Summary
En robust metodikk er utviklet for å gjennomføre i ovo fôring forskning studier ved hjelp av uskadet kommersielle broiler egg for å teste evnen til naturlige og syntetiske forbindelser, i dette tilfellet nicotinamide riboside, for å påvirke muskelutvikling og vekst.
Abstract
I løpet av de siste tre tiårene fokuserte forskere på rødt kjøtt og fjærfe på å utvikle strategier og teknologier for å manipulere muskelutvikling under embryonal og fosterutvikling. Dette området fortsetter å være et fokusområde fordi muskelfibernummer er etablert i løpet av denne tiden og bestemmer grunnlaget for all fremtidig vekst. I fjærfe viste mange studier i ovofôring av vekstfaktorer, vitaminer eller andre næringsstoffer forbedret kylling embryonal muskel- og tarmutvikling. Forbedring i ovo muskelutvikling kan være til nytte for fjærfeindustrien ved muligens å påvirke kjøttutbyttet, vekstraten eller myopatiforholdene. I løpet av de siste fem årene utviklet Gonzalez Laboratory ved University of Georgia en nikotinamid riboside i ovo fôringsmetodikk for broilerkylling embryoer, noe som endret muskelutviklingen. Når injisert i en utviklende embryo eggeplomme sac, nicotinamide riboside økt pectoralis stor muskel vekt og muskelfiber tetthet ved luke. Denne protokollen vil demonstrere en metodikk for nøyaktig og reprodusert oppførsel i ovo-fôringsstudier ved hjelp av kommersielle standard- og høyavkastende broilerembryoer. Disse dataene og metodene vil gjøre det mulig for andre forskningsgrupper å utføre i ovofôringsstudier med stor suksess og reproduserbarhet.
Introduction
Siden 1960 har USAs forbruk av kjøtt fra fjærfe per innbygger økt i forbløffende hastighet, mens andre primære proteinkilder har holdt seg stillestående, avslått eller minimalt økt. Fjærfeindustrien investerte betydelig tid og forskningsinnsats for å optimalisere ernæring og genetikk for å produsere en effektiv fugl for å holde tritt med etterspørselen. Fordi fjærfeindustriens hovedmål er å produsere muskler for konvertering til kjøtt, har deres innsats drastisk endret fuglens ultimate muskelmasse ved høsting.
Som de fleste arter utvikler fjærfe muskler på en bifasisk måte. Primær myogenese bruker mesenchymale stamceller for å produsere primære muskelfibre, som tjener som stillas for den andre bølgen av muskelfiberutvikling1. I fjærfe oppstår primær myogenese i embryonale dager 3 til 8, og sekundær myogenese skjer fra dag 8 til 212. Når utviklet, primære og sekundære muskelfibre tjener som grunnlag for alle fremtidige muskelvekst gjennom cellulær hypertrofi. Derfor brukte forskere og industri betydelig innsats på å forsøke å manipulere primær og sekundær myogenese i alle kjøttproduserende arter for å maksimere kjøttutbyttet.
En teknologi utforsket i fjærfe, kalt i ovo-fôring, innebærer fôring av forbindelser gjennom injeksjon. I ovofôring ble en teknologi ansatt av fjærfeindustrien i nesten 40 år opprinnelig utviklet for vaksineadministrasjon3. Litteraturen dokumenterer at i ovo fôring av ulike forbindelser og næringsstoffer på ulike utviklingsperioder og steder i egget positivt påvirket i ovo muskel utvikling og vekst 4,5,6. Til dags dato er Gonzalez Laboratory ved University of Georgia pioneren i å bruke nikotinamid riboside i ovo-fôring for å manipulere fjærfemuskelutvikling.
Nikotinamid riboside, en pyridin-nukleoside analog av vitamin B3, produserer NAD + gjennom bergingsveien7. Siden denne banen bruker færre enzymatiske trinn for å produsere NAD+, er produksjonen den mest effektive8. Gonzalez og Jackson9 viste at tilskudd av å utvikle broiler embryo eggeplomme sac med nikotinamid riboside økt klekket kylling pectoralis stor muskel vekt og muskelfiber tetthet. Dette ble senere bekreftet av Xu et al.10, som fant at økende nikotinamid riboside dose økt muskelvekt og økt muskelfiber tetthet. Disse to første studiene ble utført i en kommersiell avkastningsbroiler. Fordi høy avkastning broilere har et mer betydelig genetisk potensial for ultimate muskelmassestørrelse, var studiens mål å bestemme effekten av nikotinamid riboside dose på høy avkastning broiler klekket kylling pectoralis stor muskelutvikling og vekst ved luke.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle metoder ble godkjent av University of Georgia Institutional Animal Care and Use Committee.
1. Egginkubasjon og behandlingsadministrasjon
- Egginnkjøp og behandlingsoppdrag
- Få uinkubaterte, befruktede kjøttegg med høyt utbytte og transporter dem til laboratoriet.
- Inspiser og kast egg som anses som dårlig kvalitet.
MERK: Eliminer misshapen egg (rund, langstrakt, plate-sided), sprukket, skitten / farget, tynnskallet og rynket. Dette er viktig for å minimere risikoen for råtne egg. - Tilordne individuelle eggnumre, veie og registrere eggnumre og -vekter i et regnearkprogram.
- Bruk regnearkprogrammet til å sortere egg etter vekt.
- Fremhev eggnummeret og eggvektkolonnene .
- Velg Data-fanen , og sorter - sorter data etter eggvekt fra minste til største.
MERK: For best mulig klekkingshastighet, bruk egg som veier mellom 40 og 70 g. - Basert på utformingen av eksperimentet, tilordne egg (numerisk eller alfabetisk) en injeksjonsbehandling og dagen for eutanasi. Angi behandlingsnummer og eutanasidag i separate kolonner, og tilordne disse faktorene tilfeldig i hvert lag.
MERK: For denne publikasjonen ble behandlinger tilfeldig tildelt innenfor hver 8-egg strata.
- Generer en pivottabell i regnearkprogrammet for å sikre at hver behandling har lignende starteggvekter.
- Merk alle dataene i regnearket som skal analyseres.
- Velg pivottabellalternativ under Sett inn-fanen .
- Velg den uavhengige variabelen (kolonnen Dag for eutanasi ) i undervinduet Pivottabellfelt, og dra til Rader-feltet .
- Velg den uavhengige variabelen (Behandlingskolonne ) i B-delvinduet, og dra til Rader-feltet under Eutanasi-dagen.
- Velg den avhengige interessevariabelen (Eggvekt), og dra den til Verdier-feltet .
- Endre innstillinger for verdifelt ved å klikke den avhengige variabelen og velge Innstillinger for verdifelt.
- Endre innstillingen til Gjennomsnitt.
- Tildeling av skuff
- I regnearkprogrammet tilordner du egg til en skuff (numerisk eller alfabetisk), slik at behandlinger er like representert i en skuff.
- Tilordne de fire første eggene med tildelte behandlinger til skuff 1. Tilordne de neste fire eggene til brett 2 og fortsett til alle eggene er tildelt en skuff.
MERK: Dette trinnet vil variere avhengig av antall inkubatorer og skuffer som brukes i eksperimentet.
- Tilordne de fire første eggene med tildelte behandlinger til skuff 1. Tilordne de neste fire eggene til brett 2 og fortsett til alle eggene er tildelt en skuff.
- I regnearkprogrammet tilordner du egg til en skuff (numerisk eller alfabetisk), slik at behandlinger er like representert i en skuff.
- Kontroller at alle behandlinger er like representert på en skuff ved hjelp av pivottabellfunksjonen .
- Merk alle dataene i regnearket som skal analyseres.
- Velg pivottabellalternativet på Sett inn-fanen .
- Velg den uavhengige variabelen (Skuffkolonnen ) i undervinduet Pivottabellfelt, og dra til Rader-feltet .
- Velg den avhengige interessevariabelen (Eggvekt), og dra den til Verdier-feltet .
- Endre innstillinger for verdifelt ved å klikke den avhengige variabelen og velge Innstillinger for verdifelt.
- Endre innstillingen til Antall.
- Inkubasjon
- Legg egg i riktig inkubasjonsbrett og inkuber dem på 26,6 °C med 40 % ± 4 % relativ fuktighet i 6 timer.
MERK: Noen inkubatorer har selvovervåkingssystemer som kanskje ikke er helt nøyaktige. Bruk andre temperatur- og fuktighetsovervåkingsenheter for å kontrollere forholdene. - Øk inkubatortemperaturen til 37 °C med 40 % ± 4 % relativ fuktighet og oppretthold disse forholdene frem til inkubasjonsdagen 18.
- For å sikre riktig inkubatortemperatur, mål flere eggs overflatetemperaturer gjennom inkubatoren to ganger daglig med et termisk overflatetermometer for å sikre at overflatetemperaturen er 37 °C.
- Roter eggene hver time for å omplassere.
- Registrer eggvekter daglig for å sikre 10% -12,5% eggvekttap i løpet av de første 18,5 dagene av inkubasjon.
MERK: Hvis vekttap ikke er innenfor ønsket område, juster (øk eller reduser) fuktighet.
- Legg egg i riktig inkubasjonsbrett og inkuber dem på 26,6 °C med 40 % ± 4 % relativ fuktighet i 6 timer.
- Inkubasjon dag-10 i ovo injeksjoner
- Beregn mengden nikotinamid riboside som trengs for hver behandling ved hjelp av formelvekten på 290,07 g/mol, med 100 μL oppløsning injisert i hver eggeplommesekk.
MERK: Steril saltvann (0,9 %) oppløsning vil bli brukt som fortynningsmiddel for alle løsninger.
Beregning: 50 egg × 100 μL = 5000 μL (5 ml) løsning nødvendig. Rund opp til 6 ml for å sikre at nok oppløsning er tilgjengelig for injeksjon (figur 1).- Når løsningene er laget, plasser dem i et 37 °C vannbad for å holde dem ved eggets temperatur.
- Fjern egg fra inkubatoren ett brett om gangen og dekk med et varmt håndkle.
- Stearinlys egg for å finne eggeplomme sac og rengjør injeksjonsområdet med 70% etanol.
- Sett en steril 20 G, 2,54 cm hypodermisk nål ~ 1 cm inn i eggeskallet og injiser den tildelte dosen i eggeplommesekken. Injiser eggene fra 0 mM nikotinamid riboside behandling med 100 μL steril saltvann (0,9%).
- Dekk umiddelbart injeksjonsstedet med et lite stykke absolutt vanntett tape for å unngå overdreven fuktighetstap.
- Når alle eggene har fått sin behandling, legg brettet tilbake i inkubatoren.
- På inkubasjonsdagen 18, fjern egg fra skuffer og legg dem i klekkebokser i henhold til behandlingene deres.
- Plasser klekkebokser i inkubatoren og øk fuktigheten til 60 ± 2% til alle egg klekkes eller til dag 23 av inkubasjon.
MERK: Hvis egg ikke inneholder et embryo ved candling, kast egget. Dette vil forhindre forekomsten av rotte egg.
- Beregn mengden nikotinamid riboside som trengs for hver behandling ved hjelp av formelvekten på 290,07 g/mol, med 100 μL oppløsning injisert i hver eggeplommesekk.
2. Eutanasi og pectoralis store muskel prøve samling
- Chick eutanasi
- På inkubasjonsdagen 18, fjern de embryonale eggene fra inkubatoren og plasser dem ved romtemperatur i 1 time for å stoppe metabolismen. Fjern embryoene fra eggene, vei uten eggeplommesekken, og decapitate deretter. 12 h etter klekking, euthanize kyllingene ved eksponering for CO2 i 10 min, veie, raskt samle krone-til-rump lengde måling, og deretter halshugge.
MERK: Det faktum at fuglen ikke lenger har hodet, sikrer eutanasi. - Vurder følgende målinger (trinn 2.1.2.1-2.1.2.4) ved hjelp av digitale kalipere for embryoer og kyllinger.
- For å bestemme krone-til-rumpe lengde, legg kyllingen på siden med hodet gjemt ned og bena under kroppen. Mål fra toppen av hodet til halen.
- For å måle hodebredden måler du fra det ene ørehullet til det andre ørehullet.
- For å bestemme hodelengden, mål fra baksiden av nebbet til baksiden av kraniet.
- Ta en ikke-elastisk streng og vikle den rundt skallen fra det ene ørehullet til det andre for å måle hodeomkretsen. Plasser strengen på en metrisk linjal for å få et mål.
- Samle brystomkrets ved å pakke en streng rundt brystet, under hvor vingene kommer i kontakt med kroppen og plassere strengen på en metrisk linjal for å oppnå målingen.
- Spray bryster med 70% etanol, og bruk fingrene, trekk fjærene og huden for å avsløre pectoralis store muskler og ta målingene (trinn 2.1.4.1-2.1.4.2) med digitale kalipere.
- For å bestemme brystbredden, mål over brystet der vingene kommer i kontakt med kroppen.
- For å bestemme brystlengden, mål fra bunnen av kragebenet til toppen av fettputen.
- På inkubasjonsdagen 18, fjern de embryonale eggene fra inkubatoren og plasser dem ved romtemperatur i 1 time for å stoppe metabolismen. Fjern embryoene fra eggene, vei uten eggeplommesekken, og decapitate deretter. 12 h etter klekking, euthanize kyllingene ved eksponering for CO2 i 10 min, veie, raskt samle krone-til-rump lengde måling, og deretter halshugge.
- Ekstraksjon av pectoralis store muskler, måling og samling
- Bruk kirurgisk saks eller skalpell og tang, fjern høyre pectoralis store muskel ved å kutte langs kjølbenet og frigjøre muskelen fra kroppsveggen.
MERK: Pass på at du ikke samler pectoralis mindre muskler ved å visuelt identifisere at muskelen forblir på ribbein buret. - Etter å ha fjernet pectoralis store muskel, legg muskelen flat på en ispinne, og samle følgende målinger (trinn 2.2.2.1-2.2.2.3) ved hjelp av digitale kalipere.
- For å bestemme muskellengden, mål fra kranialen til den kaudale delen av muskelen.
- For å bestemme muskelbredden, mål på den bredeste delen av kranialdelen av muskelen.
- For å bestemme muskeltykkelsen, plukk opp brystet med tang og mål på den tykkeste delen av kranialdelen av muskelen.
- Om ønskelig, lagre denne muskelen og venstre pectoralis store muskel for videre analyser (som histologi, protein og genuttrykk, etc.) ved -80 °C i opptil et år.
- Bruk kirurgisk saks eller skalpell og tang, fjern høyre pectoralis store muskel ved å kutte langs kjølbenet og frigjøre muskelen fra kroppsveggen.
3. Statistikk
- Analyser dataene som en helt randomisert design med egg/kylling som eksperimentell enhet.
MERK: Nikotinamid riboside dose (DOS) fungerte som den faste effekten. Alle data ble analysert med et statistisk analyseprogram (se Materialfortegnelser), og parvise sammenligninger mellom minst firkantede behandlingsmåter ble beregnet. Forskjeller ble ansett som signifikante ved P < 0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Det var ingen DOS-effekter for kroppsvekten til dag-18 embryoer og klekkede kyllinger (P > 0,52; Figur 2). Det var ingen DOS-effekter for alle dag-18 embryo pectoralis store muskelmålinger (P > 0,24; Figur 3). Det var ingen DOS-effekter for klekkede chick pectoralis store muskellengde- og breddemålinger (P > 0,26); DOS påvirket imidlertid muskelvekt og dybde (P < 0,03; Figur 4). Kyllinger fra embryoer som ikke ble injisert med nikotinamid riboside hadde pectoralis store muskler som veide mindre enn kylling fra embryoer injisert med 500 og 1000 mM nikotinamid riboside (P < 0,03), men disse behandlingene var ikke forskjellige (P = 0,41) fra hverandre. Kyllinger fra embryoer injisert med 250 mM nikotinamid riboside var ikke varierende i pectoralis stor vekt sammenlignet med de andre behandlingene (P > 0,06). Kyllinger fra embryoer injisert med 0 og 250 mM nikotinamid riboside hadde mindre pectoralis stor dybde enn kyllinger fra embryoer injisert med 500 og 1000 mM nikotinamid riboside (P < 0,05), men disse behandlingene var ikke forskjellige (P = 0,95). Kylling fra embryoer injisert med 500 og 1000 mM nikotinamid riboside var ikke varierende (P = 0,73) i pectoralis stor dybde.
Figur 1: Nicotinamide riboside dose generell beregning og eksempler på de tre dosene som brukes i det nåværende eksperimentet. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Effekt av ved fôring av fire doser nikotinamid riboside på (A) dag-18 embryo og (B) luke kylling kroppsvekt. Embryoer ble injisert i eggeplommesekken med fire nikotinamid riboside doser ved dag-10 av inkubasjon. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Effekt av i ovo fôring av fire doser nikotinamid riboside på dag-18 embryo pectoralis store muskel. (A) Vekt. (B) Lengde. (C) Bredde. (D) Dybde. Embryoer ble injisert i eggeplommesekken med en av fire nikotinamid riboside doser på dag 10 av inkubasjon. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Effekt av i ovo fôring av fire doser nikotinamid riboside på luke chick body pectoralis store muskel. (A) Vekt. (B) Lengde. (C) Bredde. (D) Dybde. Embryoer ble injisert i eggeplommesekken med en av fire nikotinamid riboside doser på dag 10 av inkubasjon. a,b angir den statistiske forskjellen fra hverandre i en underfigur (P < 0,05). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Til dags dato er Gonzalez Laboratory ved University of Georgia den eneste gruppen som demonstrerer positive effekter av nikotinamid riboside i ovofôring på pectoralis stor muskelutvikling og vekst. Den første studien fant at i ovo fôring av 250 mM nikotinamid riboside økt muskelvekt og dimensjoner når injisert i eggeplomme sac9. I oppfølgingsstudien økte ikke injisering av økende nikotinamid ribosidedose i eggeplommen, i likhet med dosene som ble testet i den nåværende studien, pectoralis store muskelmorfometri utover 250 mM dose10. Disse to studiene benyttet en kommersiell avkastning broiler linje; Derfor ble denne studien utført for å demonstrere effekten av i ovo fôring av høy avkastning broiler embryoer med nikotinamid riboside.
Gjennom disse studiene er det identifisert flere kritiske trinn i denne protokollen som bestemmer suksess. Denne prosessen er kritisk viktig for de som ikke er kjent med å velge egg til inkubasjon for å redusere bakteriespredning og ikke partisk klekket kyllingresultater. For det første er det kritisk viktig å ikke velge skitne eller misshapen egg fordi de har bakterier som kan hemme de andre eggene. Disse bakteriene vil spre seg raskt gjennom inkubatoren og føre til at råtten eggforekomst øker drastisk; dermed påvirker antall embryoer og kyllinger tilgjengelig for prøvetaking.
Når det gjelder tildeling av egg til eksperimentelle behandlinger, må forskere bruke regnearkprogramvaremetoder beskrevet ovenfor for å sikre at all behandling som starter eggvekter er like. Å fullføre dette trinnet vil bli demonstrert i embryoet og klekket kylling hele kroppen morfometriske data. Dette vil sikre at alle eksperimentelle behandlingsmuskelforskjeller skyldes behandlingsapplikasjon. Det var ingen nikotinamid riboside effekter på alle kroppen morfometriske tiltak i Gonzalez og Jackson9 og Xu et al.10 studier. På grunn av disse konsistente funnene ble bare embryo- og klekket kylling kroppsvekt målt i den nåværende forskningen for å etablere mangel på nikotinamid riboside effekt på hele kroppen morfometri; Metoder for innsamling av morfometri for hele kroppen presenteres imidlertid i denne publikasjonen for de som ønsker å samle inn disse dataene. Det var ingen nikotinamid riboside dose effekter på embryo eller kylling kroppsvekt i den nåværende studien, fortsetter trenden rapportert tidligere.
Fordi denne metodikken strengt påvirker sekundær myogenese, kan fremtidige forskningsteam bli fristet til å injisere embryoer på et tidligere tidspunkt. Etter forfatternes erfaring reduserer tidlig injeksjon, fra inkubasjonsdager 0 til 5, drastisk lukkbarheten av egg med opptil 70 til 80%. En tidlig injeksjon er en betydelig begrensning av teknikken. Det kan tjene som et fremtidig forskningsområde, men etter forfatternes erfaring er tidlig injeksjon skadelig for lukkbarhet som reduserer verdien av denne teknologien sterkt.
Ved måling av morfometri av pectoralis store muskel, forskere må tenke to avgjørende hensyn. For det første anbefaler forfatterne en enkelt, godt trent forsker å fjerne alle muskler som brukes til morfometrisk analyse. Fordi pectoralis store muskelen er så liten, mye uønsket variasjon eller skjevhet kan bli introdusert i data ved å samle andre muskler utenfor muskelen av interesse. Bruk av en enkelt forsker vil sikre at den samme muskelen vil bli samlet i henhold til konsistente landemerker som brukes til å identifisere muskelen. For det andre, når du plasserer muskler på treoverflaten for måling, må det tas hensyn til å legge alle muskler i en naturlig posisjon. Dette gjelder spesielt for lengdemålingen, da den kan manipuleres ved å strekke muskelen når du legger den ned på måleflaten. Ingen nikotinamid riboside effekter ble sett i den nåværende studien for pectoralis store muskel morphometrics på inkubasjon dag 18. Xu et al.10 rapporterte ingen pectoralis store muskelvekt og lengdeforskjeller på inkubasjonsdag 19; Dermed kan det ikke manifestere seg før etter inkubasjonsdag 19 i disse to genetiske broilerlinjene.
Sammenlignet med tidligere publiserte studier var en av de store modifikasjonene i den nåværende studien bruk av kommersielt tilgjengelig kapselform nikotinamid riboside. I de forrige studiene ble 9,10, ren nikotinamid riboside sikret fra en produsent. Med hjelp fra produsenten ble forskningsgruppen informert om at det kommersielle produktet som ble brukt i den nåværende studien også hadde celluloseingredienser blandet inn i produktet, noe som reduserte den beregnede konsentrasjonen av nikotinamid ribose med 34%. Derfor, i den nåværende studien, pectoralis stor muskelvekt fra klekkede kyllinger injisert med 500 og 1000 mM nikotinamid riboside var større enn kyllinger fra embryoer injisert med 0 mM nikotinamid riboside med henholdsvis 15 og 10%. Denne vekten økte hovedsakelig på grunn av disse behandlingene pectoralis store muskeldybde øker med henholdsvis 17 og 7%. Dette svaret var mindre enn halvparten av de tidligere svarene. Xu et al.10 rapporterte nikotinamid riboside tilskudd, 250 til 1000 mM konsentrasjoner, økt pectoralis stor muskelvekt med 35% på grunn av økt muskellengde, bredde og dybde. Mens redusert respons kan skyldes først og fremst å supplere mindre nikotinamid riboside enn beregnet, er det også ukjent om cellulosemateriale hindret myogenese. Derfor anbefalte forfatterne all fremtidig forskning å bruke ren nikotinamid riboside og ikke kommersielt tilgjengelige produkter.
Uavhengig av de nåværende resultatene, vil det å følge metodene som er skissert i denne publikasjonen sikre robust gjennomføring av i ovofôringsstudier. Fremtidige forskere kan bruke metodene ovenfor for å teste andre forbindelser som positivt kan påvirke kylling kylling i ovo muskelutvikling og vekst.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen interessekonflikt å erklære.
Acknowledgments
Forfatterne vil takke Cobb Vantress, Inc. for donasjon av eggene og teknisk assistanse på egginkubasjon. Forfatterne vil takke ChromaDex, Inc. for nikotinamid riboside teknisk assistanse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Air-Tite™ Sterile Hypodermic Needles- 20 G; 1 inch | Fisher Scientific | 14-817-208 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-hypodermic-needles-32/p-7182916#?keyword= |
| Analytical Balance | VWR | VWR-214B2 | https://us.vwr.com/store/product/20970740/vwr-b2-series-analytical-and-precision-balances |
| Complete Dissection Set | DOCAZON | DK1001 | https://www.amazon.com/DOCAZON-Complete-Dissection-Set-Dissecting/dp/B07VBHKSW3 |
| Fisherbrand™ Isotemp™ General Purpose Deluxe Water Baths | Fisher Scientific | FSGPD02 | https://www.fishersci.com/shop/products/isotemp-general-purpose-water-baths/p-6448020 |
| Fisherbrand™ Sterile Syringes for Single Use | Fisher Scientific | 14-955-464 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-syringes-single-use-12/p-7114739#?keyword= |
| HIGH INTENSITY EGG CANDLER | Titan Incubators | N/A | https://www.titanincubators.com/collections/egg-candlers/products/egg-candler-high-intensity |
| Infrared Forehead Thermometer | HALIDODO | XZ-001 | |
| Microsoft Excel | Microsoft | N/A | |
| Neiko Tools Digital Caliper | Neiko Tools | 01408A | https://www.amazon.com/Neiko-01407A-Electronic-Digital-Stainless/dp/B000NEA0P8?th=1 |
| Nexcare Absolute Waterproof Tape | Nexcare Brand | 732 | https://www.nexcare.com/3M/en_US/nexcare/products/catalog/~/Nexcare-Absolute-Waterproof-Tape/?N=4326+3294529207+3294631805 &rt=rud |
| Pen Size Temperature and Humidity USB Data Logger with Display | Omega | OM-HL-SP-TH | https://www.omega.com/en-us/temperature-measurement/temperature-and-humidity-data-loggers/p/OM-HL-SP-Series |
| SAS 9.4 for Windows | SAS Institute | N/A | https://www.sas.com/en_us/home.html |
| Sportsman 1502 Incubator | GQF Manufacturing | 1502 | https://www.gqfmfg.com/item/1502-digital-sportsman/ |
| Tru Niagen (Nicotinamide riboside) | ChromaDex, Inc. | N/A | https://www.truniagen.com/truniagen-300mg/ - note, contact company for pure product |
| Wood Craft Sticks | Creatology | M20001547 | https://www.michaels.com/wood-craft-sticks-by-creatology/M20001547.html |
References
- Biressi, S., Molinaro, M., Cossu, G. Cellular heterogeneity during vertebrate skeletal muscle development. Developmental Biology. 308 (2), 281-293 (2007).
- Chal, J., Pourquie, O. Making muscle: Skeletal myogenesis in vivo and in vitro. Development. 144 (12), 2104-2122 (2017).
- Sharma, J., Burmester, B. Resistance of Marek's disease at hatching in chickens vaccinated as embryos with the Turkey herpesvirus. Avian Diseases. 26 (1), 134-149 (1982).
- Al-Murrani, W. K. Effect of injecting amino acids into the egg on embryonic and subsequent growth in the domestic fowl. British Poultry Science. 23 (2), 171-174 (1982).
- Ohta, Y., Kidd, M. T., Ishibashi, T. Embryo growth and amino acid concentration profiles of broiler breeder eggs, embryos, and chicks after in ovo administration of amino acids. Poultry Science. 80 (10), 1430-1436 (2001).
- Zhao, M. M., et al. In ovo feeding of creatie pyruvate increases hatching weight, growth performance, and muscle growth but has no effect on meat quality in broiler chickens. Livestock Science. 206, 59-64 (2017).
- Bieganowski, P., Brenner, C. Discoveries of nicotinamide riboside as a nutrient and conserved NRK genes establish a Preiss Handler independent route to NAD1 in fungi and humans. Cell. 117 (4), 495-502 (2004).
- Chi, Y., Sauve, A. Nicotinamide riboside, a trace nutrient in foods, is a Vitamin B3 with effects on energy metabolism and neuroprotection. Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care. 16 (6), 657-661 (2013).
- Gonzalez, J. M., Jackson, A. R. In ovo feeding of nicotinamide riboside affects pectoralis major muscle development. Translational Animal Science. 4 (3), 1-7 (2020).
- Xu, X., Jackson, A. R., Gonzalez, J. M. The effects of in ovo nicotinamide riboside dose on broiler myogenesis. Poultry Science. 100 (3), 100926 (2021).
