. सूखी आंखों का मुकाबला करने के लिए लगातार आई जेल लागू करें।
  5. पुच्छल सरल बाधित सीवन को काट लें। चीरा खोलें और संभावित नेक्रोटिक ऊतक या रक्त के थक्कों को हटा दें।
  6. मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) के रिसाव को रोकने के लिए कैंची और अंत में गोंद का उपयोग करके आईसीपी जांच को जितना संभव हो उतना छोटा करें। चीरे को गैर-अवशोषक मोनोफिलामेंट 4-0 सीवन के साथ बंद करें।
  7. आइसोफ्लुरेन बंद कर दें।
  8. जब चूहा हिलना शुरू कर देता है, तो उसे भोजन और पानी के साथ एक पिंजरे में रखें। पिंजरे का आधा हिस्सा हीटिंग प्लेट पर रखें और चूहे को इस क्षेत्र में रखें।
  9. जब अभ्यस्त अवस्था में लौट आएं, तो जानवरों को पहले 15 मिनट के लिए पर्यवेक्षण के तहत एक संयुक्त पिंजरे में एक दूसरे से फिर से मिलाएं।

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Representative Results

पुरुषों की तुलना में महिलाओं में एएसएएच का खतरा बढ़ जाता है। इसके बावजूद, नर कृन्तकों का उपयोग मुख्य रूप से मादाओं में एस्ट्रस चक्र की विषमता से संभावित पूर्वाग्रह के कारण प्रयोगों में किया जाता है। यहां प्रस्तुत प्रतिनिधि परिणाम मादा और नर चूहों की तुलना करने वाले एक हालिया प्रकाशन से हैं, यह पुष्टि करते हुए कि मॉडल नर21 की तुलना में मादा जानवरों में समान परिणाम उत्पन्न करता है। अध्ययन में 34 मादा स्प्राग-डॉवले चूहे (18 एसएएच और 16 शाम) शामिल थे। शम्स के पास रीढ़ की हड्डी की सुई ऑप्टिक चियास्म या रक्त इंजेक्शन तक नहीं उतरी थी। अन्य सभी प्रक्रियाएं एसएएच के समान शम्स पर की गई थीं। समूहों के बीच सभी शारीरिक पैरामीटर तुलनीय थे। अंत में, नर चूहों पर पिछले प्रयोगों के डेटा का एक मेटा-विश्लेषण किया गया था और वर्तमान अध्ययन21 के परिणामों के साथ तुलना की गई थी।

घूर्णन पोल परीक्षण सकल सेंसरिमोटर फ़ंक्शन का एक परीक्षण है। जानवर को 150 सेमी बाय 45 मिमी पोल के एक छोर पर रखा जाता है, जो 10 आरपीएम तक घूम सकता है। लक्ष्य ध्रुव के दूर के छोर तक पहुंचना है जहां एक पिंजरा रखा गया है। घूर्णन ध्रुव पर दिखावटी जानवरों की तुलना में एसएएच चूहों ने दिन 1 और 2 पर काफी खराब प्रदर्शन किया (चित्र 1)।

एसएएच के बाद, ईटी -1 और 5-एचटी रिसेप्टर परिवार दोनों सेरेब्रल धमनियों में अनियंत्रित होते हैं जिसके परिणामस्वरूप उत्तेजित होने पर संकुचन बढ़ जाता है और इस तरह सीवीएस22,23 में योगदान होता है। बेसिलर धमनी (बीए) और मध्य सेरेब्रल धमनियों (एमसीए) को डिकैपिटेशन के बाद हटा दिया गया और मायोग्राफ प्रयोगों के लिए उपयोग किया गया। ईटी -1 रिसेप्टर परिवार के लिए एक एगोनिस्ट एंडोथेलिन 1 (ईटी -1) और 5-कार्बोक्सामिडोट्रिप्टामाइन (5-सीटी), 5-एचटी-रिसेप्टर परिवार के लिए एक एगोनिस्ट दोनों ने शाम की तुलना में एसएएच में संवहनी संकुचन में काफी वृद्धि की (चित्रा 2)। संवेदनशीलता दोनों लिंगों में एसएएच के बाद संकुचन प्राप्त करने के लिए आवश्यक कम सांद्रता द्वारा देखी जा सकती है।

एसएएच के बाद बढ़ी हुई पानी की मात्रा (एडिमा) मनुष्यों में कम कार्यात्मक परिणाम का एक उपाय है। दूसरे दिन शाम की तुलना में एसएएच में सेरेब्रल एडिमा में काफी वृद्धि पाई गई। हिप्पोकैम्पस में बढ़ी हुई एडिमा की ओर भी एक प्रवृत्ति थी, लेकिन यह सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं था (पी = 0.0508)21।

ऐतिहासिक पुरुष डेटा के लिए उपर्युक्त डेटा की तुलना करते समय, परिणाम तुलनीय हैं। मेटाडेटा ईटी -1 या 5-सीटी (चित्रा 2) के अतिरिक्त पुरुष एसएएच में बढ़ी हुई सिकुड़न को दर्शाता है। इसके अलावा, घूर्णन पोल परीक्षण करते समय एसएएच चूहों ने शम्स की तुलना में काफी खराब प्रदर्शन किया। परिणाम ने सेंसरिमोटर फ़ंक्शन में कमी का संकेत दिया (चित्रा 1)।

चित्रा 5 ए एसएएच के प्रेरण के 30 मिनट बाद खारा छिड़काव के बाद ऑटोलॉगस, इंजेक्शन वाले रक्त के वितरण को दर्शाता है। आंकड़े से पता चलता है कि रक्त को प्री-चियास्मेटिक इंजेक्शन के बाद सबरैक्नोइड स्पेस में वितरित किया गया है।

चित्रा 5 बी और चित्रा 5 सी इंट्राथेकोली इंजेक्शन रंगों के वितरण को दर्शाता है, इसके बाद इंजेक्शन के बाद 30 मिनट के लिए पूरे शरीर के खारा छिड़काव को दर्शाता है। चित्र 5B 20 mM इवांस ब्लू (पानी में घुलनशील) के 25 μL के वितरण को दर्शाता है और चित्र 5C 10 mM तेल लाल O (पानी अघुलनशील) के 25 μL के वितरण को दर्शाता है। दोनों रंगों को सिस्टर्ना मैग्ना में इंजेक्शन के बाद सबरैक्नोइड स्पेस में वितरित किया गया था, यह पुष्टि करते हुए कि यह पानी में घुलनशील और अघुलनशील दोनों यौगिकों के इंट्राथेकल इंजेक्शन का एक व्यवहार्य मॉडल है। ध्यान देने योग्य पानी अघुलनशील यौगिक के लिए धमनियों के आसपास जमा का गठन है।

Figure 1
चित्रा 1: नर और मादा चूहों में एसएएच के बाद पहले 2 दिनों में संवेदी-मोटर अनुभूति का विश्लेषण। रोटेटिंग पोल टेस्ट एसएएच के बाद दिन 1 और दिन 2 पर किया गया था। दोनों लिंगों के चूहों में एक ही लिंग के शाम-संचालित चूहों की तुलना में महत्वपूर्ण कमी थी। समूहों के बीच व्यवहार में सांख्यिकीय अंतर का परीक्षण दिन 0, दिन 1 और दिन 2 पर 2-तरफा एनोवा द्वारा किया गया था। महिला कोई रोटेशन नहीं और 3 आरपीएम: पी < 0.05। महिला 10 आरपीएम और सभी पुरुष डेटा: पी < 0.01। मान SEM ± साधन हैं. स्प्रे, S. et al.21 की अनुमति से पुनर्प्रकाशित. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: नर और मादा चूहों में एसएएच के 2 दिन बाद बेसिलर धमनी (बीए) और मध्य सेरेब्रल धमनी (एमसीए) में ईटी -1 और 5-सीटी प्रेरित संकुचन के प्रति बढ़ती संवेदनशीलता का विश्लेषण। (ए, बी) एगोनिस्ट-प्रेरित प्रतिक्रियाओं के सामान्यीकरण के लिए संदर्भ मूल्यों के रूप में 60 एमएम के + -इवोकेटेड (के + अधिकतम) सिकुड़ा हुआ प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया गया था। बीए और एमसीए दोनों में एक ही लिंग के शम-संचालित चूहों की तुलना में एसएएच के 2 दिन बाद ईटी -1 की संवेदनशीलता में काफी वृद्धि हुई थी। (C, D) बीए और एमसीए दोनों में एक ही लिंग के शम-संचालित चूहों की तुलना में एसएएच के 2 दिन बाद 5-सीटी की संवेदनशीलता में काफी वृद्धि हुई थी। एकाग्रता-प्रतिक्रिया वक्रों की तुलना सांख्यिकीय रूप से दो-तरफा एनोवा के साथ की गई थी। सभी डेटा: पी < 0.001। मान SEM ± साधन हैं. स्प्रे, S. et al.21 की अनुमति से पुनर्प्रकाशित. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: एसएएच के प्रेरण से पहले सेटअप का अवलोकन। तस्वीर के शीर्ष से, ध्यान दें कि 1) इंजेक्शन सुई, 2) लेजर-डॉपलर जांच, और 3) आईसीपी जांच सभी जगह पर हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: इंट्राथेकल इंजेक्शन के बाद नमूना ट्रेस। लाल ग्राफ एमएमएचजी में रक्तचाप को दर्शाता है। नीला ग्राफ एमएमएचजी में आईसीपी दिखाता है और हरा ग्राफ सीबीएफ को मनमानी इकाई एफयू में दिखाता है। आईसीपी में स्पाइक रक्त इंजेक्शन का परिणाम है। ध्यान दें कि इसके परिणामस्वरूप 5 मिनट से अधिक समय तक सीबीएफ > बेसलाइन के 50% में गिरावट आती है। आईसीपी वृद्धि के परिणामस्वरूप रक्तचाप में थोड़ी वृद्धि होती है जो सेकंड के भीतर सामान्य हो जाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: इंट्राथेकली इंजेक्शन रक्त और रंगीन रंगों का वितरण। (ए) एसएएच प्रेरण के 30 मिनट बाद ऑटोलॉगस रक्त का वितरण। (बी) आईसीपी-कैथेटर के माध्यम से इंट्राथेकल इंजेक्शन के बाद 20 एमएम इवांस ब्लू के 25 μL का वितरण। (सी) आईसीपी-कैथेटर के माध्यम से इंट्राथेकल इंजेक्शन के बाद 10 एमएम ऑयल रेड ओ के 25 μL का वितरण। सभी जानवरों को इंट्रापरिटोनियल केटामाइन / ज़ाइलेज़िन मिश्रण के साथ एनेस्थेटाइज्ड किया गया था, जिसके बाद खारा छिड़काव किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

एसएएच का प्री-चियास्मेटिक सिंगल इंजेक्शन मॉडल मानव एसएएच के कई महत्वपूर्ण तत्वों की नकल करता है, जिसमें आईसीपी में स्पाइक, सीबीएफ की कमी, क्षणिक वैश्विक इस्किमिया, न्यूरोइन्फ्लेमेटरी मार्करों का अपरेग्यूलेशन और सीवीएस 14,15,16,18,19,20 शामिल हैं। आईसीपी-जांच का उपयोग इंट्राथेकल प्रशासन के लिए एक बंदरगाह के रूप में भी किया गया था (चित्रा 5)। इसके अलावा, अध्ययन से पता चलता है कि मॉडल नर और मादा जानवरोंमें समान प्रदर्शन करता है। मॉडल में धमनीविस्फार के विकास और बाद में टूटना शामिल नहीं है। कई मॉडलों ने प्रणालीगत उच्च रक्तचाप को शल्य चिकित्सा या औषधीय रूप से शामिल करके और इलास्टेस25,26,27 का उपयोग करके धमनी दीवार को कमजोर करके टूटे हुए धमनीविस्फार से एसएएच का उत्पादन करने का प्रयास किया है। सभी प्रयासों ने जानवरों के उप-समूह में एन्यूरिज्मल एसएएच का उत्पादन किया है, लेकिन इन मॉडलों में एक अंतर्निहित परिवर्तनशीलता है जिसमें यह अनुमान लगाने में असमर्थता शामिल है कि धमनीविस्फार कब टूट जाएगा। मॉडल एसएएच18,28 पर पूर्व-नैदानिक अनुसंधान के लिए बहुत उपयुक्त नहीं हैं।

अन्य मुराइन, एसएएच मॉडल के बीच, एंडोवास्कुलर वेध मॉडल में एक पोत का टूटना शामिल है, जो कुछ हद तक एक धमनीविस्फार के टूटने की नकल करता है, लेकिन उच्च परिवर्तनशीलता और मृत्यु दर से ग्रस्त है। यहां वर्णित मॉडल बेहतर पता लगाने योग्य और अधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है क्योंकि रक्त की मात्रा पूर्व-निर्धारित है और इंजेक्शन दबाव को नियंत्रित किया जा सकता है। डबल इंजेक्शन मॉडल में विलंबित सीवीएस के उत्पादन की अधिक संभावना है, लेकिन मुख्य रूप से पीछे के परिसंचरण को प्रभावित करता है और इसमें एक अशारीरिक दूसरा रक्त इंजेक्शन शामिल है। इसकी तुलना में, यह मॉडल मनुष्यों में एसएएच जैसा दिखता है क्योंकि यह पूर्वकाल परिसंचरण का एक इंजेक्शन है और यह एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य आईसीपी वृद्धि18 का उत्पादन करता है।

प्रयोगात्मक एसएएच पर विभिन्न संज्ञाहरण शासनों का प्रभाव स्पष्ट नहीं है और प्रयोगात्मक डेटा विरोधाभासी है। एक अध्ययन ने आइसोफ्लुरेन इनहेलेशन29 का उपयोग करते समय चूहों में एक एंडोवास्कुलर वेध मॉडल में साइटोकिन्स और सामान्य न्यूरोइन्फ्लेमेशन के संभावित निषेध की सूचना दी। एक अन्य कृंतक मॉडल के परिणामस्वरूप श्वसन मापदंडों में कमी आई और आइसोफ्लुरेन30 का उपयोग करते समय क्षेत्रीय सीबीएफ में कमी के साथ मस्तिष्क एडिमा में वृद्धि हुई। हालांकि, माउस मॉडल में मृत्यु दर की तुलना करने वाले एक मेटा-विश्लेषण ने आइसोफ्लुरेन और अन्य प्रकार के संज्ञाहरण31 के बीच मृत्यु दर में कोई अंतर नहीं दिखाया। समझौते में, उपरोक्त प्रोटोकॉल ने दोनों समूहोंमें समान परिणामों के साथ आइसोफ्लुरेन इनहेलेशन या इंट्रापरिटोनियल केटामाइन / ज़ाइलेज़िन मिश्रण का सफलतापूर्वक उपयोग किया है।

उच्च प्रजनन क्षमता और उचित डेटा अधिग्रहण सुनिश्चित करने के लिए, निगरानी उपकरणों के प्लेसमेंट के संबंध में कदमों पर समग्र जोर दिया गया है। पूंछ कैथेटर का सही प्लेसमेंट रक्तचाप की निरंतर निगरानी और रक्त गैस विश्लेषण करने की क्षमता की सुविधा प्रदान करता है। आईसीपी कैथेटर का उचित प्लेसमेंट सही आईसीपी निगरानी और इंट्राथेकल हस्तक्षेप की बाद की संभावना सुनिश्चित करता है। लेजर-डॉपलर जांच का उचित प्लेसमेंट यह सुनिश्चित करता है कि सीबीएफ की कमी की निगरानी की जा सकती है, जहां एसएएच प्रेरण के बाद कम से कम 5 मिनट के लिए बेसलाइन स्कोर में 50% या उससे कम की कमी एक मजबूत इस्किमियासुनिश्चित करती है। यह सुनिश्चित करके कि सभी निगरानी कदम क्रम में हैं, शोधकर्ता एसएएच प्रेरण के बाद सही डेटा संग्रह सुरक्षित कर सकता है।

प्रोटोकॉल अपडेट और संशोधन के साथ सबरैक्नॉइड रक्तस्राव के पूर्व-चियास्मेटिक एकल इंजेक्शन मॉडल का वर्णन करता है। मॉडल एसएएच-अनुसंधान के लिए मूल्यवान रहा है और संभवतः प्रारंभिक मस्तिष्क की चोट और विलंबित सेरेब्रल इस्किमिया सहित सबरैक्नॉइड रक्तस्राव की बेहतर समझ की दिशा में योगदान करना जारी रखेगा।

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Disclosures

लेखकों के पास घोषित करने के लिए कोई परस्पर विरोधी हित नहीं हैं।

Acknowledgments

काम को लुंडबेक फाउंडेशन और लुंडबेक ग्रांट ऑफ एक्सीलेंस (नंबर आर 59-ए 5404) द्वारा समर्थित किया गया था। पांडुलिपि के किसी भी हिस्से में फंडर्स की कोई भूमिका नहीं थी।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
16 G peripheral vein catheter BD Venflon 393229 Needle shortened, distal 1 cm curved. Wings removed
Anesthesia bell/ chamber Unknown
Blood gas analyzer Radiometer ABL80
Blood pressure (BP) monitor Adinstruments ML117 Connects to Powerlab
Curved forceps, 12 cm x 3 F.S.T 11001-12 For anesthesia
Cylindrical pillow, 28 cm x 4 cm Homemade Made from surgical towels
Data acquisition hardware Adinstruments ML870 Powerlab
Data acquistion software Adinstruments LabChart 6.0
Drill KMD 1189
Drill controller Silfradent 300 IN
Flexible light Schott KL200
Heating pad Minco 1135
Hypodermic needle, 20 G KD Medical 301300 Connects to stereotaxic frame
ICP monitor Adinstruments ML117 Connects to Powerlab
Isoflurane vaporizer Ohmeda TEC3
Laptop Lenovo T410
Laser doppler monitor Adinstruments ML191
Laser doppler probe Oxford Optronics MSF100XP Connects to laser doppler monitor
Needle holder, 13 cm F.S.T 12001-13 For anesthesia
Precision syringe, 0.025 mL Hamilton 547407
Stereotaxic frame Kopf Instruments M900
Surgical microscope Carl Zeiss F170
Suture needle Allgaier 1245 For anesthesia
Temperaure controller CWE,INC. TC-1000
Transducer x 2 Adinstruments MLT0699 Connects to BP and ICP monitor
Ventilator Ugo Basile 7025
Veterinary clipper Aesculap GT421
3-pronged Blair retractor, 13.5 cm Agnthos 17022--13
Blunt Alm retractor F.S.T 17008-07
Curved forceps, 12 cm x 2 F.S.T 11001-12
Needle holder, 13 cm F.S.T 12001-13
Straight Dumont forceps, 11 cm F.S.T 11252-00
Straight Halsted-Mosquito hemostat x 2 F.S.T 13008-12
Straight Iris scissor, 9 cm F.S.T 14090-09
Straight Vannas scissor, 10.5 cm F.S.T 15018-10
Absorpable swabs Kettenbach 31603
Black silk thread, 4-0, 5 x 15 cm Vömel 14757
Bone wax Aesculap 1029754
Carbomer eye gel 2 mg/g Paranova
Cotton swab Heinz Herenz WA-1
Cotton tipped applicator x 4 Selefa 120788
Hypodermic needle, 23 G x2 KD Medical 900284 Connects to stopcock. Remove distal end
Hypodermic needle, 23 G x3 KD Medical 900284 Remove distal end. 2 connects to stopcock, 1 to syringe
ICP probe: Homemade Made of the following:
Polythene tubing, 20 mm Smiths medical 800/100/200 Inner diameter (ID): 0.58 mm, Outer diameter (OD): 0.96 mm.
Silicone tubing, 10 mm Fisher 15202710 ID: 0.76 mm, OD: 2.4 mm.
Silicone tubing, 2 mm Fisher 11716513 ID: 1.0 mm, OD: 3.0 mm.
Micro hematocrit tubes Brand 7493 11
OP-towel, 45 cm x75 cm Mölnlycke 800430
PinPort adapter, 22 G Instech PNP3F22
PinPort injector Instech PNP3M
Polythene tubing, 2 x 20 cm Smiths medical 800/100/200 Connects to syringe. ID: 0.58 mm, OD: 0.96 mm.
Rubberband Unknown
Scalpel, 10 blade Kiato 23110
Spinalneedle, 25 G x 3.5'' Braun 5405905-01
Stopcock system, Discofix x 2 Braun 16494C Connects to transducer
Suture, 4-0, monofil, non-resorbable x 3 Ethicon EH7145H
Syringe, 1 mL BD Plastipak 1710023
Syringe, luer-lock, 10 mL x 4 BD Plastipak 305959 Connects to transducer
Tissue adhesive glue 3M 1469SB
0.5% Chlorhexidine spirit Faaborg Pharma 210918
Carprofen 50 mg/mL ScanVet 43715 Diluted 1:10
Isoflurane Baxter
Isotonic saline Amgros 16404
Lidocaine-Adrenaline 10 mg/5 µg/mL Amgros 16318

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References

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Bömers, J. P., Johansson, S.… More

Bömers, J. P., Johansson, S. E., Edvinsson, L., Mathiesen, T. I., Haanes, K. A. Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model. J. Vis. Exp. (172), e62567, doi:10.3791/62567 (2021).

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