Summary
En robust metod har utvecklats för att genomföra i ovo utfodring forskningsförsök med hjälp av unincubated kommersiella slaktkycklingar för att testa förmågan hos naturliga och syntetiska föreningar, i detta fall nikotinamid ribosid, att påverka muskelutveckling och tillväxt.
Abstract
Under de senaste tre decennierna fokuserade forskare på rött kött och fjäderfä på att utveckla strategier och tekniker för att manipulera muskelutveckling under embryonal och fosterutveckling. Detta område fortsätter att vara ett fokusområde eftersom muskelfibernummer etableras under denna tid och bestämmer grunden för all framtida tillväxt. Hos fjäderfä visade många studier i ovo utfodring av tillväxtfaktorer, vitaminer eller andra näringsämnen förbättrade kycklingembryonens muskel- och tarmutveckling. Förbättring av ovo muskelutveckling kan gynna fjäderfäindustrin genom att eventuellt påverka köttutbyte, tillväxttakt eller myopatiförhållanden. Under de senaste fem åren har Gonzalez Laboratory vid University of Georgia utvecklat en nikotinamidribosid i ovo-utfodringsmetodik för broiler-kycklingembryon, vilket förändrade muskelutvecklingen. När det injiceras i ett utvecklande embryos äggula sac, ökade nikotinamid ribosid pectoralis större muskelvikt och muskelfiberdensitet vid luckan. Detta protokoll kommer att demonstrera en metod för att exakt och reproducerbart genomföra i ovo-utfodringsstudier med användning av kommersiella standard- och högavkastande slaktkycklingembryon. Dessa data och metoder kommer att göra det möjligt för andra forskargrupper att utföra i ovo utfodringsstudier med stor framgång och reproducerbarhet.
Introduction
Sedan 1960 har USA: s konsumtion per capita av kött från fjäderfä ökat i en häpnadsväckande takt, medan andra primära proteinkällor har förblivit stillastående, minskat eller minimalt ökat. Fjäderfäindustrin investerade betydande tid och forskningsinsatser för att optimera näring och genetik för att producera en effektiv fågel för att hålla jämna steg med efterfrågan. Eftersom fjäderfäindustrins huvudmål är att producera muskler för omvandling till kött, har deras ansträngningar drastiskt förändrat fågelns ultimata muskelmassa vid skörden.
Liksom de flesta arter utvecklar fjäderfä muskler på ett bifasiskt sätt. Primär myogenes använder mesenkymala stamceller för att producera primära muskelfibrer, som fungerar som byggnadsställning för den andra vågen av muskelfiberutveckling1. Hos fjäderfä uppträder primär myogenes under embryonala dagar 3 till 8, och sekundär myogenes sker från dag 8 till 212. När de väl har utvecklats tjänar primära och sekundära muskelfibrer som grund för all framtida muskeltillväxt genom cellulär hypertrofi. Därför spenderade forskare och industri stora ansträngningar på att försöka manipulera primär och sekundär myogenes i alla köttproducerande arter för att maximera köttutbytet.
En teknik som utforskas hos fjäderfä, kallad ovo-utfodring, innebär utfodring av föreningar genom injektion. I ovo utfodring, en teknik som används av fjäderfäindustrin i nästan 40 år, utvecklades ursprungligen för vaccinadministration3. Litteraturen dokumenterar att i ovo utfodring av olika föreningar och näringsämnen vid olika utvecklingsperioder och platser i ägget positivt påverkat i ovo muskelutveckling och tillväxt 4,5,6. Hittills är Gonzalez Laboratory vid University of Georgia pionjären när det gäller att använda nikotinamidribosid i ovo-utfodring för att manipulera fjäderfämuskelutveckling.
Nikotinamidribosid, en pyridin-nukleosidanalog av vitamin B3, producerar NAD + genom bärgningsvägen7. Eftersom denna väg använder färre enzymatiska steg för att producera NAD +, är produktionen den mest effektiva8. Gonzalez och Jackson9 visade att tillskott av att utveckla broiler embryo äggula sac med nikotinamid ribosid ökade kläckt chick pectoralis stor muskelvikt och muskelfiber densitet. Detta bekräftades senare av Xu et al.10, som fann att ökad nikotinamid ribosiddos ökade muskelvikten och ökade muskelfiberdensiteten. Dessa två första studier genomfördes i en kommersiell avkastningsbroiler. Eftersom högavkastningsbroilers har en mer signifikant genetisk potential för ultimat muskelmassastorlek, var studiens mål att bestämma effekterna av nikotinamidribosiddos på högavkastningsbrokostäckt kycklingpectoralis stor muskelutveckling och tillväxt vid kläckningen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla metoder godkändes av University of Georgia Institutional Animal Care and Use Committee.
1. Ägginkubation och administrering av behandling
- Äggupphandling och behandlingsuppdrag
- Skaffa unincubated, befruktade högavkastande slaktkycklingägg och transportera dem till laboratoriet.
- Inspektera och kassera ägg som anses vara av dålig kvalitet.
OBS: Eliminera missformade ägg (runda, långsträckta, plattsidiga), spruckna, smutsiga / färgade, tunnskalade och skrynkliga. Detta är viktigt för att minimera risken för ruttna ägg. - Tilldela enskilda äggnummer, väga och registrera äggnummer och vikter i ett kalkylprogram.
- Använd kalkylprogrammet för att sortera ägg efter vikt.
- Markera kolumnerna äggnummer och äggvikt .
- Välj fliken Data och sedan Sortera - sortera data efter äggvikt från minsta till största.
OBS: För bästa kläckningshastighet, använd ägg som väger mellan 40 och 70 g. - Baserat på experimentets utformning, tilldela ägg (numeriskt eller alfabetiskt) en injektionsbehandling och dag för eutanasi. Ange behandlingsnummer och dag för eutanasi i separata kolumner och slumpmässigt tilldela dessa faktorer inom varje stratum.
OBS: För denna publikation tilldelades behandlingar slumpmässigt inom varje 8-äggskikt.
- Generera en pivottabell i kalkylprogrammet för att säkerställa att varje behandling har liknande startäggvikter.
- Markera alla data i kalkylbladet som ska analyseras.
- Välj alternativet Pivottabell under fliken Infoga .
- Markera den oberoende variabeln (kolumnen Dag för dödshjälp ) i underfönstret Pivottabellfält och dra till fältet Rader .
- Välj den oberoende variabeln (kolumnen Behandling ) i underfönstret B och dra till fältet Rader under Dag för dödshjälp.
- Välj den beroende variabeln av intresse (äggvikt) och dra den till fältet Värden .
- Ändra inställningar för värdefält genom att klicka på den beroende variabeln och välja Inställningar för värdefält.
- Ändra inställningen till Genomsnitt.
- Bricka uppgift
- I kalkylprogrammet tilldelar du ägg till ett fack (numeriskt eller alfabetiskt), så att behandlingarna är lika representerade i ett fack.
- Tilldela de fyra första äggen med tilldelade behandlingar till fack 1. Tilldela de följande fyra äggen till bricka 2 och fortsätt tills alla ägg har tilldelats en bricka.
OBS: Detta steg varierar beroende på antalet inkubatorer och brickor som används i experimentet.
- Tilldela de fyra första äggen med tilldelade behandlingar till fack 1. Tilldela de följande fyra äggen till bricka 2 och fortsätt tills alla ägg har tilldelats en bricka.
- I kalkylprogrammet tilldelar du ägg till ett fack (numeriskt eller alfabetiskt), så att behandlingarna är lika representerade i ett fack.
- Se till att alla behandlingar är lika representerade i ett fack med hjälp av pivottabellfunktionen .
- Markera alla data i kalkylbladet som ska analyseras.
- Välj alternativet Pivottabell under fliken Infoga .
- Markera den oberoende variabeln (kolumnen Fack ) i underfönstret Pivottabellfält och dra till fältet Rader .
- Välj den beroende variabeln av intresse (äggvikt) och dra den till fältet Värden .
- Ändra inställningar för värdefält genom att klicka på den beroende variabeln och välja Inställningar för värdefält.
- Ändra inställningen till Antal.
- Inkubation
- Lägg äggen i lämplig inkubationsbricka och förinkubera dem vid 26,6 °C med 40 % ± 4 % relativ luftfuktighet i 6 timmar.
OBS: Vissa inkubatorer har självövervakningssystem som kanske inte är helt korrekta. Använd andra temperatur- och fuktighetsövervakningsanordningar för att kontrollera förhållandena. - Öka inkubatortemperaturen till 37 °C med 40 % ± 4 % relativ luftfuktighet och behåll dessa förhållanden fram till inkubationsdag 18.
- För att säkerställa korrekt inkubatortemperatur, mät flera äggs yttemperaturer i hela inkubatorn två gånger dagligen med en termisk yttermometer för att säkerställa att yttemperaturen är 37 ° C.
- Rotera ägg varje timme för att flytta.
- Registrera äggvikter dagligen för att säkerställa 10% -12,5% äggviktsförlust under de första 18,5 dagarna av inkubation.
OBS: Om viktminskning inte ligger inom önskat intervall, justera (öka eller minska) luftfuktigheten.
- Lägg äggen i lämplig inkubationsbricka och förinkubera dem vid 26,6 °C med 40 % ± 4 % relativ luftfuktighet i 6 timmar.
- Inkubation dag-10 i ovo injektioner
- Beräkna mängden nikotinamidribosid som behövs för varje behandling med formelvikten 290,07 g/mol, med 100 μL lösning injicerad i varje äggula.
OBS: Steril saltlösning (0,9%) lösning kommer att användas som utspädningsmedel för alla lösningar.
Beräkning: 50 ägg × 100 μL = 5 000 μL (5 ml) lösning som behövs. Avrunda upp till 6 ml för att säkerställa att tillräckligt med lösning finns tillgänglig för injektion (figur 1).- När lösningar har gjorts, placera dem i ett 37 ° C vattenbad för att hålla dem vid äggets temperatur.
- Ta bort ägg från inkubatorn en bricka i taget och täck med en varm handduk.
- Ljusägg för att lokalisera äggula sac och rengöra injektionsområdet med 70% etanol.
- Sätt in en steril 20 G, 2,54 cm hypodermisk nål ~ 1 cm i äggskalet och injicera den tilldelade dosen i äggula sac. Injicera äggen från 0 mM nikotinamidribosidbehandling med 100 μL steril saltlösning (0,9%).
- Täck omedelbart injektionsstället med en liten bit absolut vattentät tejp för att undvika överdriven fuktförlust.
- När alla ägg har fått sin behandling, placera brickan tillbaka i inkubatorn.
- På inkubationsdag 18, ta bort ägg från brickor och placera dem i kläcklådor enligt deras behandlingar.
- Placera kläcklådor i inkubatorn och öka luftfuktigheten till 60 ± 2% tills alla ägg kläcks eller fram till dag 23 av inkubation.
OBS: Om ägg inte innehåller ett embryo vid candling, kassera ägget. Detta kommer att förhindra förekomsten av ruttna ägg.
- Beräkna mängden nikotinamidribosid som behövs för varje behandling med formelvikten 290,07 g/mol, med 100 μL lösning injicerad i varje äggula.
2. Eutanasi och pectoralis större muskelprovsamling
- Chick eutanasi
- På inkubationsdag 18, ta bort de embryonala äggen från inkubatorn och placera dem vid rumstemperatur i 1 timme för att upphöra med ämnesomsättningen. Ta bort embryon från äggen, väg utan äggula sac och halshugg sedan. 12 h efterkläckning, avliva kycklingarna genom exponering för CO2 i 10 min, väga, samla snabbt kron-till-rumplängdsmätning och halshugg sedan.
OBS: Det faktum att fågeln inte längre har huvudet säkerställer eutanasi. - Tänk på följande mätningar (steg 2.1.2.1-2.1.2.4) med hjälp av digitala bromsok för embryon och kycklingar.
- För att bestämma kron-till-rumplängd, lägg kycklingen på sin sida med huvudet nedstoppat och benen under kroppen. Mät från toppen av huvudet till svansen.
- För att mäta huvudbredden, mät från ett öronhål till det andra öronhålet.
- För att bestämma huvudlängden, mät från baksidan av näbben till baksidan av kraniet.
- Ta en icke-elastisk sträng och linda den runt skallen från ett öronhål till det andra för att mäta huvudomkretsen. Placera strängen på en metrisk linjal för att få en mätning.
- Samla bröstomkretsen genom att linda en sträng runt bröstet, under där vingarna kommer i kontakt med kroppen och placera strängen på en metrisk linjal för att få mätningen.
- Spraya bröst med 70% etanol och dra i fjädrarna och huden med fingrarna för att avslöja pectoralis stora muskler och ta mätningarna (steg 2.1.4.1-2.1.4.2) med digitala bromsok.
- För att bestämma bröstbredden, mät över bröstet där vingarna kommer i kontakt med kroppen.
- För att bestämma bröstlängden, mät från botten av nyckelbenet till toppen av fettkudden.
- På inkubationsdag 18, ta bort de embryonala äggen från inkubatorn och placera dem vid rumstemperatur i 1 timme för att upphöra med ämnesomsättningen. Ta bort embryon från äggen, väg utan äggula sac och halshugg sedan. 12 h efterkläckning, avliva kycklingarna genom exponering för CO2 i 10 min, väga, samla snabbt kron-till-rumplängdsmätning och halshugg sedan.
- Extraktion av pectoralis major muskel, mätning och insamling
- Använd kirurgisk sax eller skalpell och pincett, ta bort den högra pectoralis major muskeln genom att skära längs kölbenet och släppa muskeln från kroppsväggen.
OBS: Var noga med att inte samla pectoralis minor muskel genom att visuellt identifiera att muskeln förblir på bröstkorgen. - Efter att ha tagit bort pectoralis major-muskeln lägger du muskeln platt på en ispinne och samlar in följande mätningar (steg 2.2.2.1-2.2.2.3) med hjälp av digitala bromsok.
- För att bestämma muskellängden, mät från kranialen till den kaudala delen av muskeln.
- För att bestämma muskelbredden, mät vid den bredaste delen av muskelns kraniella del.
- För att bestämma muskeltjockleken, plocka upp bröstet med pincett och mät vid den tjockaste delen av muskelns kranialdel.
- Om så önskas, förvara denna muskel och vänster pectoralis huvudmuskel för ytterligare analyser (såsom histologi, protein- och genuttryck etc.) vid -80 ° C i upp till ett år.
- Använd kirurgisk sax eller skalpell och pincett, ta bort den högra pectoralis major muskeln genom att skära längs kölbenet och släppa muskeln från kroppsväggen.
3. Statistik
- Analysera data som en helt randomiserad design med ägg/kyckling som experimentell enhet.
OBS: Nikotinamid ribosiddos (DOS) fungerade som den fasta effekten. Alla data analyserades med ett statistiskt analysprogram (se Materialtabell), och parvisa jämförelser mellan minsta kvadratiska behandlingsmedel beräknades. Skillnaderna ansågs signifikanta vid P < 0,05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Det fanns inga DOS-effekter för kroppsvikten hos dag-18-embryon och kläckta kycklingar (P > 0,52; Figur 2). Det fanns inga DOS-effekter för alla dag-18 embryo pectoralis större muskelmätningar (P > 0,24; Figur 3). Det fanns inga DOS-effekter för kläckt chick pectoralis större muskellängds- och breddmätningar (P > 0,26); DOS påverkade dock muskelvikt och djup (P < 0,03; Figur 4). Kycklingar från embryon som inte injicerats med nikotinamidribosid hade pectoralis stora muskler som vägde mindre än kyckling från embryon injicerade med 500 och 1000 mM nikotinamidribosid (P < 0,03), men dessa behandlingar skilde sig inte (P = 0,41) från varandra. Kycklingar från embryon injicerade med 250 mM nikotinamidribosid varierade inte i pectoralis huvudvikt jämfört med de andra behandlingarna (P > 0,06). Kycklingar från embryon injicerade med 0 och 250 mM nikotinamidribosid hade mindre pectoralis större djup än kycklingar från embryon injicerade med 500 och 1000 mM nikotinamidribosid (P < 0,05), men dessa behandlingar skilde sig inte åt (P = 0,95). Chick från embryon injicerade med 500 och 1000 mM nikotinamidribosid varierade inte (P = 0,73) i pectoralis större djup.
Figur 1: Generell beräkning av nikotinamidribosiddosen och exempel på de tre doser som används i det aktuella experimentet. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Effekt av in ovo utfodring av fyra doser nikotinamid ribosid på (A) dag-18 embryo och (B) kläck kyckling kroppsvikter. Embryon injicerades i äggula sac med fyra nikotinamid ribosid doser vid dag-10 av inkubation. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Effekt av in ovo utfodring av fyra doser nikotinamid ribosid på dag-18 embryo pectoralis major muskel. (A) Vikt. (B) Längd. c) Bredd. (D) Djup. Embryon injicerades i äggula sac med en av fyra nikotinamid ribosid doser vid dag 10 av inkubation. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Effekt av in ovo utfodring av fyra doser nikotinamid ribosid på kläckning kyckling kropp pectoralis major muskel. (A) Vikt. (B) Längd. c) Bredd. (D) Djup. Embryon injicerades i äggula sac med en av fyra nikotinamid ribosid doser vid dag 10 av inkubation. a,b anger den statistiska skillnaden från varandra inom ett deltal (P < 0,05). Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hittills är Gonzalez Laboratory vid University of Georgia den enda gruppen som visar positiva effekter av nikotinamidribosid i ovo som matar på pectoralis större muskelutveckling och tillväxt. Den första studien visade att vid ovo-utfodring av 250 mM nikotinamid ribosid ökade muskelvikt och dimensioner när de injicerades i äggula sac9. I uppföljningsstudien ökade inte pectoralis major muskelmorfometrik utöver dosen 250 mM10 genom att injicera ökande nikotinamidribosiddos i äggulan, liknande de doser som testades i den aktuella studien. Dessa två studier använde en kommersiell avkastningslinje för slaktkycklingar; Därför genomfördes denna studie för att visa effekterna av in ovo utfodring av högavkastande slaktkycklingembryon med nikotinamidribosid.
Genom dessa studier har flera kritiska steg identifierats i detta protokoll som bestämmer framgång. Denna process är kritiskt viktig för dem som inte känner till att välja ägg för inkubation för att minska bakteriespridningen och inte förspända kläckta kycklingresultat. För det första är det kritiskt viktigt att inte välja smutsiga eller missformade ägg eftersom de har bakterier som kan hämma de andra äggen. Dessa bakterier kommer att spridas snabbt genom inkubatorn och orsaka att förekomsten av ruttna ägg ökar drastiskt; påverkar således antalet embryon och kycklingar som är tillgängliga för provtagning.
När det gäller att tilldela ägg till experimentella behandlingar måste forskare använda kalkylprogramvarumetoder som beskrivs ovan för att säkerställa att alla behandlingsstartande äggvikter är lika. Slutförandet av detta steg kommer att demonstreras i embryo- och kläckta kycklingmorfometriska data för hela kroppen. Detta kommer att säkerställa att alla experimentella behandlingsmuskelskillnader beror på behandlingsapplikation. Det fanns inga nikotinamid ribosideffekter på alla kroppsmorfometriska mått i Gonzalez och Jackson9 och Xu et al.10 studier. På grund av dessa konsekventa fynd mättes endast embryo- och kläckta kycklingkroppsvikter i den aktuella forskningen för att fastställa en brist på nikotinamidribosideffekt på helkroppsmorfometri; Metoder för att samla in morfometri för hela kroppen presenteras dock i denna publikation för dem som vill samla in dessa data. Det fanns inga nikotinamid ribosiddoseffekter på embryon eller kyckling kroppsvikter i den aktuella studien, vilket fortsätter trenden som rapporterats tidigare.
Eftersom denna metod strikt påverkar sekundär myogenes kan framtida forskargrupper frestas att injicera embryon vid en tidigare tidpunkt. Enligt författarnas erfarenhet minskar tidig injektion, från inkubationsdagar 0 till 5, drastiskt kläckbarheten hos ägg med upp till 70 till 80%. En tidig injektion är en betydande begränsning av tekniken. Det kan fungera som ett framtida forskningsområde, men enligt författarnas erfarenhet är tidig injektion skadlig för luktbarheten vilket allvarligt minskar värdet av denna teknik.
Vid mätning av morfometri av pectoralis major muskel måste forskare fundera över två viktiga överväganden. Först rekommenderar författarna en enda, välutbildad forskare att ta bort alla muskler som används för morfometrisk analys. Eftersom pectoralis major-muskeln är så liten kan mycket oönskad variation eller bias införas i data genom att samla in andra muskler utanför muskeln av intresse. Att använda en enda forskare kommer att säkerställa att samma muskel kommer att samlas in enligt konsekventa landmärken som används för att identifiera muskeln. För det andra, när du placerar muskler på träytan för mätning, måste man vara försiktig med att lägga alla muskler i en naturlig position. Detta gäller särskilt för längdmätningen, eftersom den kan manipuleras genom att sträcka muskeln när den läggs ner på mätytan. Inga nikotinamidribosider sågs i den aktuella studien för pectoralis major muskelmorfometri vid inkubationsdag 18. Xu et al.10 rapporterade inga pectoralis större muskelvikts- och längdskillnader vid inkubationsdag 19; Således kan indikera nikotinamidribosids effekt på hela muskelmorfometri inte manifesteras förrän efter inkubationsdag 19 i dessa två genetiska broilerlinjer.
Jämfört med tidigare publicerade studier var en av de viktigaste modifieringarna i den aktuella studien användningen av kommersiellt tillgänglig kapselform nikotinamidribosid. I de tidigare studierna 9,10 säkrades ren nikotinamidribosid från en tillverkare. Med hjälp av tillverkaren informerades forskargruppen om att den kommersiella produkten som användes i den aktuella studien också hade cellulosaingredienser blandade i produkten, vilket minskade den beräknade koncentrationen av nikotinamidribos med 34%. I den aktuella studien var därför pectoralis större muskelvikt från kläckta kycklingar injicerade med 500 och 1 000 mM nikotinamidribosid större än kycklingar från embryon injicerade med 0 mM nikotinamidribosid med 15 respektive 10 %. Denna vikt ökade främst på grund av att dessa behandlingars pectoralis stora muskeldjup ökade med 17 respektive 7%. Detta svar var mindre än hälften av de tidigare svaren. Xu et al.10 rapporterade nikotinamid ribosidtillskott, 250 till 1000 mM koncentrationer, ökade pectoralis större muskelvikt med 35% på grund av ökad muskellängd, bredd och djup. Medan minskat svar främst kan bero på att man kompletterar mindre nikotinamidribosid än beräknat, är det också okänt om cellulosamaterial hindrade myogenesen. Därför rekommenderade författarna all framtida forskning att använda ren nikotinamidribosid och inte kommersiellt tillgängliga produkter.
Oavsett de nuvarande resultaten kommer en uppföljning av de metoder som beskrivs i denna publikation att säkerställa ett robust genomförande av in ovo utfodringsstudier. Framtida forskare kan använda ovanstående metoder för att testa andra föreningar som positivt kan påverka slaktkyckling kyckling i ovo muskelutveckling och tillväxt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingen intressekonflikt att deklarera.
Acknowledgments
Författarna vill tacka Cobb Vantress, Inc. för donation av äggen och tillhandahållande av tekniskt bistånd vid ägginkubation. Författarna vill tacka ChromaDex, Inc. för teknisk hjälp med nikotinamid ribosid.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Air-Tite™ Sterile Hypodermic Needles- 20 G; 1 inch | Fisher Scientific | 14-817-208 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-hypodermic-needles-32/p-7182916#?keyword= |
| Analytical Balance | VWR | VWR-214B2 | https://us.vwr.com/store/product/20970740/vwr-b2-series-analytical-and-precision-balances |
| Complete Dissection Set | DOCAZON | DK1001 | https://www.amazon.com/DOCAZON-Complete-Dissection-Set-Dissecting/dp/B07VBHKSW3 |
| Fisherbrand™ Isotemp™ General Purpose Deluxe Water Baths | Fisher Scientific | FSGPD02 | https://www.fishersci.com/shop/products/isotemp-general-purpose-water-baths/p-6448020 |
| Fisherbrand™ Sterile Syringes for Single Use | Fisher Scientific | 14-955-464 | https://www.fishersci.com/shop/products/sterile-syringes-single-use-12/p-7114739#?keyword= |
| HIGH INTENSITY EGG CANDLER | Titan Incubators | N/A | https://www.titanincubators.com/collections/egg-candlers/products/egg-candler-high-intensity |
| Infrared Forehead Thermometer | HALIDODO | XZ-001 | |
| Microsoft Excel | Microsoft | N/A | |
| Neiko Tools Digital Caliper | Neiko Tools | 01408A | https://www.amazon.com/Neiko-01407A-Electronic-Digital-Stainless/dp/B000NEA0P8?th=1 |
| Nexcare Absolute Waterproof Tape | Nexcare Brand | 732 | https://www.nexcare.com/3M/en_US/nexcare/products/catalog/~/Nexcare-Absolute-Waterproof-Tape/?N=4326+3294529207+3294631805 &rt=rud |
| Pen Size Temperature and Humidity USB Data Logger with Display | Omega | OM-HL-SP-TH | https://www.omega.com/en-us/temperature-measurement/temperature-and-humidity-data-loggers/p/OM-HL-SP-Series |
| SAS 9.4 for Windows | SAS Institute | N/A | https://www.sas.com/en_us/home.html |
| Sportsman 1502 Incubator | GQF Manufacturing | 1502 | https://www.gqfmfg.com/item/1502-digital-sportsman/ |
| Tru Niagen (Nicotinamide riboside) | ChromaDex, Inc. | N/A | https://www.truniagen.com/truniagen-300mg/ - note, contact company for pure product |
| Wood Craft Sticks | Creatology | M20001547 | https://www.michaels.com/wood-craft-sticks-by-creatology/M20001547.html |
References
- Biressi, S., Molinaro, M., Cossu, G. Cellular heterogeneity during vertebrate skeletal muscle development. Developmental Biology. 308 (2), 281-293 (2007).
- Chal, J., Pourquie, O. Making muscle: Skeletal myogenesis in vivo and in vitro. Development. 144 (12), 2104-2122 (2017).
- Sharma, J., Burmester, B. Resistance of Marek's disease at hatching in chickens vaccinated as embryos with the Turkey herpesvirus. Avian Diseases. 26 (1), 134-149 (1982).
- Al-Murrani, W. K. Effect of injecting amino acids into the egg on embryonic and subsequent growth in the domestic fowl. British Poultry Science. 23 (2), 171-174 (1982).
- Ohta, Y., Kidd, M. T., Ishibashi, T. Embryo growth and amino acid concentration profiles of broiler breeder eggs, embryos, and chicks after in ovo administration of amino acids. Poultry Science. 80 (10), 1430-1436 (2001).
- Zhao, M. M., et al. In ovo feeding of creatie pyruvate increases hatching weight, growth performance, and muscle growth but has no effect on meat quality in broiler chickens. Livestock Science. 206, 59-64 (2017).
- Bieganowski, P., Brenner, C. Discoveries of nicotinamide riboside as a nutrient and conserved NRK genes establish a Preiss Handler independent route to NAD1 in fungi and humans. Cell. 117 (4), 495-502 (2004).
- Chi, Y., Sauve, A. Nicotinamide riboside, a trace nutrient in foods, is a Vitamin B3 with effects on energy metabolism and neuroprotection. Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care. 16 (6), 657-661 (2013).
- Gonzalez, J. M., Jackson, A. R. In ovo feeding of nicotinamide riboside affects pectoralis major muscle development. Translational Animal Science. 4 (3), 1-7 (2020).
- Xu, X., Jackson, A. R., Gonzalez, J. M. The effects of in ovo nicotinamide riboside dose on broiler myogenesis. Poultry Science. 100 (3), 100926 (2021).
