Summary
Se ha desarrollado una metodología robusta para llevar a cabo ensayos de investigación de alimentación en ovo utilizando huevos de pollos de engorde comerciales no incluidos para probar la capacidad de los compuestos naturales y sintéticos, en este caso, el ribósido de nicotinamida, para influir en el desarrollo y crecimiento muscular.
Abstract
En las últimas tres décadas, los científicos de carne roja y aves de corral se centraron en el desarrollo de estrategias y tecnologías para manipular el desarrollo muscular durante el desarrollo embrionario y fetal. Esta área continúa siendo un área de enfoque porque el número de fibras musculares se establece durante este tiempo y determina la base para todo el crecimiento futuro. En aves de corral, numerosos estudios demostraron que la alimentación con factores de crecimiento, vitaminas u otros nutrientes mejoró el desarrollo muscular embrionario e intestinal de los pollitos. Mejorar el desarrollo muscular ovo podría beneficiar a la industria avícola al influir posiblemente en el rendimiento de la carne, la tasa de crecimiento o las condiciones de miopatía. Durante los últimos cinco años, el Laboratorio González de la Universidad de Georgia desarrolló una metodología de nicotinamida ribósido in ovo feeding para embriones de pollo de engorde, lo que alteró el desarrollo muscular. Cuando se inyecta en el saco vitelino de un embrión en desarrollo, el ribósido de nicotinamida aumentó el peso muscular principal del pectoral y la densidad de la fibra muscular en la eclosión. Este protocolo demostrará una metodología para realizar de manera precisa y reproducible estudios de alimentación en ovo utilizando embriones comerciales de pollos de engorde estándar y de alto rendimiento. Estos datos y métodos permitirán a otros grupos de investigación realizar estudios de alimentación en ovo con mucho éxito y reproducibilidad.
Introduction
Desde 1960, el consumo per cápita de carne de aves de corral de los Estados Unidos ha aumentado a un ritmo asombroso, mientras que otras fuentes primarias de proteínas se han mantenido estancadas, disminuidas o mínimamente aumentadas. La industria avícola invirtió un tiempo considerable y esfuerzos de investigación optimizando la nutrición y la genética para producir un ave eficiente para mantenerse al día con la demanda. Debido a que el objetivo principal de la industria avícola es producir músculo para la conversión en carne, sus esfuerzos han cambiado drásticamente la masa muscular final del ave en la cosecha.
Como la mayoría de las especies, las aves de corral desarrollan músculo de manera bifásica. La miogénesis primaria utiliza células madre mesenquimales para producir fibras musculares primarias, que sirven como andamio para la segunda ola de desarrollo de fibras musculares1. En las aves de corral, la miogénesis primaria ocurre durante los días embrionarios 3 a 8, y la miogénesis secundaria ocurre de los días 8 a 212. Una vez desarrolladas, las fibras musculares primarias y secundarias sirven como base para todo el crecimiento muscular futuro a través de la hipertrofia celular. Por lo tanto, los científicos y la industria dedicaron un esfuerzo considerable a intentar manipular la miogénesis primaria y secundaria en todas las especies productoras de carne para maximizar el rendimiento de la carne.
Una tecnología explorada en aves de corral, llamada alimentación en ovo, implica la alimentación de compuestos a través de la inyección. In ovo feeding, una tecnología empleada por la industria avícola durante casi 40 años, se desarrolló inicialmente para la administración de vacunas3. La literatura documenta que la alimentación in ovo de diversos compuestos y nutrientes en diferentes períodos de desarrollo y ubicaciones dentro del huevo afectó positivamente en el desarrollo y crecimiento muscular ovo 4,5,6. Hasta la fecha, el Laboratorio González de la Universidad de Georgia es el pionero en la utilización de ribósido de nicotinamida en la alimentación ovo para manipular el desarrollo muscular de las aves de corral.
El ribósido de nicotinamida, un análogo piridina-nucleósido de la vitamina B3, produce NAD+ a través de la vía de rescate7. Dado que esta vía utiliza menos pasos enzimáticos para producir NAD +, la producción es la más eficiente8. González y Jackson9 demostraron que la suplementación del saco vitelino embrionario en desarrollo con ribósido de nicotinamida aumentó el peso muscular mayor del pollito eclosionado y la densidad de la fibra muscular. Esto fue confirmado más tarde por Xu et al.10, quienes encontraron que el aumento de la dosis de ribósido de nicotinamida aumentaba el peso muscular y aumentaba la densidad de la fibra muscular. Estos dos primeros estudios se realizaron en un pollo de engorde de rendimiento comercial. Debido a que los pollos de engorde de alto rendimiento poseen un potencial genético más significativo para el tamaño final de la masa muscular, el objetivo del estudio fue determinar los efectos de la dosis de ribósido de nicotinamida en el desarrollo muscular principal del pollito pectoral de alto rendimiento en la eclosión.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Todas las metodologías fueron aprobadas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Georgia.
1. Incubación de huevos y administración de tratamiento
- Asignación de obtención y tratamiento de óvulos
- Obtenga huevos de pollos de engorde de alto rendimiento no intervenidos y fertilizados y transpórtelos al laboratorio.
- Inspeccionar y desechar los huevos considerados de mala calidad.
NOTA: Elimine los huevos deformes (redondos, alargados, de lado de losa), agrietados, sucios / manchados, de cáscara delgada y arrugados. Esto es importante para minimizar el riesgo de huevos podridos. - Asigne números de huevos individuales, pese y registre números y pesos de huevos en un programa de software de hoja de cálculo.
- Utilice el programa de software de hoja de cálculo para clasificar los huevos por peso.
- Resalte las columnas de número de huevo y peso de huevo .
- Seleccione la pestaña Datos y luego Ordenar: ordene los datos por peso de huevo de menor a mayor.
NOTA: Para obtener la mejor tasa de eclosión, use huevos que pesen entre 40 y 70 g. - Según el diseño del experimento, asigne a los óvulos (numérica o alfabéticamente) un tratamiento de inyección y el día de la eutanasia. Ingrese el número de tratamiento y el día de la eutanasia en columnas separadas y asigne aleatoriamente estos factores dentro de cada estrato.
NOTA: Para esta publicación, los tratamientos se asignaron al azar dentro de cada estrato de 8 huevos.
- Genere una tabla dinámica dentro del programa de software de hoja de cálculo para garantizar que cada tratamiento posea pesos de huevo iniciales similares.
- Resalte todos los datos dentro de la hoja de cálculo que se van a analizar.
- Seleccione la opción Tabla dinámica en la pestaña Insertar .
- Seleccione la variable independiente (columna Día de eutanasia ) dentro de la subventana Campos de tabla dinámica y arrastre hasta el campo Filas .
- Seleccione la variable independiente (columna Tratamiento ) dentro de la subventana B y arrastre al campo Filas , en Día de la eutanasia.
- Seleccione la variable de interés dependiente (Egg Weight) y arrástrela al campo Valores .
- Cambie la configuración del campo Valor haciendo clic en la variable dependiente y seleccionando Configuración del campo Valor.
- Cambie la configuración a Promedio.
- Asignación de bandeja
- En el programa de software de hoja de cálculo, asigne huevos a una bandeja (numérica o alfabéticamente), de modo que los tratamientos se representen igualmente dentro de una bandeja.
- Asigne los primeros cuatro huevos con tratamientos asignados a la bandeja 1. Asigne los siguientes cuatro huevos a la bandeja 2 y continúe hasta que todos los huevos se asignen a una bandeja.
NOTA: Este paso variará dependiendo del número de incubadoras y bandejas utilizadas en el experimento.
- Asigne los primeros cuatro huevos con tratamientos asignados a la bandeja 1. Asigne los siguientes cuatro huevos a la bandeja 2 y continúe hasta que todos los huevos se asignen a una bandeja.
- En el programa de software de hoja de cálculo, asigne huevos a una bandeja (numérica o alfabéticamente), de modo que los tratamientos se representen igualmente dentro de una bandeja.
- Asegúrese de que todos los tratamientos estén igualmente representados en una bandeja mediante la función de tabla dinámica .
- Resalte todos los datos dentro de la hoja de cálculo que se van a analizar.
- Seleccione la opción Tabla dinámica en la pestaña Insertar .
- Seleccione la variable independiente (columna Bandeja ) dentro de la subventana Campos de tabla dinámica y arrastre hasta el campo Filas .
- Seleccione la variable de interés dependiente (Egg Weight) y arrástrela al campo Valores .
- Cambie la configuración del campo Valor haciendo clic en la variable dependiente y seleccionando Configuración del campo Valor.
- Cambie la configuración a Contar.
- Incubación
- Coloque los huevos en su bandeja de incubación adecuada y preincube a 26,6 °C con un 40% de ± un 4% de humedad relativa durante 6 h.
NOTA: Algunas incubadoras tienen sistemas de autocontrol que pueden no ser del todo precisos. Utilice otros dispositivos de monitoreo de temperatura y humedad para controlar las condiciones. - Aumentar la temperatura de la incubadora a 37 °C con un 40% de ± un 4% de humedad relativa y mantener estas condiciones hasta el día 18 de incubación.
- Para garantizar una temperatura adecuada de la incubadora, mida las temperaturas de la superficie de varios huevos en toda la incubadora dos veces al día con un termómetro térmico de la superficie para garantizar que las temperaturas de la superficie sean de 37 ° C.
- Gire los huevos cada hora para reposicionarlos.
- Registre el peso de los huevos diariamente para garantizar una pérdida de peso de huevo del 10% al 12.5% durante los primeros 18.5 días de incubación.
NOTA: Si la pérdida de peso no está dentro del rango deseado, ajuste (aumente o disminuya) la humedad.
- Coloque los huevos en su bandeja de incubación adecuada y preincube a 26,6 °C con un 40% de ± un 4% de humedad relativa durante 6 h.
- Día de incubación-10 en ovo inyecciones
- Calcule la cantidad de ribósido de nicotinamida necesaria para cada tratamiento utilizando el peso de la fórmula de 290,07 g/mol, con 100 μL de solución inyectada en el saco vitelino de cada huevo.
NOTA: Se utilizará solución salina estéril (0,9%) como diluyente para todas las soluciones.
Cálculo: 50 huevos × 100 μL = 5.000 μL (5 mL) de solución necesaria. Redondee hasta 6 ml para asegurarse de que hay suficiente solución disponible para inyección (Figura 1).- Una vez hechas las soluciones, colócalas en un baño de agua a 37 °C para mantenerlas a la temperatura de los huevos.
- Retire los huevos de la incubadora una bandeja a la vez y cúbralos con una toalla tibia.
- Huevo de vela para localizar el saco vitelino y limpiar la zona de inyección con etanol al 70%.
- Inserte una aguja hipodérmica estéril de 20 G, 2,54 cm ~ 1 cm en la cáscara del huevo e inyecte la dosis asignada en el saco vitelino. Inyectar los óvulos del tratamiento con ribósido de nicotinamida 0 mM con 100 μL de solución salina estéril (0,9%).
- Inmediatamente, cubra el sitio de inyección con un pequeño trozo de cinta impermeable absoluta para evitar la pérdida excesiva de humedad.
- Una vez que todos los huevos hayan recibido su tratamiento, coloque la bandeja de nuevo en la incubadora.
- En el día 18 de incubación, retire los huevos de las bandejas y colóquelos en cajas para incubar de acuerdo con sus tratamientos.
- Coloque las cajas de incubación en la incubadora y aumente la humedad a 60 ± 2% hasta que todos los huevos eclosionen o hasta el día 23 de incubación.
NOTA: Si los óvulos no contienen un embrión en el candling, deseche el huevo. Esto evitará la aparición de huevos podridos.
- Calcule la cantidad de ribósido de nicotinamida necesaria para cada tratamiento utilizando el peso de la fórmula de 290,07 g/mol, con 100 μL de solución inyectada en el saco vitelino de cada huevo.
2. Eutanasia y recolección de muestras de músculo pectoral mayor
- Eutanasia de pollitos
- En el día 18 de incubación, retire los huevos embrionarios de la incubadora y colóquelos a temperatura ambiente durante 1 h para detener el metabolismo. Retire los embriones de los huevos, pese sin el saco vitelino y luego decapite. 12 h después de la eclosión, sacrificar a los polluelos por exposición al CO2 durante 10 minutos, pesar, recoger rápidamente la medición de la longitud de la corona a la grupa y luego decapitar.
NOTA: El hecho de que el ave ya no tenga cabeza asegura la eutanasia. - Considere las siguientes mediciones (pasos 2.1.2.1-2.1.2.4) utilizando pinzas digitales para embriones y pollitos.
- Para determinar la longitud de la corona a la grupa, coloque el polluelo de lado con la cabeza metida hacia abajo y las patas debajo de su cuerpo. Mide desde la parte superior de la cabeza hasta la cola.
- Para medir el ancho de la cabeza, mida de un orificio para la oreja al otro orificio para la oreja.
- Para determinar la longitud de la cabeza, mida desde la parte posterior del pico hasta la parte posterior del cráneo.
- Tome una cuerda no elástica y envuélvala alrededor del cráneo de un orificio de la oreja al otro para medir la circunferencia de la cabeza. Coloque la cadena en una regla métrica para obtener una medición.
- Recoge la circunferencia del pecho envolviendo una cuerda alrededor del pecho, debajo de donde las alas entran en contacto con el cuerpo y colocando la cuerda en una regla métrica para obtener la medición.
- Rocíe los senos con etanol al 70% y, con los dedos, tire de las plumas y la piel para revelar los músculos pectorales mayores y tome las medidas (pasos 2.1.4.1-2.1.4.2) con pinzas digitales.
- Para determinar el ancho del pecho, mida a través del pecho donde las alas entran en contacto con el cuerpo.
- Para determinar la longitud del pecho, mida desde la parte inferior de la clavícula hasta la parte superior de la almohadilla de grasa.
- En el día 18 de incubación, retire los huevos embrionarios de la incubadora y colóquelos a temperatura ambiente durante 1 h para detener el metabolismo. Retire los embriones de los huevos, pese sin el saco vitelino y luego decapite. 12 h después de la eclosión, sacrificar a los polluelos por exposición al CO2 durante 10 minutos, pesar, recoger rápidamente la medición de la longitud de la corona a la grupa y luego decapitar.
- Extracción del músculo pectoral mayor , medición y recolección
- Usando tijeras quirúrgicas o bisturí y fórceps, retire el músculo pectoral mayor derecho cortando a lo largo del hueso de la quilla y liberando el músculo de la pared del cuerpo.
NOTA: Asegúrese de no recolectar el músculo pectoral menor identificando visualmente que el músculo permanece en la caja torácica. - Después de extirpar el músculo pectoral mayor , coloque el músculo plano sobre un palito de paleta y recoja las siguientes mediciones (pasos 2.2.2.1-2.2.2.3) utilizando pinzas digitales.
- Para determinar la longitud del músculo, mida desde el cráneo hasta la porción caudal del músculo.
- Para determinar el ancho muscular, mida en la porción más ancha de la parte craneal del músculo.
- Para determinar el grosor muscular, recoja el seno con fórceps y mida en la parte más gruesa de la parte craneal del músculo.
- Si lo desea, guarde este músculo y el músculo pectoral mayor izquierdo para análisis adicionales (como histología, expresión de proteínas y genes, etc.) a -80 ° C durante un máximo de un año.
- Usando tijeras quirúrgicas o bisturí y fórceps, retire el músculo pectoral mayor derecho cortando a lo largo del hueso de la quilla y liberando el músculo de la pared del cuerpo.
3. Estadísticas
- Analice los datos como un diseño completamente aleatorio con huevo / pollito como unidad experimental.
NOTA: La dosis de ribósido de nicotinamida (DOS) sirvió como efecto fijo. Todos los datos se analizaron con un programa de software de análisis estadístico (ver Tabla de Materiales), y se calcularon las comparaciones por pares entre las medias de tratamiento menos cuadradas. Las diferencias se consideraron significativas en P < 0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
No hubo efectos dos para el peso corporal de los embriones del día 18 y los pollitos eclosionados (P > 0,52; Figura 2). No hubo efectos del DOS para todas las mediciones musculares del embrión pectoral mayor del día 18 (P > 0,24; Figura 3). No hubo efectos del DOS para las mediciones de longitud y anchura muscular mayor del pollito eclosionado (P > 0,26); sin embargo, el DOS sí afectó el peso y la profundidad muscular (P < 0,03; Figura 4). Los pollitos de embriones no inyectados con ribósido de nicotinamida tenían músculos pectorales mayores que pesaban menos que los pollitos de embriones inyectados con 500 y 1.000 mM de nicotinamida ribósido (P < 0,03), pero estos tratamientos no difirieron (P = 0,41) entre sí. Los pollitos de embriones inyectados con 250 mM de nicotinamida ribósido no variaron en peso pectoral mayor en comparación con los otros tratamientos (P > 0,06). Los pollitos de embriones inyectados con 0 y 250 mM de nicotinamida ribósido tenían menos profundidad pectoral mayor que los pollitos de embriones inyectados con 500 y 1.000 mM de nicotinamida ribósido (P < 0,05), pero estos tratamientos no difirieron (P = 0,95). El pollito de embriones inyectados con 500 y 1.000 mM de nicotinamida ribósido no varió (P = 0,73) en la profundidad mayor del pectoral .
Figura 1: Cálculo general de la dosis de ribósido de nicotinamida y ejemplos de las tres dosis utilizadas en el experimento actual. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Efecto de la alimentación in ovo de cuatro dosis de ribósido de nicotinamida en (A) el embrión del día 18 y (B) el peso corporal del pollito de eclosión. Los embriones se inyectaron en el saco vitelino con cuatro dosis de ribósido de nicotinamida al día 10 de la incubación. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: Efecto de la alimentación in ovo de cuatro dosis de ribósido de nicotinamida en el músculo pectoral mayor embrionario del día 18. a) Peso. b) Longitud. (C) Ancho. d) Profundidad. Los embriones se inyectaron en el saco vitelino con una de las cuatro dosis de ribósido de nicotinamida en el día 10 de incubación. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: Efecto de la alimentación in ovo de cuatro dosis de nicotinamida ribósido sobre el músculo pectoral mayor del cuerpo del pollito. (A) Peso. b) Longitud. (C) Ancho. d) Profundidad. Los embriones se inyectaron en el saco vitelino con una de las cuatro dosis de ribósido de nicotinamida en el día 10 de incubación. a,b indica la diferencia estadística entre sí dentro de una subfigura (P < 0,05). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hasta la fecha, el Laboratorio González de la Universidad de Georgia es el único grupo que demuestra los efectos positivos del ribósido de nicotinamida en la alimentación de ovo en el desarrollo y crecimiento muscular mayor de la pectoral . El primer estudio encontró que en la alimentación ovo de nicotinamida de 250 mM ribósido aumentó el peso muscular y las dimensiones cuando se inyectó en el saco vitelino9. En el estudio de seguimiento, la inyección de dosis creciente de ribósido de nicotinamida en la yema, similar a las dosis probadas en el estudio actual, no aumentó la morfometría muscular pectoral mayor más allá de la dosis de 250 mM10. Estos dos estudios utilizaron una línea de pollos de engorde de rendimiento comercial; por lo tanto, este estudio se realizó para demostrar los efectos de la alimentación in ovo de embriones de pollos de engorde de alto rendimiento con ribósido de nicotinamida.
A través de estos estudios, se han identificado varios pasos críticos ubicados en este protocolo que determinan el éxito. Este proceso es de vital importancia para aquellos que no están familiarizados con la selección de huevos para la incubación para reducir la propagación de bacterias y no sesgar los resultados de los pollitos eclosionados. Primero, es de vital importancia no elegir huevos sucios o deformes porque poseen bacterias que podrían obstaculizar los otros huevos. Estas bacterias se propagarán rápidamente a través de la incubadora y harán que la incidencia de huevos podridos aumente drásticamente; afectando así al número de embriones y pollitos disponibles para el muestreo.
En cuanto a la asignación de óvulos a tratamientos experimentales, los investigadores deben utilizar métodos de software de hoja de cálculo descritos anteriormente para garantizar que todos los pesos de huevo que comienzan con el tratamiento sean iguales. Completar este paso se demostrará en los datos morfométricos de cuerpo entero de embriones y pollitos eclosionados. Esto asegurará que todas las diferencias musculares del tratamiento experimental se deban a la aplicación del tratamiento. No hubo efectos ribósidos de nicotinamida en todas las medidas morfométricas corporales en los estudios Gonzalez y Jackson9 y Xu et al.10 . Debido a estos hallazgos consistentes, solo se midieron los pesos corporales de embriones y pollitos eclosionados en la investigación actual para establecer la falta de un efecto ribósido de nicotinamida en la morfometría de todo el cuerpo; sin embargo, las metodologías para recopilar morfometría de cuerpo entero se presentan en esta publicación para aquellos que deseen recopilar esos datos. No hubo efectos de la dosis de ribósido de nicotinamida en el peso corporal de embriones o pollitos en el estudio actual, continuando la tendencia informada anteriormente.
Debido a que esta metodología afecta estrictamente a la miogénesis secundaria, los futuros equipos de investigación pueden verse tentados a inyectar embriones en un punto de tiempo más temprano. En la experiencia de los autores, la inyección temprana, desde los días de incubación 0 a 5, reduce drásticamente la incubabilidad de los huevos hasta en un 70 a 80%. Una inyección temprana es una limitación significativa de la técnica. Podría servir como un área futura de investigación, pero en la experiencia de los autores, la inyección temprana es perjudicial para la incubabilidad, lo que reduce gravemente el valor de esta tecnología.
Al medir la morfometría del músculo pectoral mayor , los investigadores deben reflexionar sobre dos consideraciones cruciales. Primero, los autores aconsejan a un solo investigador bien entrenado que elimine todos los músculos utilizados para el análisis morfométrico. Debido a que el músculo pectoral mayor es tan pequeño, se podría introducir una variación o sesgo no deseado en los datos mediante la recopilación de otros músculos fuera del músculo de interés. La utilización de un solo investigador asegurará que el mismo músculo se recolecte de acuerdo con los puntos de referencia consistentes utilizados para identificar el músculo. En segundo lugar, al colocar los músculos en la superficie de la madera para la medición, se debe tener cuidado al colocar todos los músculos en una posición natural. Esto es especialmente cierto para la medición de longitud, ya que se puede manipular estirando el músculo al colocarlo en la superficie de medición. No se observaron efectos de ribósido de nicotinamida en el estudio actual para la morfometría muscular pectoral mayor en el día 18 de incubación. Xu et al.10 no reportaron diferencias de peso y longitud muscular mayor pectoral en el día 19 de incubación; por lo tanto, lo que indica el efecto del ribósido de nicotinamida sobre la morfometría muscular completa puede no manifestarse hasta después del día 19 de incubación en estas dos líneas genéticas de pollos de engorde.
En comparación con los estudios publicados anteriormente, una de las principales modificaciones en el estudio actual fue el uso de ribósido de nicotinamida en forma de cápsula disponible comercialmente. En los estudios previos 9,10, el ribósido de nicotinamida pura se obtuvo de un fabricante. Con la ayuda del fabricante, se informó al grupo de investigación que el producto comercial utilizado en el estudio actual también tenía ingredientes de celulosa mezclados en el producto, reduciendo la concentración calculada de nicotinamida ribosa en un 34%. Por lo tanto, en el presente estudio, el peso muscular mayor de los pectorales de los pollitos eclosionados inyectados con 500 y 1.000 mM de nicotinamida ribósido fue mayor que el de los pollitos de embriones inyectados con 0 mM de nicotinamida ribósido en un 15 y 10%, respectivamente. Este peso aumentó principalmente debido a que la profundidad muscular pectoral mayor de estos tratamientos aumentó en un 17 y 7%, respectivamente. Esta respuesta fue menos de la mitad de las respuestas anteriores. Xu et al.10 reportaron suplementación con ribósido de nicotinamida, concentraciones de 250 a 1,000 mM, aumento del peso muscular mayor del pectoral en un 35% debido al aumento de la longitud, anchura y profundidad muscular. Si bien la respuesta reducida podría deberse principalmente a la suplementación con menos ribósido de nicotinamida de lo calculado, también se desconoce si el material de celulosa dificultó la miogénesis. Por lo tanto, los autores recomendaron que todas las investigaciones futuras utilicen ribósido de nicotinamida pura y no productos disponibles comercialmente.
Independientemente de los resultados actuales, seguir las metodologías descritas en esta publicación asegurará una ejecución robusta de los estudios de alimentación in ovo . Los futuros investigadores pueden utilizar los métodos anteriores para probar otros compuestos que pueden afectar positivamente al pollo de engorde en el desarrollo y crecimiento muscular ovo.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Los autores no tienen ningún conflicto de intereses que declarar.
Acknowledgments
Los autores desean agradecer a Cobb Vantress, Inc. por la donación de los óvulos y la prestación de asistencia técnica sobre la incubación de huevos. Los autores desean agradecer a ChromaDex, Inc. por la asistencia técnica de nicotinamida ribósido.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Air-Tite™ Sterile Hypodermic Needles- 20 G; 1 inch | Fisher Scientific | 14-817-208 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-hypodermic-needles-32/p-7182916#?keyword= |
| Analytical Balance | VWR | VWR-214B2 | https://us.vwr.com/store/product/20970740/vwr-b2-series-analytical-and-precision-balances |
| Complete Dissection Set | DOCAZON | DK1001 | https://www.amazon.com/DOCAZON-Complete-Dissection-Set-Dissecting/dp/B07VBHKSW3 |
| Fisherbrand™ Isotemp™ General Purpose Deluxe Water Baths | Fisher Scientific | FSGPD02 | https://www.fishersci.com/shop/products/isotemp-general-purpose-water-baths/p-6448020 |
| Fisherbrand™ Sterile Syringes for Single Use | Fisher Scientific | 14-955-464 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-syringes-single-use-12/p-7114739#?keyword= |
| HIGH INTENSITY EGG CANDLER | Titan Incubators | N/A | https://www.titanincubators.com/collections/egg-candlers/products/egg-candler-high-intensity |
| Infrared Forehead Thermometer | HALIDODO | XZ-001 | |
| Microsoft Excel | Microsoft | N/A | |
| Neiko Tools Digital Caliper | Neiko Tools | 01408A | https://www.amazon.com/Neiko-01407A-Electronic-Digital-Stainless/dp/B000NEA0P8?th=1 |
| Nexcare Absolute Waterproof Tape | Nexcare Brand | 732 | https://www.nexcare.com/3M/en_US/nexcare/products/catalog/~/Nexcare-Absolute-Waterproof-Tape/?N=4326+3294529207+3294631805 &rt=rud |
| Pen Size Temperature and Humidity USB Data Logger with Display | Omega | OM-HL-SP-TH | https://www.omega.com/en-us/temperature-measurement/temperature-and-humidity-data-loggers/p/OM-HL-SP-Series |
| SAS 9.4 for Windows | SAS Institute | N/A | https://www.sas.com/en_us/home.html |
| Sportsman 1502 Incubator | GQF Manufacturing | 1502 | https://www.gqfmfg.com/item/1502-digital-sportsman/ |
| Tru Niagen (Nicotinamide riboside) | ChromaDex, Inc. | N/A | https://www.truniagen.com/truniagen-300mg/ - note, contact company for pure product |
| Wood Craft Sticks | Creatology | M20001547 | https://www.michaels.com/wood-craft-sticks-by-creatology/M20001547.html |
References
- Biressi, S., Molinaro, M., Cossu, G. Cellular heterogeneity during vertebrate skeletal muscle development. Developmental Biology. 308 (2), 281-293 (2007).
- Chal, J., Pourquie, O. Making muscle: Skeletal myogenesis in vivo and in vitro. Development. 144 (12), 2104-2122 (2017).
- Sharma, J., Burmester, B. Resistance of Marek's disease at hatching in chickens vaccinated as embryos with the Turkey herpesvirus. Avian Diseases. 26 (1), 134-149 (1982).
- Al-Murrani, W. K. Effect of injecting amino acids into the egg on embryonic and subsequent growth in the domestic fowl. British Poultry Science. 23 (2), 171-174 (1982).
- Ohta, Y., Kidd, M. T., Ishibashi, T. Embryo growth and amino acid concentration profiles of broiler breeder eggs, embryos, and chicks after in ovo administration of amino acids. Poultry Science. 80 (10), 1430-1436 (2001).
- Zhao, M. M., et al. In ovo feeding of creatie pyruvate increases hatching weight, growth performance, and muscle growth but has no effect on meat quality in broiler chickens. Livestock Science. 206, 59-64 (2017).
- Bieganowski, P., Brenner, C. Discoveries of nicotinamide riboside as a nutrient and conserved NRK genes establish a Preiss Handler independent route to NAD1 in fungi and humans. Cell. 117 (4), 495-502 (2004).
- Chi, Y., Sauve, A. Nicotinamide riboside, a trace nutrient in foods, is a Vitamin B3 with effects on energy metabolism and neuroprotection. Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care. 16 (6), 657-661 (2013).
- Gonzalez, J. M., Jackson, A. R. In ovo feeding of nicotinamide riboside affects pectoralis major muscle development. Translational Animal Science. 4 (3), 1-7 (2020).
- Xu, X., Jackson, A. R., Gonzalez, J. M. The effects of in ovo nicotinamide riboside dose on broiler myogenesis. Poultry Science. 100 (3), 100926 (2021).
